一種CRHR1基因分型的ARMS-qPCR檢測(cè)試劑盒的制作方法
【專(zhuān)利摘要】一種CRHR1基因分型的ARMS-qPCR檢測(cè)試劑盒，包括盒體和覆蓋在盒體上的盒蓋，盒體具有容置腔，還包括固定座和海綿墊，固定座容置在上述容置腔內(nèi)并縱向開(kāi)設(shè)有6個(gè)容置孔和1個(gè)容置槽，6個(gè)所述容置孔的孔腔內(nèi)分別容置有CRHR1-R引物試劑管、CRHR1-C引物試劑管、CRHR1-F1引物試劑管、CRHR1-F2引物試劑管、CRHR1-Taqman管和陽(yáng)性對(duì)照質(zhì)粒管；容置槽的槽腔內(nèi)容置有PCR緩沖液試劑瓶；6個(gè)容置孔的孔腔的底部、容置槽的槽腔的底部分別鋪設(shè)有所述的海綿墊；所述盒蓋的下端面分別對(duì)應(yīng)6個(gè)容置孔處設(shè)有6個(gè)能固定試劑管位置的第一限位槽，所述盒蓋的下端面對(duì)應(yīng)容置槽處設(shè)有能固定PCR緩沖液試劑瓶位置的第二限位槽；所述盒蓋與盒蓋磁性連接。本檢測(cè)試劑盒結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、合理，而且具有良好的密封性和安全性。
【專(zhuān)利說(shuō)明】-種CRHR1基因分型的ARMS-qPCR檢測(cè)試劑盒

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本實(shí)用新型設(shè)及一種檢測(cè)試劑盒，尤其設(shè)及一種用于CRHR1基因分型的 ARMS-qPCR檢測(cè)試劑盒。

【背景技術(shù)】
[0002] 產(chǎn)后抑郁癥是女性精神障礙中最為常見(jiàn)的類(lèi)型，是女性生產(chǎn)之后，由于性激素、社 會(huì)角色及屯、理變化所帶來(lái)的身體、情緒、屯、理等一系列變化。典型的產(chǎn)后抑郁癥是產(chǎn)后6周 內(nèi)發(fā)生，可持續(xù)整個(gè)產(chǎn)媽期，有的甚至持續(xù)至幼兒上學(xué)前。產(chǎn)后抑郁癥的發(fā)病率在15%? 30%。產(chǎn)后抑郁癥通常在6周內(nèi)發(fā)病，可在3?6個(gè)月自行恢復(fù)，但嚴(yán)重的也可持續(xù)1?2 年，再次妊娠則有20%?30%的復(fù)發(fā)率。造成產(chǎn)后抑郁癥的原因很多，比如懷孕期間有過(guò) 嚴(yán)重的情緒波動(dòng)、內(nèi)分泌失調(diào)等。越來(lái)越多的研究表明，遺傳因素在肥胖癥發(fā)病過(guò)程中扮演 著重要的角色，例如有精神病家族史，特別是有家族抑郁癥病史的產(chǎn)婦，產(chǎn)后抑郁的發(fā)病率 高，說(shuō)明家族遺傳可能影響到某一婦女對(duì)抑郁癥的易感性和她的個(gè)性。
[0003] 最近，有研究發(fā)現(xiàn)CRHRlrs242939基因型與產(chǎn)后抑郁癥緊密關(guān)聯(lián)，rsl0918859不 同的基因型是一個(gè)極好的產(chǎn)后抑郁癥風(fēng)險(xiǎn)預(yù)測(cè)指標(biāo)，對(duì)于產(chǎn)后抑郁癥的預(yù)防W及其后期的 治療具有重要的指導(dǎo)意義。
