一種提高以乙酸鈉異養(yǎng)微藻脂肪酸產(chǎn)率的方法
【專利摘要】一種提高以乙酸鈉異養(yǎng)微藻脂肪酸產(chǎn)率的方法，所述方法包括以下步驟：a.將微藻在白養(yǎng)培養(yǎng)基中擴(kuò)大培養(yǎng)獲得足夠藻種；b.將步驟a種接種到氮缺乏異養(yǎng)培養(yǎng)基中；c.進(jìn)行氮缺乏異養(yǎng)培養(yǎng)。
【專利說明】一種提高以乙酸鈉異養(yǎng)微藻脂肪酸產(chǎn)率的方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于微藻生物【技術(shù)領(lǐng)域】，涉及一種提高以乙酸鈉異養(yǎng)微藻脂肪酸產(chǎn)率的方法。

【背景技術(shù)】
[0002]生物柴油是一種可再生的生物質(zhì)能源，具有優(yōu)良的環(huán)保性能及燃燒性能。傳統(tǒng)的生物柴油來源于玉米、大豆等農(nóng)作物，但是產(chǎn)率低、成本高且存在著“與糧爭地”的隱患，因此尋找一種新的生物質(zhì)能原材料成為迫切需要。微藻具有分布廣泛、生長周期短、油脂含量高等優(yōu)點(diǎn)，因此微藻很可能成為未來生產(chǎn)生物質(zhì)能源的最重要來源。
[0003]現(xiàn)今，對(duì)微藻產(chǎn)油的研宄大多都集中在光自養(yǎng)培養(yǎng)方式。但是因?yàn)楣庾责B(yǎng)培養(yǎng)方式對(duì)光的要求高，導(dǎo)致其成本增高而且有用產(chǎn)物的產(chǎn)率低。而異養(yǎng)培養(yǎng)微藻則可以克服這一缺點(diǎn)?；诋愷B(yǎng)培養(yǎng)微藻產(chǎn)油具有成本低、設(shè)施簡單等優(yōu)點(diǎn)，使其在生產(chǎn)生物產(chǎn)油及廢水處理領(lǐng)域有廣闊的應(yīng)用前景。
[0004]與光合自養(yǎng)相比，異養(yǎng)培養(yǎng)在生產(chǎn)生物柴油方面具有以下優(yōu)點(diǎn):(1)成本低，設(shè)施簡單；(2)易獲得高密度藻細(xì)胞，可用于大規(guī)模生產(chǎn)經(jīng)濟(jì)產(chǎn)物；(3)其油脂含量高于自養(yǎng)培養(yǎng)的藻細(xì)胞；(4)其油脂組成與自養(yǎng)培養(yǎng)的藻細(xì)胞相比更適用于生產(chǎn)生物柴油。
[0005]微藻在光自養(yǎng)培養(yǎng)下油脂產(chǎn)率不高，而異養(yǎng)培養(yǎng)方式開辟了一種提高其油脂產(chǎn)率的新途徑。葡萄糖是一種常用的微藻異養(yǎng)培養(yǎng)的碳源，但是以葡萄糖為碳源存在成本高、易染菌的缺陷。而乙酸鈉可來源于許多工業(yè)生產(chǎn)的廢棄物，價(jià)格低廉且易于獲得。氮缺乏就是一種最常用、有效的提高油脂含量的方法。在氮缺乏條件下，微藻的生物量雖然有所降低，但是其油脂的產(chǎn)率與有氮條件相比仍然得到了提高。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]為了解決現(xiàn)有技術(shù)中微藻脂肪酸產(chǎn)率不高的技術(shù)難題，本發(fā)明的目的是提供一種提高異養(yǎng)下脂肪酸產(chǎn)率的微藻方法。
[0007]在一個(gè)方面，本發(fā)明提供一種提高微藻脂肪酸產(chǎn)率的方法，所述方法包括以下步驟:
