一種糞便細菌的保存液的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種糞便保存液的配方，按照配方所述配置保存液，將采集的糞便直接置于保存液中，無需凍存，即可達到穩(wěn)定其中微生物構(gòu)成的作用。使用該配方保存糞便樣本可以在常溫下達到凍存糞便樣本的效果，從而使采樣者在任何時候都可以進行采樣和樣品的保存，也能夠用于糞便樣本的長途運輸。
【專利說明】一種糞便細菌的保存液

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于微生物【技術(shù)領(lǐng)域】，具體而言，涉及一種糞便細菌的保存液。

【背景技術(shù)】
[0002] 人腸道中生存著10萬億到100萬億個細菌，分屬數(shù)百到上千個不同的種屬，其數(shù) 量為人體細胞數(shù)量的10倍，基因數(shù)量是人體基因數(shù)量的150-200倍。這些共生在人體腸道 中的微生物是人體一大"未發(fā)現(xiàn)的"器官，更有學(xué)者認為人本身就是人體細胞和細菌共同組 合而成的共生生物體。它們與人體共生，以人體攝入的食物以及腸道分泌物為食，合成必須 氨基酸，維生素，短鏈脂肪酸等重要物質(zhì)進入人體，促進宿主健康；相反，其中一些病原菌也 分泌有害物質(zhì)進入體內(nèi)，損害宿主的健康。由于腸道菌群的復(fù)雜和多樣性,人類對其結(jié)構(gòu)多 樣性和功能重要性一直缺乏足夠的認知。直至近幾年，隨著第二代測序等技術(shù)的進步，微生 物組的黑盒才得以打開，并借助無菌動物的驗證，發(fā)現(xiàn)了腸道微生物與大量的疾病直接相 關(guān)，甚至在許多疾病中扮演了病因的角色。并且，其中大量的疾病，例如肥胖，糖尿病，動脈 粥樣硬化，炎癥性腸炎等都是高發(fā)病率重要公共衛(wèi)生問題。
[0003] 由于腸道微生物寄居在人的腸道內(nèi)，因此最便捷，也是目前采用的最主要的方式 是研究人體排出的糞便的微生物，以此代表大腸內(nèi)的共生微生物。糞便采集之后，通過提取 細菌的總DNA，擴增核糖體16S rRNA可變區(qū)，測序，以及一系列生物信息學(xué)分析，可以了解 糞便中的細菌構(gòu)成，進一步研究其和人體健康疾病之間的關(guān)系。
[0004] 由于糞便離體后，其環(huán)境也發(fā)生了變化，例如無氧環(huán)境轉(zhuǎn)變成有氧環(huán)境，其中提供 微生物代謝的能量來源也進入只消耗而不補充的狀態(tài)。與此同時，其中的部分細菌還保持 了活性，繼續(xù)代謝和生長，而由于環(huán)境的變化，不同細菌其增長與死亡的速率已經(jīng)不同于排 便前。因此，需要對糞便進行一些保存措施，盡量將其中微生物的構(gòu)成穩(wěn)定在剛剛離體時的 狀態(tài)，從而最好的代表大腸中的共生微生物。目前采用的保存方法為采集糞便后立即凍存 在-20°C或者更低的溫度中。由于細菌在低溫狀態(tài)下代謝速率極大的降低，因此可以在一段 時間內(nèi)維持糞便中細菌的構(gòu)成。
[0005] 就其效果而言，凍存在_20°C或者更低的溫度中是可以在一段時間內(nèi)（一周以上） 保持糞便內(nèi)的細菌構(gòu)成不發(fā)生顯著的變化。然而其最大的缺陷則是凍存條件在某些時候無 法實現(xiàn)，例如采樣者外出，采得的糞便需要攜帶一段時間才可以拿回實驗室凍存，或者采樣 者與實驗室并不在同一地點，需要采樣后通過快遞等方式寄送到實驗室后才可以凍存，而 在這個過程中，微生物的構(gòu)成可能已經(jīng)發(fā)生了改變。然而目前國內(nèi)并沒有任何技術(shù)來解決 這一問題。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明涉及一種糞便保存液的配方，按照配方所述配置保存液，將采集的糞便直 接置于保存液中，無需凍存，即可達到穩(wěn)定其中微生物構(gòu)成的作用。使用該配方保存糞便樣 本可以在常溫下達到凍存糞便樣本的效果，從而使采樣者在任何時候都可以進行采樣和樣 品的保存，也能夠用于糞便樣本的長途運輸。
[0007] 本保存液配方（配方1)如下：
[0008] 表1.保存液配方

【權(quán)利要求】
1. 一種糞便細菌的保存液，其特征在于，所述保存液配方為： 異硫氰酸胍（GuanidineThiocyanate) 0.47% EDTA- '.fi-'j(EDTANa：) 1.86% 氯化鈉(NaC.l) 0.9% 梓檬酸鈉（sodiumcitra) 0.74% 95%乙醇 95% 余量為水 且所述的保存液的pH為7. 4。
2. 權(quán)利要求1所述的保存液的制備方法，其特征在于，按照以上配方稱取各成分，無菌 去離子水溶解后，高壓滅菌，室溫保存即得。
3. 權(quán)利要求1所述的保存液在保存糞便細菌中的應(yīng)用。
4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的音樂，其特征在于，保存糞便細菌的方法如下： (1) 采集至少〇. 2g新鮮糞便樣品； (2) 立即使用本發(fā)明保存液室溫下密封，避光浸泡保存樣品，所述的糞便樣本和保存液 用量的比例為1 :l(w/v)。
【文檔編號】C12N1/04GK104480012SQ201410699015
【公開日】2015年4月1日 申請日期:2014年11月27日 優(yōu)先權(quán)日:2014年11月27日
【發(fā)明者】何彥, 周宏偉, 尹恝 申請人:南方醫(yī)科大學(xué)