本發(fā)明涉及一種發(fā)酵方法，特別是一種提升檸檬多酚含量的檸檬多酚的高濃度發(fā)酵方法。
背景技術(shù)：
檸檬(lemon)，學(xué)名citruslimon(l.)brum.f，檸檬富含豐富的維他命c、多酚、檸檬酸等營養(yǎng)物質(zhì)，例如多酚，為芳香基團的衍生物，被認(rèn)為是良好的抗氧化劑，對許多疾病有好的療效。因此攝取檸檬多酚已成為現(xiàn)代人保持健康的養(yǎng)生法之一。
一般而言，民眾常會將檸檬去皮后，榨取檸檬果肉的汁液(即，檸檬汁)飲用，但是，檸檬果肉所含有的檸檬多酚含量不高，且榨取所得的檸檬汁的酸度高，常需要額外添加糖或蜂蜜以調(diào)整口感。有鑒于此，需要一種提升檸檬多酚含量的檸檬發(fā)酵方法，以獲得富含檸檬多酚的檸檬皮汁。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
本發(fā)明提供一種檸檬多酚的高濃度發(fā)酵方法，以獲得高檸檬多酚含量的檸檬皮汁發(fā)酵液，以及獲得容易入口的檸檬皮汁發(fā)酵液。
本發(fā)明的技術(shù)方案為：檸檬多酚的高濃度發(fā)酵方法，包括：提供一檸檬皮汁，為將含皮的整顆檸檬榨汁所獲得；提供一植物內(nèi)生菌；提供一藻類發(fā)酵產(chǎn)物；混合該檸檬皮汁、該植物內(nèi)生菌及該藻類發(fā)酵產(chǎn)物，以形成一混合物，使該混合物中的菌類物質(zhì)最終濃度為2.8×105cfu/ml-3.6×106cfu/ml；以該植物內(nèi)生菌及藻類發(fā)酵產(chǎn)物共同發(fā)酵該檸檬皮汁，其中發(fā)酵溫度為17℃-37℃，發(fā)酵時間為30-60天，以獲得一檸檬皮汁發(fā)酵液。
進(jìn)一步的，發(fā)酵溫度為17℃-28℃。
進(jìn)一步的，發(fā)酵時間為40-50天。
進(jìn)一步的，發(fā)酵溫度為26℃。
進(jìn)一步的，發(fā)酵時間為45天。
進(jìn)一步的，該混合物為由該檸檬皮汁、植物內(nèi)生菌的菌液及藻類發(fā)酵產(chǎn)物所組成。
進(jìn)一步的，該混合物中，該植物內(nèi)生菌及藻類發(fā)酵產(chǎn)物的菌數(shù)相同。
進(jìn)一步的，所述植物內(nèi)生菌的提取方法為：采用組織塊法，取新鮮杜仲即杜仲科植物的樹皮，表面消毒處理后，接種至pda（分離內(nèi)生真菌）和高氏一號培養(yǎng)基（分離內(nèi)生放線菌）上培養(yǎng)7-10d，然后分離單菌落；從活化斜面中挑取菌絲塊接種于裝有100ml發(fā)酵培養(yǎng)基的錐形瓶中，置28℃，200r/min搖床振蕩培養(yǎng)7d；發(fā)酵培養(yǎng)物除去菌體，濾液用等體積乙酸乙酯萃取3次，合并有機相，55℃減壓濃縮蒸干，即為菌液粗提物；離心和過濾得到的菌體，用適量95%乙醇冷凝回流3次，合并乙醇相，減壓濃縮蒸干，即為菌體粗提物；置4℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>
進(jìn)一步的，所述藻類發(fā)酵產(chǎn)物為裂壺藻發(fā)酵產(chǎn)物，其制備方法為：取經(jīng)過清洗的裂壺藻原料，設(shè)定酶解條件為料液比1∶10（m/v）、纖維素酶cellulaseaccf-4740添加量2%、溫度55℃、ph4.5、反應(yīng)時間1.3h，進(jìn)行酶解，纖維素酶水解結(jié)束后，沸水浴滅酶15min，9000r/min離心，收集上清液得到裂壺藻纖維素酶水解液；裂壺藻酶解液滅酶活后，調(diào)節(jié)ph值至6.2-6.6，高壓蒸汽滅菌（121℃，20min），然后接種體積分?jǐn)?shù)1%的mrs培養(yǎng)基活化的戊糖片球菌液到裂壺藻酶解液，37℃恒溫培養(yǎng)箱靜置，進(jìn)行發(fā)酵；發(fā)酵結(jié)束后，9000r/min離心，收集上清液得到裂壺藻發(fā)酵產(chǎn)物。
