交叉引用

本申請要求提交于2014年11月11日的第62/078,385號美國臨時申請的權益，其通過引用而并入本文。

發(fā)明背景

消費者對注重健康的快餐選擇的需求的不斷增長使得近年來對蛋清的需求呈現歷史新高。最近快餐連鎖店推出的“健康選擇”菜單項目的成功(例如，麥當勞的“蛋清喜悅”早餐三明治)以及日益增長的對冠心病與過量膽固醇攝入之間聯系的認識已使得消費者規(guī)避膽固醇豐富的蛋黃而傾向于蛋白質相對較多、碳水化合物較少的蛋清制品。這一趨勢使得全球干燥蛋白庫存處于歷史低位，同時液體蛋清的成本在2013年上漲了80％。隨著2014年7月的價格與去年同期相比翻了一倍，并且達到2012年的三倍，預計這一趨勢將持續(xù)下去。價格的急劇上漲尤其影響了蛋清是關鍵成分的成品食物的制造商(例如，烘焙混合物的制造者)。

雞蛋蛋白質生產的無雞蛋替代品旨在為最終承擔生產商努力降低成本以及滿足日益增長的全球需求的壓力的產蛋雞的惡劣條件提供解決方案。除了越來越有健康意識的消費者基礎之外，人們普遍認識到母雞所經受的大規(guī)模工業(yè)孵化場實踐的不人道的狀況，關于它們復雜社會行為的能力的科學共識以及工廠養(yǎng)殖母雞相對于散養(yǎng)產蛋雞的明顯壓力的證據都支持該認識。這種對工業(yè)孵化場不人道的方面的厭惡可能會促使人們接受并最終傾向于無動物成分蛋清替代品，而非工廠養(yǎng)殖的雞蛋。

無動物成分雞蛋蛋白質生產的潛力不依賴于產蛋雞的生產能力，并且不受由廣泛的疾病暴發(fā)或原料的短缺或價格上漲造成的市場不確定性的影響。此外，正如世界各地最近爆發(fā)的禽類傳播疾病所提示的，禽類向人類傳播疾病的風險因依賴于頻繁人類接觸和密集母雞群體的維護的養(yǎng)殖實踐而加劇。采用無動物方法進行雞蛋蛋白質生產可被視為針對未來禽類向人類傳播疾病的風險的保護措施。

亟需使生產和價格分別與世界范圍的雞蛋庫存和價格變動的不確定性脫鉤的、替代的無雞蛋卵清蛋白生產方法。這樣的方法對于例如希望將蛋清選擇納入其菜單的快餐連鎖店以及基于蛋清的食品混合物的制造商將會是有吸引力的選擇。

技術實現要素：

在一方面，本公開內容提供了生產卵清蛋白組合物的方法，所述方法包括：重組地表達兩種或更多種卵清蛋白；以及混合所述兩種或更多種卵清蛋白。在一些實施方案中，所述卵清蛋白可選自卵白蛋白、卵轉鐵蛋白(ovotransferrin)、卵類黏蛋白、g162mf167a卵類黏蛋白、卵球蛋白g2、卵球蛋白g3、α-卵黏蛋白、β-卵黏蛋白、溶菌酶、卵抑制劑(ovoinhibitor)、卵糖蛋白、黃素蛋白、卵巨球蛋白、卵固蛋白(ovostatin)、半胱氨酸蛋白酶抑制劑、抗生物素蛋白、卵白蛋白相關蛋白x、卵白蛋白相關蛋白y，以及它們的任意組合；諸如選自卵白蛋白、卵轉鐵蛋白、卵類黏蛋白、g162mf167a卵類黏蛋白、卵球蛋白g2、卵球蛋白g3、溶菌酶、卵抑制劑、卵糖蛋白、黃素蛋白、卵巨球蛋白、卵固蛋白、半胱氨酸蛋白酶抑制劑、抗生物素蛋白、卵白蛋白相關蛋白x、卵白蛋白相關蛋白y，以及它們的任意組合。在任一前述實施方案中，所述重組地表達所述兩種或更多種卵清蛋白可在一個或多個宿主細胞中進行。在任一前述實施方案中，所述方法可進一步包括從所述一個或多個宿主細胞分泌所述兩種或更多種卵清蛋白。在任一前述實施方案中，所述重組地表達所述兩種或更多種卵清蛋白可采用無細胞蛋白質合成進行。在任一前述實施方案中，所述方法可進一步包括向所述卵清蛋白組合物中添加食品添加劑。在任一前述實施方案中，所述方法可進一步包括對所述卵清蛋白組合物進行脫糖、穩(wěn)定化或從中去除葡萄糖。在任一前述實施方案中，所述方法可進一步包括對所述卵清蛋白組合物進行巴氏滅菌或超巴氏滅菌。在任一前述實施方案中，所述方法可進一步包括干燥所述卵清蛋白組合物。在任一前述實施方案中，所述方法可進一步包括酶促地、化學地或機械地消化所述兩種或更多種卵清蛋白中的一種或多種。

在一方面，本公開內容提供了包含一種或多種重組卵清蛋白或其片段的經加工的可消費產品。在一些實施方案中，所述一種或多種卵清蛋白可選自卵白蛋白、卵轉鐵蛋白、卵類黏蛋白、g162mf167a卵類黏蛋白、卵球蛋白g2、卵球蛋白g3、α-卵黏蛋白、β-卵黏蛋白、溶菌酶、卵抑制劑、卵糖蛋白、黃素蛋白、卵巨球蛋白、卵固蛋白、半胱氨酸蛋白酶抑制劑、抗生物素蛋白、卵白蛋白相關蛋白x、卵白蛋白相關蛋白y，以及它們的任意組合；諸如選自卵白蛋白、卵轉鐵蛋白、卵類黏蛋白、g162mf167a卵類黏蛋白、卵球蛋白g2、卵球蛋白g3、溶菌酶、卵抑制劑、卵糖蛋白、黃素蛋白、卵巨球蛋白、卵固蛋白、半胱氨酸蛋白酶抑制劑、抗生物素蛋白、卵白蛋白相關蛋白x、卵白蛋白相關蛋白y，以及它們的任意組合。在任一前述實施方案中，所述經加工的可消費產品可包含兩種或更多種、三種或更多種、四種或更多種、五種或更多種或者六種或更多種卵清蛋白，或它們的片段。在任一前述實施方案中，所述經加工的可消費產品可缺少一種或多種、兩種或更多種、三種或更多種、五種或更多種、十種或更多種或者二十種或更多種卵清蛋白。在任一前述實施方案中，所述經加工的可消費產品可缺少卵類黏蛋白。在任一前述實施方案中，所述經加工的可消費產品可缺少一種或多種、兩種或更多種、三種或更多種、五種或更多種、十種或更多種或者二十種或更多種卵黃蛋白。在任一前述實施方案中，所述經加工的可消費產品可選自食物產品、飲料產品、膳食補充劑、食品添加劑、藥物產品、衛(wèi)生產品及它們的任意組合，諸如選自食物產品和飲料產品。

在一方面，本公開內容提供了生產可消費產品的方法，所述方法包括：重組地表達一種或多種卵清蛋白；以及將所述一種或多種卵清蛋白與一種或多種成分混合以產生可消費產品。在一些實施方案中，所述一種或多種成分可包括食品添加劑。在任一前述實施方案中，所述一種或多種成分可包括卵清蛋白。在任一前述實施方案中，所述一種或多種成分可包括重組卵清蛋白。在任一前述實施方案中，所述一種或多種成分可以不包括卵清蛋白。在任一前述實施方案中，所述一種或多種卵清蛋白可包括兩種或更多種、三種或更多種、四種或更多種或者五種或更多種卵清蛋白。

在一方面，本公開內容提供了用于生產卵清蛋白或其片段的方法，所述方法包括：在宿主細胞中重組地表達所述卵清蛋白或其片段，其中所述宿主細胞可包含編碼所述卵清蛋白或其片段的多核苷酸，并且其中所述卵清蛋白可選自卵球蛋白g2、卵球蛋白g3、α-卵黏蛋白、β-卵黏蛋白、卵糖蛋白、黃素蛋白、卵巨球蛋白、半胱氨酸蛋白酶抑制劑，以及它們的任意組合，諸如選自卵球蛋白g2、卵球蛋白g3、卵糖蛋白、黃素蛋白、卵巨球蛋白、半胱氨酸蛋白酶抑制劑，以及它們的任意組合。在一些實施方案中，所述方法可進一步包括從所述宿主細胞分泌所述卵清蛋白或其片段。在任一前述實施方案中，所述方法可進一步包括純化所述卵清蛋白或其片段。在任一前述實施方案中，所述方法可進一步包括在所述宿主細胞中重組地表達第二卵清蛋白或其片段。在任一前述實施方案中，所述片段可包括所述卵清蛋白的至少10％、20％、30％、40％或50％。

在一方面，本公開內容提供了用于生產兩種或更多種卵清蛋白或其片段的方法，所述方法包括在宿主細胞中重組地表達所述兩種或更多種卵清蛋白或其片段。在一些實施方案中，所述宿主細胞可包含編碼所述兩種或更多種卵清蛋白或其片段的一種或多種多核苷酸。在任一前述實施方案中，所述方法可進一步包括從所述宿主細胞分泌所述兩種或更多種卵清蛋白或其片段。在任一前述實施方案中，所述方法可進一步包括純化所述兩種或更多種卵清蛋白或其片段。在任一前述實施方案中，所述兩種或更多種卵清蛋白可選自卵白蛋白、卵轉鐵蛋白、卵類黏蛋白、g162mf167a卵類黏蛋白、卵球蛋白g2、卵球蛋白g3、α-卵黏蛋白、β-卵黏蛋白、溶菌酶、卵抑制劑、卵糖蛋白、黃素蛋白、卵巨球蛋白、卵固蛋白、半胱氨酸蛋白酶抑制劑、抗生物素蛋白、卵白蛋白相關蛋白x、卵白蛋白相關蛋白y，以及它們的任意組合；諸如選自卵白蛋白、卵轉鐵蛋白、卵類黏蛋白、g162mf167a卵類黏蛋白、卵球蛋白g2、卵球蛋白g3、溶菌酶、卵抑制劑、卵糖蛋白、黃素蛋白、卵巨球蛋白、卵固蛋白、半胱氨酸蛋白酶抑制劑、抗生物素蛋白、卵白蛋白相關蛋白x、卵白蛋白相關蛋白y，以及它們的任意組合。

在一方面，本公開內容提供了分離的重組卵清蛋白，其選自卵球蛋白g2、卵球蛋白g3、α-卵黏蛋白、β-卵黏蛋白、卵糖蛋白、黃素蛋白、卵巨球蛋白、半胱氨酸蛋白酶抑制劑，以及它們的任意組合，諸如選自卵球蛋白g2、卵球蛋白g3、卵糖蛋白、黃素蛋白、卵巨球蛋白、半胱氨酸蛋白酶抑制劑，以及它們的任意組合。在一些實施方案中，所述分離的重組卵清蛋白可具有與蛋清中的卵清蛋白不同的糖基化、乙?；蛄姿峄Ｊ?。在任一前述實施方案中，所述分離的重組卵清蛋白可具有與蛋清中的卵清蛋白不同的解鏈溫度，如相對于蛋清中的卵清蛋白更高或更低的解鏈溫度。在任一前述實施方案中，所述分離的重組卵清蛋白可包含相對于蛋清中的卵清蛋白的一個或多個氨基酸插入、缺失或置換。在任一前述實施方案中，所述分離的重組卵清蛋白可選自seqidno:1、seqidno:2、seqidno:3、seqidno:4、seqidno:5、seqidno:6、seqidno:7、seqidno:8、seqidno:9、seqidno:10、seqidno:11、seqidno:12、seqidno:13，以及它們的任意組合。

在一方面，本公開內容提供了包含色氨酸的分離的突變卵類黏蛋白。在一些實施方案中，可重組地表達所述分離的突變卵類黏蛋白。在任一前述實施方案中，所述分離的突變卵類黏蛋白可為完整的蛋白質。在任一前述實施方案中，所述分離的突變卵類黏蛋白在與seqidno:3最佳比對時可包含相對于seqidno:3的一個或多個、兩個或更多個、三個或更多個、四個或更多個、五個或更多個或者六個或更多個氨基酸插入或置換。在任一前述實施方案中，所述分離的突變卵類黏蛋白可包含一個或多個氨基酸置換，其中所述氨基酸置換可包括一個或多個、兩個或更多個、三個或更多個、四個或更多個、五個或更多個或者六個或更多個酪氨酸至色氨酸的置換。在任一前述實施方案中，所述分離的突變卵類黏蛋白在與seqidno:3最佳比對時可包含相對于seqidno:3的至多四個、至多五個、至多六個或至多十個氨基酸插入或置換。在任一前述實施方案中，所述分離的突變卵類黏蛋白可包含一個或多個、兩個或更多個、三個或更多個或者四個或更多個色氨酸殘基。在任一前述實施方案中，所述分離的突變卵類黏蛋白可在n末端或c末端包含一個或多個、兩個或更多個、三個或更多個或者四個或更多個色氨酸殘基。在任一前述實施方案中，所述分離的突變卵類黏蛋白在與seqidno:3最佳比對時相對于seqidno:3可包含在位置162處的甲硫氨酸和在位置167位置處的丙氨酸。在任一前述實施方案中，所述分離的突變卵類黏蛋白可具有相對于野生型卵類黏蛋白降低的變應原性。在任一前述實施方案中，所述分離的突變卵類黏蛋白可具有相對于野生型卵類黏蛋白增強的消化性。

在一方面，本公開內容提供了一種卵清蛋白組合物，其包含本文所述的分離的重組卵清蛋白或分離的突變卵類黏蛋白；以及一種或多種卵清蛋白。在一些實施方案中，可重組地表達所述一種或多種卵清蛋白。

在一方面，本公開內容提供了包含兩種或更多種重組卵清蛋白的卵清蛋白組合物。

在一些實施方案中，對于本文所述的卵清蛋白組合物，所述兩種或更多種重組卵清蛋白可選自卵白蛋白、卵轉鐵蛋白、卵類黏蛋白、g162mf167a卵類黏蛋白、卵球蛋白g2、卵球蛋白g3、α-卵黏蛋白、β-卵黏蛋白、溶菌酶、卵抑制劑、卵糖蛋白、黃素蛋白、卵巨球蛋白、卵固蛋白、半胱氨酸蛋白酶抑制劑、抗生物素蛋白、卵白蛋白相關蛋白x、卵白蛋白相關蛋白y，以及它們的任意組合；諸如選自卵白蛋白、卵轉鐵蛋白、卵類黏蛋白、g162mf167a卵類黏蛋白、卵球蛋白g2、卵球蛋白g3、溶菌酶、卵抑制劑、卵糖蛋白、黃素蛋白、卵巨球蛋白、卵固蛋白、半胱氨酸蛋白酶抑制劑、抗生物素蛋白、卵白蛋白相關蛋白x、卵白蛋白相關蛋白y，以及它們的任意組合。在任一前述實施方案中，所述卵清蛋白組合物可包含卵白蛋白。在任一前述實施方案中，所述卵清蛋白組合物可包含本文所述的分離的重組卵清蛋白。在任一前述實施方案中，所述卵清蛋白組合物可包含本文所述的分離的突變卵類黏蛋白。在任一前述實施方案中，所述卵清蛋白可具有來源于單個物種的序列。在任一前述實施方案中，所述物種可為家雞(gallusgallusdomesticus)。在任一前述實施方案中，所述物種可以不是家雞。在任一前述實施方案中，所述卵清蛋白可具有來源于超過一個物種的序列。在任一前述實施方案中，所述卵清蛋白可具有來源于禽類的序列，所述禽類選自家禽、飛禽、水禽、獵禽、雞、鵪鶉、火雞、鴨、鴕鳥、鵝、鷗、珍珠雞、雉雞、鴯鹋及它們的任意組合。在任一前述實施方案中，所述卵清蛋白組合物可包含三種或更多種、四種或更多種或者五種或更多種卵清蛋白。在任一前述實施方案中，所述卵清蛋白組合物可包含至多5種、至多10種、至多15種或至多20種卵清蛋白。在任一前述實施方案中，所述卵清蛋白組合物可進一步包含水。在任一前述實施方案中，所述卵清蛋白組合物可具有至多95％的水百分比。在任一前述實施方案中，所述卵清蛋白組合物可具有80％至95％的水百分比。在任一前述實施方案中，所述卵清蛋白組合物可包含按干重計至少90％的蛋白質。在任一前述實施方案中，所述卵清蛋白組合物可進一步包含食品添加劑。在任一前述實施方案中，所述食品添加劑可選自甜味劑、鹽、碳水化合物及其任意組合。