[0004] 可用于CRHRlrs242939分型的技術(shù)很多，包括如DNA直接測(cè)序法、雜交巧片法、焦 磯酸測(cè)序法W及變性高效液相色譜法等。其中，DNA測(cè)序法為基因分型的金標(biāo)準(zhǔn)，該方法存 在如下缺點(diǎn)；檢測(cè)的靈敏度不高，只有大于15%的突變才能檢測(cè)到；費(fèi)時(shí)，操作復(fù)雜，對(duì)操 作人員要求高；非閉管操作，設(shè)及PCR擴(kuò)增后的操作，因此易被污染，造成結(jié)果的不理想；通 量太小，一次最多只能做24個(gè)，很難大規(guī)模開(kāi)展。 實(shí)用新型內(nèi)容
[0005] 本實(shí)用新型所要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、密封性強(qiáng)的CRHR1基因分 型的ARMS-qPCR檢測(cè)試劑盒。
[0006] 本實(shí)用新型解決上述技術(shù)問(wèn)題所采用的技術(shù)方案為；一種CRHR1基因分型的 ARMS-qPCR檢測(cè)試劑盒，包括盒體和覆蓋在盒體上的盒蓋，所述盒體具有容置腔，還包括固 定座和海綿墊，所述固定座容置在上述容置腔內(nèi)并縱向開(kāi)設(shè)有6個(gè)容置孔和1個(gè)容置槽，6 個(gè)所述容置孔的孔腔內(nèi)分別容置有CRHR1-R引物試劑管、CRHR1-C引物試劑管、CRHR1-F1引 物試劑管、CRHR1-巧引物試劑管、0?皿1-化9111311管和陽(yáng)性對(duì)照質(zhì)粒管；所述容置槽的槽腔 內(nèi)容置有PCR緩沖液試劑瓶；6個(gè)所述容置孔的孔腔的底部、所述容置槽的槽腔的底部分別 鋪設(shè)有所述的海綿墊；
[0007] 所述盒蓋的下端面分別對(duì)應(yīng)6個(gè)容置孔處設(shè)有6個(gè)能固定試劑管位置的第一限位 槽，所述盒蓋的下端面對(duì)應(yīng)容置槽處設(shè)有能固定PCR緩沖液試劑瓶位置的第二限位槽；
[000引所述盒蓋的一側(cè)與盒體的開(kāi)口處轉(zhuǎn)動(dòng)連接，另一側(cè)向下彎折形成連接部，所述連 接部朝向盒體的側(cè)壁設(shè)有金屬部件，相應(yīng)的，所述盒體的側(cè)壁對(duì)應(yīng)金屬部件處設(shè)有磁性部 件。
[0009] CRHRl基因分型的ARMS-qPCR檢測(cè)試劑盒還包括備用容置槽，所述備用容置槽的 槽腔內(nèi)容置有PCR緩沖液備用試劑瓶，所述備用容置槽的槽腔底部鋪設(shè)有海綿墊，所述備 用容置槽與容置槽并列排布在固定座上，所述盒蓋的下端面對(duì)應(yīng)備用容置槽處設(shè)有能固定 PCR緩沖液備用試劑瓶位置的第S限位槽。
[0010] 其中，6個(gè)所述容置孔在固定座上分兩排平行排列，對(duì)應(yīng)的，6個(gè)所述第一限位槽 在盒蓋上分兩排平行排列。
[0011] 其中，6個(gè)所述容置孔分別為能容納1. 5m化P管的孔洞，相應(yīng)的，所述CRHR1-R引物 試劑管、CRHR1-C引物試劑管、CRHR1-F1引物試劑管、CRHR1-F2引物試劑管、0?皿1-化9111311 管和陽(yáng)性對(duì)照質(zhì)粒管分別采用1. 5m化P管。
[0012] 其中，所述金屬部件為鐵片，所述磁性部件為磁鐵塊。
[0013] 作為改進(jìn)，所述磁性部件外凸地設(shè)置在盒蓋的側(cè)壁，所述連接部設(shè)置金屬部件處 開(kāi)設(shè)有凹槽，所述金屬部件設(shè)置在該凹槽的槽底，在所述金屬部件與磁性部件吸附在一起 的狀態(tài)下，所述磁性部件完全容置在該凹槽的容置空間內(nèi)。
[0014] 作為改進(jìn)，所述盒蓋與盒體之間設(shè)有密封條，所述密封條緊固設(shè)置在盒蓋與盒體 開(kāi)口端相接觸的端面并與盒體的容置腔的上端面相匹配。
