一種煙草發(fā)酵所得煙用香料及其應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種煙草發(fā)酵所得煙用香料及其應(yīng)用。從云南烤煙紅花大金元品種煙葉中分離了一株優(yōu)勢微生物，分類命名為長孢洛德酵母(Lodderomyces elongisporus).CGMCC6645。將該酵母接種到以煙草為原料的培養(yǎng)基中進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)。培養(yǎng)之后的發(fā)酵產(chǎn)物具有天然香味，含有苯乙醇、4-羥基丁酸內(nèi)酯、鄰苯二甲酸二丁酯等多種致香成分。將該煙用香料添加到煙絲中，具有有效增加清香感，改善煙氣口感和余味，提高喉部舒適性，降低刺激性，掩蓋雜氣，以及使吸味更加柔和的良好效果。整個生產(chǎn)工藝簡單、實(shí)用，具有良好的應(yīng)用前景。
CGMCC No.6645
2012.10.08
【專利說明】一種煙草發(fā)酵所得煙用香料及其應(yīng)用

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于卷煙香精香料【技術(shù)領(lǐng)域】，具體是涉及一種用酵母菌發(fā)酵煙草后得到的 煙用香料。同時，本發(fā)明還涉及該煙用香料在卷煙生產(chǎn)中的具體應(yīng)用。

【背景技術(shù)】
[0002] 煙草是我國財政的重要支柱之一。國家煙草專賣局在"十一五"中國卷煙科技發(fā) 展綱要第7條明確指出，要"攻克影響煙葉香氣質(zhì)、香氣量的關(guān)鍵技術(shù)"，縮小與國外煙葉質(zhì) 量差距，以提高國內(nèi)外市場競力。
[0003] 煙用香精香料是專供各種煙草制品加香矯味使用的一種添加劑。煙用香精香料技 術(shù)是煙草行業(yè)的核心技術(shù)之一。通過近年的研究，國內(nèi)在煙用香精香料技術(shù)方面取得了一 定成績，對形成中式卷煙香氣和吃味特征做出了貢獻(xiàn)。煙用香料一般分為天然煙用香料和 人工合成煙用香料。天然煙用香料在加入卷煙后經(jīng)燃燒裂解能釋放出香氣香味，在卷煙生 產(chǎn)中占據(jù)著非常重要地位。
[0004] 隨著中國煙草工業(yè)的快速發(fā)展，大品牌的形成，卷煙減害降焦的要求，以及煙草品 類的進(jìn)一步完善，對高品質(zhì)天然煙用香精香料的需求與日俱增，天然香料資源日漸短缺，市 場價格比較昂貴。微生物發(fā)酵生產(chǎn)天然香料具有發(fā)酵周期短、發(fā)酵效率高、低成本、高收益、 環(huán)境友好等優(yōu)勢，能夠滿足天然香料工業(yè)的需求。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的在于針對現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種以特殊的產(chǎn)香酵母發(fā)酵煙草后 制備得到的煙用香料，該香料符合天然香料的要求，能夠與煙香形成良好的配伍。
[0006] 本發(fā)明的目的還在于提供所述煙用香料在卷煙生產(chǎn)中的具體應(yīng)用。
[0007] 本發(fā)明的目的通過下述技術(shù)方案予以實(shí)現(xiàn)。
[0008] 除非另有說明，本發(fā)明中所采用的百分?jǐn)?shù)均為質(zhì)量百分?jǐn)?shù)。
[0009] 本發(fā)明從云南烤煙紅花大金元品種煙葉中分離了一株優(yōu)勢微生物0F-08作為試 驗菌種，對其進(jìn)行了 26S rDNA分析，鑒定結(jié)果表明該菌株屬于長孢洛德酵母，其分類命名為 Lodderomyces elongisporus，保藏號為 CGMCC No. 6645。
[0010] 本發(fā)明所述的長孢洛德酵母（Lodderomyces elongisporus)菌株的形態(tài)學(xué)特征 為：菌落較大，呈卵球形，奶白色凸起，菌落比較粗糙，邊緣整齊；在液體培養(yǎng)基中，培養(yǎng)液 澄清有沉淀，且有菌蹼。
[0011] 本發(fā)明所述的長孢洛德酵母0F-08的分子鑒定特征為：利用通用引物NL-I (5'CAT ATCAATAAGCGGAGGAAAAG3'）和 NL-4 (5' GGTCCGTGITTCAAGACGG3'），以長孢洛德酵母 0F-08 的 基因組DNA作為模板擴(kuò)增得到600bp左右的PCR產(chǎn)物，回收測序、校正之后得到的0F-08菌 株的部分26S rDNA基因序列578bp，該序列已經(jīng)提交國際核苷酸序列數(shù)據(jù)庫（GenBank)，序 列索引號為JQ916053。
[0012] 利用所述長孢洛德酵母菌發(fā)酵煙草，制備得到一種煙用香料，其特征在于：將煙草 粉碎后與水按1:5?1:50的質(zhì)量比配制成發(fā)酵培養(yǎng)基，高壓滅菌后按1%的質(zhì)量比接種長 孢洛德酵母CGMCC6645,發(fā)酵培養(yǎng)2天后對發(fā)酵液進(jìn)行過濾濃縮，即得所需煙用香料。
[0013] 所述的煙草與水的質(zhì)量比優(yōu)選為1:20。
[0014] 所述的煙草包括煙片、煙梗或煙末；優(yōu)選為煙梗。
[0015] 所述煙草發(fā)酵所得煙用香料在卷煙生產(chǎn)中的應(yīng)用，具體為：在卷煙制絲加料階段， 將所述煙用香料噴灑在預(yù)先平衡好的煙絲上，添加量為8?12g/箱煙絲；其中，煙絲平衡的 條件為：溫度22±2°C，相對濕度60% ±2%，平衡時間24h。
[0016] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下突出的優(yōu)點(diǎn)：
[0017] (1)通過長孢洛德酵母菌發(fā)酵煙草得到的煙用香料，具有天然香料的香味，通過 GC-MS檢測，結(jié)果表明發(fā)酵液中含有苯乙醇、4-羥基丁酸內(nèi)酯、鄰苯二甲酸二丁酯等致香成 分；將該香料添加到卷煙中進(jìn)行評吸，具有有效增加清香感，改善煙氣口感和余味，提高喉 部舒適性，降低刺激性，掩蓋雜氣，以及使吸味更加柔和的良好效果。
[0018] (2)本發(fā)明原料價格低廉，來源豐富；所用菌株易于保存，易于活化和發(fā)酵；
[0019] (3)生產(chǎn)工藝簡單、操作容易、成本低廉，便于實(shí)現(xiàn)大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)，具有良好的 開發(fā)應(yīng)用前景。
[0020] 保藏生物材料的說明
[0021] 本發(fā)明的菌株，已于2012年10月08日，保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會 普通微生物中心（CGMCC);該中心地址：中國北京市朝陽區(qū)大屯路，中國科學(xué)院微生物研 究所。該菌株分類命名為長孢洛德酵母（Lodderomyces elongisporus);保藏號為CGMCC No.6645〇