在任一前述實施方案中，所述卵清蛋白組合物可不含膽固醇。在任一前述實施方案中，所述卵清蛋白組合物可包含按干重計少于5％的脂肪。在任一前述實施方案中，所述卵清蛋白組合物可不含脂肪、飽和脂肪或反式脂肪。在任一前述實施方案中，所述卵清蛋白組合物可不含葡萄糖。在任一前述實施方案中，所述卵清蛋白組合物可不含一種或多種卵清蛋白，如卵類黏蛋白或黃素蛋白。在任一前述實施方案中，所述一種或多種卵清蛋白可選自tenp、簇蛋白、ch21、vmo-1、卵黃原蛋白、透明帶c蛋白、bc型卵轉鐵蛋白、卵抑制劑前體、卵類黏蛋白前體、簇蛋白前體、hep21蛋白前體、卵糖蛋白前體、細胞外脂肪酸結合蛋白、細胞外脂肪酸結合蛋白前體、前列腺素d2syntmayhavee腦前體、標志物蛋白、卵黃原蛋白-1、卵黃原蛋白-2、卵黃原蛋白-2前體、卵黃原蛋白-3、核黃素結合蛋白、血紅素結合蛋白、血清白蛋白前體、載脂蛋白d、卵分泌球蛋白(ovosecretoglobulin)、hep21、谷胱甘肽過氧化物酶3、脂質運載蛋白型前列腺素dsyntmayhavee/軟骨發(fā)生相關脂質運載蛋白、脫輔基脂蛋白(apovitellenin)-1、dickkopf-相關蛋白3、雞防御素-11(vmo-ii，β-防衛(wèi)素-11)、血清白蛋白(α-卵黃蛋白)、雞精子堿性蛋白(gallin)、分泌胰蛋白酶抑制劑、淋巴細胞抗原86、肌動蛋白、igμ鏈c區(qū)、巰基氧化酶1、組蛋白h4、血管生成素樣蛋白3、泛蛋白、禽蛋殼基質蛋白質(ovocalyxin)-32、聚免疫球蛋白受體、肽基-脯氨酰-順/反異構酶b、氨肽酶ey、多效營養(yǎng)因子(pleiotrophin)、中期因子(midkine)、腎素/腎素原受體、timp-2、timp-3、組蛋白h2b變體、igλ鏈、famc3蛋白、α-烯醇化酶、60s酸性核糖體蛋白p1、腱生蛋白/生腱蛋白、cepu-1、含硒蛋白質、延長因子1-α1、附睪分泌蛋白、e1、14-3-3蛋白ζ(ζ)、嗅介蛋白樣蛋白3、谷胱甘肽s-轉移酶2、β-2-微球蛋白、rgd-cap、載脂蛋白b、高爾基體蛋白1、cochlin、蛋白酶體亞單位α型-7、載脂蛋白a-i、真核起始因子4a-ii、aspic/軟骨酸性蛋白1、磷酸丙糖異構酶、蛋白酶體亞單位α型、igλ鏈c-區(qū)、前膠原-賴氨酸2-氧代戊二酸5-雙加氧酶1、adp-核糖基化因子5、鈣調蛋白、蛋白質二硫鍵異構酶、膜聯蛋白i、延長因子2、過氧化物還原酶-1、hsp70、蛋白質二硫鍵異構酶a3、鈣網蛋白、40s核糖體蛋白sa/層粘連蛋白受體1、α-輔肌動蛋白-4、腫瘤壞死因子相關的凋亡誘導配體、維生素d-結合蛋白、腦信號蛋白-3c、內質蛋白、過氧化氫酶、肝α-淀粉酶、過渡性eratp酶、鈣粘蛋白-1、血管緊張素轉換酶、骨形態(tài)發(fā)生蛋白1、鳥嘌呤核苷酸結合蛋白亞基β2-樣1、組氨酸氨裂解酶、膜聯蛋白a2、β-連環(huán)蛋白、rab-gdp解離抑制物、核纖層蛋白-a、ovocleidin-116、氨肽酶、hsp90-α、缺氧上調蛋白1、熱休克同源蛋白hsp90β、atp檸檬酸合酶、肌球蛋白-9，以及它們的組合。在任一前述實施方案中，所述卵清蛋白組合物可缺少兩種或更多種、三種或更多種、五種或更多種、十種或更多種或者二十種或更多種卵清蛋白。在任一前述實施方案中，所述卵清蛋白組合物不是雞蛋、蛋清或蛋黃。

在任一前述實施方案中，所述卵清蛋白組合物可進一步包含一種或多種卵清蛋白，該一種或多種卵清蛋白選自tenp、簇蛋白、ch21、vmo-1、卵黃原蛋白、透明帶c蛋白、bc型卵轉鐵蛋白、卵抑制劑前體、卵類黏蛋白前體、簇蛋白前體、hep21蛋白前體、卵糖蛋白前體、細胞外脂肪酸結合蛋白、細胞外脂肪酸結合蛋白前體、前列腺素d2syntmayhavee腦前體、標志物蛋白、卵黃原蛋白-1、卵黃原蛋白-2、卵黃原蛋白-2前體、卵黃原蛋白-3、核黃素結合蛋白、血紅素結合蛋白、血清白蛋白前體、載脂蛋白d、卵分泌球蛋白、hep21、谷胱甘肽過氧化物酶3、脂質運載蛋白型前列腺素d合酶/軟骨發(fā)生相關脂質運載蛋白、脫輔基脂蛋白-1、dickkopf-相關蛋白3、雞防御素-11(vmo-ii，β-防衛(wèi)素-11)、血清白蛋白(α-卵黃蛋白)、雞精子堿性蛋白、分泌胰蛋白酶抑制劑、淋巴細胞抗原86、肌動蛋白、igμ鏈c區(qū)、巰基氧化酶1、組蛋白h4、血管生成素樣蛋白3、泛蛋白、禽蛋殼基質蛋白質-32、聚免疫球蛋白受體、肽基-脯氨酰-順/反異構酶b、氨肽酶ey、多效營養(yǎng)因子、中期因子、腎素/腎素原受體、timp-2、timp-3、組蛋白h2b變體、igλ鏈、famc3蛋白、α-烯醇化酶、60s酸性核糖體蛋白p1、腱生蛋白/生腱蛋白、cepu-1、含硒蛋白質、延長因子1-α1、附睪分泌蛋白、e1、14-3-3蛋白ζ(ζ)、嗅介蛋白樣蛋白3、谷胱甘肽s-轉移酶2、β-2-微球蛋白、rgd-cap、載脂蛋白b、高爾基體蛋白1、cochlin、蛋白酶體亞單位α型-7、載脂蛋白a-i、真核起始因子4a-ii、aspic/軟骨酸性蛋白1、磷酸丙糖異構酶、蛋白酶體亞單位α型、igλ鏈c-區(qū)、前膠原-賴氨酸2-氧代戊二酸5-雙加氧酶1、adp-核糖基化因子5、鈣調蛋白、蛋白質二硫鍵異構酶、膜聯蛋白i、延長因子2、過氧化物還原酶-1、hsp70、蛋白質二硫鍵異構酶a3、鈣網蛋白、40s核糖體蛋白sa/層粘連蛋白受體1、α-輔肌動蛋白-4、腫瘤壞死因子相關的凋亡誘導配體、維生素d-結合蛋白、腦信號蛋白-3c、內質蛋白、過氧化氫酶、肝α-淀粉酶、過渡性eratp酶、鈣粘蛋白-1、血管緊張素轉換酶、骨形態(tài)發(fā)生蛋白1、鳥嘌呤核苷酸結合蛋白亞基β2-樣1、組氨酸氨裂解酶、膜聯蛋白a2、β-連環(huán)蛋白、rab-gdp解離抑制物、核纖層蛋白-a、ovocleidin-116、氨肽酶、hsp90-α、缺氧上調蛋白1、熱休克同源蛋白hsp90β、atp檸檬酸合酶，以及肌球蛋白-9，以及它們的組合。

在任一前述實施方案中，所述卵清蛋白組合物可具有6至10范圍內的ph。在任一前述實施方案中，所述卵清蛋白組合物可具有10mm至60mm，如30mm至60mm范圍內的泡沫高度。在任一前述實施方案中，所述卵清蛋白組合物可具有至少30mm的泡沫高度。在任一前述實施方案中，所述卵清蛋白組合物的泡沫高度可大于蛋清的泡沫高度。在任一前述實施方案中，所述卵清蛋白組合物在攪打后30分鐘時可具有至多10mm或至多5mm的泡沫滲出(seep)。在任一前述實施方案中，在攪打后30分鐘時，所述卵清蛋白組合物的泡沫滲出可小于蛋清的泡沫滲出。在任一前述實施方案中，所述卵清蛋白組合物可具有30g至100g，如40g至100g范圍內的泡沫強度。在任一前述實施方案中，所述卵清蛋白組合物的泡沫強度可大于蛋清的泡沫強度。在任一前述實施方案中，所述卵清蛋白組合物可具有100g至1500g、500g至1500g或700g至1500g范圍內的凝膠強度。在任一前述實施方案中，所述卵清蛋白組合物的凝膠強度可大于蛋清的凝膠強度。在任一前述實施方案中，所述卵清蛋白組合物可具有至少一個月、至少兩個月、至少三個月或至少六個月的保質期。在任一前述實施方案中，所述卵清蛋白組合物可具有相對于蛋清降低的變應原性。在任一前述實施方案中，所述卵清蛋白組合物可為液體。在任一前述實施方案中，所述卵清蛋白組合物可為固體或粉末。在任一前述實施方案中，可以冷凍所述卵清蛋白組合物。

在一方面，本公開內容提供了編碼本文所述的分離的重組卵清蛋白或分離的突變卵類黏蛋白的多核苷酸。在一些實施方案中，所述多核苷酸可以是密碼子優(yōu)化的。在任一前述實施方案中，所述多核苷酸可為dna或rna。在任一前述實施方案中，所述多核苷酸可進一步編碼信號肽。在任一前述實施方案中，所述信號肽可在所述卵清蛋白或多肽的n-末端。在任一前述實施方案中，所述信號肽可選自酸性磷酸酶、白蛋白、堿性細胞外蛋白酶、α-交配因子、淀粉酶、β-酪蛋白、碳水化合物結合模塊家族21-淀粉結合結構域、羧肽酶y、纖維二糖水解酶i、二肽基蛋白酶、葡糖淀粉酶、熱休克蛋白、疏水蛋白、菊粉酶、轉化酶、殺傷蛋白或殺傷毒素、富亮氨酸的人工信號肽cly-l8、溶菌酶、植物凝集素、麥芽糖結合蛋白、p因子、巴斯德畢赤酵母(pichiapastoris)dse、巴斯德畢赤酵母exg、巴斯德畢赤酵母pir1、巴斯德畢赤酵母scw、pir4，以及它們的任意組合。在任一前述實施方案中，所述信號肽可選自seqidno:14、seqidno:15、seqidno:16、seqidno:17、seqidno:18、seqidno:19、seqidno:20、seqidno:21、seqidno:22、seqidno:23、seqidno:24、seqidno:25、seqidno:26、seqidno:27、seqidno:28、seqidno:29、seqidno:30、seqidno:31、seqidno:32、seqidno:33、seqidno:34、seqidno:35、seqidno:36、seqidno:37、seqidno:38、seqidno:39、seqidno:40、seqidno:41、seqidno:42、seqidno:43、seqidno:44、seqidno:45、seqidno:46、seqidno:47、seqidno:48、seqidno:49、seqidno:50、seqidno:51、seqidno:52、seqidno:53、seqidno:54、seqidno:55、seqidno:56、seqidno:57、seqidno:58、seqidno:59、seqidno:60、seqidno:61、seqidno:62、seqidno:63、seqidno:64、seqidno:65、seqidno:66、seqidno:67、seqidno:68、seqidno:69、seqidno:70、seqidno:71，以及它們的任意組合。在任一前述實施方案中，所述信號肽的長度可為至多100個氨基酸。在任一前述實施方案中，所述多核苷酸可進一步編碼信號肽酶切割或識別位點。在任一前述實施方案中，所述信號肽酶可選自kex2、krp1、腸激酶(ekt)、凝血酶、因子xa(fxa)、煙草蝕紋病毒(tev)、3cprescission，以及它們的任意組合。

在一方面，本公開內容提供了包含本文所述的多核苷酸的表達載體。在一些實施方案中，所述表達載體可進一步包含啟動子。在任一前述實施方案中，所述啟動子可為組成型啟動子、誘導型啟動子或雜合啟動子。在任一前述實施方案中，所述啟動子可選自acu-5、adh1+、醇脫氫酶(adh1、adh2、adh4)、ahsb4m、ainv、alca、α-淀粉酶、交替氧化酶(aod)、醇氧化酶(aox1)、醇氧化酶2(aox2)、axdh、b2、camv、纖維二糖水解酶i(cbh1)、ccg-1、cdna1、細胞絲多肽(cfp)、cpc-2、ctr4+、cup1、二羥基丙酮合酶(das)、烯醇化酶(eno、eno1)、甲醛脫氫酶(fld1)、fmd、甲醛脫氫酶(fmdh)、g1、g6、gaa、gal1、gal2、gal3、gal4、gal5、gal6、gal7、gal8、gal9、gal10、gcw14、gdha、gla-1、α-葡糖淀粉酶(glaa)、甘油醛-3-磷酸脫氫酶(gpda、gap、gapdh)、磷酸甘油酸變位酶(gpm1)、甘油激酶(gut1)、hsp82、invl+、異檸檬酸裂合酶(icl1)、乙酰羥酸異構體還原酶(ilv5)、kar2、kex2、β-半乳糖苷酶(lac4)、leu2、melo、met3、甲醇氧化酶(mox)、nmt1、nsp、pcbc、pet9、過氧化物酶體生成蛋白8(pex8)、磷酸甘油酸激酶(pgk、pgk1)、pho1、pho5、pho89、磷脂酰肌醇合酶(pis1)、pyk1、丙酮酸激酶(pki1)、rps7、山梨醇脫氫酶(sdh)、3-磷酸絲氨酸氨基轉移酶(ser1)、ssa4、sv40、tef、翻譯延伸因子1α(tef1)、thi11、高絲氨酸激酶(thr1)、tpi、tps1、磷酸丙糖異構酶(tpi1)、xrp2、ypt1，以及它們的任意組合。在任一前述實施方案中，所述表達載體可進一步包含營養(yǎng)缺陷型標志物。在任一前述實施方案中，所述營養(yǎng)缺陷型標志物可選自ade1、arg4、his4、ura3、met2及其任意組合。在任一前述實施方案中，所述表達載體可進一步包含選擇性標記。在任一前述實施方案中，所述選擇性標記可為抗性基因。在任一前述實施方案中，所述抗性基因可賦予對吉歐霉素(zeocin)、氨芐西林、殺稻瘟素、卡那霉素、nurseothricin、氯霉素、四環(huán)素、三氯生、更昔洛韋及其任意組合的抗性。在任一前述實施方案中，所述表達載體可包含質粒。

在一方面，本公開內容提供了經轉化以表達一種或多種異源卵清蛋白的宿主細胞，其中所述宿主細胞不選自大腸桿菌(escherichiacoli)、巴斯德畢赤酵母、水稻、黑曲霉(aspergillusniger)、米曲霉(aspergillusoryzae)、產黃頭孢霉(acremoniumchrysogenum)、釀酒酵母(saccharomycescerevisiae)、昆蟲、小鼠、玉米、pseudozyma、煙草、斑馬魚，以及它們的任意組合。

在一方面，本公開內容提供了經轉化以表達一種或多種異源卵清蛋白的宿主細胞，其中所述一種或多種卵清蛋白不選自卵白蛋白、卵轉鐵蛋白、溶菌酶、卵固蛋白、卵類黏蛋白、卵抑制劑、抗生物素蛋白，以及它們的組合。

在一方面，本公開內容提供了包含本文所述的多核苷酸的宿主細胞。

在一方面，本公開內容提供了包含本文所述的表達載體的宿主細胞。在一些實施方案中，所述表達載體可以是基因組整合的。在任一前述實施方案中，所述宿主細胞可包含該表達載體的多個拷貝。