[0008]將微藻在自養(yǎng)培養(yǎng)基中擴(kuò)大培養(yǎng)獲得足夠藻種；
[0009]匕將步驟3所述藻種接種到氮缺乏異養(yǎng)培養(yǎng)基中；
[0010]0.進(jìn)行異養(yǎng)培養(yǎng)。
[0011]在一個(gè)實(shí)施方案中，所述微藻為綠藻門
[0012]在一個(gè)實(shí)施方案中，所述微藻為普通小球藻(01101^113 VIII職!'18)或柵藻
(806116(168111118 0)311^11118)。
[0013]在一個(gè)實(shí)施方案中，所述微藻自養(yǎng)培養(yǎng)基為8卜11培養(yǎng)基，其中氮的濃度小于之呢/[，優(yōu)選小于50呢凡，再優(yōu)選小于川呢/[，最優(yōu)選為0。
[0014]在一個(gè)實(shí)施方案中，所述微藻異養(yǎng)培養(yǎng)基為添加了乙酸鈉的86-11培養(yǎng)基。
[0015]在一個(gè)實(shí)施方案中，步驟6的接種比例為1: 6至1: 10，優(yōu)選1: 7至1: 9，最優(yōu)選1:8。
[0016]在一個(gè)實(shí)施方案中，所述微藻異養(yǎng)培養(yǎng)基包含以下各項(xiàng)中的一種或多種:乙酸鈉、^03^2！1？04.3！！20、％304.7??！20、0^12、一水合檸檬酸、檸檬酸鐵銨、似220！7\、！！3803、111012.祖20、211804.7！！20、011804.5??！20、00012.6??！20 和琴。04.2??！20 等。
[0017]在一個(gè)實(shí)施方案中，乙酸鈉的含量為:08/1至108/1，優(yōu)選況/1至108/1，再優(yōu)選4邑凡至108/1，最優(yōu)選58/1。
[0018]在一個(gè)實(shí)施方案中，似勵(lì)3的含量為至1500呢凡。
[0019]在一個(gè)實(shí)施方案中，1^？04，3??！20的含量為:0^/1至50呢/1，優(yōu)選0呢凡至20^/1,再優(yōu)選01118凡至10呢凡，最優(yōu)選2呢凡。
[0020]在一個(gè)實(shí)施方案中，1叻04 ? 7！！20的含量為:601^/1至洲呢/匕優(yōu)選651^/1至851^/I，再優(yōu)選60呢凡至80呢凡，最優(yōu)選75呢凡。
[0021]在一個(gè)實(shí)施方案中，的含量為:101118凡至30呢凡，優(yōu)選15呢凡至25呢凡，再優(yōu)選18呢凡至22呢凡，最優(yōu)選20呢凡。
[0022]在一個(gè)實(shí)施方案中，01(?的含量為:20呢71至40呢71，優(yōu)選20呢71至30呢71，再優(yōu)選251118凡至30呢凡，最優(yōu)選271118/1。
[0023]在一個(gè)實(shí)施方案中，一水合梓檬酸的含量為:31118凡至10呢凡，優(yōu)選51^/1至10呢凡，再優(yōu)選5呢凡至8呢凡，最優(yōu)選6呢凡。
[0024]在一個(gè)實(shí)施方案中，梓檬酸鐵錢的含量為:31118凡至10呢凡，優(yōu)選51^/1至川呢/
1,再優(yōu)選5呢凡至8呢凡，最優(yōu)選6呢凡。
[0025]在一個(gè)實(shí)施方案中，似220！7\的含量為:0^/1至2.0呢/1，優(yōu)選0.5呢凡至2.0^/I，再優(yōu)選0.5呢凡至1.5呢凡，最優(yōu)選1呢凡。