[0015] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本實(shí)用新型的優(yōu)點(diǎn)在于；本ARMS-qPCR檢測(cè)試劑盒在盒蓋的下 端面開(kāi)設(shè)了能分別限定試劑管、試劑瓶的限位槽，使得在搬運(yùn)本檢測(cè)試劑盒時(shí)，盒體內(nèi)的 容器會(huì)穩(wěn)固地容置在各自的空間內(nèi)，從而避免了碰撞從而破損；同時(shí)，本ARMS-qPCR檢測(cè) 試劑盒在盒蓋和盒體的連接處設(shè)置了磁性鎖合機(jī)構(gòu)（即金屬部件和磁性部件），可W保證 在盒蓋與盒體閉合時(shí)，保持密封狀態(tài)，方便移動(dòng)和運(yùn)輸；另外，本ARMS-qPCR檢測(cè)試劑盒在 CRHRlrsl0918859位基因分型時(shí)具有敏感性高、特異性強(qiáng)、耗時(shí)短等優(yōu)點(diǎn)；此外，容置孔的 孔槽與容置槽的槽腔底部都鋪設(shè)有海綿墊，可W避免試劑管與試劑瓶的底部磕碰破損，保 證了各個(gè)容器的安全。
[0016] 本ARMS-qPCR檢測(cè)試劑盒適用于CRHR1基因分型，其結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、設(shè)計(jì)合理、使用方 便、容易制造，且檢測(cè)過(guò)程不易受污染其即保證了試劑盒密封性、安全性，又方便運(yùn)輸，可W 在給CRHR1基因分型時(shí)方便實(shí)驗(yàn)人員操作，提高了工作效率。

【專(zhuān)利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0017] 圖1為本實(shí)用新型實(shí)施例ARMS-qPCR檢測(cè)試劑盒的結(jié)構(gòu)示意圖。

【具體實(shí)施方式】
[0018] W下結(jié)合附圖實(shí)施例對(duì)本實(shí)用新型作進(jìn)一步詳細(xì)描述。
[0019] 本實(shí)施例的CRHR1基因分型的ARMS-qPCR檢測(cè)試劑盒，如圖1所示，包括盒體1和 位于盒體1上方的盒蓋2,盒體1為上端開(kāi)口的中空的立方體盒體1，其具有容置腔。盒蓋 2的一側(cè)邊與盒體1的開(kāi)口端的一側(cè)壁的頂端轉(zhuǎn)動(dòng)連接，例如較接或者通過(guò)一層膜連接，而 盒蓋2的相對(duì)的一側(cè)通過(guò)磁性鎖合機(jī)構(gòu)與盒體1連接。盒體1與盒蓋2的具體連接方式為： 盒蓋2的一側(cè)與盒體1的開(kāi)口處轉(zhuǎn)動(dòng)連接，另一側(cè)向下彎折形成連接部11，連接部11朝向 盒體1的側(cè)壁設(shè)有金屬部件12-一鐵片，相應(yīng)的，盒體1的側(cè)壁對(duì)應(yīng)金屬部件12處設(shè)有磁 性部件13-一磁鐵塊。磁鐵塊的位置應(yīng)使盒蓋2蓋合在盒體1上，且盒蓋2的連接部11貼 合在盒體1的側(cè)壁上，該磁鐵塊正好與連接部11上的鐵片相對(duì)應(yīng)并吸合。
[0020] 本實(shí)施例的盒蓋2與盒體1的連接方式可W保證在盒蓋2與盒體1閉合時(shí)，保持 密封狀態(tài)，W方便移動(dòng)和運(yùn)輸。
[0021] 為了進(jìn)一步增強(qiáng)本試劑盒的密封性，磁性部件13外凸地設(shè)置在盒蓋2的側(cè)壁，同 時(shí)，連接部11上設(shè)置金屬部件12的內(nèi)壁處開(kāi)設(shè)有凹槽，而金屬部件12固定在該凹槽的槽 底，當(dāng)金屬部件12與磁性部件13吸附在一起時(shí)，磁性部件13完全容置在該凹槽的容置空 間內(nèi)。此時(shí)，因磁性部件13完成容置在了凹槽內(nèi)，使得盒蓋2和盒體1蓋合時(shí)，盒蓋2與盒 體1間無(wú)縫隙，增強(qiáng)了密封性。