在任一前述實施方案中，所述宿主細胞可選自細菌、真菌、植物、昆蟲、哺乳動物及其任意組合。在任一前述實施方案中，所述真菌可為酵母或絲狀真菌。在任一前述實施方案中，所述酵母可選自arxulaspp.、arxulaadeninivorans、克魯維酵母屬的種(kluyveromycesspp.)、乳酸克魯維酵母(kluyveromyceslactis)、畢赤酵母屬的種(pichiaspp.)、安格斯畢赤酵母(pichiaangusta)、巴斯德畢赤酵母、酵母屬的種(saccharomycesspp.)、釀酒酵母、裂殖酵母屬的種(schizosaccharomycesspp.)、粟酒裂殖酵母(schizosaccharomycespombe)、耶氏酵母屬的種(yarrowiaspp.)，以及它們的任意組合。在任一前述實施方案中，所述真菌可選自蘑菇屬的種(agaricusspp.)、二孢蘑菇(agaricusbisporus)、曲霉屬的種(aspergillusspp.)、泡盛曲霉(aspergillusawamori)、煙曲霉(aspergillusfumigatus)、構巢曲霉(aspergillusnidulans)、黑曲霉(aspergillusniger)、米曲霉(aspergillusoryzae)、刺盤孢屬的種(colletotrichumspp.)、盤長孢狀刺盤孢(colletotrichumgloeosporiodes)、內座殼屬的種(endothiaspp.)、寄生內座殼(endothiaparasitica)、鐮孢屬的種(fusariumspp.)、禾本科鐮孢(fusariumgraminearum)、腐皮鐮孢(fusariumsolani)、毛霉屬的種(mucorspp.)、米黑毛霉(mucormiehei)、微小毛霉(mucorpusillus)、毀絲霉屬的種(myceliophthoraspp.)、嗜熱毀絲霉(myceliophthorathermophila)、脈孢菌屬的種(neurosporaspp.)、粗糙脈孢菌(neurosporacrassa)、青霉屬的種(penicilliumspp.)、沙門柏干酪青霉(penicilliumcamemberti)、變灰青霉(penicilliumcanescens)、產黃青霉(penicilliumchrysogenum)、埃默森青霉(踝節(jié)菌)(penicillium(talaromyces)emersonii)、繩狀青霉(penicilliumfuniculosum)、產紫青霉(penicilliumpurpurogenum)、婁地青霉(penicilliumroqueforti)、側耳屬的種(pleurotusspp.)、糙皮側耳(pleurotusostreatus)、根毛霉屬的種(rhizomucorspp.)、米黑根毛霉(rhizomucormiehei)、微小根毛霉(rhizomucorpusillus)、根霉屬的種(rhizopusspp.)、少根根霉(rhizopusarrhizus)、少孢根霉(rhizopusoligosporus)、米根霉(rhizopusoryzae)、木霉屬的種(trichodermaspp.)、深綠木霉(trichodermaaltroviride)、里氏木霉(trichodermareesei)、綠木霉(trichodermavireus)，以及它們的任意組合。在任一前述實施方案中，所述宿主細胞可選自米曲霉、枯草桿菌(bacillussubtilis)、大腸桿菌、嗜熱毀絲霉、粗糙脈孢菌、巴斯德畢赤酵母以及它們的任意組合。在任一前述實施方案中，所述宿主細胞可被美國食品與藥品管理局批準為通常認為是安全的。在任一前述實施方案中，所述宿主細胞可以是營養(yǎng)缺陷型的。

在一方面，本公開內容提供了包含本文所述的宿主細胞的細胞培養(yǎng)物。

在一方面，本公開內容提供了用于制備可消費產品的方法，所述方法包括用本文所述的分離的重組卵清蛋白、分離的突變卵類黏蛋白或卵清蛋白組合物替換一部分基于雞蛋的成分。

在一方面，本公開內容提供了用于制備可消費產品的方法，所述方法包括添加本文所述的分離的重組卵清蛋白、分離的突變卵類黏蛋白或卵清蛋白組合物。

在一方面，本公開內容提供了使用重組卵清蛋白作為加工助劑來制備經加工的可消費產品的方法。在一些實施方案中，所述方法可進一步包括去除所述重組卵清蛋白。

在一方面，本公開內容提供了使用本文所述的分離的重組卵清蛋白、分離的突變卵類黏蛋白或卵清蛋白組合物作為加工助劑來制備經加工的可消費產品的方法。在一些實施方案中，所述方法可進一步包括去除所述分離的重組卵清蛋白、分離的突變卵類黏蛋白或卵清蛋白組合物。

在任一前述實施方案中，所述加工助劑充當乳化劑、結合劑、膨松劑、增稠劑、保濕劑、粘合劑、褐變劑、澄清劑、膠凝劑、結晶控制劑、濕潤劑、嫩化劑、充氣劑、結構改善劑、凝結劑、涂層劑、著色劑、光澤劑、調味劑、冷凍劑、隔離劑、口感改善劑、ph緩沖劑、保質期延長劑、防腐劑、抗微生物劑(例如，抗細菌劑、抗真菌劑、抗病毒劑、抗寄生蟲劑)、食品腐敗抑制劑、蘋果乳酸發(fā)酵抑制劑、質地改進劑、雞蛋替代物，或它們的任意組合。

在一方面，本公開內容提供了包含本文所述的分離的重組卵清蛋白、分離的突變卵類黏蛋白或卵清蛋白組合物的可消費產品。在一些實施方案中，所述可消費產品可選自食物產品、飲料產品、藥物產品、衛(wèi)生產品，以及它們的任意組合。

在一方面，本公開內容提供了使用重組卵清蛋白作為乳化劑、結合劑、膨松劑、增稠劑、保濕劑、粘合劑、褐變劑、澄清劑、膠凝劑、結晶控制劑、濕潤劑、嫩化劑、充氣劑、結構改善劑、凝結劑、涂層劑、著色劑、光澤劑、調味劑、冷凍劑、隔離劑、口感改善劑、ph緩沖劑、保質期延長劑、防腐劑、抗微生物劑(例如，抗細菌劑、抗真菌劑、抗病毒劑、抗寄生蟲劑)、食品腐敗抑制劑、蘋果乳酸發(fā)酵抑制劑、質地改進劑、雞蛋替代物或它們的任意組合的方法。

在一方面，本公開內容提供了使用本文所述的分離的重組卵清蛋白、分離的突變卵類黏蛋白或卵清蛋白組合物作為乳化劑、結合劑、膨松劑、增稠劑、保濕劑、粘合劑、褐變劑、澄清劑、膠凝劑、結晶控制劑、濕潤劑、嫩化劑、充氣劑、結構改善劑、凝結劑、涂層劑、著色劑、光澤劑、調味劑、冷凍劑、隔離劑、口感改善劑、ph緩沖劑、保質期延長劑、防腐劑、抗微生物劑(例如，抗細菌劑、抗真菌劑、抗病毒劑、抗寄生蟲劑)、食品腐敗抑制劑、蘋果乳酸發(fā)酵抑制劑、質地改進劑、雞蛋替代物或它們的任意組合的方法。

在一方面，本公開內容提供了用于診斷食物變態(tài)反應的方法，所述方法包括向受試者引入本文所述的分離的重組卵清蛋白、分離的突變卵類黏蛋白或卵清蛋白組合物。在一些實施方案中，可采用皮膚點刺試驗、血液檢查或口服食物激發(fā)進行引入。

在一方面，本公開內容提供了用于治療食物變態(tài)反應的方法，所述方法包括用本文所述的分離的重組卵清蛋白、分離的突變卵類黏蛋白或卵清蛋白組合物替換蛋清變應原，或通過食用本文所述的分離的重組卵清蛋白、分離的突變卵類黏蛋白或卵清蛋白組合物來提高受試者對蛋清變應原的耐受性。

在一方面，本公開內容提供了用于抑制酒中的蘋果乳酸發(fā)酵的方法，所述方法包括向酒提供蛋清溶菌酶。在一些實施方案中，可重組地表達所述蛋清溶菌酶。

援引并入

本說明書中提及的所有出版物、專利和專利申請均通過引用而并入本文，其程度如同特別地和單獨地指出每個單獨的出版物、專利或專利申請均通過引用而并入。

附圖說明

本發(fā)明的新特征在隨附的權利要求中具體闡述。通過參考以下對在其中利用到本發(fā)明原理的說明性實施方案加以闡述的詳細描述和附圖，將會獲得對本發(fā)明的特征和優(yōu)點的更好理解，附圖中：

圖1為卵白蛋白的氨基酸序列(seqidno:1)。

圖2為卵轉鐵蛋白的氨基酸序列(seqidno:2)。

圖3為卵類黏蛋白的氨基酸序列(seqidno:3)。

圖4為g162mf167a卵類黏蛋白的氨基酸序列(seqidno:4)。

圖5為卵球蛋白g2的氨基酸序列(seqidno:5)。

圖6為卵球蛋白g3的氨基酸序列(seqidno:6)。

圖7為α-卵黏蛋白的氨基酸序列(seqidno:7)。

圖8為β-卵黏蛋白的部分氨基酸序列(seqidno:8)。

圖9為溶菌酶的氨基酸序列(seqidno:9)。

圖10為卵抑制劑的氨基酸序列(seqidno:10)。

圖11為卵固蛋白的氨基酸序列(seqidno:11)。

圖12為卵白蛋白相關蛋白x的氨基酸序列(seqidno:12)。

圖13為卵白蛋白相關蛋白y的氨基酸序列(seqidno:13)。

圖14示出了根據實施例的卵球蛋白表達載體的示意圖。

圖15示出了根據實施例的溶菌酶表達載體的示意圖。

圖16示出了根據實施例的具有蛋白梯的重組卵白蛋白的凝膠圖像。

圖17示出了根據實施例的具有蛋白梯的重組卵類黏蛋白的凝膠圖像。

圖18示出了根據實施例的卵清蛋白組合物和蛋清的泡沫強度的示意圖。

具體實施方式

術語“約”或“大約”指在由本領域普通技術人員確定的特定值的可接受的誤差范圍內，該可接受的誤差范圍將部分地取決于該值是如何測量或確定的，例如，測量系統(tǒng)的極限。例如，根據本領域的實踐，“約”可指在1或超過1的標準偏差內?；蛘撸凹s”可指給定值的至多20％、至多15％、至多10％、至多5％或至多1％的范圍?；蛘?，特別就生物系統(tǒng)或過程而言，該術語可指數值的數量級，優(yōu)選在其5倍以內，更優(yōu)選在其2倍以內。本申請和權利要求書中描述特定值時，除非另有說明，否則應假定術語“約”是指在該特定值的可接受的誤差范圍內。

術語“多核苷酸”、“核苷酸”、“核苷酸序列”、“核酸”和“寡核苷酸”可互換使用。它們是指任何長度的核苷酸(包括脫氧核糖核苷酸或核糖核苷酸)的聚合形式，或其類似物。多核苷酸可具有任何三維結構，并且可執(zhí)行任何已知或未知的功能。以下是多核苷酸的非限制性實例：基因或基因片段的編碼區(qū)或非編碼區(qū)、從連鎖分析定義的基因座(多個基團座)、外顯子、內含子、信使rna(mrna)、轉移rna(trna)、核糖體rna(rrna)、短干擾rna(sirna)、短發(fā)夾rna(shrna)、微rna(mirna)、核酶、cdna、重組多核苷酸、支鏈多核苷酸、質粒、表達載體、任意序列的分離的dna、任意序列的分離的rna、核酸探針以及引物。多核苷酸可包含一個或多個修飾的核苷酸，如甲基化核苷酸和核苷酸類似物。如果存在對核苷酸結構的修飾，則其可在聚合物組裝之前或之后賦予。核苷酸序列可被非核苷酸組分中斷。多核苷酸可在聚合后進一步修飾，如通過與可檢測標記綴合。

“表達”是指多核苷酸從dna模板轉錄(如轉錄成mrna或其他rna轉錄物)的過程，和/或所轉錄的mrna隨后被翻譯成肽、多肽或蛋白質的過程。轉錄物和編碼的多肽可統(tǒng)稱為“基因產物”。如果多核苷酸來源于基因組dna，則表達可包括在真核細胞中mrna的剪接。

術語“多肽”、“肽”和“蛋白質”在本文中可互換使用以指代任何長度的氨基酸聚合物。聚合物可以是直鏈或支鏈的，可包含修飾的氨基酸，并且可被非氨基酸中斷。該術語還包括已通過例如二硫鍵形成、糖基化、脂化、乙?；?、磷酸化或任何其他操作(如與可檢測標記綴合)修飾的氨基酸聚合物。

如本文所用的，術語“氨基酸”包括天然氨基酸和/或非天然氨基酸或合成氨基酸，包括甘氨酸、半胱氨酸，以及d或l光學異構體，以及氨基酸類似物和擬肽。在一些實施方案中，氨基酸是蛋白原性的、天然的、標準的、非標準的、非規(guī)范的、必需的、非必需的或非天然的氨基酸。在一些實施方案中，氨基酸具有帶正電荷的側鏈、帶負電荷的側鏈、極性不帶電荷的側鏈、非極性側鏈、疏水側鏈、親水側鏈、脂族側鏈、芳族側鏈、環(huán)狀側鏈、非環(huán)狀側鏈、堿性側鏈或酸性側鏈。在一些實施方案中，氨基酸具有親核或親電側鏈。

“對照”是指出于比較目的而用于實驗的替代受試者或樣品。在一些實施方案中，對照包含來自雞蛋的蛋清。

術語“確定”、“測量”、“評價”、“評估”、“測定”和“分析”能夠在本文中可互換使用以指代任何形式的測量，并且包括確定元素是否存在(例如，檢測)。這些術語可包括定量和/或定性的確定。評估可以是相對的或絕對的?！皺z測……的存在”可包括確定存在的物質的量并且/或者確定它是否存在。

“互補性”是指核酸通過傳統(tǒng)的watson-crick或其他非傳統(tǒng)類型與另一種核酸序列形成氫鍵的能力?；パa性百分比表示核酸分子中可與第二核酸序列形成氫鍵(例如，watson-crick堿基配對)的殘基百分比(例如，10個中有5個、6個、7個、8個、9個、10個分別為50％、60％、70％、80％、90％和100％的互補性)。“完美互補的”是指核酸序列的所有連續(xù)殘基將會與第二核酸序列中的相同數目的連續(xù)殘基形成氫鍵。如本文所用的，“基本上互補的”是指在8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、30、35、40、45、50個或更多個核苷酸的區(qū)域內至少60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的互補程度，或者指兩個核酸在嚴格條件下雜交。

可通過任何合適的比對算法來測量序列同一性(如出于評估互補性百分比的目的)，該比對算法包括但不限于needleman-wunsch算法(參見，例如，可在www.ebi.ac.uk/tools/psa/emboss_needle/nucleotide.html處獲得的任選地具有默認設置的embossneedle比對器)、blast算法(參見，例如，可在blast.ncbi.nlm.nih.gov/blast.cgi處獲得的任選地具有默認設置的blast算法工具)以及smith-waterman算法(參見，例如，可在www.ebi.ac.uk/tools/psa/emboss_water/nucleotide.html處獲得的任選地具有默認設置的embosswater比對器)?？刹捎眠x定算法的包括默認參數在內的任何適宜參數來評估最佳比對。

通常，“序列同一性”是指兩個多核苷酸或多肽序列分別的確切核苷酸與核苷酸對應關系或氨基酸與氨基酸對應關系。通常，用于確定序列同一性的技術包括確定多核苷酸的核苷酸序列和/或確定由其編碼的氨基酸序列，并將這些序列與第二核苷酸或氨基酸序列進行比較。兩個或更多個序列(多核苷酸或氨基酸)的比較可通過確定其“同一性百分比”來進行。相對于可為較長分子(例如，多核苷酸或多肽)內的一個序列的參考序列(例如，核酸或氨基酸序列)的同一性百分比可計算為兩個最佳比對序列之間準確匹配的數目除以參考序列的長度乘以100。同一性百分還可通過例如使用先進的blast計算機程序比較序列信息來確定，包括可從國立衛(wèi)生研究院(nationalinstitutesofhealth)獲得的2.2.9版。blast程序基于karlin和altschul,proc.natl.acad.sci.usa87:2264-2268(1990)的比對方法，并在altschul,等人,j.mol.biol.215:403-410(1990)；karlin和altschul,proc.natl.acad.sci.usa90:5873-5877(1993)；以及altschul等人,nucleicacidsres.25:3389-3402(1997)中討論。簡言之，blast程序將同一性定義為相同比對符號(例如，核苷酸或氨基酸)的數目除以兩個序列中較短序列的符號的總數。可將該程序用于確定在被比較的序列的總長度上的同一性百分比。提供默認參數以優(yōu)化通過例如blastp程序進行的短查詢序列搜索。如通過wootton和federhen,computersandchemistry17:149-163(1993)的seg程序確定的，該程序還允許將seg過濾器用于屏蔽查詢序列的區(qū)段。期望的序列同一性程度的范圍為約80％至100％，以及之間的整數數值。通常，公開的序列與要求保護的序列之間的同一性百分比為至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少98％。通常，準確匹配表示在參考序列的長度上100％的同一性。

術語“有效量”或“治療有效量”是指足以實現如下文限定的預期應用(包括但不限于疾病治療)的本文所述化合物的量。治療有效量可根據預期治療應用(體內)或所治療的受試者和疾病狀況，例如，受試者的體重和年齡、疾病狀況的嚴重性、給藥方式等而變化，這可由本領域普通技術人員容易地確定。該術語還適用于將會誘導靶細胞中的特定響應例如血小板粘附和/或細胞遷移減少的劑量。具體劑量將根據所選的特定化合物、待遵循的給藥方案、是否與其他化合物聯合施用、施用的時間選擇、所施用至的組織以及攜帶其的物理遞送系統(tǒng)而變化。

