本發(fā)明屬于食品生物技術(shù)及功能保健領(lǐng)域，具體涉及一種小球藻全活性物質(zhì)的制備方法。
背景技術(shù)：
小球藻是一類普生性單細(xì)胞綠藻，屬于綠藻門、小球藻屬，生長速度快，易于培養(yǎng)，應(yīng)用價(jià)值高。小球藻含有豐富的生物活性物質(zhì)和藥用成分，作為一種新型保健食品和藥物蘊(yùn)藏著巨大潛力。研究發(fā)現(xiàn)，小球藻具有顯著地免疫調(diào)節(jié)、抗疲勞、生血養(yǎng)血、耐缺氧、降血壓、降血糖血脂、抑制腫瘤、保肝護(hù)肝、促進(jìn)微量礦物質(zhì)的吸收、減肥以及克服營養(yǎng)不良等多種保健功能。
糖尿病和高血壓在我國是一種常見病和多發(fā)病，是目前世界上繼腫瘤和心血管疾病后之后排名第三的危害人類健康的疾病。其中糖尿病是一組由于胰島素分泌缺陷或胰島素作用障礙所致的以高血糖為特點(diǎn)的代謝性疾病，持續(xù)高血糖與長期代謝紊亂等可導(dǎo)致全身組織器官，特別是眼、腎、心血管及神經(jīng)系統(tǒng)的損害及其功能障礙和衰竭。嚴(yán)重者可引起失水、電解質(zhì)紊亂和酸堿平衡失調(diào)等急性并發(fā)癥酮癥酸中毒和高滲昏迷。隨著生活節(jié)奏加快，飲食結(jié)構(gòu)不合理，糖尿病發(fā)病率呈上升趨勢，發(fā)病年齡也趨于年輕化。高血壓、高血糖、高血脂以及所引發(fā)的心腦血管疾病日益危害著人類的健康，相關(guān)統(tǒng)計(jì)，每年大約有上萬的人死于這些疾病，因此高血糖高血脂、高血壓越來越成為人們關(guān)注的焦點(diǎn)，如何防止糖尿病、動脈硬化和心腦血管疾病成為一個(gè)迫切需要解決的問題，且隨著高血脂、糖尿病與心血管疾病關(guān)系的研究，人們已認(rèn)識到降血脂、降血糖對減少心血管疾病的風(fēng)險(xiǎn)具有重要的意義。
本發(fā)明將小球藻提取物、枸杞、β-環(huán)糊精、玉米纖維素等運(yùn)用到小球藻功能性食品的生產(chǎn)中，制備的既具有小球藻特有的風(fēng)味，又具有一定的保健功效和營養(yǎng)價(jià)值，具有良好的開發(fā)前景。此發(fā)明通過乙醇提取濃縮，水提，酶解技術(shù)得到小球藻等活性物質(zhì)。經(jīng)驗(yàn)證，某些純化的活性物質(zhì)的降血脂、降血糖、保肝甚至優(yōu)于當(dāng)前公認(rèn)的降血脂、降血糖及保肝物質(zhì)。
在目前所公開的小球藻全活性物質(zhì)的相關(guān)專利中，在小球藻有效提高機(jī)體免疫力領(lǐng)域中已經(jīng)有周建志“一種小球藻口服液及其制備方法”(專利申請?zhí)?01510366312.9)，在小球藻有效降血脂降血壓領(lǐng)域中已經(jīng)有岳軍堂一種小球藻活性多肽粉的制備方法(專利申請?zhí)?01510782998.x),而本發(fā)明中所述小球藻利用先用85%-95%乙醇提取，然后將85%-95%乙醇提取剩余物用55%-65%乙醇提取，接著將55%-65%乙醇提取剩余物水提，最后將水提殘?jiān)附?，以獲得小球藻全活性物質(zhì)，具有不會發(fā)生副反應(yīng)、條件溫和、環(huán)境友好等優(yōu)點(diǎn)。因此，本發(fā)明中通過小球藻細(xì)粉順序溶劑（極性從小到大）提取制備小球藻活性物質(zhì)的降血糖活性均未見其它研究報(bào)道或?qū)＠?/p>
