一種采用pcr方法擴(kuò)增糞便細(xì)粒棘球絳蟲(chóng)dna的方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種采用PCR方法擴(kuò)增糞便細(xì)粒棘球絳蟲(chóng)DNA的方法，具體為，(1)PCR反應(yīng)總體積為25μl，包括0.1μg?BSA、pH9.2?104μmol/L?Tri?s-HCl、2.5×104μmol/L?KCl、1.5×103μmol/LMgCl2、200μmol/L?dNTP、0.4μmol/L引物、2.5UTaq酶及2.5μl?DNA樣品；上游引物Eglf：5′-CATTAATGTATTTTGTAAAGT-TG-3，下游引物Eglr：5′-CACATCATCTTA-CAATAACACC-3′；目的片段大小為255bp；(2)熱循環(huán)參數(shù)：95℃預(yù)變性5min；95℃30s；53.5℃30s；72℃45s；共40次循環(huán)；72℃后延伸10min；(3)1.5％瓊脂糖電泳檢測(cè)PCR產(chǎn)物。本發(fā)明所帶來(lái)的有益效果是：采用PCR方法檢測(cè)前需對(duì)糞便進(jìn)行加熱處理，消除了蟲(chóng)卵的感染力。PCR方法不僅可以區(qū)分形態(tài)上相似的蟲(chóng)卵，還可能對(duì)蟲(chóng)卵數(shù)做出預(yù)測(cè)。
【專(zhuān)利說(shuō)明】-種采用PCR方法擴(kuò)增糞便細(xì)粒棘球絳蟲(chóng)DNA的方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及寄生蟲(chóng)檢測(cè)【技術(shù)領(lǐng)域】，具體為一種采用PCR方法擴(kuò)增糞便細(xì)粒棘球絳 蟲(chóng)DNA的方法。

【背景技術(shù)】
[0002] 細(xì)粒棘球絳蟲(chóng)有較廣泛的宿主適應(yīng)性，分布遍及世界各大洲牧區(qū)，主要以犬和偶 蹄類(lèi)家畜之間循環(huán)為特點(diǎn)，在我國(guó)主要是綿羊/犬動(dòng)物循環(huán)，牦牛/犬循環(huán)僅見(jiàn)于青藏高原 和甘肅省的高山草甸和山麓地帶。
[0003] 我國(guó)是世界上棘球蚴病流行最嚴(yán)重的國(guó)家之一，主要流行區(qū)在我國(guó)西部和北部廣 大農(nóng)牧地區(qū)，即新疆、青海、甘肅、寧夏、西藏、內(nèi)蒙和四川7省區(qū)，其次是陜西、山西和河北 部分地區(qū)。另外，在東北三省、河南、山東、安徽、湖北、貴州和云南等省有散發(fā)病例。迄今全 國(guó)已有23個(gè)省、市、區(qū)證實(shí)有當(dāng)?shù)馗腥镜牟∪恕?jù)幾個(gè)重點(diǎn)流行省區(qū)的不完全統(tǒng)計(jì)，全國(guó) 受棘球蚴病威脅的人口約5000萬(wàn)，患病人數(shù)約為50?60萬(wàn)，人群中最易感染者是學(xué)齡前 兒童（新疆15289例病人中，15歲以下者占32. 1 %)。主要?jiǎng)游镏虚g宿主綿羊的感染率在 3. 3%?90%之間，家犬的感染率在7%?71 %之間。隨著西部大開(kāi)發(fā)戰(zhàn)略的實(shí)施，對(duì)本病 的防治日益成為重要的任務(wù)。
[0004] 因此，迫切需要一種有效檢測(cè)細(xì)粒棘球絳蟲(chóng)DNA的方法。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 為了克服以上技術(shù)缺陷，本發(fā)明提供一種采用PCR方法擴(kuò)增糞便細(xì)粒棘球絳蟲(chóng) DNA的方法。
[0006] 本發(fā)明解決其技術(shù)問(wèn)題所采用的技術(shù)方案為，一種采用PCR方法擴(kuò)增糞便細(xì)粒棘 球絳蟲(chóng)DNA的方法，具體為，
[0007] (l)PCR 反應(yīng)總體積為 25μ 1，包括 0· lyg BSA、pH9.2 104ymol/L Tris-HCl、 2.5X104ymol/L KCl、1.5X103ymol/LMgC12、200ymol/L dNTP、0.4ymol/L 引物、 2. 5UTaq 酶及 2. 5 μ 1 DNA 樣品；