從植物中尋找天然發(fā)酵物質(zhì)一直是各國科學(xué)家的研究的熱點，國內(nèi)外不同學(xué)者對眾多植物的研究提示，但是植物生長環(huán)境較難模擬，生長周期長及部分植物都瀕臨滅絕，這給天然發(fā)酵活性物質(zhì)的大量生產(chǎn)帶來很大困難。植物內(nèi)生菌（endophyte）是存在于健康植物組織和器官中，而被感染的宿主植物不表現(xiàn)出明顯侵染癥狀的一類微生物。對其的研究發(fā)現(xiàn)及其相關(guān)性質(zhì)的研究表明，幾乎所有的植物中都伴隨有內(nèi)生菌的存在，且許多內(nèi)生菌在長期的自然選擇下能夠產(chǎn)生與寄主植物相同或相似的具生物活性的次級代謝產(chǎn)物，這為發(fā)現(xiàn)新功能活性產(chǎn)物及活性物質(zhì)的提取提供了重要的開發(fā)和利用途徑。
海洋微藻作為一類原始而十分重要的海洋生物資源，富含多不飽和脂肪酸、多糖、多肽等多種生物活性物質(zhì)，現(xiàn)主要用于制備生物能源及水產(chǎn)養(yǎng)殖飼料，關(guān)于用于發(fā)酵的活性物質(zhì)制備的報道更為少見。裂壺藻是一類富含多不飽和脂肪酸的微藻，常被用來生產(chǎn)高純度二十二碳六烯酸（docosahexaenoicacid，dha）的保健品、嬰幼兒乳制品添加劑等。裂壺藻經(jīng)提取多不飽和脂肪酸后所產(chǎn)生的藻渣其蛋白質(zhì)含量可高達(dá)40%以上，然而目前這些藻渣大多被當(dāng)成飼料或肥料處理，蛋白資源未得到充分開發(fā)與利用。將裂壺藻發(fā)酵蛋白產(chǎn)物應(yīng)用于檸檬多酚發(fā)酵生產(chǎn)，用以提高檸檬多酚產(chǎn)物產(chǎn)量的研究國內(nèi)外尚未見報道。
本發(fā)明提供的提升檸檬多酚含量的檸檬發(fā)酵方法，通過使用該植物內(nèi)生菌及藻類發(fā)酵產(chǎn)物，將該檸檬皮汁進(jìn)行發(fā)酵，以提升該檸檬皮汁中檸檬多酚的含量，達(dá)到方便飲用者養(yǎng)生的功效。本發(fā)明提供的提升檸檬多酚含量的檸檬發(fā)酵方法，通過使用整顆的帶皮檸檬進(jìn)行發(fā)酵，且沒有添加任何糖份，發(fā)酵后檸檬皮汁甜度可達(dá)到9-11°brix，而不用通過額外人工添加物來幫助使用者入口，達(dá)到減輕飲用者身體負(fù)擔(dān)的功效。
具體實施方式
下面將結(jié)合本發(fā)明實施例對本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實施例僅僅是本發(fā)明一部分實施例，而不是全部的實施例。基于本發(fā)明中的實施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒有做出創(chuàng)造性勞動前提下所獲得的所有其他實施例，都屬于本發(fā)明保護的范圍。
實施例1
