一種熒光抗酸染色液及用該染色液檢測抗酸桿菌的方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及病理檢測領(lǐng)域，特別涉及一種熒光抗酸染色液及用該染色液檢測抗酸桿菌的方法。首先配置A液：由金胺O、乙醇、苯酚、水組成，B液：由37%鹽酸和乙醇組成，C液：由高錳酸鉀和水組成，然后再利用上述染色液進(jìn)行檢測。本發(fā)明的染色液染色簡單、時間短，無沉渣，熒光鏡下菌體呈現(xiàn)明亮橘黃色，背景黑暗，特征對比清晰，熒光染色后保存時間長，陽性率高、不易漏檢等優(yōu)點。本發(fā)明對抗酸桿菌的鑒別診斷和治療具有重要意義。
【專利說明】一種熒光抗酸染色液及用該染色液檢測抗酸桿菌的方法
[0001](一)

【技術(shù)領(lǐng)域】
本發(fā)明涉及病理檢測領(lǐng)域，特別涉及一種熒光抗酸染色液及用該染色液檢測抗酸桿菌的方法。
[0002](二)

【背景技術(shù)】
結(jié)核(Tuberculosis，簡稱TB)是常見并可致命的一種傳染病，由分枝桿菌又稱結(jié)核桿菌導(dǎo)致。結(jié)核通常感染并破壞肺以及淋巴系統(tǒng)，但其它器官如腦、中樞神經(jīng)系統(tǒng)、循環(huán)系統(tǒng)、泌尿系統(tǒng)、骨骼、關(guān)節(jié)、甚至皮膚亦可受感染。據(jù)世界衛(wèi)生組織統(tǒng)計資料顯示，全球目前有近三分之一的人感染結(jié)核桿菌，結(jié)核病患者達(dá)2000萬人，每年新增患者880萬人，死亡200萬人。因此，早期、快速、有效的病原學(xué)診斷對及時治療結(jié)核病、減少病死率和后遺癥極其重要。
[0003]目前,臨床上檢測結(jié)核病主要依靠抗酸染色法(Ziehl — Neelsen)來確診?？顾崛旧ㄗ鳛榻?jīng)典的方法，結(jié)果較為準(zhǔn)確且長期用于診斷結(jié)核病，但由于鏡檢時間較長，由于操作原因可能導(dǎo)致顏色對比不明顯，陽性檢出率較低，無法完全滿足臨床需求。
[0004](三)