雖小球藻有顯著并且明確的降血脂、降血壓，以及抗癌，保肝健胃等功效，但目前在高效制備小球藻的活性成分的領(lǐng)域的技術(shù)上，往往存在小球藻全活性物質(zhì)制備不完全，制作工藝繁瑣，利用率低等問題。目前，尚未見將小球藻采用順序溶劑（極性從小到大）提取制備活性物質(zhì)的方法報(bào)道，且此方法對大規(guī)模工業(yè)化的生產(chǎn)具有良好的開發(fā)前景。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的在于提供一種小球藻全活性物質(zhì)的制備方法，以小球藻為原料，采用從小到大不同極性的溶劑提取制備小球藻全活性物質(zhì)，根據(jù)中醫(yī)“君臣佐使”理論以及現(xiàn)代營養(yǎng)學(xué)理論，用所述方法制備的一種或幾種提取物與其他具有相同功效的藥食同源活性成分復(fù)配制備調(diào)節(jié)血糖、血脂、血壓及保肝等功效的營養(yǎng)功能性食品。
所述的一種小球藻全活性物質(zhì)的制備方法，具體包括如下步驟：
a.小球藻子實(shí)體用粉碎機(jī)磨成細(xì)粉備用；
b.將制得的小球藻細(xì)粉先用體積分?jǐn)?shù)85%-95%乙醇為提取溶劑在45-70℃中超聲-微波協(xié)同萃取或超聲輔助提取0.5-3h，過濾獲得小球藻醇提液ⅰ。
c.經(jīng)體積分?jǐn)?shù)85%-95%乙醇提取的小球藻剩余物利用體積分?jǐn)?shù)55%-65%乙醇在45-70℃進(jìn)行超聲-微波協(xié)同萃取或超聲輔助提取0.5-3h，過濾獲得小球藻醇提液ⅱ；
d.再將經(jīng)體積分?jǐn)?shù)55%-65%乙醇提取的小球藻剩余物利用去離子水在70-100℃進(jìn)行超聲-微波協(xié)同萃取或超聲輔助提取0.5-3h，過濾獲得小球藻水提液ⅲ；
e.最后將獲得小球藻水提剩余物利用復(fù)合蛋白酶在37-65℃進(jìn)行酶解0.5-3h，過濾以獲得小球藻的酶解物。
f.所述b-d制備得到的小球藻醇提液ⅰ、小球藻醇提液ⅱ、小球藻水提液ⅲ經(jīng)減壓濃縮、干燥后分別制備小球藻醇提物ⅰ、小球藻醇提物ⅱ、小球藻水提物ⅲ，這三者與酶解物組成小球藻全活性物質(zhì)。
其中提取溶劑與提取物料的體積重量比（l:kg）為10:1-50:1。
其中所述復(fù)合蛋白酶添加量為小球藻細(xì)粉重量的0.1-2%。
利用所述方法制備的一種或幾種提取物與其他具有相同功效的藥食同源活性成分復(fù)配制備如口服液，膠囊，片劑，沖劑，固體飲料的不同劑型的營養(yǎng)、功能性食品。
本發(fā)明的有益之處：
以小球藻細(xì)粉為原料，順序溶劑（極性從小到大）提取及復(fù)合蛋白酶酶解等方法制備小球藻全活性物質(zhì)；根據(jù)中醫(yī)的“君臣佐使”和現(xiàn)代營養(yǎng)學(xué)理論，用所述方法制備的一種或幾種提取物與其他具有相同功效的藥食同源活性成分復(fù)配制備具有.可以補(bǔ)血.可以預(yù)防肥胖，可以降血壓，降血糖，降血脂、保肝，可以抵御心腦血管疾病，可以提高人體免疫力。并且此發(fā)明工藝穩(wěn)定可靠，重復(fù)性高，實(shí)用性強(qiáng)，適合于大規(guī)模的工業(yè)化生產(chǎn)。
具體實(shí)施方式
為進(jìn)一步公開而不是限制本發(fā)明，以下結(jié)合實(shí)例對本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)說明。
實(shí)施例1
一種小球藻全活性物質(zhì)的制備方法，具體包括如下步驟：
a小球藻用粉碎機(jī)磨成細(xì)粉備用。
b.將制得的小球藻細(xì)粉先用95%（v/v）乙醇在55℃中超聲輔助提取1h，過濾獲得小球藻95%醇提液。