[0026]在一個(gè)實(shí)施方案中，成803的含量為:0 凡至5 V ^/1,優(yōu)選2 凡至4 V ^/1,再優(yōu)選2.5 IX ^/1至3.0 V ^/1,最優(yōu)選2.86 ^邑/匕
[0027]在一個(gè)實(shí)施方案中，1冗12，4！！20的含量為:1 4/1至3 4凡，優(yōu)選1 4凡至2 4/I，再優(yōu)選1.5^ ^/1至2 V ^/1,最優(yōu)選1.81。邑/匕
[0028]在一個(gè)實(shí)施方案中，2#04.7！！20的含量為:0.1 4/1至0.5 V邑/[，優(yōu)選0.1 V ^/1至 0.4 V ^/1,再優(yōu)選 0.20 V 8/1 至 0.25 V ^/1,最優(yōu)選 0.222 V 8凡。
[0029]在一個(gè)實(shí)施方案中，011804 ? 5?。?0的含量為:0.05 V ^/1至0.15 V ^/1,優(yōu)選0.05 V 8/1 至 0.10 V ^/1,再優(yōu)選 0.07 V ^/1 至 0.09 V ^/1,最優(yōu)選 0.079 V 8凡。
[0030]在一個(gè)實(shí)施方案中，00012 ? 6??！20的含量為:0.03 V ^/1至0.10 V ^/1,優(yōu)選0.03 V 8/1 至 0.08 V ^/1,再優(yōu)選 0.04 V ^/1 至 0.06 V ^/1,最優(yōu)選 0.050 V 8凡。
[0031]在一個(gè)實(shí)施方案中，似21004 ?2！！20的含量為:0.2 [至0.6 V 8凡，優(yōu)選0.2 V邑/I 至 0.5 V ^/1,再優(yōu)選 0.3 V ^/1 至 0.5 V ^/1,最優(yōu)選 0.39 ^ 邑/1。
[0032]在一個(gè)實(shí)施方案中，步驟。的培養(yǎng)條件包括:22至26攝氏度的溫度，優(yōu)選23至25攝氏度，最優(yōu)選24攝氏度。
[0033]在一個(gè)實(shí)施方案中，步驟。的培養(yǎng)條件包括:6.0至8.0的邱值，優(yōu)選6.5至7.5，再優(yōu)選6.8至7.2，最優(yōu)選7.0的邱值。
[0034]在一個(gè)實(shí)施方案中，所述方法還包括將異養(yǎng)培養(yǎng)中的微藻細(xì)胞冷凍干燥成藻粉，用于提取胞內(nèi)活性物質(zhì)。
[0035]在一個(gè)實(shí)施方案中，氮缺乏異養(yǎng)培養(yǎng)持續(xù)時(shí)間為3至25天，優(yōu)選4至20天，再優(yōu)選5至15天，再優(yōu)選6至10天，再優(yōu)選6至8天，再優(yōu)選6天。
[0036]相對(duì)于現(xiàn)有技術(shù)中的方案，本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是:
[0037](1)經(jīng)過氮缺乏條件下的異養(yǎng)培養(yǎng)，微藻脂肪酸甲酯含量(脂肪酸甲酯免丨細(xì)胞干重8)大大提高。缺氮條件下脂肪酸含量從17.9%提高到62%左右。
[0038](2)相比較于氮充足條件下，氮缺乏條件下的脂肪酸的產(chǎn)率提高至29.6^/1/(1,與氮充足條件下的20.8呢/1/(1相比提高了 42.3%。
[0039](3)相比較于氮充足條件下，氮缺乏條件下的乙酸(1)0轉(zhuǎn)化率提高了近2?4倍。在氮充足條件下乙酸000轉(zhuǎn)化率是6.4%?11.5%，而在氮缺乏條件下提高至25.9%?40.