檸檬多酚的高濃度發(fā)酵方法，包括：提供一檸檬皮汁，為將含皮的整顆檸檬榨汁所獲得；提供一植物內(nèi)生菌；提供一藻類發(fā)酵產(chǎn)物；混合該檸檬皮汁、該植物內(nèi)生菌及該藻類發(fā)酵產(chǎn)物，以形成一混合物，使該混合物中的菌類物質(zhì)最終濃度為2.8×105cfu/ml；以該植物內(nèi)生菌及藻類發(fā)酵產(chǎn)物共同發(fā)酵該檸檬皮汁，其中發(fā)酵溫度為37℃，發(fā)酵時間為60天，以獲得一檸檬皮汁發(fā)酵液。
進(jìn)一步的，該混合物為由該檸檬皮汁、植物內(nèi)生菌的菌液及藻類發(fā)酵產(chǎn)物所組成。
進(jìn)一步的，該混合物中，該植物內(nèi)生菌及藻類發(fā)酵產(chǎn)物的菌數(shù)相同。
進(jìn)一步的，所述植物內(nèi)生菌的提取方法為：采用組織塊法，取新鮮杜仲即杜仲科植物的樹皮，表面消毒處理后，接種至pda（分離內(nèi)生真菌）和高氏一號培養(yǎng)基（分離內(nèi)生放線菌）上培養(yǎng)7-10d，然后分離單菌落；從活化斜面中挑取菌絲塊接種于裝有100ml發(fā)酵培養(yǎng)基的錐形瓶中，置28℃，200r/min搖床振蕩培養(yǎng)7d；發(fā)酵培養(yǎng)物除去菌體，濾液用等體積乙酸乙酯萃取3次，合并有機相，55℃減壓濃縮蒸干，即為菌液粗提物；離心和過濾得到的菌體，用適量95%乙醇冷凝回流3次，合并乙醇相，減壓濃縮蒸干，即為菌體粗提物；置4℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>
進(jìn)一步的，所述藻類發(fā)酵產(chǎn)物為裂壺藻發(fā)酵產(chǎn)物，其制備方法為：取經(jīng)過清洗的裂壺藻原料，設(shè)定酶解條件為料液比1∶10（m/v）、纖維素酶cellulaseaccf-4740添加量2%、溫度55℃、ph4.5、反應(yīng)時間1.3h，進(jìn)行酶解，纖維素酶水解結(jié)束后，沸水浴滅酶15min，9000r/min離心，收集上清液得到裂壺藻纖維素酶水解液；裂壺藻酶解液滅酶活后，調(diào)節(jié)ph值至6.2-6.6，高壓蒸汽滅菌（121℃，20min），然后接種體積分?jǐn)?shù)1%的mrs培養(yǎng)基活化的戊糖片球菌液到裂壺藻酶解液，37℃恒溫培養(yǎng)箱靜置，進(jìn)行發(fā)酵；發(fā)酵結(jié)束后，9000r/min離心，收集上清液得到裂壺藻發(fā)酵產(chǎn)物。
本發(fā)明提供的提升檸檬多酚含量的檸檬發(fā)酵方法，通過使用該植物內(nèi)生菌及藻類發(fā)酵產(chǎn)物，將該檸檬皮汁進(jìn)行發(fā)酵，以提升該檸檬皮汁中檸檬多酚的含量，達(dá)到方便飲用者養(yǎng)生的功效。本發(fā)明提供的提升檸檬多酚含量的檸檬發(fā)酵方法，通過使用整顆的帶皮檸檬進(jìn)行發(fā)酵，且沒有添加任何糖份，發(fā)酵后檸檬皮汁甜度可達(dá)到9-11°brix，而不用通過額外人工添加物來幫助使用者入口，達(dá)到減輕飲用者身體負(fù)擔(dān)的功效。
實施例2
檸檬多酚的高濃度發(fā)酵方法，包括：提供一檸檬皮汁，為將含皮的整顆檸檬榨汁所獲得；提供一植物內(nèi)生菌；提供一藻類發(fā)酵產(chǎn)物；混合該檸檬皮汁、該植物內(nèi)生菌及該藻類發(fā)酵產(chǎn)物，以形成一混合物，使該混合物中的菌類物質(zhì)最終濃度為3.6×106cfu/ml；以該植物內(nèi)生菌及藻類發(fā)酵產(chǎn)物共同發(fā)酵該檸檬皮汁，其中發(fā)酵溫度為17℃℃，發(fā)酵時間為30天，以獲得一檸檬皮汁發(fā)酵液。