術語“哺乳動物”包括人，以及家養(yǎng)動物如實驗室動物和家庭寵物(例如，貓、狗、豬、牛、綿羊、山羊、馬、兔)和非家養(yǎng)動物如野生動物等。哺乳動物包括但不限于鼠、猿、人、農場動物、運動動物、馴養(yǎng)動物和寵物。體內獲得或體外培養(yǎng)的生物實體的組織、細胞及其后代也包括在內。

術語“禽類”包括馴養(yǎng)的鳥類和非馴養(yǎng)的鳥類，如野生鳥類等。禽類包括但不限于家禽、飛禽、水禽、獵禽、平胸鳥(例如，不能飛的鳥)、雞(家雞)、鵪鶉、火雞、鴨、鴕鳥(非洲鴕鳥(struthiocamelus))、索馬里鴕鳥(struthiomolybdophanes)、鵝、鷗、珍珠雞、雉雞、鴯鹋(dromaiusnovaehollandiae)、美洲鴕鳥(rheaamericana)、達爾文鶆(美洲小鴕(rheapennata))以及幾維鳥。體內獲得或體外培養(yǎng)的生物實體的組織、細胞及其后代也包括在內。禽可以產蛋。

術語“體內”是指在受試者體內發(fā)生的事件。

術語“體外”是指在受試者身體之外發(fā)生的事件。例如，體外測定包括在受試者體外進行的任何測定。體外測定包括其中采用活細胞或死亡細胞的基于細胞的測定。體外測定還包括其中未使用完整細胞的無細胞測定。

在某些實施方案中，本文公開的蛋白質或化合物是同位素標記的。同位素標記的蛋白質或化合物(例如，同位素體)的一個或多個原子可被具有不同原子質量或質量數的原子所取代?？蓳饺胨_的化合物中的同位素的非限制性實例包括氫、碳、氮、氧、磷、硫、氟、氯和碘的同位素，分別如²h、³h、¹¹c、¹³c、¹⁴c、¹³n、¹⁵n、¹⁵o、¹⁷o、¹⁸o、³¹p、³²p、³⁵s、¹⁸f、³⁶cl、¹²³i以及¹²⁵i。某些同位素標記的化合物，例如，摻入穩(wěn)定同位素的那些化合物在質譜研究中是有用的。例如，穩(wěn)定同位素蛋白質可用作基于質譜的測定中的參考標準。某些同位素標記的化合物，例如，摻入放射性同位素的那些化合物在藥物和/或基底組織分布研究中是有用的。鑒于放射性同位素氚(³h)和碳-14(¹⁴c)易于摻入并且檢測手段完備，它們對于這種目的是特別有用的。這些放射性標記的化合物可通過表征例如作用部位或作用模式，或對藥理學重要的作用位點的結合親和力而用于輔助確定或測量該化合物的有效性。用更重的同位素如氘(²h)取代可由于更高的代謝穩(wěn)定性而提供某些優(yōu)點，例如，延長的體內半衰期或降低的劑量要求，并因此在一些情況下是優(yōu)選的。用正電子發(fā)射同位素如¹¹c、¹⁸f、¹⁵o和¹³n取代在用于檢查底物受體占有率的正電子發(fā)射斷層掃描(pet)研究中可以是有用的。同位素標記的化合物通?？赏ㄟ^本領域已知的常規(guī)技術制備，或采用合適的同位素標記的試劑代替未標記的試劑，通過與本所述的那些類似的工藝來制備。

“任選的”和“任選地”是指隨后所述的事件或情況可能發(fā)生或可能不發(fā)生，并且該描述包括該事件或情況發(fā)生的情形和其未發(fā)生的情形。例如，“任選取代的芳基”是指該芳基基團可能被取代或可能未被取代，并且該描述同時包括取代的芳基基團和未被取代的芳基基團。

如本文所用的，術語“可消費產品”是指這樣的產品，其包含分離的重組卵清蛋白或卵清蛋白組合物及其他成分并且可被消費(例如，通過吃、嚼、喝、嘗、咽或吞)。作為非限制性實例，可消費產品包括食物產品、飲料產品、膳食補充劑、食品添加劑、藥物產品以及衛(wèi)生產品。食物產品包括但不限于烘焙商品(例如，蛋糕、松餅、餅干、面包、百吉餅、糕點、甜甜圈)、炒雞蛋、煎蛋卷、乳蛋餅、意大利面、面條、可麗餅、華夫餅、面團、面糊、餅干面團、肉餅、肉丸、漢堡包、動物飼料、水果、蔬菜、豆腐(tofu)、豆腐(beancurd)、奶酪、海鮮、肉類、冰淇淋、蛋黃醬、乳蛋糕、布丁、蛋奶酥、乳液、泡沫、蛋白糖霜、糖霜、糖果、棉花糖、杏仁糖、湯、調味品、醬料、香味料、乳制品以及調味劑。飲料產品包括但不限于軟飲料、調味水、果汁、運動飲料、能量飲料、冰沙、混合飲料、酒精飲料(例如，葡萄酒、清酒、啤酒、烈酒)、雞尾酒、利口酒、碳酸飲料、含咖啡因的飲料、咖啡、可可、茶、蛋酒以及乳制品飲料。膳食補充劑包括復合維生素、全食品補充劑、飲食補充劑、草藥補充劑、蛋白質混合物、質量增加劑、即食蛋白質、蛋白質棒、蛋白質奶昔、蛋白粉、蛋白劑(proteinshot)、蛋白質分離物、能量棒、能量凝膠、能量咀嚼物、能量配方、耐力配方、能量補充劑、營養(yǎng)補充劑、運動營養(yǎng)補充劑、嬰兒配方(例如，粉劑或液體)以及膳食替代品。藥物產品包括但不限于止咳糖漿、膠囊和片劑。衛(wèi)生產品包括但不限于化妝品、護膚品、美容產品、洗發(fā)劑、護發(fā)素、乳液、乳膏、洗臉劑、牙膏、口香糖和漱口水。

用于形成經加工的可消費產品的可消費產品加工可包括但不限于冷凍、猝冷、加熱、烘焙、燒烤、烤、煮沸、熱燙、包裝、罐裝、漂白、富集、干燥、壓榨、研磨、混合、預煮、烹飪、打樣、鹵制、切塊、切片、切丁、壓碎、撕碎、切碎、搖晃、去核、旋轉、滾動、榨汁、濾干、過濾、揉捏、攪拌、打漿、攪打、磨碎、填充、剝皮、去籽、煙熏、固化、腌制、防腐、腌漬、發(fā)酵、均化、巴氏滅菌、滅菌、穩(wěn)定、共混、搗糊、強化、精煉、氫化、老化、延長保質期或添加酶。

如本文所用的，術語“溶劑”是指這樣的液體，其可與組合物或組合物的一種或多種組分如蛋白質混合，或用于將之溶解。溶劑的非限制性實例包括水、乙醇或異丙醇。溶劑可以是適于飲用的。溶劑可為水。水的非限制性實例包括純凈水、蒸餾水、二次蒸餾水、去離子水、蒸餾去離子水、飲用水、井水、自來水、泉水、瓶裝水、碳酸水、礦泉水、調味水，或它們的任意組合。溶劑可為兩種或更多種不同溶劑的組合。

無動物成分蛋清生產系統(tǒng)的概述

本文提供了用于通過在宿主細胞(例如，酵母)中重組表達來生產蛋清的蛋白質組分的方法，以及/或者用于從體外培養(yǎng)的輸卵管細胞的分泌物中純化卵清蛋白的方法。純化的蛋白質可采用既定的方法(例如，噴霧干燥)儲存，包裝為粉末產品，或作為在稠度、味道、功能性質和/或外觀上類似于動物來源蛋清的卵清蛋白組合物以重建的形式銷售。由于可獨立調整各種成分的不存在或豐度，因此可實現卵清蛋白組合物的蛋白質成分的不同配方。在一個實施方案中，蛋清中可引起兒童即時食物超敏反應的主要食物變應原——卵類黏蛋白可避免在成品配方中使用，或經遺傳修飾和/或糖基化以產生變應原性降低的蛋清產品。

禽蛋是烹飪中常見的食物來源和通用成分。蛋通常含有蛋殼、膜、蛋清和蛋黃。蛋清或白蛋白含有約10％蛋白質、88％水，以及1-2％碳水化合物、礦物質和脂質。卵清蛋白可包括但不限于卵白蛋白(約54％)、卵轉鐵蛋白或伴清蛋白(約12％)、卵類黏蛋白(約11％)、卵球蛋白g2(約4％)、卵球蛋白g3(約4％)、卵黏蛋白(約3.5％)、溶菌酶(約3.4％)、卵抑制劑(約1.5％)、卵糖蛋白(約1.0％)、黃素蛋白或卵黃素蛋白(約0.8％)、卵巨球蛋白(約0.5％)、半胱氨酸蛋白酶抑制劑(約0.05％)、抗生物素蛋白(約0.05％)、卵固蛋白、卵白蛋白相關蛋白x、卵白蛋白相關蛋白y、tenp、簇蛋白、ch21、vmo-1、卵黃原蛋白、透明帶c蛋白、bc型卵轉鐵蛋白、卵抑制劑前體、卵類黏蛋白前體、簇蛋白前體、hep21蛋白前體、卵糖蛋白前體、細胞外脂肪酸結合蛋白、細胞外脂肪酸結合蛋白前體、前列腺素d2合酶腦前體、標志物蛋白、卵黃原蛋白-1、卵黃原蛋白-2、卵黃原蛋白-2前體、卵黃原蛋白-3、核黃素結合蛋白、血紅素結合蛋白、血清白蛋白前體、載脂蛋白d、卵分泌球蛋白、hep21、谷胱甘肽過氧化物酶3、脂質運載蛋白型前列腺素d合酶/軟骨發(fā)生相關脂質運載蛋白、脫輔基脂蛋白-1、dickkopf-相關蛋白3、雞防御素-11(vmo-ii，β-防衛(wèi)素-11)、血清白蛋白(α-卵黃蛋白)、雞精子堿性蛋白、分泌胰蛋白酶抑制劑、淋巴細胞抗原86、肌動蛋白、igμ鏈c區(qū)、巰基氧化酶1、組蛋白h4、血管生成素樣蛋白3、泛蛋白、禽蛋殼基質蛋白質-32、聚免疫球蛋白受體、肽基-脯氨酰-順/反異構酶b、氨肽酶ey、多效營養(yǎng)因子、中期因子、腎素/腎素原受體、timp-2、timp-3、組蛋白h2b變體、igλ鏈、famc3蛋白、α-烯醇化酶、60s酸性核糖體蛋白p1、腱生蛋白/生腱蛋白、cepu-1、含硒蛋白質、延長因子1-α1、附睪分泌蛋白、e1、14-3-3蛋白ζ(ζ)、嗅介蛋白樣蛋白3、谷胱甘肽s-轉移酶2、β-2-微球蛋白、rgd-cap、載脂蛋白b、高爾基體蛋白1、cochlin、蛋白酶體亞單位α型-7、載脂蛋白a-i、真核起始因子4a-ii、aspic/軟骨酸性蛋白1、磷酸丙糖異構酶、蛋白酶體亞單位α型、igλ鏈c-區(qū)、前膠原-賴氨酸2-氧代戊二酸5-雙加氧酶1、adp-核糖基化因子5、鈣調蛋白、蛋白質二硫鍵異構酶、膜聯蛋白i、延長因子2、過氧化物還原酶-1、hsp70、蛋白質二硫鍵異構酶a3、鈣網蛋白、40s核糖體蛋白sa/層粘連蛋白受體1、α-輔肌動蛋白-4、腫瘤壞死因子相關的凋亡誘導配體、維生素d-結合蛋白、腦信號蛋白-3c、內質蛋白、過氧化氫酶、肝α-淀粉酶、過渡性eratp酶、鈣粘蛋白-1、血管緊張素轉換酶、骨形態(tài)發(fā)生蛋白1、鳥嘌呤核苷酸結合蛋白亞基β2-樣1、組氨酸氨裂解酶、膜聯蛋白a2、β-連環(huán)蛋白、rab-gdp解離抑制物、核纖層蛋白-a、ovocleidin-116、氨肽酶、hsp90-α、缺氧上調蛋白1、熱休克同源蛋白hsp90β、atp檸檬酸合酶以及肌球蛋白-9。

在一方面，本公開內容提供了生產卵清蛋白組合物的方法，所述方法包括：重組地表達兩種或更多種卵清蛋白；以及混合所述兩種或更多種卵清蛋白。在一些情況中，該卵清蛋白選自卵白蛋白、卵轉鐵蛋白、卵類黏蛋白、g162mf167a卵類黏蛋白、卵球蛋白g2、卵球蛋白g3、α-卵黏蛋白、β-卵黏蛋白、溶菌酶、卵抑制劑、卵糖蛋白、黃素蛋白、卵巨球蛋白、卵固蛋白、半胱氨酸蛋白酶抑制劑、抗生物素蛋白、卵白蛋白相關蛋白x、卵白蛋白相關蛋白y，以及它們的任意組合，諸如選自卵白蛋白、卵轉鐵蛋白、卵類黏蛋白、g162mf167a卵類黏蛋白、卵球蛋白g2、卵球蛋白g3、溶菌酶、卵抑制劑、卵糖蛋白、黃素蛋白、卵巨球蛋白、卵固蛋白、半胱氨酸蛋白酶抑制劑、抗生物素蛋白、卵白蛋白相關蛋白x、卵白蛋白相關蛋白y，以及它們的任意組合。所述重組地表達兩種或更多種卵清蛋白可在一個或多個宿主細胞中進行。該方法可進一步包括從一個或多個宿主細胞分泌兩種或更多種卵清蛋白。所述重組地表達兩種或更多種卵清蛋白可采用無細胞蛋白質合成進行。該方法可進一步包括向卵清蛋白組合物添加食品添加劑。該方法可進一步包括對卵清蛋白組合物進行脫糖、穩(wěn)定化或從中去除葡萄糖。該方法可進一步包括對卵清蛋白組合物巴氏滅菌或超巴氏滅菌。該方法可進一步包括干燥卵清蛋白組合物。該方法可進一步包括酶促地、化學地或機械地消化兩種或更多種卵清蛋白中的一種或多種。對卵清蛋白中的一種或多種的處理可改善組合物的功能性質，例如，提供增強的發(fā)泡性或溶解性。

在一方面，本公開內容提供了包含一種或多種重組卵清蛋白或其片段的經加工的可消費產品。在一些情況中，該一種或多種卵清蛋白選自卵白蛋白、卵轉鐵蛋白、卵類黏蛋白、g162mf167a卵類黏蛋白、卵球蛋白g2、卵球蛋白g3、α-卵黏蛋白、β-卵黏蛋白、溶菌酶、卵抑制劑、卵糖蛋白、黃素蛋白、卵巨球蛋白、卵固蛋白、半胱氨酸蛋白酶抑制劑、抗生物素蛋白、卵白蛋白相關蛋白x、卵白蛋白相關蛋白y，以及它們的任意組合，諸如選自卵白蛋白、卵轉鐵蛋白、卵類黏蛋白、g162mf167a卵類黏蛋白、卵球蛋白g2、卵球蛋白g3、溶菌酶、卵抑制劑、卵糖蛋白、黃素蛋白、卵巨球蛋白、卵固蛋白、半胱氨酸蛋白酶抑制劑、抗生物素蛋白、卵白蛋白相關蛋白x、卵白蛋白相關蛋白y，以及它們的任意組合。在一些情況下，該經加工的可消費產品包含兩種或更多種、三種或更多種、四種或更多種、五種或更多種或者六種或更多種卵清蛋白，或它們的片段。在一些情況下，該經加工的可消費產品缺少一種或多種、兩種或更多種、三種或更多種、五種或更多種、十種或更多種、二十種或更多種或者五十種或更多種卵清蛋白。該經加工的可消費產品可缺少卵類黏蛋白。在一些情況下，該經加工的可消費產品可缺少一種或多種、兩種或更多種、三種或更多種、五種或更多種、十種或更多種或者二十種或更多種卵黃蛋白。在一些情況下，該經加工的可消費產品選自食物產品、飲料產品、膳食補充劑、食品添加劑、藥物產品、衛(wèi)生產品及它們的任意組合，諸如選自食物產品、飲料產品，以及它們的任意組合。

在一方面，本公開內容提供了生產可消費產品的方法，所述方法包括：重組地表達一種或多種卵清蛋白；以及將所述一種或多種卵清蛋白與一種或多種成分混合以產生可消費產品。在一些情況下，該一種或多種成分包括食品添加劑、卵清蛋白或重組卵清蛋白。在一些情況下，該一種或多種成分不包括卵清蛋白。在一些情況下，該一種或多種卵清蛋白可包括兩種或更多種、三種或更多種、四種或更多種或者五種或更多種卵清蛋白。