【專利附圖】

【附圖說明】
[0040]圖1實(shí)施例1生物量的變化情況。
[0041]圖2實(shí)施例1乙酸鈉的吸收情況。
[0042]圖3實(shí)施例1脂肪酸含量及產(chǎn)率變化情況。
[0043]圖4實(shí)施例2生物量的變化情況。
[0044]圖5實(shí)施例2乙酸鈉的吸收情況。
[0045]圖6實(shí)施例2脂肪酸含量及產(chǎn)率變化情況。

【具體實(shí)施方式】
[0046]為了解決現(xiàn)有技術(shù)中的問題，本發(fā)明提供的【具體實(shí)施方式】是:
[0047]將自養(yǎng)培養(yǎng)獲得的微藻作為藻種接種到異養(yǎng)培養(yǎng)基中培養(yǎng)，通過控制異養(yǎng)培養(yǎng)基中氮的濃度，達(dá)到提高脂肪酸含量及產(chǎn)率的效果。
[0048]在一個(gè)實(shí)施方案中，所述方法的具體步驟如下:
[0049](1)自養(yǎng)條件下擴(kuò)大培養(yǎng)獲得足夠藻種
[0050](2)將步驟(1)所述藻種接種到特定的異養(yǎng)培養(yǎng)基中；
[0051](3)進(jìn)行氮缺乏下的異養(yǎng)培養(yǎng)。
[0052]在一個(gè)實(shí)施方案中，所述微藻為綠藻門的普通小球藻VIII職!'18)或柵藻(806116(168111118 0)311^11118)。
[0053]在一個(gè)實(shí)施方案中，所述微藻自養(yǎng)培養(yǎng)基為86-11培養(yǎng)基。
[0054]在一個(gè)實(shí)施方案中，所述微藻異養(yǎng)培養(yǎng)基為添加了乙酸鈉的86-11培養(yǎng)基，其中不含有氮元素。
[0055]在一個(gè)實(shí)施方案中，所述微藻異養(yǎng)培養(yǎng)時(shí)在11錐形瓶中加入0.7[異養(yǎng)培養(yǎng)基，接種比例為1: 8。
[0056]在一個(gè)實(shí)施方案中，所述異養(yǎng)培養(yǎng)可在搖床和磁力攪拌器上進(jìn)行。
[0057]在一個(gè)實(shí)施方案中，所述自養(yǎng)培養(yǎng)基的組成成分如下:似勵(lì)315001^/1，^2！??？04.3！！20 20呢/1，18804.7??！20 75呢/1，似2⑶320呢/1，一水合檸檬酸 6^/匕檸檬酸鐵銨6呢/1，似2201八1呢/1，1^1微量金屬溶液微量金屬溶液迅80； 86^/1, 111(? ? 祖20 1.81 呢/1，211804 ? 7！！20 0.222呢/1，011804 ? 5?。?0 0.079呢/1，00012 ? 6?。?0
0.050呢凡，他2！004 # 2?。?0 0.3911^/1)
[0058]在一個(gè)實(shí)施方案中，所述異養(yǎng)培養(yǎng)基的組成成分如下:乙酸鈉4?108/1，似勵(lì)30 ?1500呢.31^0 15呢凡，1叻04.7??！20 75呢/1，似2?:0320呢/1，01?:1227呢71，一水合檸檬酸6呢/1，檸檬酸鐵銨6呢/1，似2201八1呢/1，1^1微量金屬溶液微量金屬溶液:^8032.86呢/1，111012.祖20 1.81 呢/1，211804.7?。?0 0.222呢/1，011804.5！！20 0.079^/
1,00012.6?。?0 0.050呢/1，琴。04.2！！20 0.39呢/1)
[0059]在一個(gè)實(shí)施方案中，所述培養(yǎng)條件包括:溫度24 ±21，0-8.0。
[0060]在一個(gè)實(shí)施方案中，所述方法還包括將異養(yǎng)培養(yǎng)中的微藻細(xì)胞冷凍干燥成藻粉，用于提取胞內(nèi)活性物質(zhì)。
[0061]在一個(gè)【具體實(shí)施方式】中，本發(fā)明采用普通小球藻，培養(yǎng)基為培養(yǎng)基。