c.將小球藻95%（v/v）乙醇提取剩余物利用65%（v/v）乙醇在60℃進(jìn)行超聲輔助提取1h，過濾獲得小球藻65%（v/v）乙醇提液。
d.再將小球藻65%（v/v）乙醇提取剩余物利用去離子水在100℃下進(jìn)行超聲輔助提取1h，過濾獲得小球藻水提液。
e.最后將獲得小球藻水提剩余物利用復(fù)合蛋白酶在50℃進(jìn)行酶解2h，過濾以獲得小球藻的酶解物。
f.所述b-e制備得到的提取液經(jīng)減壓濃縮、干燥后分別制備小球藻95%（v/v）乙醇提取、小球藻65%（v/v）乙醇提取物、小球藻水提取物以及酶解物，即：小球藻全活性物質(zhì)。
其中提取溶劑與提取物料的體積重量比（l:kg）20:1。
其中所述復(fù)合蛋白酶添加量為小球藻細(xì)粉重量的0.3%。
將上述制備小球藻全活性物質(zhì)，與灰樹花提取物、枸杞提取物按質(zhì)量比2:1:0.3充分混合，制備小球藻保健膠囊。
實(shí)施例2
一種小球藻全活性物質(zhì)的制備方法，具體包括如下步驟：
a小球藻用粉碎機(jī)磨成細(xì)粉備用。
b.將制得的小球藻細(xì)粉先用90%（v/v）乙醇在60℃中超聲輔助提取1h，過濾獲得小球藻90%醇提液。
c.將小球藻90%（v/v）乙醇提取剩余物利用60%（v/v）乙醇在70℃進(jìn)行超聲輔助提取1h，過濾獲得小球藻60%（v/v）乙醇提液。
d.再將小球藻60%（v/v）乙醇提取剩余物利用去離子水在90℃下進(jìn)行超聲輔助提取1h，過濾獲得小球藻水提液。
e.最后將獲得小球藻水提剩余物利用復(fù)合蛋白酶在45℃進(jìn)行酶解2h，過濾以獲得小球藻的酶解物。
f.所述b-e制備得到的提取液經(jīng)減壓濃縮、干燥后分別制備小球藻90%（v/v）乙醇提取、小球藻60%（v/v）乙醇提取物、小球藻水提取物以及酶解物，即：小球藻全活性物質(zhì)。
其中提取溶劑與提取物料的體積重量比（l:kg）25:1。
其中所述復(fù)合蛋白酶添加量為小球藻細(xì)粉重量的0.5%。
將上述制備小球藻全活性物質(zhì)，與靈芝水提取物、人參水提取物按質(zhì)量比2:2:1充分混合，制備小球藻保健膠囊。
實(shí)施例3
一種小球藻全活性物質(zhì)的制備方法，具體包括如下步驟：
a小球藻用粉碎機(jī)磨成細(xì)粉備用；
b.將制得的小球藻細(xì)粉先用85%（v/v）乙醇在65℃中超聲輔助提取1.5h，過濾獲得小球藻85%醇提液；
c.將小球藻85%（v/v）乙醇提取剩余物利用55%（v/v）乙醇在65℃進(jìn)行超聲輔助提取1.5h，過濾獲得小球藻55%（v/v）乙醇提液；
d.再將小球藻55%（v/v）乙醇提取剩余物利用去離子水在95℃下進(jìn)行超聲輔助提取1.5h，過濾獲得小球藻水提液；
e.最后將獲得小球藻水提剩余物利用復(fù)合蛋白酶在40℃進(jìn)行酶解1.5h，過濾以獲得小球藻的酶解物；
f.所述b-e制備得到的提取液經(jīng)減壓濃縮、干燥后分別制備小球藻85%（v/v）乙醇提取、小球藻55%（v/v）乙醇提取物、小球藻水提取物以及酶解物，即：小球藻全活性物質(zhì)。
其中提取溶劑與提取物料的體積重量比（l:kg）30:1。
其中所述復(fù)合蛋白酶添加量為小球藻細(xì)粉重量的0.6%。
將上述制備小球藻全活性物質(zhì)，與枸杞提取物、靈芝提取物按質(zhì)量比4:1:1充分混合，制備小球藻保健膠囊。
以上所述僅為本發(fā)明的較佳實(shí)施例，凡依本發(fā)明申請專利范圍所做的均等變化與修飾，皆應(yīng)屬本發(fā)明的涵蓋范圍。