在一方面，本公開內容提供了用于生產卵清蛋白或其片段的方法，所述方法包括：在宿主細胞中重組地表達所述卵清蛋白或其片段，其中所述宿主細胞包含編碼所述卵清蛋白或其片段的多核苷酸，并且其中所述卵清蛋白選自卵球蛋白g2、卵球蛋白g3、α-卵黏蛋白、β-卵黏蛋白、卵糖蛋白、黃素蛋白、卵巨球蛋白、半胱氨酸蛋白酶抑制劑，以及它們的任意組合，諸如選自卵球蛋白g2、卵球蛋白g3、卵糖蛋白、黃素蛋白、卵巨球蛋白、半胱氨酸蛋白酶抑制劑，以及它們的任意組合。該方法可進一步包括從宿主細胞分泌卵清蛋白或其片段。該方法可進一步包括純化該卵清蛋白或其片段。該方法可進一步包括在宿主細胞中重組地表達第二卵清蛋白或其片段。在一些情況下，該片段可包括卵清蛋白的至少10％、20％、30％、40％或50％。

在一些情況下，蛋白質的片段的長度可約為或至少為10、50、100、200、300、400、500、600、700、800、900、1000、1100、1200、1300、1400、1500、1600、1700、1800、1900或2000個氨基酸。在一些情況下，蛋白質的片段的長度可至多為10、50、100、200、300、400、500、600、700、800、900、1000、1100、1200、1300、1400、1500、1600、1700、1800、1900或2000個氨基酸。

在一些情況下，蛋白質的片段可為該蛋白質的約或至少1％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或100％。在一些情況下，蛋白質的片段可為該蛋白質的至多1％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或100％。

在一些情況下，蛋白質的片段可約為或至少為10、50、100、200、300、400、500、600、700、800、900或1000kda。在一些情況下，蛋白質的片段可至多為10、50、100、200、300、400、500、600、700、800、900或1000kda。

在一方面，本公開內容提供了用于生產兩種或更多種卵清蛋白或其片段的方法，所述方法包括在宿主細胞中重組地表達所述兩種或更多種卵清蛋白或其片段。該宿主細胞可包含編碼所述兩種或更多種卵清蛋白或其片段的一種或多種多核苷酸。該方法可進一步包括從宿主細胞分泌所述兩種或更多種卵清蛋白或其片段。該方法可進一步包括純化所述兩種或更多種卵清蛋白或其片段。在一些情況中，該兩種或更多種卵清蛋白選自卵白蛋白、卵轉鐵蛋白、卵類黏蛋白、g162mf167a卵類黏蛋白、卵球蛋白g2、卵球蛋白g3、α-卵黏蛋白、β-卵黏蛋白、溶菌酶、卵抑制劑、卵糖蛋白、黃素蛋白、卵巨球蛋白、卵固蛋白、半胱氨酸蛋白酶抑制劑、抗生物素蛋白、卵白蛋白相關蛋白x、卵白蛋白相關蛋白y，以及它們的任意組合，諸如選自卵白蛋白、卵轉鐵蛋白、卵類黏蛋白、g162mf167a卵類黏蛋白、卵球蛋白g2、卵球蛋白g3、溶菌酶、卵抑制劑、卵糖蛋白、黃素蛋白、卵巨球蛋白、卵固蛋白、半胱氨酸蛋白酶抑制劑、抗生物素蛋白、卵白蛋白相關蛋白x、卵白蛋白相關蛋白y，以及它們的任意組合。

在一方面，本公開內容提供了分離的重組卵清蛋白，其選自卵球蛋白g2、卵球蛋白g3、α-卵黏蛋白、β-卵黏蛋白、卵糖蛋白、黃素蛋白、卵巨球蛋白、半胱氨酸蛋白酶抑制劑，以及它們的任意組合，諸如選自卵球蛋白g2、卵球蛋白g3、卵糖蛋白、黃素蛋白、卵巨球蛋白、半胱氨酸蛋白酶抑制劑，以及它們的任意組合。該分離的重組卵清蛋白可具有與蛋清中的卵清蛋白不同的糖基化、乙?；蛄姿峄Ｊ?。該分離的重組卵清蛋白可具有與蛋清中的卵清蛋白不同的解鏈溫度，如相對于蛋清中的卵清蛋白更高或更低的解鏈溫度。在一些情況下，該分離的重組卵清蛋白具有約為或至少為65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94或95℃的解鏈溫度。在一些情況下，該分離的重組卵清蛋白具有至多65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94或95℃的解鏈溫度。在一些情況下，該分離的重組卵清蛋白可包含相對于蛋清中的卵清蛋白的一個或多個氨基酸插入、缺失或置換。在一些情況下，相對于蛋清中的卵清蛋白，分離的重組卵清蛋白可具有約或至少0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、30、40、50、60、70、80、90、100、150、200、250、300、350、400、450、500、600、700、800、900或1000個氨基酸插入、缺失和/或置換。在一些情況下，相對于蛋清中的卵清蛋白，分離的重組卵清蛋白可具有至多0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、30、40、50、60、70、80、90、100、150、200、250、300、350、400、450、500、600、700、800、900或1000個氨基酸插入、缺失和/或置換。在一些情況下，該分離的重組卵清蛋白選自seqidno:1、seqidno:2、seqidno:3、seqidno:4、seqidno:5、seqidno:6、seqidno:7、seqidno:8、seqidno:9、seqidno:10、seqidno:11、seqidno:12、seqidno:13，以及它們的任意組合。

在一方面，本公開內容提供了包含色氨酸的分離的突變卵類黏蛋白?？芍亟M地表達該分離的突變卵類黏蛋白。該分離的突變卵類黏蛋白可為完整的蛋白質。在一些情況下，該分離的突變卵類黏蛋白在與seqidno:3最佳比對時包含相對于seqidno:3的一個或多個、兩個或更多個、三個或更多個、四個或更多個、五個或更多個或者六個或更多個氨基酸插入或置換。在一些情況下，該分離的突變卵類黏蛋白包含一個或多個氨基酸置換，其中該氨基酸置換包括一個或多個、兩個或更多個、三個或更多個、四個或更多個、五個或更多個或者六個或更多個酪氨酸至色氨酸的置換(例如，最佳比對時在相對于seqidno:3或seqidno:4的位置37、46、73、102、141或161處)。在一些情況下，該分離的突變卵類黏蛋白在與seqidno:3最佳比對時包含相對于seqidno:3的至多四個、至多五個、至多六個或至多十個氨基酸插入或置換。在一些情況下，該分離的突變卵類黏蛋白包含一個或多個、兩個或更多個、三個或更多個或者四個或更多個色氨酸殘基。在一些情況下，該分離的突變卵類黏蛋白在n-末端或c-末端包含一個或多個、兩個或更多個、三個或更多個或者四個或更多個色氨酸殘基。該分離的突變卵類黏蛋白在與seqidno:3最佳比對時相對于seqidno:3可包含在位置162處的甲硫氨酸和在位置167位置處的丙氨酸。

該分離的突變卵類黏蛋白可具有相對于野生型卵類黏蛋白降低的變應原性。在一些情況下，分離的突變卵類黏蛋白具有相對于野生型卵類黏蛋白為約或至少0％、1％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％或95％的變應原性。在一些情況下，分離的突變卵類黏蛋白具有相對于野生型卵類黏蛋白至多0％、1％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％或95％的變應原性。在一些情況下，可采用皮膚點刺試驗、血液檢查或口服食物激發(fā)來測量降低的變應原性。

所述分離的突變卵類黏蛋白可具有相對于野生型卵類黏蛋白增強的消化性。在一些情況下，分離的突變卵類黏蛋白具有相對于野生型卵類黏蛋白為約或至少100％、105％、110％、115％、120％、125％、130％、135％、140％、145％、150％、160％、170％、180％、190％、200％、210％、220％、230％、240％、250％、260％、270％、280％、290％、300％、350％、400％、450％或500％的消化性。在一些情況下，分離的突變卵類黏蛋白具有相對于野生型卵類黏蛋白至多100％、105％、110％、115％、120％、125％、130％、135％、140％、145％、150％、160％、170％、180％、190％、200％、210％、220％、230％、240％、250％、260％、270％、280％、290％、300％、350％、400％、450％或500％的消化性。在一些情況下，增強的消化性可作為蛋白質代謝的速率或通過蛋白酶或酸體內或體外降解或消化的速率而測量。

分離的突變卵類黏蛋白可具有與野生型卵類黏蛋白不同的糖基化、乙酰化或磷酸化模式。分離的突變卵類黏蛋白可具有與野生型卵類黏蛋白不同的解鏈溫度。分離的突變卵類黏蛋白可相對于野生型卵類黏蛋白包含一個或多個氨基酸插入、缺失或置換。在一些情況下，分離的突變卵類黏蛋白可相對于野生型卵類黏蛋白具有約或至少0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、25、30、40、50、60、70、80、90或100個氨基酸插入、缺失和/或置換。在一些情況下，分離的突變卵類黏蛋白可相對于野生型卵類黏蛋白具有至多0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、25、30、40、50、60、70、80、90或100個氨基酸插入、缺失和/或置換。

在一方面，本公開內容提供了一種卵清蛋白組合物，其包含本文所述的分離的重組卵清蛋白或分離的突變卵類黏蛋白；以及一種或多種卵清蛋白。可重組地表達所述一種或多種卵清蛋白。

在一方面，本公開內容提供了包含兩種或更多種重組卵清蛋白的卵清蛋白組合物。在一些情況中，該兩種或更多種重組卵清蛋白選自卵白蛋白、卵轉鐵蛋白、卵類黏蛋白、g162mf167a卵類黏蛋白、卵球蛋白g2、卵球蛋白g3、α-卵黏蛋白、β-卵黏蛋白、溶菌酶、卵抑制劑、卵糖蛋白、黃素蛋白、卵巨球蛋白、卵固蛋白、半胱氨酸蛋白酶抑制劑、抗生物素蛋白、卵白蛋白相關蛋白x、卵白蛋白相關蛋白y，以及它們的任意組合，諸如選自卵白蛋白、卵轉鐵蛋白、卵類黏蛋白、g162mf167a卵類黏蛋白、卵球蛋白g2、卵球蛋白g3、溶菌酶、卵抑制劑、卵糖蛋白、黃素蛋白、卵巨球蛋白、卵固蛋白、半胱氨酸蛋白酶抑制劑、抗生物素蛋白、卵白蛋白相關蛋白x、卵白蛋白相關蛋白y，以及它們的任意組合。該卵清蛋白組合物可包含卵白蛋白。該卵清蛋白組合物可包含本文所述的分離的重組卵清蛋白。該卵清蛋白組合物可包含本文所述的分離的突變卵類黏蛋白。

該卵清蛋白可具有來源于單個物種如家雞的序列。在一些情況下，所述單個物種不是家雞。該卵清蛋白可具有來源于超過一個物種的序列。在一些情況下，該卵清蛋白具有來源于禽類的序列，所述禽類選自家禽、飛禽、水禽、獵禽、雞、鵪鶉、火雞、鴨、鴕鳥、鵝、鷗、珍珠雞、雉雞、鴯鹋及它們的任意組合。在一些情況下，該卵清蛋白組合物包含三種或更多種、四種或更多種或者五種或更多種卵清蛋白。在一些情況下，該卵清蛋白組合物包含至多5種、至多10種、至多15種或至多20種卵清蛋白。卵清蛋白組合物可包含本文公開的分離的突變卵類黏蛋白。

在一些情況下，重組卵清蛋白可包含相對于蛋清中的卵清蛋白的一個或多個氨基酸插入、缺失或置換。在一些情況下，相對于蛋清中的卵清蛋白，重組卵清蛋白可具有約或至少0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、30、40、50、60、70、80、90、100、150、200、250、300、350、400、450、500、600、700、800、900或1000個氨基酸插入、缺失和/或置換。在一些情況下，相對于蛋清中的卵清蛋白，重組卵清蛋白可具有至多0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、30、40、50、60、70、80、90、100、150、200、250、300、350、400、450、500、600、700、800、900或1000個氨基酸插入、缺失和/或置換。例如，在與seqidno:9最佳比對時，重組溶菌酶可具有相對于seqidno:9在位置62處的氨基酸置換(例如，用酪氨酸替換色氨酸)。

該卵清蛋白組合物可進一步包含水。在一些情況下，該卵清蛋白組合物具有至多5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％或95％百分比的水。在一些情況下，該卵清蛋白組合物具有80％至95％百分比的水。在一些情況下，該卵清蛋白組合物包含按干重計至少50％、60％、70％、80％、90％、95％或99％的蛋白質。該卵清蛋白組合物可進一步包含食品添加劑。在一些情況下，該食品添加劑選自甜味劑、鹽、碳水化合物及其任意組合。

該卵清蛋白組合物可不含膽固醇。在一些情況下，該卵清蛋白組合物包含按干重計少于10％、5％、4％、3％、2％、1％或0.5％的脂肪。該卵清蛋白組合物可不含脂肪、飽和脂肪或反式脂肪。該卵清蛋白組合物可不含葡萄糖。該卵清蛋白組合物可缺少一種或多種卵清蛋白，如卵類黏蛋白或黃素蛋白。例如，卵類黏蛋白是一種蛋清變應原，而其不存在于卵清蛋白組合物中可降低該卵清蛋白組合物的變應原性。作為另一實例，黃素蛋白可為蛋清提供黃色色調，而其不存在于卵清蛋白組合物中可使該卵清蛋白組合物變白，或在用該卵清蛋白組合物制備的產品如蛋白糖霜中產生相對于天然蛋清更亮的白色。在一些情況下，該卵清蛋白組合物缺少兩種或更多種、三種或更多種、五種或更多種、十種或更多種、二十種或更多種或者五十種或更多種卵清蛋白。在一些情況下，該卵清蛋白組合物不是蛋、蛋清或蛋黃。

在一些情況下，該卵清蛋白組合物是酸性的、中性的或堿性的。在一些情況下，ph約為或至少為6、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9、8、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.6、8.7、8.8、8.9、9、9.1、9.2、9.3、9.4、9.5、9.6、9.7、9.8、9.9或10。在一些情況下，ph至高為6、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9、8、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.6、8.7、8.8、8.9、9、9.1、9.2、9.3、9.4、9.5、9.6、9.7、9.8、9.9或10。在一些情況下，該卵清蛋白組合物可具有6至10的ph。

卵清蛋白組合物的泡沫高度可大于蛋清的泡沫高度。在一些情況下，該卵清蛋白組合物具有10mm至60mm，如30mm至60mm范圍內的泡沫高度。在一些情況下，卵清蛋白組合物的泡沫高度約為或至少為1、5、10、15、20、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、50、55或60mm。在一些情況下，卵清蛋白組合物的泡沫高度至多為1、5、10、15、20、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、50、55或60mm。在一些情況下，卵清蛋白組合物具有相對于蛋清約或至少0％、1％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、100％、105％、110％、115％、120％、125％、130％、135％、140％、145％、150％、160％、170％、180％、190％、200％、210％、220％、230％、240％、250％、260％、270％、280％、290％、300％、350％、400％、450％或500％的泡沫高度。在一些情況下，卵清蛋白組合物具有相對于蛋清至多0％、1％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、100％、105％、110％、115％、120％、125％、130％、135％、140％、145％、150％、160％、170％、180％、190％、200％、210％、220％、230％、240％、250％、260％、270％、280％、290％、300％、350％、400％、450％或500％的泡沫高度。

卵清蛋白組合物的泡沫滲出可小于蛋清的泡沫滲出(例如，在攪打后30分鐘時)。在一些情況下，卵清蛋白組合物可具有至多10mm或至多5mm的泡沫滲出(例如，在攪打后30分鐘時)。在一些情況下，卵清蛋白組合物的泡沫滲出約為或至少為0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、20、25或30mm。在一些情況下，卵清蛋白組合物的泡沫滲出至多為0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、20、25或30mm。在一些情況下，在攪打后1min、5min、10min、15min、20min、30min、40min、50min、1h、2h、3h、4h、5h、6h、7h、8h、9h、10h、15h、20h、24h、25h、30h或超過30h時測量泡沫滲出。在一些情況下，卵清蛋白組合物具有相對于蛋清約或至少0％、1％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、100％、105％、110％、115％、120％、125％、130％、135％、140％、145％、150％、160％、170％、180％、190％、200％、210％、220％、230％、240％、250％、260％、270％、280％、290％、300％、350％、400％、450％或500％的泡沫滲出。在一些情況下，卵清蛋白組合物具有相對于蛋清至多0％、1％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、100％、105％、110％、115％、120％、125％、130％、135％、140％、145％、150％、160％、170％、180％、190％、200％、210％、220％、230％、240％、250％、260％、270％、280％、290％、300％、350％、400％、450％或500％的泡沫滲出。