[0062]將0.61已經(jīng)配制好的8「11培養(yǎng)基加入體積為光合反應(yīng)器中，然后高壓蒸汽滅菌當(dāng)培養(yǎng)基在超凈室降溫至室溫左右時(shí)，以10%的比例接入藻種開始自養(yǎng)擴(kuò)大培養(yǎng)，培養(yǎng)時(shí)間為7山(?與空氣的混合氣體(其中(1) 2濃度為4% )在反應(yīng)器頂端通過0.22 VIII的濾器進(jìn)入光合反應(yīng)器。曝氣速率為0.5^八加111。
[0063]離心收集(600011)111/111111,離心5111111)擴(kuò)大培養(yǎng)獲得的微藻，并將其再懸浮于適量的異養(yǎng)培養(yǎng)基中待用。
[0064]將0.71已經(jīng)配制好的異養(yǎng)培養(yǎng)基加入1[錐形瓶中，然后高壓蒸汽滅菌(1211,
培養(yǎng)基在超凈室降至室溫左右時(shí)，以1: 8的比例接入上述再懸浮的藻種開始異養(yǎng)培養(yǎng)，培養(yǎng)時(shí)間為6天，攪拌速率為10011)111/111111。
[0065]本文中涉及到細(xì)胞干重、脂肪酸含量以及產(chǎn)率、乙酸⑶0轉(zhuǎn)化率的測定和計(jì)算方法如下:
[0066]藻細(xì)胞干重測定:先將0.45 4 0的醋酸纖維膜烘至恒重，記錄質(zhì)量為叫匕)，取細(xì)胞培養(yǎng)過程中的藻液V?。?！匕用上述已烘至恒重的醋酸纖維膜抽濾后，再次烘至恒重，記錄質(zhì)量為爪々)。藻體干重可根據(jù)下式計(jì)算4(8/0 =
[0067]脂肪酸含量與組成測定:準(zhǔn)確稱取2508冷凍干燥后的干藻粉，置于消解管中，然后加入2此酯化試劑(乙酰氯:甲醇=1: 9，現(xiàn)用現(xiàn)配)。在801:水浴中反應(yīng)2.5卜后，冷卻至室溫，然后加入1此質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.58% ^01溶液以停止酯化反應(yīng)。緊接著再加入2此配制好的苯甲酸甲酯溶液(以正己烷配制，其中苯甲酸甲酯的濃度為0.36^/1111),充分混勻后低轉(zhuǎn)速離心，待溶液分層之后取上清液進(jìn)行氣相分析。
[0068]脂肪酸產(chǎn)率:由生物量和脂肪酸含量計(jì)算得出。
[0069]乙酸(1)0轉(zhuǎn)化率:由乙酸鈉吸收量與脂肪酸合成量計(jì)算得出。
[0070]實(shí)施例
[0071]實(shí)施例1氮缺乏條件對(duì)異養(yǎng)小球藻脂肪酸含量及產(chǎn)率的研宄
[0072]自養(yǎng)培養(yǎng)基的組成成分如下:似勵(lì)31500呢/1，^2?。?？04 ? 3??！20 20呢/1，18804 ? 7??！2075呢凡，^003201118/1,一水合梓檬酸6呢凡，梓檬酸鐵錢6^/1,1^/1,1此微量金屬溶液微量金屬溶液 $38()32.86^/1,111012 ?4?。?0 1.81^/1, 211804 ? 7?。?00.222呢/1，011804.5！！20 0.079呢/1，00012.6?。?0 0.050呢/1，琴。04.2?。?0 0.39呢/1)
[0073]氮缺乏條件下異養(yǎng)培養(yǎng)基成分為:乙酸鈉58/1，1即04 - 3！！20 15呢/1，18804 - 7??！2075呢凡，^003201118/1,一水合梓檬酸6呢凡，梓檬酸鐵錢6^/1, ^￡01^ 1^/
1,1此微量金屬溶液微量金屬溶液 $38()32.86^/1,111012 ?4??！20 1.81^/1, 211804 ? 7！！200.222呢/1，011804.5??！20 0.079呢/1，00012.6??！20 0.050呢/1，琴。04.2?。?0 0.39呢/1)，其中氮缺乏培養(yǎng)基中似勵(lì)3含量為0呢/1，氮充足培養(yǎng)基中似勵(lì)3含量為15001^/1。
[0074]將0.61的已經(jīng)配制好的8「11培養(yǎng)基加入到體積為光合反應(yīng)器中，然后高壓蒸汽滅菌(1211,201111111當(dāng)培養(yǎng)基在超凈工作臺(tái)降溫至室溫左右時(shí)，以10%的比例接入藻種開始自養(yǎng)擴(kuò)大培養(yǎng)，培養(yǎng)時(shí)間為7山(?與空氣的混合氣體(其中(1) 2濃度為4% )在反應(yīng)器頂端通過0.22 VIII的濾器進(jìn)入光合反應(yīng)器。曝氣速率為0.5^八加111。