[0022] 本實(shí)施例的盒蓋2與盒體1的連接方式可W保證在盒蓋2與盒體1閉合時(shí)，保持 密封狀態(tài)。為了更進(jìn)一步增強(qiáng)本實(shí)施例檢測(cè)試劑盒的密封性，盒蓋2與盒體1之間設(shè)有密 封條14,密封條14緊固設(shè)置在盒蓋2與盒體1開(kāi)口端相接觸的端面并與盒體1的容置腔的 上端面相匹配，即密封條14固定（例如粘貼）在盒蓋2的下端面，當(dāng)盒蓋2與盒體1閉合 時(shí)，密封條14恰好位于盒體1容置腔的上端面上，密封條14的形狀為與容置腔相匹配的四 邊形。
[002引本實(shí)施例的CRHR1基因分型的ARMS-qPCR檢測(cè)試劑盒還包括固定座18和海綿墊， 固定座18容置在盒體1容置腔內(nèi)并縱向開(kāi)設(shè)有6個(gè)容置孔、1個(gè)容置槽和1個(gè)備用容置槽， 6個(gè)容置孔的孔腔內(nèi)分別容置有CRHR1-R引物試劑管4、CRHR1-C引物試劑管3、CRHR1-F1 引物試劑管5、CRHR1-F2引物試劑管6、CRHR1-化qman管8和陽(yáng)性對(duì)照質(zhì)粒管7 ;容置槽的 槽腔內(nèi)容置有PCR緩沖液試劑瓶10，備用容置槽的槽腔內(nèi)容置有PCR緩沖液備用試劑瓶9。 [0024] 為了使得本實(shí)施例的ARMS-qPCR檢測(cè)試劑盒結(jié)構(gòu)更加整齊，6個(gè)容置孔在固定座 18上分兩排平行排列，而備用容置槽與容置槽并列排布在固定座18上并位于容置孔的右 偵U，其中容置槽位于上方。位于上排的3個(gè)容置孔內(nèi)從左至右分別放置CRHR1-C引物試劑 管3XRHR1-F2引物試劑管6和陽(yáng)性對(duì)照質(zhì)粒管7,位于下排的3個(gè)容置孔內(nèi)從左至右分別 放置CRHR1-R引物試劑管4、CRHR1-F1引物試劑管5和CRHR1-化qman管8。該種排布格 局是根據(jù)使用本檢測(cè)試劑盒來(lái)進(jìn)行CRHR1基因分型時(shí)的操作步驟來(lái)設(shè)計(jì)的，可W使得檢測(cè) 時(shí)，操作人員能有條理、有規(guī)律地選擇相應(yīng)的試劑。
[00巧]6個(gè)容置孔分別為能容納1. 5m化P管（即離屯、管）的孔洞，相應(yīng)的，CRHR1-R引 物試劑管4、CRHR1-C引物試劑管3、CRHR1-F1引物試劑管5、CRHR1-F2引物試劑管6、 CRHR1-化qman管8和陽(yáng)性對(duì)照質(zhì)粒管7分別采用1. 5m化P管。
[0026] 為了能進(jìn)一步固定住6個(gè)試劑管、2個(gè)試劑瓶的位置，盒蓋2的下端面分別對(duì)應(yīng)6 個(gè)容置孔處設(shè)有6個(gè)能固定試劑管位置的第一限位槽15,盒蓋2的下端面對(duì)應(yīng)容置槽處設(shè) 有能固定PCR緩沖液試劑瓶10位置的第二限位槽17,同時(shí)，盒蓋2的下端面對(duì)應(yīng)備用容置 槽處設(shè)有能固定PCR緩沖液備用試劑瓶9位置的第S限位槽16。當(dāng)然，6個(gè)第一限位槽15 也在盒蓋2上分兩排平行排列，同時(shí)，第二限位槽17和第=限位槽16并列排布在第一限位 槽15的右側(cè)。
