技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及微生物制劑技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及腸溶性雙層無(wú)縫實(shí)心益生菌微球及其制備方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)：

益生菌是一類(lèi)對(duì)宿主有益的活性微生物，是定植于人體腸道、生殖系統(tǒng)內(nèi)，能產(chǎn)生確切健康功效從而改善宿主微生態(tài)平衡、發(fā)揮有益作用的活性有益微生物的總稱(chēng)。益生菌的益生作用與其在腸道中的存活數(shù)量和生存質(zhì)量有關(guān), 其活菌制劑進(jìn)入人或動(dòng)物消化道后多難以經(jīng)受低pH 值的鹽酸、膽汁酸等的作用, 難以有足夠的活菌數(shù)量到達(dá)腸道或定植腸道而發(fā)揮作用。目前市場(chǎng)上奶制品和飲料中添加的益生菌大多是采用冷凍干燥、噴霧干燥、流化床干燥等技術(shù)生產(chǎn)的粉狀產(chǎn)品, 這些產(chǎn)品在食品中是完全釋放的, 在產(chǎn)品的環(huán)境中或通過(guò)胃腸道的過(guò)程中得不到有效的保護(hù)。

海藻酸是存在于褐藻類(lèi)海洋天然多糖，海藻酸鈉可減緩脂肪糖和膽鹽的吸收，具有降低血清膽固醇、血中甘油三酯和血糖的作用，可預(yù)防高血壓、糖尿病、肥胖癥等現(xiàn)代病。它在腸道中能抑制有害金屬如鍶、鎘、鉛等在體內(nèi)的積累，正是因?yàn)楹衷逅徕c這些重要作用，在國(guó)內(nèi)外已日益被人們所重視。日本人把富含有褐藻酸鈉的食品稱(chēng)為“長(zhǎng)壽食品”，美國(guó)人則稱(chēng)其為“奇妙的食品添加劑”。殼聚糖是甲殼素經(jīng)1,4鍵連接而成的線性聚合物，是迄今所發(fā)現(xiàn)的唯一天然堿性多糖，,殼聚糖分子鏈中存在大量伯氨基,在稀酸溶液中(如乙酸) 因氨基質(zhì)子化而溶解,并荷正電成為陽(yáng)離子聚合物,表現(xiàn)出良好的生物黏附性,利于其黏附并跨越表面負(fù)電的疏水性細(xì)胞膜。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的就是針對(duì)上述現(xiàn)有技術(shù)中的缺陷，提供了腸溶性雙層無(wú)縫實(shí)心益生菌微球及其制備方法和應(yīng)用。

為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供的技術(shù)方案為：腸溶性雙層無(wú)縫實(shí)心益生菌微球，所述益生菌微球以活性微生物為囊材，以海藻酸鈣-殼聚糖凝膠為壁材。

進(jìn)一步的，上述的腸溶性雙層無(wú)縫實(shí)心益生菌微球，所述活性微生物為食用菌種。

進(jìn)一步的，上述的腸溶性雙層無(wú)縫實(shí)心益生菌微球，所述益生菌微球中添加有食用色素或食用香精。

進(jìn)一步的，上述的腸溶性雙層無(wú)縫實(shí)心益生菌微球，所述益生菌微球的直徑為0.5mm-10mm。

本發(fā)明的第二個(gè)目的是提供了上述腸溶性雙層無(wú)縫實(shí)心益生菌微球的制備方法，包括以下步驟：

1）益生菌菌株經(jīng)發(fā)酵、離心、收集菌體后，與PBS按照質(zhì)量比1：（3-10）的比例混合，重懸菌體并再次離心得到洗滌后菌體，菌體以生理鹽水按質(zhì)量比1:1的比例重懸，得到菌懸液；

2）配制質(zhì)量百分比為1-5%的海藻酸鈉溶液，115℃滅菌20min，得到滅菌海藻酸鈉溶液；

3）將步驟1）得到的菌懸液與步驟2）得到的滅菌海藻酸鈉溶液按照質(zhì)量比1：（2-10）的比例混合均勻，得到混合液；

4）將步驟3）得到的混合液制成直徑0.5-10mm的液滴，滴入質(zhì)量百分濃度2%-5%的無(wú)菌氯化鈣溶液中，靜置得到一次包埋微球顆粒；

5）收集步驟4）得到的一次包埋微球顆粒，加入至質(zhì)量百分濃度0.3%-2.0%的無(wú)菌殼聚糖溶液中進(jìn)行二次包埋，一次包埋微球顆粒與無(wú)菌殼聚糖溶液的比例為質(zhì)量比1：（1-5），得到二次包埋微球；

6）按照益生菌微球的直徑，即0.5mm-10mm選擇適合濾網(wǎng)對(duì)步驟5）得到的二次包埋微球進(jìn)行過(guò)濾，并收集得到益生菌微球，置于生理鹽水中，4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