[0075]離心收集(6000轉(zhuǎn)每分鐘，離心5分鐘)擴(kuò)大培養(yǎng)獲得的微藻并再懸浮于適量缺氮條件下的異養(yǎng)培養(yǎng)基中待用。
[0076]將0.7[已經(jīng)配制好的兩種(有氮和缺氮)異養(yǎng)培養(yǎng)基加入1[錐形瓶中，然后高壓蒸汽滅菌(1211,20分鐘)，當(dāng)培養(yǎng)基在超凈工作臺(tái)降溫至室溫左右時(shí)，以1: 8的比例接入上述再懸浮的藻種開始異養(yǎng)培養(yǎng)，培養(yǎng)時(shí)間為6(1，攪拌速率為10011)111/111111。
[0077]經(jīng)過六天異養(yǎng)培養(yǎng)，氮缺乏條件下的脂肪酸含量從17.9%提高到62.8%。缺氮條件下的脂肪酸的產(chǎn)率提高至29.6呢凡/山與氮充足條件下的20.8呢/1/(1相比提高了42.3%。從乙酸⑶0轉(zhuǎn)化率方面，氮缺乏條件下的乙酸⑶0轉(zhuǎn)化率提高了近2.5倍。在氮充足條件下乙酸￠:00轉(zhuǎn)化率是11.5%，而在氮缺乏條件下提高至39.97%。
[0078]實(shí)施例2氮缺乏條件對(duì)異養(yǎng)柵藻脂肪酸含量及產(chǎn)率的研宄
[0079]自養(yǎng)培養(yǎng)基的組成成分如下:似勵(lì)31500呢/1，^2！??？04 ? 3！！20 20呢/1，18804 ? 7?。?075呢凡，^003201118/1,一水合梓檬酸6呢凡，梓檬酸鐵錢6^/1,1^/1,1此微量金屬溶液微量金屬溶液 $38()32.86^/1,111012 ?4?。?0 1.81^/1, 211804 ? 7?。?00.222呢/1，011804.5！！20 0.079呢/1，00012.6??！20 0.050呢/1，琴。04.2??！20 0.39呢/1)
[0080]氮缺乏條件下異養(yǎng)培養(yǎng)基成分為:乙酸鈉58/1，1即04 - 3??！20 15呢/1，18804 - 7??！2075呢凡，^003201118/1,一水合梓檬酸6呢凡，梓檬酸鐵錢6^/1,1^/1,1此微量金屬溶液微量金屬溶液 $38()32.86^/1,111012 ?4??！20 1.81^/1, 211804 ? 7?。?00.222呢/1，011804.5??！20 0.079呢/1，00012.6！！20 0.050呢/1，琴。04.2?。?0 0.39呢/1)，其中氮缺乏培養(yǎng)基中似勵(lì)3含量為0呢/1，氮充足培養(yǎng)基中似勵(lì)3含量為15001^/1。
[0081]將0.61的已經(jīng)配制好的8「11培養(yǎng)基加入到體積為光合反應(yīng)器中，然后高壓蒸汽滅菌(1211,201111111當(dāng)培養(yǎng)基在超凈工作臺(tái)降溫至室溫左右時(shí)，以10%的比例接入藻種開始自養(yǎng)擴(kuò)大培養(yǎng)，培養(yǎng)時(shí)間為7山(?與空氣的混合氣體(其中(1) 2濃度為4% )在反應(yīng)器頂端通過0.22 VIII的濾器進(jìn)入光合反應(yīng)器。曝氣速率為0.5^八加111。
[0082]離心收集(6000轉(zhuǎn)每分鐘，離心5分鐘)擴(kuò)大培養(yǎng)獲得的微藻并再懸浮于適量缺氮條件下的異養(yǎng)培養(yǎng)基中待用。
[0083]將0.7[已經(jīng)配制好的兩種(有氮和缺氮)異養(yǎng)培養(yǎng)基加入1[錐形瓶中，然后高壓蒸汽滅菌(1211,20分鐘)，當(dāng)培養(yǎng)基在超凈工作臺(tái)降溫至室溫左右時(shí)，以1: 8的比例接入上述再懸浮的藻種開始異養(yǎng)培養(yǎng)，培養(yǎng)時(shí)間為6(1，攪拌速率為10011)111/111111。
【權(quán)利要求】