【發(fā)明內(nèi)容】

本發(fā)明為了彌補現(xiàn)有技術(shù)的缺陷，提供了一種方法簡單、陽性檢出率高的熒光抗酸染色液，同時提供了利用該染色液檢測抗酸桿菌的方法。
[0005]本發(fā)明是通過如下技術(shù)方案實現(xiàn)的:
一種熒光抗酸染色液，其特征是，
包括A液:每100ml溶液中包含下列組分:
金胺 O 0.5-1.3g，95% 乙醇 50-130ml，苯酚 50_130ml，余量為水；
其配置方法為:將金胺O加入到95%乙醇中，不斷攪拌充分溶解；將60-70°C加熱溶解的苯酚，溶于少量水中；兩者混勻后用水定容至1000ml，并攪拌Ih ；
B液:為由37%鹽酸20-100ml、95%乙醇900_980ml組成的混合溶液，其配置方法為:先加入37%鹽酸，再加入部分95%乙醇，攪拌均勻后用余量95%乙醇定容至100ml后攪拌均勻；
C液:每100ml溶液中，高錳酸鉀2-10g，余量為水，其配置方法為:先將高錳酸鉀溶入部分水，攪拌均勻后再用水定容至1000ml,并攪拌lh。
[0006]所述A液:每1000ml溶液中包含下列組分:金胺O 1.2g，95%乙醇100ml，苯酚100ml，余量為水。
[0007]所述B液的組成成分為:37%鹽酸30ml、95%乙醇970ml。
[0008]每100ml溶液中，高錳酸鉀7g，余量為水。
[0009]使用上述任一項所述的熒光抗酸染色液檢測抗酸桿菌的方法，其特征是，包括以下步驟:
1)將結(jié)核菌標(biāo)本均勻涂布于潔凈玻片上，自然干燥，經(jīng)火焰固定之后，滴加A液3-4滴，室溫染色15min或加熱5min ；
2)冷卻后，再用流動水自玻片一端輕緩沖洗去除染色液； 3)加B液數(shù)滴于載玻片，輕輕搖動載玻片，脫色2-3min或至無色，然后再用水緩慢沖洗；
4)水洗，沖去脫色液，如果標(biāo)本表面還可以看到殘存紅色，再添加B液至完全脫掉紅色為止；
5)加C液1-2滴，復(fù)染2-4min;水洗，干燥后在暗室鏡檢。
[0010]本發(fā)明的有益效果是:
本發(fā)明的染色液染色簡單、時間短，無沉渣，熒光鏡下菌體呈現(xiàn)明亮橘黃色，背景黑暗，特征對比清晰，熒光染色后保存時間長，陽性率高、不易漏檢等優(yōu)點。本發(fā)明對抗酸桿菌的鑒別診斷和治療具有重要意義。
[0011](四)【具體實施方式】熒光抗酸染色液的配置:
A液的配制之
實施例一:
將0.5克金胺O加入到130ml 95%乙醇中，不斷攪拌充分溶解；將60_70°C加熱溶解的苯酚50ml，溶于少量水中；兩者混勻后用水定容至1000ml，并攪拌Ih ；
實施例二:
將1.3克金胺O加入到50ml 95%乙醇中，不斷攪拌充分溶解；將60_70°C加熱溶解的苯酚130ml，溶于少量水中；兩者混勻后用水定容至1000ml，并攪拌Ih ；
實施例三:
將1.2克金胺O加入到10ml 95%乙醇中，不斷攪拌充分溶解；將60_70°C加熱溶解的苯酚100ml，溶于少量水中；兩者混勻后用水定容至1000ml，并攪拌Ih ；
B液的配置之實施例一:
先在容量瓶中加入20ml37%鹽酸，再加入部分95%乙醇，攪拌均勻后用余量95%乙醇定容至100ml后攪拌均勻；
實施例二:
先在容量瓶中加入30ml37%鹽酸，再加入部分95%乙醇，攪拌均勻后用余量95%乙醇定容至100ml后攪拌均勻；
實施例三:
先在容量瓶中加入100ml37%鹽酸，再加入部分95%乙醇，攪拌均勻后用余量95%乙醇定容至100ml后攪拌均勻；
C液至配置之實施例一:
先將2克高錳酸鉀溶入部分水，攪拌均勻后再用水定容至1000ml，并攪拌lh。
[0012]實施例二:
先將10克高錳酸鉀溶入部分水，攪拌均勻后再用水定容至1000ml，并攪拌lh。
[0013]實施例三:
先將7克高錳酸鉀溶入部分水，攪拌均勻后再用水定容至1000ml，并攪拌lh。
[0014]利用上述配置的熒光抗酸染色液檢測抗酸桿菌的方法如下: 1)將結(jié)核菌標(biāo)本均勻涂布于潔凈玻片上，自然干燥，經(jīng)火焰固定之后，滴加上述配置好的任一種A液3-4滴,室溫染色12-17min,最好是15min或加熱4_7min,最好是5min ；
2)冷卻后，再用流動水自玻片一端輕緩沖洗去除染色液；
3)加上述配置好的任一種B液數(shù)滴于載玻片，輕輕搖動載玻片，脫色2-3min或至無色，然后再用水緩慢沖洗；
4)水洗，沖去脫色液，如果標(biāo)本表面還可以看到殘存紅色，再添加B液至完全脫掉紅色為止；
5)加上述配置好的任一種C液1-2滴，復(fù)染2-4min;水洗，干燥后在暗室鏡檢。
[0015]除說明書所述技術(shù)特征外，其余技術(shù)特征均為本領(lǐng)域技術(shù)人員已知技術(shù)。
【權(quán)利要求】
1.一種熒光抗酸染色液，其特征是， 包括A液:每100ml溶液中包含下列組分: 金胺 O 0.5-1.3g，95% 乙醇 50-130ml，苯酚 50_130ml，余量為水； 其配置方法為:將金胺O加入到95%乙醇中，不斷攪拌充分溶解；將60-70°C加熱溶解的苯酚，溶于少量水中；兩者混勻后用水定容至1000ml，并攪拌Ih ； B液:為由37%鹽酸20-100ml、95%乙醇900_980ml組成的混合溶液，其配置方法為:先加入37%鹽酸，再加入部分95%乙醇，攪拌均勻后用余量95%乙醇定容至100ml后攪拌均勻； C液:每100ml溶液中，高錳酸鉀2-10g，余量為水，其配置方法為:先將高錳酸鉀溶入部分水，攪拌均勻后再用水定容至1000ml,并攪拌lh。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的熒光抗酸染色液，其特征是，所述A液:每100ml溶液中包含下列組分:金胺O 1.2g，95%乙醇100ml，苯酚100ml，余量為水。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的熒光抗酸染色液，其特征是，所述B液的組成成分為:37%鹽酸 30ml、95% 乙醇 970ml ο
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的熒光抗酸染色液，其特征是，每100ml溶液中，高錳酸鉀7g，余量為水。
5.使用權(quán)利要求1至4任一項所述的熒光抗酸染色液檢測抗酸桿菌的方法，其特征是，包括以下步驟: 1)將結(jié)核菌標(biāo)本均勻涂布于潔凈玻片上，自然干燥，經(jīng)火焰固定之后，滴加A液3-4滴，室溫染色12-17min或加熱4_7min ； 2)冷卻后，再用流動水自玻片一端輕緩沖洗去除染色液； 3)加B液數(shù)滴于載玻片，輕輕搖動載玻片，脫色2-3min或至無色，然后再用水緩慢沖洗； 4)水洗，沖去脫色液，如果標(biāo)本表面還可以看到殘存紅色，再添加B液至完全脫掉紅色為止； 5)加C液1-2滴，復(fù)染2-4min;水洗，干燥后在暗室鏡檢。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的熒光抗酸染色液檢測抗酸桿菌的方法，其特征是，包括以下步驟: 1)將結(jié)核菌標(biāo)本均勻涂布于潔凈玻片上，自然干燥，經(jīng)火焰固定之后，滴加A液3-4滴，室溫染色15min或加熱5min ； 2)冷卻后，再用流動水自玻片一端輕緩沖洗去除染色液； 3)加B液數(shù)滴于載玻片，輕輕搖動載玻片，脫色2-3min或至無色，然后再用水緩慢沖洗； 4)水洗，沖去脫色液，如果標(biāo)本表面還可以看到殘存紅色，再添加B液至完全脫掉紅色為止； 5)加C液1-2滴，復(fù)染2-4min;水洗，干燥后在暗室鏡檢。
【文檔編號】C12Q1/04GK104388520SQ201410580766
【公開日】2015年3月4日 申請日期:2014年10月27日 優(yōu)先權(quán)日:2014年10月27日
【發(fā)明者】房濱, 寧春華, 聶暉, 崔蘭蘭, 韓瑩瑩, 劉俊廷, 曹立璇 申請人:濟(jì)南百博生物技術(shù)股份有限公司