一種高溫中性β-葡萄糖苷酶HiBgl3A及其基因和應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及基因工程領(lǐng)域，具體地，本發(fā)明涉及一種新穎的特異腐質(zhì)霉來源的高溫中性β-葡萄糖苷酶HiBgl3A及其基因和應(yīng)用。本發(fā)明提供了一種新的高溫中性β-葡萄糖苷酶HiBgl3A，其具有如SEQ ID NO.1或2所示氨基酸序列，且本發(fā)明還提供了編碼上述高溫中性β-葡萄糖苷酶HiBgl3A的基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO.4或5所示，以及包含該基因的重組載體和重組菌株及其應(yīng)用。本發(fā)明所提供的來源于特異腐質(zhì)霉的高溫中性β-葡萄糖苷酶HiBgl3A，最適溫度為65℃，最適pH為5.5-6.5，且pH穩(wěn)定性較好，對SDS耐受性較強(qiáng)，可較好地應(yīng)用于洗滌劑、造紙和紡織業(yè)等中堿性水解過程中。
【專利說明】-種高溫中性P -葡萄糖音酶HiBgl3A及其基因和應(yīng)用

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及基因工程領(lǐng)域，具體涉及一種高溫中性目-葡萄糖巧酶HiBgl3A及其 基因和應(yīng)用。

【背景技術(shù)】
[0002] 纖維素是單糖葡萄糖通過目-1,4-連接鍵共價(jià)鍵合的聚合物。許多微生物產(chǎn)生水 解目-連接葡聚糖的酶。該些酶包括內(nèi)切葡聚糖酶、纖維二糖水解酶和目-葡萄糖巧酶。內(nèi) 切葡聚糖酶在任意位置消化纖維素聚合物，使其易受纖維二糖水解酶的攻擊。纖維二糖水 解酶從纖維素聚合物的末端順序釋放纖維二糖分子。纖維二糖是葡萄糖的水溶性目-1,4 連接的二聚體，是內(nèi)切葡聚糖酶和纖維二糖水解酶的有效抑制劑，纖維二糖在水解過程中 的累積極度不利于生物己醇生產(chǎn)、枯桿處理等生物質(zhì)利用。目-葡萄糖巧酶可水解下包括纖 維二糖在內(nèi)的糖巧類物質(zhì)的還原端目-連接的葡萄糖殘基，從而極大地促進(jìn)纖維素物質(zhì)的 徹底降解和轉(zhuǎn)化。
[0003] 除了用于進(jìn)行纖維素己醇生產(chǎn)的纖維二糖水解功能之外，目-葡萄糖巧酶亦可廣 泛用于醫(yī)藥、農(nóng)業(yè)及食品業(yè)的領(lǐng)域中。諸多涉及糖巧鍵的切割或合成的反應(yīng)都需要目-葡 萄糖巧酶的參與，包括增強(qiáng)制酒香氣釋放，作為飼料添加物W增進(jìn)單胃動物的營養(yǎng)利用，將 染料木巧水解為染料木黃麗W作為抗癌劑，轉(zhuǎn)化糖巧型大豆異黃麗為活性巧元等。
[0004] 現(xiàn)有微生物來源的目-葡萄糖巧酶Pi值大多在酸性范圍內(nèi)，最適的抑值一般在 3. 5?5. 5之間，可適用于較多酸性水解過程，但不能滿足部分如洗涂劑、造紙和紡織工業(yè) 等的中堿性水解過程的應(yīng)用需求。本發(fā)明所提供的來源于特異腐質(zhì)霉的高溫中性目-葡萄 糖巧酶化Bgl3A，最適溫度為65C，最適抑為5. 5-6. 5,且抑穩(wěn)定性較好，對SDS耐受性較 強(qiáng)，可較好地應(yīng)用于洗涂劑、造紙和紡織業(yè)等中堿性水解過程中。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的是提供一種新的高溫中性目-葡萄糖巧酶。
[0006] 本發(fā)明的再一目的是提供編碼上述目-葡萄糖巧酶的基因。
[0007] 本發(fā)明的另一目的是提供包含上述基因的重組載體。
[0008] 本發(fā)明的另一目的是提供包含上述基因的重組菌株。
[0009] 本發(fā)明的另一目的是提供一種制備上述目-葡萄糖巧酶的基因工程方法。
[0010] 本發(fā)明的另一目的提供上述目-葡萄糖巧酶的應(yīng)用。
[0011] 本發(fā)明從腐質(zhì)霉（Humicola insolens Yl)中分離得到一種新的高溫中性目-葡 萄糖巧酶化Bgl3A，并構(gòu)建了能夠高效表達(dá)此目-葡萄糖巧酶的重組酵母菌株。
[0012] 本發(fā)明提供了一種高溫中性目-葡萄糖巧酶化Bgl3A，其氨基堿序列如SEQ ID NO. 1所示。
[001 引 SEQ ID NO. 1 :
[0014] MRALYAAGW化ISTVSMTTANRHRQVIGRNHLNHHHRSQRELAYSPPSYPSPWMDPKAAEWQNAYAKAK

【權(quán)利要求】
1. 一種高溫中性￠-葡萄糖苷酶HiBgl3A，其特征在于，其氨基堿序列如SEQ ID NO. 1 或 SEQ ID NO. 2 所示。
2. -種高溫中性￠-葡萄糖苷酶基因 Hibgl3A，其特征在于，編碼權(quán)利要求1所述的高 溫中性￠-葡萄糖苷酶HiBgl3A。
3. 如權(quán)利要求2所述的高溫中性￠-葡萄糖苷酶基因Hibgl3A，其特征在于，其堿基序 列如 SEQ ID NO. 4 或 SEQ ID NO. 5 所示。
4. 包含權(quán)利要求2所述高溫中性0 -葡萄糖苷酶基因 Hibgl3A的重組載體。
5. 包含權(quán)利要求2所述高溫中性0 -葡萄糖苷酶基因 Hibgl3A的重組載體 pPIC-Hibgl3A。
6. 包含權(quán)利要求2所述高溫中性0 -葡萄糖苷酶基因 Hibgl3A的重組菌株。
7. -種制備重組高溫中性￠-葡萄糖苷酶HiBgl3A的方法，其特征在于，包括以下步 驟： 1) 用權(quán)利要求4的重組載體轉(zhuǎn)化宿主細(xì)胞，得重組菌株； 2) 培養(yǎng)重組菌株，誘導(dǎo)高溫中性P -葡萄糖苷酶基因 Hibgl3A表達(dá)； 3) 回收并純化所表達(dá)的高溫中性P _葡萄糖苷酶HiBgl3A。
8. 權(quán)利要求1所述高溫中性P -葡萄糖苷酶HiBgl3A的應(yīng)用。
【文檔編號】C12N9/42GK104357429SQ201410713835
【公開日】2015年2月18日 申請日期:2014年12月1日 優(yōu)先權(quán)日:2014年12月1日
【發(fā)明者】姚斌, 石鵬君, 夏偉, 羅會穎, 黃火清, 蘇小運(yùn), 柏映國, 楊培龍, 王亞茹, 孟昆, 師霞, 馬銳 申請人:中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院飼料研究所