1.一種提高以乙酸鈉異養(yǎng)微藻脂肪酸產(chǎn)率的方法，所述方法包括以下步驟: a.將微藻在自養(yǎng)培養(yǎng)基中擴(kuò)大培養(yǎng)獲得足夠藻種； b.將步驟a所述藻種接種到氮缺乏異養(yǎng)培養(yǎng)基中； c.進(jìn)行氮缺乏異養(yǎng)培養(yǎng)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述微藻為綠藻門(Chlorophyta)。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述微藻為普通小球藻(Chlorellavulgaris)或柵藻(Scenedesmus obliquus)。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述微藻自養(yǎng)培養(yǎng)基為BG-11培養(yǎng)基。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述微藻異養(yǎng)培養(yǎng)基為添加了乙酸鈉的BG-11培養(yǎng)基，其中氮的濃度小于2mg/L。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中步驟b的接種比例為1: 6至1: 10。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述微藻異養(yǎng)培養(yǎng)基包含以下各項(xiàng)中的一種或多種:乙酸鈉、NaN03、Κ2ΗΡ04.3H20、MgS04.7H20、Na2C03、CaCl2、一水合檸檬酸、檸檬酸鐵銨、Na2EDTA、H3B03、MnCl2.4H20、ZnS04.7H20、CuS04.5H20、CoCl2.6H20 和 Na2Mo04.2H20。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中: 乙酸鈉的含量為:0g/L至5g/L ;和/或 似勵(lì)3的含量為:0mg/L至1500mg/L ;和/或 Κ2ΗΡ04.3H20 的含量為:0mg/L 至 37mg/L ;和 / 或 MgS04.7H20 的含量為:60mg/L 至 90mg/L ;和 / 或 Na2C03的含量為:10mg/L至30mg/L ;和/或 〇&(:12的含量為:20mg/L至40mg/L ;和/或 一水合檸檬酸的含量為:3mg/L至10mg/L ;和/或 檸檬酸鐵銨的含量為:3mg/L至10mg/L ;和/或 Na2EDTA 的含量為:0mg/L 至 2.0mg/L ;和 / 或 Η3Β03的含量為:0 μ g/L至5 μ g/L ;和/或 MnCl2.4H20 的含量為:1 μ g/L 至 3 μ g/L ;和 / 或 ZnS04.7H20 的含量為:0.1 μ g/L 至 0.5 μ g/L ;和 / 或 CuS04.5H20 的含量為:0.05 μ g/L 至 0.15 μ g/L ;和 / 或 CoCl2.6H20 的含量為:0.03 μ g/L 至 0.10 μ g/L ;和 / 或 Na2Mo04.2H20 的含量為:0.2 μ g/L 至 0.6 μ g/L。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述步驟c的培養(yǎng)條件包括:22至26攝氏度的溫度，和/或6.0至8.0的pH值。
10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，所述方法還包括將異養(yǎng)培養(yǎng)中的微藻細(xì)胞冷凍干燥成藻粉，用于提取胞內(nèi)活性物質(zhì)。
【文檔編號(hào)】C12R1/89GK104480151SQ201410667689
【公開日】2015年4月1日 申請(qǐng)日期:2014年11月20日 優(yōu)先權(quán)日:2014年11月20日
【發(fā)明者】曾建雄, 劉靜靜, 申曉菲 申請(qǐng)人:中國科學(xué)技術(shù)大學(xué)