[0027] 為了防止在運(yùn)輸過(guò)程中，試劑管、試劑瓶與盒體1或固定座18碰撞而破損，6個(gè) 容置孔的孔腔的底部、容置槽的槽腔的底部W及備用容置槽的槽腔的底部分別鋪設(shè)有海綿 墊。在本實(shí)施例中，容置孔、容置槽和備用容置槽都是具有底部的空腔式結(jié)構(gòu)，每個(gè)孔腔、槽 腔底部分別鋪設(shè)有海綿墊，該樣可w防止發(fā)生碰撞，對(duì)試劑管、試劑瓶能起到更好的保護(hù)和 緩沖作用，W保證各個(gè)容器的安全。
[002引當(dāng)然，容置孔、容置槽和備用容置槽可W設(shè)計(jì)成沒(méi)底的穿孔式結(jié)構(gòu)，此時(shí)海綿墊可 W為一整塊，其具體鋪設(shè)在盒體1內(nèi)固定座18下方的容置腔內(nèi)。
[0029] 6個(gè)容置孔中放置的EP管中分別裝有濃度為10 ymol/L的如下引物；
[0030] CRHR1-R ;5, -CCTCGTGTCTGGGCCTACCT-3，
[003U CRHR1-C ;5> -GGGTGGCCAGGGCTGGCTGC-3'
[0032] CRHR1-F1 ;5' -CGGAGGCCACACAAGAGTATG-3'
[0033] CRHR1-F2 ;5' -CGGAGGCCACACAAGAGATA-3，
[0034] 另外，PCR緩沖液試劑瓶10、PCR緩沖液備用試劑瓶9中盛裝的PCR反應(yīng)緩沖 酶液混合物包括濃度為 0. 4mmol/L 的 dNTPs，5mmol/L 的 Mg"，2xPCR Buffer, 1U/25 y L Goldstar Best hg。0?皿1-化9111311 管 8 中裝有通用 hginan 探針，序列為；0?皿1-化9]\&111; 5' -FAM-TGAAACCTGAGGCTGGGCGG-3'，陽(yáng)性對(duì)照質(zhì)粒管7中裝有陽(yáng)性對(duì)照質(zhì)粒。
[0035] 使用本實(shí)施例的ARMS-qPCR檢測(cè)試劑盒進(jìn)行CRHR1基因分型的操作方法如下；
[0036] 1)取模板 DNA
[0037] 取病人全血1血，常規(guī)提取DNA，取1 y LDNA作為模板。
[00測(cè)。反應(yīng)體系
[0039] 將各反應(yīng)物質(zhì)按照如下反應(yīng)體系進(jìn)行配比；
[0040] 反應(yīng)體系為20 y 1，包括qPCR混合液10 y 1，參照引物或者ARMS引物各0. 5 y 1 (終 濃度0. 5 y M/L)，模板1 y 1 (10化g)，其余用(1化0補(bǔ)齊。
[0041]

【權(quán)利要求】
1. 一種CRHR1基因分型的ARMS-qPCR檢測(cè)試劑盒，包括盒體（1)和覆蓋在盒體（1)上 的盒蓋（2)，所述盒體（1)具有容置腔，其特征在于：還包括固定座（18)和海綿墊，所述固 定座（18)容置在上述容置腔內(nèi)并縱向開(kāi)設(shè)有6個(gè)容置孔和1個(gè)容置槽，6個(gè)所述容置孔的 孔腔內(nèi)分別容置有CRHR1-R引物試劑管（4)、CRHR1-C引物試劑管（3)、CRHR1-F1引物試劑 管（5)、CRHR1-F2引物試劑管（6)、CRHR1-Taqman管⑶和陽(yáng)性對(duì)照質(zhì)粒管（7);所述容置 槽的槽腔內(nèi)容置有PCR緩沖液試劑瓶（10) ;6個(gè)所述容置孔的孔腔的底部、所述容置槽的槽 腔的底部分別鋪設(shè)有所述的海綿墊； 所述盒蓋（2)的下端面分別對(duì)應(yīng)6個(gè)容置孔處設(shè)有6個(gè)能固定試劑管位置的第一限位 槽（15)，所述盒蓋（2)的下端面對(duì)應(yīng)容置槽處設(shè)有能固定PCR緩沖液試劑瓶（10)位置的第 二限位槽（17); 所述盒蓋（2)的一側(cè)與盒體（1)的開(kāi)口處轉(zhuǎn)動(dòng)連接，另一側(cè)向下彎折形成連接部（11)， 所述連接部（11)朝向盒體（1)的側(cè)壁設(shè)有金屬部件（12)，相應(yīng)的，所述盒體（1)的側(cè)壁對(duì) 應(yīng)金屬部件（12)處設(shè)有磁性部件（13)。