[0008] 上游弓丨物 Eglf :5 ' -CATTAATGTATTTTGTAAAGT-TG-3，下游引物 Eglr : 5' -CACATCATCTTA-CAATAACACC-3，；目的片段大小為 255bp ;
[0009] (2)熱循環(huán)參數(shù)：95°C預(yù)變性 5min ;95°C 30s ;53. 5°C 30s ;72°C 45s ;共 40 次循環(huán)； 72°C后延伸 lOmin ;
[0010] (3) 1· 5%瓊脂糖電泳檢測(cè)PCR產(chǎn)物。
[0011] 本發(fā)明所帶來(lái)的的有益效果是：采用PCR方法檢測(cè)前需對(duì)糞便進(jìn)行加熱處理，消 除了蟲(chóng)卵的感染力，對(duì)操作者更加安全。PCR方法不僅可以區(qū)分形態(tài)上相似的蟲(chóng)卵，還可能 對(duì)蟲(chóng)卵數(shù)做出預(yù)測(cè)。

【具體實(shí)施方式】
[0012] 本發(fā)明為一種采用PCR方法擴(kuò)增糞便細(xì)粒棘球絳蟲(chóng)DNA的方法，具體為，
[0013] (l)PCR 反應(yīng)總體積為 25μ 1，包括 0· lyg BSA、pH9.2 104ymol/L Tris-HCl、 2.5X104ymol/L KCl、1.5X103ymol/LMgC12、200ymol/L dNTP、0.4ymol/L 引物、 2. 5UTaq 酶及 2. 5 μ 1 DNA 樣品；
[0014] 上游引物 Eglf :5 ' -CATTAATGTATTTTGTAAAGT-TG-3，下游引物 Eglr : 5' -CACATCATCTTA-CAATAACACC-3，；目的片段大小為 255bp ;
[0015] (2)熱循環(huán)參數(shù)：95°C預(yù)變性 5min ;95°C 30s ;53. 5°C 30s ;72°C 45s ;共 40 次循環(huán)； 72°C后延伸 lOmin ;
[0016] (3) 1· 5%瓊脂糖電泳檢測(cè)PCR產(chǎn)物。
[0017] 采用PCR方法檢測(cè)前需對(duì)糞便進(jìn)行加熱處理，消除了蟲(chóng)卵的感染力，對(duì)操作者更 加安全。PCR方法不僅可以區(qū)分形態(tài)上相似的蟲(chóng)卵，還可能對(duì)蟲(chóng)卵數(shù)做出預(yù)測(cè)。
[0018] 本發(fā)明不局限于上述實(shí)施方式，任何人應(yīng)得知在本發(fā)明啟示下做出的結(jié)構(gòu)變化所 得出的相同或相近的技術(shù)方案，均落入本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
[0019] 本發(fā)明未詳細(xì)描述的技術(shù)、形狀、構(gòu)造部分均為公知技術(shù)。
【權(quán)利要求】
1. 一種采用PCR方法擴(kuò)增糞便細(xì)粒棘球絳蟲(chóng)DNA的方法，其特征在于，具體為， (1) PCR 反應(yīng)總體積為 25μ 1，包括 0· 1μ g BSA、pH9. 2 104ymol/L Tris-HCl、 2.5X104ymol/L KCl、1.5X103ymol/LMgC12、200ymol/L dNTP、0.4ymol/L 引物、 2. 5UTaq 酶及 2. 5 μ 1 DNA 樣品； 上游引物 Eglf :5 ' -CATTAATGTATTTTGTAAAGT-TG-3，下游引物 Eglr : 5' -CACATCATCTTA-CAATAACACC-3';目的片段大小為 255bp ; (2) 熱循環(huán)參數(shù)：95°C預(yù)變性5min ;95°C30s ;53. 5°C30s ;72°C45s ;共40次循環(huán)；72°C 后延伸lOmin ; (3) 1. 5 %瓊脂糖電泳檢測(cè)PCR產(chǎn)物。
2. 如權(quán)利要求1所述的采用PCR方法擴(kuò)增糞便細(xì)粒棘球絳蟲(chóng)DNA的方法，其特征在于， 檢測(cè)前需對(duì)糞便進(jìn)行加熱處理，消除了蟲(chóng)卵的感染力。
【文檔編號(hào)】C12Q1/68GK104195261SQ201410491712
【公開(kāi)日】2014年12月10日 申請(qǐng)日期:2014年9月24日 優(yōu)先權(quán)日:2014年9月24日
【發(fā)明者】陳啟龍, 馬嵋, 張亞樓, 王雪梅 申請(qǐng)人:陳啟龍, 馬嵋