進(jìn)一步的，該混合物為由該檸檬皮汁、植物內(nèi)生菌的菌液及藻類發(fā)酵產(chǎn)物所組成。
進(jìn)一步的，該混合物中，該植物內(nèi)生菌及藻類發(fā)酵產(chǎn)物的菌數(shù)相同。
實施例3
檸檬多酚的高濃度發(fā)酵方法，包括：提供一檸檬皮汁，為將含皮的整顆檸檬榨汁所獲得；提供一植物內(nèi)生菌；提供一藻類發(fā)酵產(chǎn)物；混合該檸檬皮汁、該植物內(nèi)生菌及該藻類發(fā)酵產(chǎn)物，以形成一混合物，使該混合物中的菌類物質(zhì)最終濃度為8.6×105cfu/ml；以該植物內(nèi)生菌及藻類發(fā)酵產(chǎn)物共同發(fā)酵該檸檬皮汁，其中發(fā)酵溫度為28℃，發(fā)酵時間為50天，以獲得一檸檬皮汁發(fā)酵液。
進(jìn)一步的，發(fā)酵溫度為17℃-28℃。
進(jìn)一步的，發(fā)酵時間為40-50天。
進(jìn)一步的，發(fā)酵溫度為26℃。
進(jìn)一步的，發(fā)酵時間為45天。
進(jìn)一步的，該混合物為由該檸檬皮汁、植物內(nèi)生菌的菌液及藻類發(fā)酵產(chǎn)物所組成。
進(jìn)一步的，該混合物中，該植物內(nèi)生菌及藻類發(fā)酵產(chǎn)物的菌數(shù)相同。
實施例4
檸檬多酚的高濃度發(fā)酵方法，包括：提供一檸檬皮汁，為將含皮的整顆檸檬榨汁所獲得；提供一植物內(nèi)生菌；提供一藻類發(fā)酵產(chǎn)物；混合該檸檬皮汁、該植物內(nèi)生菌及該藻類發(fā)酵產(chǎn)物，以形成一混合物，使該混合物中的菌類物質(zhì)最終濃度為1.5×106cfu/ml；以該植物內(nèi)生菌及藻類發(fā)酵產(chǎn)物共同發(fā)酵該檸檬皮汁，其中發(fā)酵溫度為26℃，發(fā)酵時間為45天，以獲得一檸檬皮汁發(fā)酵液。
進(jìn)一步的，該混合物為由該檸檬皮汁、植物內(nèi)生菌的菌液及藻類發(fā)酵產(chǎn)物所組成。
進(jìn)一步的，該混合物中，該植物內(nèi)生菌及藻類發(fā)酵產(chǎn)物的菌數(shù)相同。
對于本領(lǐng)域技術(shù)人員而言，顯然本發(fā)明不限于上述示范性實施例的細(xì)節(jié)，而且在不背離本發(fā)明的精神或基本特征的情況下，能夠以其他的具體形式實現(xiàn)本發(fā)明。因此，無論從哪一點來看，均應(yīng)將實施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本發(fā)明的范圍由所附權(quán)利要求而不是上述說明限定，因此旨在將落在權(quán)利要求的等同要件的含義和范圍內(nèi)的所有變化囊括在本發(fā)明內(nèi)。
此外，應(yīng)當(dāng)理解，雖然本說明書按照實施方式加以描述，但并非每個實施方式僅包含一個獨立的技術(shù)方案，說明書的這種敘述方式僅僅是為清楚起見，本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)將說明書作為一個整體，各實施例中的技術(shù)方案也可以經(jīng)適當(dāng)組合，形成本領(lǐng)域技術(shù)人員可以理解的其他實施方式。本發(fā)明中所未詳細(xì)描述的技術(shù)細(xì)節(jié)，均可通過本領(lǐng)域中的任一現(xiàn)有技術(shù)實現(xiàn)。特別的，本發(fā)明中所有未詳細(xì)描述的技術(shù)特點均可通過任一現(xiàn)有技術(shù)實現(xiàn)。