本發(fā)明的第三個(gè)目的是提供了上述腸溶性雙層無(wú)縫實(shí)心益生菌微球在制備食品中的應(yīng)用。

進(jìn)一步的，上述的應(yīng)用，所述食品為酸乳、發(fā)酵乳、乳酸菌飲料、果汁、發(fā)酵果汁、蔬菜汁、發(fā)酵蔬菜汁、豆乳、發(fā)酵豆乳、果凍、布丁、純凈水、礦泉水、茶飲料、功能性飲料或碳酸飲料。

本發(fā)明的有益效果為：本發(fā)明提供的腸溶性雙層無(wú)縫實(shí)心益生菌微球及其制備方法和應(yīng)用，是以益生菌為芯材，以海藻酸鈉和氯化鈣為第一層囊材，以殼聚糖為第二層囊材，利用滴制法或擠壓法制作的直徑為0.5mm-10mm的球，其所用的囊材耐酸性強(qiáng)，能使包埋的乳酸菌順利通過(guò)胃酸到達(dá)腸道中定植，并在腸道中釋放出益生菌。

附圖說(shuō)明

圖1顯示為植物乳桿菌微球在生理鹽水中的活菌數(shù)變化。

圖2顯示為植物乳桿菌微球在酸奶貨架期內(nèi)的活菌數(shù)變化。

圖3顯示為干酪乳桿菌微球在生理鹽水中的活菌數(shù)變化。

圖4顯示為干酪乳桿菌微球在乳酸菌飲料貨架期內(nèi)的活菌數(shù)變化。

具體實(shí)施方式

實(shí)施例1：

植物乳桿菌微球的制備與應(yīng)用：

（1）配制2%海藻酸鈉100ml、0.5%殼聚糖200ml、生理鹽水100ml、PBS溶液500ml，115℃滅菌20min。

（2）將1000ml植物乳桿菌發(fā)酵液離心去上清，收集菌體約10g，加50gPBS重懸后再次離心得菌體。

（3）菌體與生理鹽水按1:1混合，重懸菌體。

（4）2%海藻酸鈉中添加0.05%（質(zhì)量體積比）梔子黃色素，形成黃色海藻酸鈉溶液。

（5）菌體重懸液與（4）中2%海藻酸鈉按1:3混合均勻。

（6）用無(wú)菌注射器將混合溶液擠成液滴，滴入3%氯化鈣中，鈣化30min形成微球。

（7）過(guò)濾出微球，加到200ml的0.5%殼聚糖溶液中，在搖床中60rpm/min勻速搖動(dòng)20min。

（8）過(guò)濾出微球，用生理鹽水浸泡，4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

（9）制作攪拌型酸乳：鮮牛奶加6%白砂糖，均質(zhì)后進(jìn)行巴氏殺菌；發(fā)酵劑接種到牛奶中，42℃發(fā)酵酸度70°T 左右終止發(fā)酵。

（10）微球過(guò)濾，用無(wú)菌水洗滌去除生理鹽水的咸澀味后加入酸乳中，攪拌均勻后放冰箱后熟即可食用。

植物乳桿菌微球的活菌數(shù)變化如圖1、圖2所示。

實(shí)施例2：

干酪乳桿菌微球的制備與應(yīng)用：

（1）配制1.5%海藻酸鈉100ml、1.0%殼聚糖200ml、生理鹽水100ml、PBS溶液200ml，115℃滅菌20min。

（2）將1000ml干酪乳桿菌發(fā)酵液離心去上清，收集菌體約10g，加100gPBS重懸后再次離心得菌體。

（3）菌體與生理鹽水按1:1混合，重懸菌體。

（4）1.5%海藻酸鈉溶液中加入0.15%（質(zhì)量體積比）甜橙香精與0.1%（質(zhì)量體積比）β-胡蘿卜素。

（5）菌體重懸液與（4）中1.5%海藻酸鈉按1:5混合均勻。

（6）用無(wú)菌注射器將混合溶液擠成液滴，滴入4%氯化鈣中，鈣化30min形成微球。

（7）過(guò)濾出微球，加到200ml的1.0%殼聚糖溶液中，在搖床中60rpm/min勻速搖動(dòng)20min。

（8）過(guò)濾出微球，用生理鹽水浸泡，4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

（9）添加入乳酸菌飲料中。

干酪乳桿菌微球的活菌數(shù)變化如圖3、圖4所示。

最后應(yīng)說(shuō)明的是：以上所述僅為本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施例而已，并不用于限制本發(fā)明，盡管參照前述實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行了詳細(xì)的說(shuō)明，對(duì)于本領(lǐng)域的技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，其依然可以對(duì)前述各實(shí)施例所記載的技術(shù)方案進(jìn)行修改，或者對(duì)其中部分技術(shù)特征進(jìn)行等同替換。凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所作的任何修改、等同替換、改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。