1.一種蘋果酵素的制備方法,其特征在于該制備方法,即以新鮮成熟度好的蘋果為主材料,用畢赤酵母亞種Pichia kudriavzevii PKD 3001進行發(fā)酵制備而成,其制備過程具體包括如下步驟:
(1)、菌種的選取
所用的菌種,是2016年9月29日于中國典型培養(yǎng)物保藏中心保藏的,其保藏編號為CCTCC NO: M 2016537的畢赤酵母亞種Pichia kudriavzevii PKD 3001冷凍干燥管;
(2)、發(fā)酵原料液的制備
將新鮮、成熟度好、天然酵素含量高的蘋果用自來水清洗干凈后經(jīng)吹干、去核、用榨汁機進行榨汁、用100目紗布過濾得到純蘋果汁,然后與純凈水混合,得到原料混合物,其中純蘋果汁與純凈水的比例,按體積百分比計算,純蘋果汁:純凈水為10%:90%;
在上述所得的原料混合物中再加入原料混合物總重量3%的葡萄糖,經(jīng)1mol/L食用碳酸鈉水溶液調(diào)pH值為6.0-7.0,然后于105℃滅菌10min得到發(fā)酵原料液;
(3)、菌種活化
用接種環(huán)取無菌水溶解的冷凍干燥管保存的畢赤酵母亞種Pichia kudriavzevii PKD3001菌種一環(huán)在馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基平板上劃線,在培養(yǎng)箱中30℃培養(yǎng)24h,得到平板活化菌種;
(4)、種子培養(yǎng)
用接種環(huán)取步驟(3)所得的平板活化菌種一環(huán)接入裝有50mL 麥芽浸粉肉湯液體培養(yǎng)基的250mL規(guī)格的三角瓶中,置于溫度30℃的培養(yǎng)箱中,然后控制轉(zhuǎn)速為120rpm,恒溫培養(yǎng)36h,得到培養(yǎng)液;
將上述所得的培養(yǎng)液控制轉(zhuǎn)速為5000r/min進行離心20min, 離心所得的沉淀用0.01mol/L無菌磷酸緩沖鹽溶液清洗3次,然后在清洗后的沉淀中加入50mL 0.01mol/L無菌磷酸緩沖鹽溶液經(jīng)500rpm下漩渦震蕩重懸菌體,得到種子液,所得的種子液中,每毫升種子液中含畢赤酵母亞種Pichia kudriavzevii PKD 3001為1×108-1×1010 cfu;
(5)、發(fā)酵培養(yǎng)
在步驟(2)所得的發(fā)酵原料液中,按1×105 cfu/mL接種量將步驟(4)得到的種子液接入步驟(2)所得的發(fā)酵原料液中,然后控制轉(zhuǎn)速為120r/min,溫度為25-35℃進行發(fā)酵24-72h,得到發(fā)酵液;
(6)、綜合調(diào)配
在步驟(5)所得的發(fā)酵液中,按每升發(fā)酵液計算,在發(fā)酵液中依次添加蔗糖40-80g,檸檬酸5-10g,穩(wěn)定劑羧甲基纖維鈉2-4g,混勻后于121℃殺菌20min,然后罐裝,即得蘋果酵素成品。
2.如權(quán)利要求1所述的一種蘋果酵素的制備方法,其特征在于步驟(2)發(fā)酵原料液的制備中:在上述所得的原料混合物中再加入為原料混合物總重量3%的葡萄糖,經(jīng)1mol/L食用碳酸鈉水溶液調(diào)pH值為6.0,然后于105℃滅菌10min得到發(fā)酵原料液;
步驟(5)發(fā)酵培養(yǎng)中:控制轉(zhuǎn)速為120rpm,溫度為28℃進行發(fā)酵36h;
步驟(6)綜合調(diào)配中:按每升發(fā)酵液計算,在步驟(5)所得的發(fā)酵液中依次添加蔗糖40g,檸檬酸7g,穩(wěn)定劑羧甲基纖維鈉4g,混勻后于121℃殺菌20min,然后罐裝,即得蘋果酵素成品。
3.如權(quán)利要求1所述的一種蘋果酵素的制備方法,其特征在于步驟(2)發(fā)酵原料液的制備中:在上述所得的原料混合物中再加入為原料混合物總重量3%的葡萄糖,經(jīng)1mol/L食用碳酸鈉調(diào)pH值為6.30,105℃滅菌10min得到發(fā)酵原料液;
步驟(5)發(fā)酵培養(yǎng)中:控制轉(zhuǎn)速為120r/min,溫度為25℃進行發(fā)酵72h,最后得到發(fā)酵液;
步驟(6)綜合調(diào)配中:按每升發(fā)酵液計算,在步驟(5)所得的發(fā)酵液中依次添加蔗糖50g,檸檬酸5g,穩(wěn)定劑羧甲基纖維鈉3g,混勻后于121℃殺菌20min,然后罐裝,即得蘋果酵素成品。
4.如權(quán)利要求1所述的一種蘋果酵素的制備方法,其特征在于步驟(2)發(fā)酵原料液的制備中:在上述所得的原料混合物中再加入為原料混合物總重量3%的葡萄糖,經(jīng)1mol/L食用碳酸鈉調(diào)pH值為7.0,105℃滅菌10min得到發(fā)酵原料液;
步驟(5)發(fā)酵培養(yǎng)中:控制轉(zhuǎn)速為120r/min,溫度為33℃進行發(fā)酵24h,最后得到發(fā)酵液;
步驟(6)綜合調(diào)配中:按每升發(fā)酵液計算,在步驟(5)所得的發(fā)酵液中依次添加蔗糖80g,檸檬酸8g,穩(wěn)定劑羧甲基纖維鈉2g,混勻后于121℃殺菌20min,然后罐裝,即得蘋果酵素成品。
5.如權(quán)利要求1所述的一種蘋果酵素的制備方法,其特征在于步驟(2)發(fā)酵原料液的制備中:在上述所得的原料混合物中再加入為原料混合物總重量3%的葡萄糖,經(jīng)1mol/L食用碳酸鈉調(diào)pH值為6.7,105℃滅菌10min得到發(fā)酵原料液;
步驟(5)發(fā)酵培養(yǎng)中:控制轉(zhuǎn)速為120r/min,溫度為35℃進行發(fā)酵60h,最后得到發(fā)酵液;
步驟(6)綜合調(diào)配中:按每升發(fā)酵液計算,在步驟(5)所得的發(fā)酵液中依次添加蔗糖70g,檸檬酸10g,穩(wěn)定劑羧甲基纖維鈉2.5g,混勻后于121℃殺菌20min,然后罐裝,即得蘋果酵素成品。
6.如權(quán)利要求1、2、3、4或5的制備方法所得的一種蘋果酵素。
7.如權(quán)利要求1、2、3、4或5的制備方法所得的一種蘋果酵素在抑制痤瘡丙酸桿菌中的應(yīng)用。