卵清蛋白組合物的泡沫強度可大于蛋清的泡沫強度。在一些情況下，卵清蛋白組合物可具有30g至100g，如40g至100g范圍內的泡沫強度。在一些情況下，卵清蛋白組合物具有約為或至少為5、10、20、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、90、100、110、120、130、140、150或200g的泡沫強度。在一些情況下，卵清蛋白組合物具有至多為5、10、20、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、90、100、110、120、130、140、150或200g的泡沫強度。在一些情況下，卵清蛋白組合物具有相對于蛋清約或至少0％、1％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、100％、105％、110％、115％、120％、125％、130％、135％、140％、145％、150％、160％、170％、180％、190％、200％、210％、220％、230％、240％、250％、260％、270％、280％、290％、300％、350％、400％、450％或500％的泡沫強度。在一些情況下，卵清蛋白組合物具有相對于蛋清至多0％、1％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、100％、105％、110％、115％、120％、125％、130％、135％、140％、145％、150％、160％、170％、180％、190％、200％、210％、220％、230％、240％、250％、260％、270％、280％、290％、300％、350％、400％、450％或500％的泡沫強度。

卵清蛋白組合物的凝膠強度可大于蛋清的凝膠強度。在一些情況下，卵清蛋白組合物可具有100g至1500g、500g至1500g或700g至1500g范圍內的凝膠強度。在一些情況下，卵清蛋白組合物的凝膠強度約為或至少為10、50、100、150、200、250、300、350、400、450、500、550、600、650、700、750、800、850、900、950、1000、1050、1100、1150、1200、1250、1300、1350、1400、1450或1500g。在一些情況下，卵清蛋白組合物的凝膠強度至多為10、50、100、150、200、250、300、350、400、450、500、550、600、650、700、750、800、850、900、950、1000、1050、1100、1150、1200、1250、1300、1350、1400、1450或1500g。在一些情況下，卵清蛋白組合物具有相對于蛋清約或至少0％、1％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、100％、105％、110％、115％、120％、125％、130％、135％、140％、145％、150％、160％、170％、180％、190％、200％、210％、220％、230％、240％、250％、260％、270％、280％、290％、300％、350％、400％、450％或500％的凝膠強度。在一些情況下，卵清蛋白組合物具有相對于蛋清至多0％、1％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、100％、105％、110％、115％、120％、125％、130％、135％、140％、145％、150％、160％、170％、180％、190％、200％、210％、220％、230％、240％、250％、260％、270％、280％、290％、300％、350％、400％、450％或500％的凝膠強度。

在一些情況下，卵清蛋白組合物可具有至少一個月、至少兩個月、至少三個月或至少六個月的保質期。

卵清蛋白組合物可具有相對于蛋清降低的變應原性。例如，可通過一種或多種卵清蛋白(例如，卵類黏蛋白、卵白蛋白、卵轉鐵蛋白、溶菌酶)的去除，或卵清蛋白內一個或多個變應原性位點或結構域的去除或突變(例如，一種或多種氨基酸插入、缺失和/或置換)來實現降低的變應原性。在一些情況下，卵清蛋白組合物具有相對于蛋清約或至少0％、1％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％或95％的變應原性。在一些情況下，卵清蛋白組合物具有相對于蛋清至多0％、1％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％或95％的變應原性。在一些情況下，可采用皮膚點刺試驗、血液檢查或口服食物激發(fā)來測量降低的變應原性。

可將卵清蛋白組合物配制為液體、固體或粉末?？蓪⒙亚宓鞍捉M合物冷藏或冷凍。

在一方面，本公開內容提供了編碼本文所述的分離的重組卵清蛋白或分離的突變卵類黏蛋白的多核苷酸。多核苷酸可以是密碼子優(yōu)化的。多核苷酸可為dna或rna。

可采用化學合成、分子克隆或重組方法、dna或基因組裝方法、人工基因合成、pcr或它們的任意組合來獲得本文所述的多核苷酸?；瘜W多核苷酸合成的方法是本領域公知的，因此不需要在本文中詳細描述。本領域技術人員可使用本文提供的序列和商用dna合成儀來生產所需的dna序列。如本文進一步討論的，對于采用重組方法制備多核苷酸，可將包含所需序列的多核苷酸插入至合適的克隆載體或表達載體中，進而可將該克隆載體或表達載體引入至合適的宿主細胞中以供復制及擴增?？赏ㄟ^本領域已知的任何手段將多核苷酸插入至宿主細胞中?？赏ㄟ^例如經由直接吸收、內吞作用、轉染、f-交配、peg-介導的原生質體融合、根癌土壤桿菌介導的轉化、生物槍轉化、化學轉化或電穿孔而引入外源多核苷酸來轉化細胞。外源多核苷酸一旦引入后可作為非整合的表達載體(如質粒)保持在細胞內，或可整合至宿主細胞基因組中?？赏ㄟ^本領域已知的方法來從宿主細胞中分離如此擴增的多核苷酸?；蛘?，核酸擴增方法(例如，pcr)允許dna序列的復制。

通過在合適的表達載體中使用分離的dna并將該表達載體插入合適的宿主細胞中而獲得rna。當細胞復制并將該dna轉錄成rna時，可隨后采用本領域技術人員已知的方法分離該rna?；蛘撸赏ㄟ^轉錄該分離的dna，例如，通過使用rna聚合酶的體外轉錄反應來獲得rna。或者，可采用化學合成來獲得rna。

可根據標準技術來構建合適的克隆載體，或可從本領域中可用的許多克隆載體中選擇合適的克隆載體。盡管所選的克隆載體可根據意欲使用的宿主細胞而變化，但有用的克隆載體將通常具有自我復制的能力，可擁有針對特定限制性核酸內切酶的單個靶標，并且/或者可攜帶可用于選擇含有該表達載體的克隆的標志物的基因。合適的實例包括質粒和細菌病毒，例如，puc18、puc19、bluescript(例如，pbssk+)及其衍生物、mp18、mp19、pbr322、pmb9、cole1、pcr1、rp4、噬菌體dna，以及穿梭載體如psa3和pat28。這些以及許多其他克隆載體可從商業(yè)供應商如biorad、strategene和invitrogen獲得。

本文所述的多核苷酸可進一步編碼信號肽。信號肽也被稱為信號序列、靶向信號、定位信號、定位序列、分泌信號、轉運肽、前導序列或前導肽，其可支持蛋白質或多核苷酸的分泌。來自宿主細胞的重組或異源表達的蛋白質的細胞外分泌可有利于蛋白質純化。例如，從細胞培養(yǎng)物上清液回收重組蛋白可能優(yōu)于將宿主細胞裂解而釋放包括宿主細胞的細胞內蛋白質在內的復雜的蛋白質混合物。分泌可減少異源蛋白質的細胞內過表達可能對宿主細胞造成的有害影響，如毒性或生長速率減緩。相比于在宿主細胞中的細胞內表達時用于儲存合成蛋白質的有限體積，分泌可使蛋白質產量提高。蛋白質的分泌生產可有利于翻譯后修飾或加工(例如，蛋白質折疊、二硫鍵形成、糖基化)。

分泌的蛋白質可最初被表達為具有n-末端信號肽的前體。信號肽可含有1-5個殘基的帶正電荷的n-末端(n區(qū))、6-16個氨基酸的中央疏水核心(h區(qū))，以及為信號肽酶的識別位點的3-7個氨基酸的極性區(qū)(c區(qū))。信號肽可位于注定分泌至細胞外的前蛋白的n-末端。在一些情況下，例如，對于雞卵白蛋白和人纖溶酶原激活劑，信號肽在內部。信號肽的長度可為15至50個氨基酸。

信號肽可引導所表達的前體前蛋白跨過內質網的膜。例如，在易位期間或易位完成不久之后，可通過信號肽酶從該蛋白質的其余部分上切下信號肽。蛋白質可被運送至高爾基體并分泌，除非其攜帶停留在細胞內區(qū)室中的信號。

信號肽可位于卵清蛋白或突變卵類黏蛋白的n-末端。

信號肽可來源于蛋白質的前體(例如，前原肽、前蛋白)。信號肽可來源于蛋白質的前體，包括但不限于酸性磷酸酶(例如，巴斯德畢赤酵母pho1)、白蛋白(例如，雞白蛋白)、堿性細胞外蛋白酶(例如，解脂耶氏酵母xrp2)、α-交配因子(α-mf，matα)(例如，釀酒酵母α-交配因子)、淀粉酶(例如，α-淀粉酶、米根霉、粟酒裂殖酵母推定的淀粉酶spcc63.02c(amy1))、β-酪蛋白(例如，牛β-酪蛋白)、碳水化合物結合模塊家族21(cbm21)-淀粉結合結構域、羧肽酶y(例如，粟酒裂殖酵母cpy1)、纖維二糖水解酶i(例如，里氏木霉cbh1)、二肽基蛋白酶(例如，粟酒裂殖酵母推定的二肽基蛋白酶spbc1711.12(dpp1))、葡糖淀粉酶(例如，泡盛曲霉葡糖淀粉酶)、熱休克蛋白(例如，細菌hsp70)、疏水蛋白(例如，里氏木霉hbfi，里氏木霉hbfii)、菊粉酶、轉化酶(例如，釀酒酵母suc2)、殺傷蛋白或殺傷毒素(例如，128kdapgkl殺傷蛋白、k1殺傷毒素的α-亞基(例如，乳酸克魯維酵母的k1殺傷毒素的α-亞基)、k1毒素kilm1、k28前原毒素、pichiaacaciae)、富亮氨酸的人工信號肽cly-l8、溶菌酶(例如，雞cly)、植物凝集素(pha-e)(例如，菜豆(phaseolusvulgaris)植物凝集素)、麥芽糖結合蛋白(mbp)(例如，大腸桿菌麥芽糖結合蛋白)、p因子(例如，粟酒裂殖酵母p3)、巴斯德畢赤酵母dse、巴斯德畢赤酵母exg、巴斯德畢赤酵母pir1、巴斯德畢赤酵母scw和細胞壁蛋白pir4(具有內部重復的蛋白質)。信號肽可包含表1中的序列。在一些情況下，信號肽可選自seqidno:14、seqidno:15、seqidno:16、seqidno:17、seqidno:18、seqidno:19、seqidno:20、seqidno:21、seqidno:22、seqidno:23、seqidno:24、seqidno:25、seqidno:26、seqidno:27、seqidno:28、seqidno:29、seqidno:30、seqidno:31、seqidno:32、seqidno:33、seqidno:34、seqidno:35、seqidno:36、seqidno:37、seqidno:38、seqidno:39、seqidno:40、seqidno:41、seqidno:42、seqidno:43、seqidno:44、seqidno:45、seqidno:46、seqidno:47、seqidno:48、seqidno:49、seqidno:50、seqidno:51、seqidno:52、seqidno:53、seqidno:54、seqidno:55、seqidno:56、seqidno:57、seqidno:58、seqidno:59、seqidno:60、seqidno:61、seqidno:62、seqidno:63、seqidno:64、seqidno:65、seqidno:66、seqidno:67、seqidno:68、seqidno:69、seqidno:70、seqidno:71，以及它們的任意組合。

在一些情況下，信號肽的長度可約為或至少為5、10、15、20、25、30、50或100個氨基酸。在一些情況下，信號肽的長度可至多為5、10、15、20、25、30、50或100個氨基酸。在一些情況下，信號肽的長度可為5至50個氨基酸或5-30個氨基酸。

可采用例如密碼子優(yōu)化、定向進化、間隔區(qū)插入和/或缺失誘變修飾信號肽，或使其包含一個或多個氨基酸插入、缺失和/或置換。

多核苷酸可進一步編碼信號肽切割或識別位點。信號肽酶包括但不限于kex2、krp1、腸激酶(ekt)、凝血酶、因子xa(fxa)、煙草蝕紋病毒(tev)，以及3cprescission。

表1：示例性信號肽的序列

在一方面，本公開內容提供了包含任意本文所述的多核苷酸的表達載體。多核苷酸可位于表達載體中。表達載體可為構建體，其能夠在宿主細胞中遞送并優(yōu)選地表達一種或多種感興趣的基因或序列。表達載體的實例包括但不限于病毒載體(例如，腺病毒、腺相關病毒和逆轉錄病毒)、裸dna或rna表達載體、質粒、粘粒、噬菌體載體、與陽離子縮合劑相關的dna或rna表達載體、封裝在脂質體內的dna或rna表達載體，以及某些真核細胞，如生產細胞。表達載體可允許方便高效的復制、克隆和/或選擇。相應地，表達載體可額外包含允許其在宿主細胞中復制的核酸序列如復制起點、一種或多種治療性基因和/或選擇性標記基因，以及本領域已知的其他遺傳元件，如引導轉錄、翻譯和/或所編碼蛋白質的分泌的調節(jié)元件。表達載體組件通常可包括但不限于以下的一種或多種：信號序列；復制起點；一種或多種標志物基因；以及合適的轉錄控制元件(如啟動子、增強子和終止子)。對于表達(例如，翻譯)，通常還需要一個或多個翻譯控制元件，如核糖體結合位點、翻譯起始位點、內部核糖體進入位點和終止密碼子。該表達載體可用于轉導、轉化或感染細胞，從而使細胞表達除該細胞天然的核酸和/或蛋白質之外的核酸和/或蛋白質。該表達載體任選地包含用于幫助實現核酸進入細胞的物質，如病毒顆粒、脂質體、蛋白質包衣等。對于蛋白質表達，通過標準分子生物技術的許多類型的合適表達載體是本領域已知的。這類表達載體選自常規(guī)載體類型，包括昆蟲，例如，桿狀病毒表達系統(tǒng)，或酵母、真菌、細菌或病毒表達系統(tǒng)。許多類型在本領域中已知的其他合適的表達載體也可用于此目的。用于獲得克隆和表達載體的方法是公知的(參見，例如，green和sambrook,molecularcloning:alaboratorymanual,第四版,coldspringharborlaboratorypress,newyork(2012))。

表達載體可進一步包含啟動子。啟動子包括但不限于組成型啟動子、誘導型啟動子和雜合啟動子。啟動子包括但不限于acu-5、adh1+、醇脫氫酶(adh1、adh2、adh4)、ahsb4m、ainv、alca、α-淀粉酶、交替氧化酶(aod)、醇氧化酶(aox1)、醇氧化酶2(aox2)、axdh、b2、camv、纖維二糖水解酶i(cbh1)、ccg-1、cdna1、細胞絲多肽(cfp)、cpc-2、ctr4+、cup1、二羥基丙酮合酶(das)、烯醇化酶(eno、eno1)、甲醛脫氫酶(fld1)、fmd、甲醛脫氫酶(fmdh)、g1、g6、gaa、gal1、gal2、gal3、gal4、gal5、gal6、gal7、gal8、gal9、gal10、gcw14、gdha、gla-1、α-葡糖淀粉酶(glaa)、甘油醛-3-磷酸脫氫酶(gpda、gap、gapdh)、磷酸甘油酸變位酶(gpm1)、甘油激酶(gut1)、hsp82、invl+、異檸檬酸裂合酶(icl1)、乙酰羥酸異構體還原酶(ilv5)、kar2、kex2、β-半乳糖苷酶(lac4)、leu2、melo、met3、甲醇氧化酶(mox)、nmt1、nsp、pcbc、pet9、過氧化物酶體生成蛋白8(pex8)、磷酸甘油酸激酶(pgk、pgk1)、pho1、pho5、pho89、磷脂酰肌醇合酶(pis1)、pyk1、丙酮酸激酶(pki1)、rps7、山梨醇脫氫酶(sdh)、3-磷酸絲氨酸氨基轉移酶(ser1)、ssa4、sv40、tef、翻譯延伸因子1α(tef1)、thi11、高絲氨酸激酶(thr1)、tpi、tps1、磷酸丙糖異構酶(tpi1)、xrp2以及ypt1。

表達載體可進一步包含營養(yǎng)缺陷型標志物(例如，ade1、arg4、his4、ura3、met2)。表達載體可進一步包括選擇性標記(例如，抗性基因)。在一些情況下，抗性基因可賦予對吉歐霉素、氨芐西林、殺稻瘟素、卡那霉素、nurseothricin、氯霉素、四環(huán)素、三氯生以及更昔洛韋的抗性。表達載體可包含質粒。

在一方面，本公開內容提供了經轉化以表達一種或多種異源卵清蛋白的宿主細胞，其中所述宿主細胞不選自大腸桿菌、巴斯德畢赤酵母、水稻、黑曲霉、米曲霉、產黃頭孢霉、釀酒酵母、昆蟲、小鼠、玉米、pseudozyma、煙草、斑馬魚，以及它們的任意組合。

在一方面，本公開內容提供了經轉化以表達一種或多種異源卵清蛋白的宿主細胞，其中所述一種或多種卵清蛋白不選自卵白蛋白、卵轉鐵蛋白、溶菌酶、卵固蛋白、卵類黏蛋白、卵抑制劑、抗生物素蛋白，以及它們的組合。