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的CRHR1基因分型的ARMS-qPCR檢測(cè)試劑盒，其特征在于：還 包括備用容置槽，所述備用容置槽的槽腔內(nèi)容置有PCR緩沖液備用試劑瓶（9)，所述備用容 置槽的槽腔底部鋪設(shè)有海綿墊，所述備用容置槽與容置槽并列排布在固定座（18)上，所述 盒蓋（2)的下端面對(duì)應(yīng)備用容置槽處設(shè)有能固定PCR緩沖液備用試劑瓶（9)位置的第三限 位槽（16)。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的CRHR1基因分型的ARMS-qPCR檢測(cè)試劑盒，其特征在于：6 個(gè)所述容置孔在固定座（18)上分兩排平行排列，對(duì)應(yīng)的，6個(gè)所述第一限位槽（15)在盒蓋 (2)上分兩排平行排列。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的CRHR1基因分型的ARMS-qPCR檢測(cè)試劑盒，其特征在 于：6個(gè)所述容置孔分別為能容納1. 5mlEP管的孔洞，相應(yīng)的，所述CRHR1-R引物試劑 管（4)、CRHR1-C引物試劑管（3)、CRHR1-F1引物試劑管（5)、CRHR1-F2引物試劑管（6)、 CRHRl-Taqman管（8)和陽(yáng)性對(duì)照質(zhì)粒管（7)分別采用1.5mlEP管。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的CRHR1基因分型的ARMS-qPCR檢測(cè)試劑盒，其特征在于：所 述金屬部件（12)為鐵片，所述磁性部件（13)為磁鐵塊。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的CRHR1基因分型的ARMS-qPCR檢測(cè)試劑盒，其特征在于：所 述磁性部件（13)外凸地設(shè)置在盒蓋（2)的側(cè)壁，所述連接部（11)設(shè)置金屬部件（12)處開(kāi) 設(shè)有凹槽，所述金屬部件（12)設(shè)置在該凹槽的槽底，在所述金屬部件（12)與磁性部件（13) 吸附在一起的狀態(tài)下，所述磁性部件（13)完全容置在該凹槽的容置空間內(nèi)。
7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的CRHR1基因分型的ARMS-qPCR檢測(cè)試劑盒，其特征在于：所 述盒蓋（2)與盒體（1)之間設(shè)有密封條（14)，所述密封條（14)緊固設(shè)置在盒蓋（2)與盒體 (1)開(kāi)口端相接觸的端面并與盒體（1)的容置腔的上端面相匹配。
【文檔編號(hào)】C12Q1/68GK204185475SQ201420642729
【公開(kāi)日】2015年3月4日 申請(qǐng)日期:2014年10月31日 優(yōu)先權(quán)日:2014年10月31日
【發(fā)明者】張道允, 張恒, 鞏子英, 羅堅(jiān)誠(chéng), 賈寧 申請(qǐng)人:江蘇所羅門(mén)兄弟醫(yī)學(xué)科技有限公司