在一方面，本公開內容提供了包含本文所述的多核苷酸或表達載體的宿主細胞。能夠表達異源dna的任何宿主細胞均可用于分離蛋白質或編碼蛋白質的多核苷酸的目的。合適的宿主細胞包括但不限于哺乳動物(例如，人如hek或hela；小鼠如3t3或來源于swiss、balb/c或nih小鼠的細胞；倉鼠如cho；猴如cos)宿主細胞、細菌(例如，大腸桿菌、枯草桿菌、假單胞菌、鏈霉菌)宿主細胞、真菌宿主細胞(例如，釀酒酵母、栗酒裂殖酵母、乳酸克魯維酵母)，或昆蟲(例如，黑腹果蠅、highfive、草地貪夜蛾sf9)宿主細胞?？赏ㄟ^例如常規(guī)手段如電穿孔用至少一種本公開內容的表達載體轉染宿主細胞?？赏ㄟ^任意一些合適的手段將含有感興趣多核苷酸的表達載體引入宿主細胞中，該手段包括電穿孔、化學轉化、采用氯化鈣、氯化銣、磷酸鈣、deae-葡聚糖或其他物質的轉染；微粒轟擊；脂轉染；peg介導的原生質體融合；根癌土壤桿菌介導的轉化；生物槍轉化；以及感染(例如，當載體是傳染原如痘苗病毒時)。引入表達載體或多核苷酸的選擇將常常取決于宿主細胞的特征。然后可在允許蛋白質表達的條件下培養(yǎng)轉染或轉化的宿主細胞。在一些實施方案中，從宿主細胞中純化蛋白質。

表達載體可以是基因組整合的。宿主細胞可包含多個拷貝的表達載體。在一些情況下，宿主細胞可選自細菌、真菌、植物、昆蟲、哺乳動物及它們的任意組合。在一些情況下，真菌可為酵母或絲狀真菌。酵母包括但不限于arxulaspp.、arxulaadeninivorans、克魯維酵母屬的種、乳酸克魯維酵母、畢赤酵母屬的種、安格斯畢赤酵母、巴斯德畢赤酵母、酵母屬的種、釀酒酵母、裂殖酵母屬的種、粟酒裂殖酵母、耶氏酵母屬的種以及解脂耶氏酵母。真菌包括但不限于蘑菇屬的種、二孢蘑菇、曲霉屬的種、泡盛曲霉、煙曲霉、構巢曲霉、黑曲霉、米曲霉、刺盤孢屬的種、盤長孢狀刺盤孢、內座殼屬的種、寄生內座殼、鐮孢屬的種、禾本科鐮孢、腐皮鐮孢、毛霉屬的種、米黑毛霉、微小毛霉、毀絲霉屬、嗜熱毀絲霉、脈孢菌屬、粗糙脈孢菌、青霉屬的種、沙門柏干酪青霉、變灰青霉、產黃青霉、埃莫森青霉(踝節(jié)菌)、繩狀青霉、產紫青霉、婁地青霉、側耳屬、糙皮側耳、根毛霉屬常、米黑根毛霉、微小根毛霉、根霉屬常、少根根霉、少孢根霉、米根霉、木霉屬常、深綠木霉、里氏木霉以及綠木霉。在一些情況下，宿主細胞可選自米曲霉、枯草桿菌、大腸桿菌、嗜熱毀絲霉、粗糙脈孢菌、巴斯德畢赤酵母以及它們的任意組合。宿主細胞可被美國食品與藥品管理局批準為通常認為是安全的。宿主細胞可以是營養(yǎng)缺陷型的。例如，可通過將宿主細胞的糖基化途徑人源化或工程化成更加類似于另一生物體(例如，鳥或雞)而對該宿主細胞進行糖工程化。

在一方面，本公開內容提供了包含本文所述的宿主細胞的細胞培養(yǎng)物。

在一些實施方案中，采用體外或無細胞蛋白質合成，例如，采用包含細胞提取物(如大腸桿菌細胞提取物、兔網織紅細胞提取物、小麥胚芽細胞提取物或昆蟲細胞提取物)的無細胞翻譯系統(tǒng)來產生多肽或蛋白質?？赏ㄟ^本領域技術人員已知的合適方法從細胞、細胞提取物、培養(yǎng)基中回收、分離和/或任選地純化所表達的蛋白質。例如，在細胞裂解后將蛋白質以可溶的形式分離，或采用已知技術，例如，在鹽酸胍中將其提取。可采用多種常規(guī)方法的任一種來進一步純化蛋白質，該常規(guī)方法包括但不限于：采用hplc、fplc等的液相色譜法如正相或反相液相色譜法；親和色譜法如通過無機配體或單克隆抗體的親和色譜法；尺寸排阻色譜法；固定金屬螯合色譜法；凝膠電泳；等等。本領域技術人員可選擇最合適的分離和純化技術。仍有其他合適的宿主細胞，以及用于轉染、培養(yǎng)、擴增、篩選、生產和純化的方法是本領域已知的。

在一方面，本公開內容提供了用于制備可消費產品的方法，所述方法包括用本文所述的分離的重組卵清蛋白、分離的突變卵類黏蛋白或卵清蛋白組合物替換一部分基于雞蛋的成分。

在一方面，本公開內容提供了用于制備可消費產品的方法，所述方法包括添加本文所述的分離的重組卵清蛋白、分離的突變卵類黏蛋白或卵清蛋白組合物。

在一方面，本公開內容提供了使用重組卵清蛋白作為加工助劑來制備經加工的可消費產品的方法。在一些情況下，所述方法進一步包括去除重組卵清蛋白。經加工的可消費產品中的重組卵清蛋白可以被消耗或可以未被消耗。經加工的可消費產品可含有痕量的重組卵清蛋白。在一些情況下，經加工的可消費產品不含有重組卵清蛋白。

在一方面，本公開內容提供了使用本文所述的分離的重組卵清蛋白、分離的突變卵類黏蛋白或卵清蛋白組合物作為加工助劑來制備經加工的可消費產品的方法。在一些情況下，所述方法進一步包括去除分離的重組卵清蛋白、分離的突變卵類黏蛋白或卵清蛋白組合物。在一些情況下，加工助劑充當乳化劑、結合劑、膨松劑、增稠劑、保濕劑、粘合劑、褐變劑、澄清劑、膠凝劑、結晶控制劑、濕潤劑、嫩化劑、充氣劑、結構改善劑、凝結劑、涂層劑、著色劑、光澤劑、調味劑、冷凍劑、隔離劑、口感改善劑、ph緩沖劑、保質期延長劑、防腐劑、抗微生物劑(例如，抗細菌劑、抗真菌劑、抗病毒劑、抗寄生蟲劑)、食品腐敗抑制劑、蘋果乳酸發(fā)酵抑制劑、質地改進劑、雞蛋替代物，或它們的任意組合。

在一方面，本公開內容提供了包含本文所述的分離的重組卵清蛋白、分離的突變卵類黏蛋白或卵清蛋白組合物的可消費產品?？上M產品包括但不限于食物產品、飲料產品、藥物產品以及衛(wèi)生產品。

在一方面，本公開內容提供了使用重組卵清蛋白作為乳化劑、結合劑、膨松劑、增稠劑、保濕劑、粘合劑、褐變劑、澄清劑、膠凝劑、結晶控制劑、濕潤劑、嫩化劑、充氣劑、結構改善劑、凝結劑、涂層劑、著色劑、光澤劑、調味劑、冷凍劑、隔離劑、口感改善劑、ph緩沖劑、保質期延長劑、防腐劑、抗微生物劑(例如，抗細菌劑、抗真菌劑、抗病毒劑、抗寄生蟲劑)、食品腐敗抑制劑、蘋果乳酸發(fā)酵抑制劑、質地改進劑、雞蛋替代物或它們的任意組合的方法。

在一方面，本公開內容提供了使用本文所述的分離的重組卵清蛋白、分離的突變卵類黏蛋白或卵清蛋白組合物作為乳化劑、結合劑、膨松劑、增稠劑、保濕劑、粘合劑、褐變劑、澄清劑、膠凝劑、結晶控制劑、濕潤劑、嫩化劑、充氣劑、結構改善劑、凝結劑、涂層劑、著色劑、光澤劑、調味劑、冷凍劑、隔離劑、口感改善劑、ph緩沖劑、保質期延長劑、防腐劑、抗微生物劑(例如，抗細菌劑、抗真菌劑、抗病毒劑、抗寄生蟲劑)、食品腐敗抑制劑、蘋果乳酸發(fā)酵抑制劑、質地改進劑、雞蛋替代物或它們的任意組合的方法。

在一方面，本公開內容提供了用于診斷食物變態(tài)反應的方法，所述方法包括向受試者引入本文所述的分離的重組卵清蛋白、分離的突變卵類黏蛋白或卵清蛋白組合物。在一些情況下，采用皮膚點刺試驗、血液檢查或口服食物激發(fā)進行引入。

在一方面，本公開內容提供了用于治療食物變態(tài)反應的方法，所述方法包括用本文所述的分離的重組卵清蛋白、分離的突變卵類黏蛋白或卵清蛋白組合物替換蛋清變應原，或通過食用本文所述的分離的重組卵清蛋白、分離的突變卵類黏蛋白或卵清蛋白組合物來提高受試者對蛋清變應原的耐受性。

在一方面，本公開內容提供了用于抑制可消費產品(例如，酒)中的蘋果乳酸發(fā)酵的方法，所述方法包括向該可消費產品提供蛋清溶菌酶?？芍亟M地表達蛋清溶菌酶。

在一方面，本公開內容提供了使用溶菌酶(例如，蛋清溶菌酶)作為例如食品、動物飼料、水果、蔬菜、藥物、豆腐、豆腐、奶酪、海鮮、肉、酒、清酒或啤酒(例如，非巴氏滅菌的啤酒)中的抗微生物劑、抗病毒劑、防腐劑或其任意組合的方法。在一方面，本公開內容提供了使用溶菌酶(例如，蛋清溶菌酶)來抑制食品腐敗生物體的生長、抑制late-blowing(例如，奶酪中)、增長保質期、幫助消化性、治療胃腸道疾病、改善食品安全性、加強免疫系統(tǒng)、替換或減少護膚品中的亞硫酸鹽以治愈或預防痤瘡或褥瘡、用于光學狀況、用于牙科狀況、用于口腔狀況、治療頭痛、治療感冒、治療喉部感染或其組合的方法?？芍亟M地表達溶菌酶。

在一方面，本公開內容提供了如下使用卵白蛋白(例如，蛋清卵白蛋白)的方法：用作用于免疫或生物化學研究的參考蛋白；用作研究蛋白質的組成、物理性質和/或結構的標準；用作阻斷劑(例如，在免疫組織化學或western印跡中)；用于檢測抗血紅蛋白單克隆抗體(例如，在酶聯免疫吸附測定(elisa)中)；用作分子量測定(例如，通過sds-page或尺寸排阻色譜法)的蛋白質標準；用于細胞培養(yǎng)系統(tǒng)或診斷學以穩(wěn)定將會以其他方式喪失其功能完整性的酶和激素；用作蛋白質載體或穩(wěn)定劑；或它們的任意組合?？芍亟M地表達卵白蛋白。

在一方面，本公開內容提供了如下使用卵轉鐵蛋白(例如，蛋清卵轉鐵蛋白)的方法：用作鐵結合蛋白(例如，以使得細菌培養(yǎng)基中的鐵在營養(yǎng)上對有害微生物如痢疾志賀氏菌(schigelladysenteriae)不可用)；用作用于細胞成熟的培養(yǎng)基成分；用于為細胞提供鐵；用于除去培養(yǎng)基的毒素(例如，通過結合金屬離子，如鋅、鐵和鋁)；用作防腐劑；用作抗病毒劑、抗生素或抗微生物劑；用作乳鐵蛋白替代物；或它們的任意組合。可重組地表達卵轉鐵蛋白。

在一方面，本公開內容提供了如下使用抗生物素蛋白(例如，蛋清抗生物素蛋白)的方法：用作生物素結合劑；用于免疫測定；用于組織化學法；用于細胞化學法；用于生物素純化；用于染色體可視化；用于蛋白質純化；用于親和色譜法；用于親和細胞化學法；用于研究細胞表面分子相互作用；用于免疫測定中的信號放大；用于診斷學；用于藥物遞送、靶向或中和；用于基因作圖；用于抗生物素蛋白綴合的探針(例如，酶、抗原、抗體、凝集素、激素、核酸、細胞、亞細胞細胞器)；或它們的任意組合。可重組地表達抗生物素蛋白。

在一方面，本公開內容提供了使用分離的重組卵清蛋白、分離的突變卵類黏蛋白或卵清蛋白組合物作為蛋白質補充物的方法。在一方面，本公開內容提供了使用一種或多種卵清蛋白作為蛋白質補充物的方法。在一些情況下，將蛋白質補充物配制為固體(例如，粉末)、液體、凝膠、奶昔或蛋白質棒。

例如，可處理卵清蛋白組合物以去除葡萄糖、保存顏色或穩(wěn)定組合物以供更長時間的儲存。為了較長的儲存穩(wěn)定性，可將葡萄糖從組合物中去除?？蓪⒔M合物澄清、過濾、脫糖(例如，穩(wěn)定化，無葡萄糖化)、噴霧干燥并且/或者巴氏滅菌。巴氏滅菌可發(fā)生在溫度維持在至少130°f(54℃)的“熱室”中，持續(xù)至少七至十天。在更高溫度下的巴氏滅菌可提高凝膠強度。如果組合物的含濕量保持在約6％，則可消除沙門氏菌。當在低濕度水平的熱室中儲存時，可提高攪打能力。巴氏滅菌可使用高溫短時(htst)巴氏滅菌設備進行。噴霧干燥可在巴氏滅菌前后進行?？蓪⒔M合物進行超巴氏滅菌?？蓪⒔M合物在-10°至-40°f(-23.3°至-40℃)下澄清、過濾、巴氏滅菌、均化和/或冷凍。組合物可為液體、冷藏的液體、冷凍的液體，或是干燥的。

可將本文的蛋白質和組合物添加至一種或多種食品添加劑，或與一種或多種食品添加劑混合。食品添加劑可增加組合物的體積和/或質量。食品添加劑可改善功能性能和/或物理特征。例如，食品添加劑可防止由冷凍-解凍循環(huán)中脂蛋白的脂質部分造成的凝膠化或粘度增加?？商砑涌菇Y塊劑以制成自由流動的組合物。可添加碳水化合物以增加對干燥期間的熱損傷的耐受性(例如，更少的蛋白質變性)并改善干燥組合物的穩(wěn)定性和流動性?？上蚋稍锝M合物添加攪打添加劑(例如，在干燥之前，以按液體重量計小于0.1％的水平)，以改善攪打能力和充氣性質。食品添加劑包括但不限于食品著色劑、ph調節(jié)劑、天然調味劑、人造調味劑、風味增強劑、批號標記物、食品酸、填料、抗結塊劑(例如，硅鋁酸鈉)、防綠化(antigreening)劑(例如，檸檬酸)、食品穩(wěn)定劑、泡沫穩(wěn)定劑或結合劑、抗氧化劑、酸度調節(jié)劑、填充劑、保色劑、攪打劑(例如，酯型攪打劑、檸檬酸三乙酯、月桂基硫酸鈉)、乳化劑(例如，卵磷脂)、濕潤劑、增稠劑、藥物賦形劑、固體稀釋劑、鹽、營養(yǎng)物、甜味劑、上光劑、防腐劑、維生素、膳食元素、碳水化合物、多元醇、樹膠、淀粉、面粉、油以及麩皮。

食品著色劑包括但不限于fd&c黃#5、fd&cc黃#6、fd&c紅#40、fd&c紅#3、fd&c藍1號、fd&c藍2號、fd&c綠3號、類胡蘿卜素(例如，藏紅花，β-胡蘿卜素)、胭脂樹紅、甜菜苷、蝶豆花、焦糖著色劑、葉綠素、接骨木果汁、番茄紅素、洋紅、香蘭(pandan)、辣椒粉、姜黃、類姜黃素、喹啉黃、偶氮玉紅(carmoisine)、胭脂紅4r、專利藍v以及綠色s(greens)。

ph調節(jié)劑包括但不限于tris緩沖液、磷酸鉀、氫氧化鈉、氫氧化鉀、檸檬酸、檸檬酸鈉、碳酸氫鈉和鹽酸。

泡沫穩(wěn)定劑或結合劑包括但不限于κ角叉菜膠、ι角叉菜膠、λ角叉菜膠、檸檬酸三乙酯、黃原膠、甲基纖維素、羥乙基纖維素、羥甲基纖維素和聚丙烯酰胺。

鹽包括但不限于酸性鹽、堿金屬鹽、有機鹽、無機鹽、磷酸鹽、氯化物鹽、氯化鈉、氯化鉀、氯化鎂、高氯酸鎂、氯化鈣、氯化銨、氯化鐵和氯化鋅。

營養(yǎng)物包括但不限于大量營養(yǎng)物、微量營養(yǎng)物、必需營養(yǎng)物、非必需營養(yǎng)物、膳食纖維、氨基酸、必需脂肪酸、ω-3脂肪酸和共軛亞油酸。

甜味劑包括但不限于糖替代物、人造甜味劑、乙酰舒泛鉀鹽、糖精(advantame)、阿力甜、阿司帕坦、環(huán)己烷氨基磺酸鈉、甘素(dulcin)、甜素(glucin)、新橙皮苷二氫查耳酮、紐甜、p-4000、糖精(saccharin)、阿司帕坦-乙酰舒泛鹽、三氯蔗糖、植物甜蛋白(brazzein)、仙茅甜蛋白、甘草甜素、甘油、菊粉、羅漢果苷、馬檳榔甜蛋白、麥芽低聚糖、甘露糖醇、神奇蛋白、莫納甜、莫內林、歐亞水龍骨甜素、潘塔亭、甜菊、三葉苷以及索默坦蛋白質。

碳水化合物包括但不限于糖、蔗糖、葡萄糖、果糖、半乳糖、乳糖、麥芽糖、甘露糖、阿洛酮糖、塔格糖、木糖、阿拉伯糖、高果糖玉米糖漿、高麥芽糖玉米糖漿、玉米糖漿(例如，無葡萄糖玉米糖漿)、單糖、二糖以及多糖(例如，聚右旋糖、麥芽糖糊精)。

多元醇包括但不限于木糖醇、麥芽糖醇、赤蘚糖醇、山梨糖醇、蘇糖醇、阿拉伯糖醇、氫化淀粉水解物、異麥芽酮糖醇、乳糖醇、甘露糖醇和半乳糖醇(衛(wèi)矛醇(dulcitol))。

樹膠包括但不限于阿拉伯膠、結冷膠、瓜爾膠、刺槐豆膠、阿拉伯樹膠、纖維素膠和黃原膠。

維生素包括但不限于煙酸、核黃素、泛酸、硫胺素、葉酸、維生素a、維生素b6、維生素b12、維生素d、維生素e、葉黃素、玉米黃質、膽堿、肌醇以及生物素。

膳食元素包括但不限于鈣、鐵、鎂、磷、鉀、鈉、鋅、銅、錳、硒、氯、碘、硫、鈷、鉬和溴。

一種制備組合物的方法可包括干燥和/或濃縮。在一些情況下，干燥形成干燥、脫水、濃縮并且/或者固體的組合物。干燥方法的一些非限制性實例包括熱干燥、蒸發(fā)(例如，通過真空或空氣)、蒸餾、沸騰、在烘箱中加熱、真空干燥、噴霧干燥、冷凍干燥、凍干，以及它們的任意組合。干燥的機制可影響組合物的水合和分子結構，以產生不同的物理性質?？蓪⒔M合物干燥直到該組合物包含按重量計約或至少約0.001％、0.005％、0.01％、0.05％、0.1％、0.2％、0.3％、0.4％、0.5％、0.6％、0.7％、0.8％、0.9％、1.0％、1.5％、2％、2.5％、3％、3.5％、4％、4.5％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％或超過95％的溶劑(例如，水)?？蓪⒔M合物干燥直到該組合物包含按重量計至多約0.001％、0.005％、0.01％、0.05％、0.1％、0.2％、0.3％、0.4％、0.5％、0.6％、0.7％、0.8％、0.9％、1.0％、1.5％、2％、2.5％、3％、3.5％、4％、4.5％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％或95％的溶劑(例如，水)。例如，可經由任何標準干燥方法(例如，在60℃的烘箱中12-80小時，使用工業(yè)鼓風機，等等)來干燥組合物，以去除溶劑，從而形成干燥或固體的組合物。在另一實例中，可將組合物濃縮(例如，從80％水至20％水)。

一種制備組合物的方法可包括稀釋和/或水合。在一些情況下，該稀釋可包括添加溶劑?？蓪⒔M合物稀釋直到該組合物包含按重量計約或至少約0.01％、0.05％、0.1％、0.2％、0.3％、0.4％、0.5％、0.6％、0.7％、0.8％、0.9％、1％、1.5％、2％、2.5％、3％、3.5％、4％、4.5％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5或99.9％的水?？蓪⒔M合物稀釋直到該組合物包含按重量計至多約0.01％、0.05％、0.1％、0.2％、0.3％、0.4％、0.5％、0.6％、0.7％、0.8％、0.9％、1％、1.5％、2％、2.5％、3％、3.5％、4％、4.5％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或99.9％的水。例如，可將組合物稀釋(例如，從20％水至80％水)。在另一實例中，可將干燥組合物水化(例如，從干燥固體至80％水)。

實施例

實施例1：宿主細胞中卵清蛋白的重組表達

將含有編碼卵清蛋白的基因序列的dna質粒或dna寡核苷酸與在側翼限制性序列位點處切割該基因序列的限制酶一起溫育。通過瓊脂糖凝膠電泳和凝膠提取方法來分離該基因序列。將純化的基因序列與dna連接酶、(如需要)dna核苷酸，以及在限制性位點處切割從而留下與所分離的基因序列的那些末端互補的末端的表達質粒一起溫育，以連接該表達質粒中啟動子(其可給予在宿主細胞中的組成型表達，例如，甘油醛-3-磷酸脫氫酶啟動子，或給予依賴于宿主細胞系生長的培養(yǎng)基中物質的存在的誘導表達)下游的基因。

例如，含有卵白蛋白的基因序列、在5'→3'方面上兩側分別有ecori和sacii限制性位點的質?？赏ㄟ^ecori和sacii限制酶切下、在瓊脂糖凝膠上分離，并連接至通過ecori和sacii切下的pgapz表達載體中。

采用標準方法(例如，電穿孔)將連接反應轉化至感受態(tài)細胞系(例如，dh5α細胞系)中并平板接種在含有抗生素(例如，吉歐霉素)的瓊脂平板上，以選擇已經被表達載體轉化的感受態(tài)細胞的菌落。在將平板于可手動選擇的適合菌落生長的溫度下溫育一段時間(例如，在37℃下持續(xù)16小時)后，選取單個菌落。通過標準分子生物學方法(例如，硅膠膜或柱、苯酚氯仿提取)分離并純化來自成功轉化株的表達載體。

采用標準分子生物學方法(例如，電感受態(tài)宿主細胞的電穿孔，或在聚乙二醇或二甲基亞砜的存在下宿主細胞的轉化)將表達載體轉化至宿主細胞(例如，巴斯德畢赤酵母)中。通過將轉化反應的溶液涂布在平板接種的培養(yǎng)基(例如，瓊脂平板)上來選擇宿主細胞通過該表達載體的成功轉化株，其中該培養(yǎng)基適合于宿主細胞的生長并含有選擇劑(例如，與該表達載體上所攜帶的抗性基因對應的抗生素)。將該平板接種的培養(yǎng)基在適當溫度下溫育適當的時間直到宿主細胞的單個菌落可以從該平板分離(例如，30℃下持續(xù)一周)。將所得的克隆各自分離并單獨平板接種在新鮮的選擇平板上，并再次溫育。利用來自這些平板的單個菌落接種含有適合宿主細胞的生長培養(yǎng)基、具有如初始輪次中所用的同一選擇劑的單個培養(yǎng)器皿。在適當的時間(例如，在搖瓶中30℃下過夜)后，可通過由該基因序列編碼的蛋白質的存在，相對于以來自陰性對照平板(如通過標準分子生物學方法(例如，western印跡法)確定的)的菌落接種的對照器皿來確定每個培養(yǎng)器皿中宿主細胞被表達載體的成功轉化。來自與表現出蛋白質表達的培養(yǎng)器皿對應的選擇平板的菌落可用于接種含有適合宿主細胞生長的培養(yǎng)基的器皿，以促進宿主細胞的生長以及蛋白質向培養(yǎng)基中的分泌。或者，可儲存來自與表現出蛋白質表達的培養(yǎng)器皿對應的選擇平板的菌落以供后續(xù)使用(例如，在-80℃下于dmso溶液中)。

實施例2：宿主細胞的選擇以及重組蛋白與天然蛋白質的比較

可合成編碼蛋清的蛋白質組分的dna序列并將其克隆至表達載體中以供在宿主細胞(例如，酵母，絲狀真菌)中表達。

例如，酵母菌株巴斯德畢赤酵母由于其在重組表達和蛋白質分泌中，特別是對于具有二硫鍵的蛋白質的效率而可以是適用于重組載體的宿主物質。使巴斯德畢赤酵母在含甘油的bmgy培養(yǎng)基中生長兩天并切換至含甲醇的bmmy培養(yǎng)基以誘導重組蛋白質產生，并在30℃下伴隨振蕩的燒瓶中生長兩天至一周。

可通過例如蛋白質構象、活性、乙?；Ｊ?、磷酸化模式、糖基化模式、凝膠化性質或其他功能特性，將重組蛋白質與天然蛋白質相比較。

應優(yōu)化上述方案以便可以增加蛋白質產量/(l培養(yǎng)物)/天，從而實現最佳輸出能力和生產成本。

實施例3：重組蛋白質的純化

可從轉化細胞系的培養(yǎng)物獲得純化的重組蛋白。可通過合適大小的發(fā)酵器皿和培養(yǎng)時間來獲得期望的蛋白質產量(例如，按克計)?？蓮呐囵B(yǎng)物上清液中純化所分泌的重組蛋白(例如，通過在離心機中離心出培養(yǎng)基)。例如，通過離心從培養(yǎng)物上清液去除宿主細胞。然后通過中空纖維滲濾純化該上清液中的蛋白質。在第二實例中，可通過溫和鹽萃取然后離心來純化蛋白質。

備選的器皿設計可允許培養(yǎng)基的連續(xù)循環(huán)，以及在單獨的器皿中過濾，從而在不中斷細胞生長的情況下收集蛋白質分泌物(例如，中空纖維生物反應器)。

可將純化的重組蛋白通過適合于加熱時膠凝的適當ph的水性緩沖液透析以獲得濕的卵清蛋白組合物，或通過適合于下游凍干(例如，噴霧干燥)的適當ph的水性緩沖液透析以獲得粉末狀卵清蛋白組合物。

通過考馬斯染色的4-20％十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳(sds-page)來表征所純化的重組蛋白，如圖16和圖17中的實例所示。

實施例4：純化的重組蛋白組合至卵清蛋白組合物中

對于即將被包含在卵清蛋白組合物的最終制劑中的每種卵清蛋白成分，可單獨地進行轉化細胞系中重組載體的構建及其蛋白質產物的純化。可期望組合和量的組合物中的這些純化蛋白質添加至一個體積中，以實現每種蛋白質的特定最終濃度。例如，一種制劑可包含以與其在動物衍生的蛋清中的對應濃度相匹配的最終濃度添加在一起的成分重組蛋白。

可將卵清蛋白組合物作為濕的卵清蛋白組合物儲存和冷藏?；蛘撸墒紫葘⒙亚宓鞍捉M合物加熱以誘導膠凝(在足以誘導大多數不穩(wěn)定成分蛋白變性的溫度下)，然后作為冷藏產物儲存或凍干以獲得粉末狀卵清蛋白組合物?；蛘?，可將蛋白蛋白以凍干的形式組合形成卵清蛋白組合物并然后溶解在溶液中。該溶液中鹽和食品添加劑的濃度和組分可根據制劑而變化。

可將不同量的蛋白質組分以匹配于在動物衍生的蛋清中發(fā)現的那些的比例混合在一起，并噴霧干燥以作為可通過添加水而重建的干燥卵清蛋白包裝?；蛘?，可使雞蛋蛋白混合物經歷加熱，并可隨后將該物質的凝膠作為冷藏的現成蛋清包裝。可改變諸如蛋白質混合物組成、ph、水百分比、加熱速率等因素以產生在稠度和適口性方面的變化。

實施例5：從雞蛋中分離蛋清

通過將未破碎的雞蛋置于外面至少30分鐘而使雞蛋達到室溫(例如，25℃)。將蛋清與蛋黃分離。

實施例6：攪打的蛋清或卵清蛋白組合物的發(fā)泡和泡沫穩(wěn)定性

將蛋清或卵清蛋白組合物(10ml)添加至50mlpyrex燒杯。將該燒杯放置在dremel旋轉工具工作站架上，該工作站架安裝有具有0.5英寸鋼刷附件的dremel3000變速旋轉工具。調整該架，使得當dremel下降進入燒杯時，該刷子幾乎不接觸燒杯的底部并且完全浸沒在該蛋清中。從該浸沒的起始位置，將dremel工具打開至速度設置3。該鋼刷攪打雞蛋1分鐘。1分鐘后，關閉dremel工具，抬起附件，并移開燒杯。

采用至少0.5mm精度的卡尺，以液體泡沫界面至泡沫空氣界面的距離測量泡沫高度。如果沒有液體可見，則將泡沫高度測量為燒杯底與泡沫空氣界面頂部的距離。

為測量滲出和/或泡沫穩(wěn)定性，在關掉dremel工具后10分鐘采用卡尺以燒杯底與液體泡沫界面的距離測量液體的量。在關掉dremel工具后30分鐘再次測量液體的量。

攪打的蛋清的泡沫高度約為30mm。

攪打的卵清蛋白組合物的泡沫高度可約為36.25mm。

攪打的蛋清的泡沫滲出在10min后約為2.5mm，在30min后約為8mm。

攪打的卵清蛋白組合物的泡沫滲出可在10min后約為0mm，在30min后約為0.5mm。

實施例7：攪打的蛋清或卵清蛋白組合物的泡沫強度和質地分析

用至少40mm的攪打的蛋清泡沫或攪打的卵清蛋白組合物泡沫填充重結晶盤。采用在brookfieldct3質地分析儀上的brookfieldta-mp探針設置3g的觸發(fā)值以及20mm的變形。將零高度設置為在蛋清泡沫或卵清蛋白組合物的表面上小于5mm處。在攪打蛋清或卵清蛋白組合物后立即在正常設置下進行至少一式三份的測試。在攪打后的30分鐘內測試攪打的蛋清或攪打的卵清蛋白組合物以將由于滲流造成的誤差降至最低。在測試中選擇先前未測試的不同的泡沫表面區(qū)域，使得來自先前測試的任何塌陷的泡沫氣泡不會在后續(xù)測試中引入誤差。對于誤差測量，考慮觸發(fā)值之前的初始噪聲。還記錄了每個樣品進行的3次運行之間的峰值負載。

攪打的蛋清的泡沫強度約為38g，例如如圖18所示。

攪打的卵清蛋白組合物的泡沫強度約為62g，例如如圖18所示。

實施例8：經烹飪的蛋清或卵清蛋白組合物的凝膠強度

將蛋清或卵清蛋白組合物(10ml)添加至50ml錐形falcon管。將該管在95℃下的水浴中煮沸9分鐘。取出該管并使其冷卻至室溫。將該管放置在brookfieldct3質地分析儀上的管支架上，并將brookfieldta-10探針降低至經烹飪的蛋清或卵清蛋白組合物的表面上方約2mm處。該分析儀以3g的觸發(fā)值和2mm的變形運行。經烹飪的蛋清或卵清蛋白組合物的凝膠強度被測量為第一次運行時經2mm變形所觀察到的峰值硬度。

經烹飪的蛋清的凝膠強度約為500至700g。

經烹飪的卵清蛋白組合物的凝膠強度約為150至500g。

實施例9：蛋清或卵清蛋白組合物的乳化能力和乳液穩(wěn)定性

為評價乳化能力，將油逐漸添加至含有蛋清或卵清蛋白質組合物的溶液中。確定從水包油乳液轉化為油包水乳液所需的油的量。

為評價乳液的穩(wěn)定性，在將該乳液置于某些條件下后，確定從乳液中分離的油或水的量。

實施例10：帶有蛋清或卵清蛋白組合物的天使蛋糕(angelfoodcake)

使蛋清或卵清蛋白組合物(30g)升至室溫并放置在帶有攪打附件的kitchenaid架混合器的混合碗中。在速度5下擊打蛋清或卵清蛋白組合物直到形成軟峰。緩慢添加精細砂糖(18g)。在速度8下擊打該混合物直到形成硬峰。在單獨的碗中，將糖(18g)和面粉(24g)一起篩分。在速度2下將糖和面粉混合物拌成混合物。將面糊舀入圓形天使蛋糕盤中，并在200°f的預熱烘箱中烘烤30分鐘。在將該盤從烘箱中取出后，將其立即倒置并冷卻，然后將蛋糕從盤中取出。

雖然本文已經顯示和描述了本發(fā)明的優(yōu)選實施方案，但對于本領域中技術人員將顯而易見的是，此類實施方案僅通過舉例的方式提供。在不偏離本發(fā)明的情況下，本領域技術人員現將想到眾多更改、改變和替換。應當理解，可采用本文所述的本發(fā)明實施方案的各種替代方案用于實踐本發(fā)明。旨在由以下權利要求來限定本發(fā)明的范圍，并且因此涵蓋在這些權利要求的范圍內的方法和結構及其等同項。