【具體實(shí)施方式】
[0022] 為了使本發(fā)明的目的、技術(shù)方案及優(yōu)點(diǎn)更加清楚明白，以下通過實(shí)施例及試驗數(shù) 據(jù)，對本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)說明。應(yīng)當(dāng)理解，此處所描述的具體實(shí)施例僅僅用以解釋本發(fā) 明，并不用于限定本發(fā)明。
[0023] 實(shí)施例1
[0024] -長孢洛德酵母菌0F-08 (L. elongisporus 0F-08)的篩選方法。
[0025] 煙葉樣品用自來水沖洗3_5min并用細(xì)毛刷清除葉片表面污垢。葉片自然晾干后， 隨機(jī)選5片葉子，在健康部位（無病斑）用無菌剪刀隨機(jī)取下3X3cm 2的組織塊3-5片，混 合后用無菌水漂洗5min并用無菌濾紙吸干水分。稱取IOg葉塊，按下述程序進(jìn)行表面消 毒：75%的無菌酒精浸泡lmin，無菌水清洗3次，并用無菌濾紙吸干水分，避免酒精殘留； 再用有效氯含量為3 %的NaClO溶液浸泡2min，無菌水清洗后吸干水分，置于超凈工作臺中 備用。取200 μ L最后一次洗滌組織的無菌水涂布在YH)培養(yǎng)基平板，28°C培養(yǎng)2d后無酵 母菌菌落出現(xiàn)，表明消毒徹底。將經(jīng)過表面消毒的組織塊放在無菌研缽中研磨至漿狀，加入 IOmL無菌水，混勻后用3層無菌擦鏡紙過濾，獲得的濾液用無菌水稀釋至ΙΟ'ΙΟ'ΚΓ3。每 一稀釋度取200 μ L涂布一個YH)培養(yǎng)基平板，每個濃度設(shè)定3個重復(fù)，三個濃度共9皿。涂 布平板在超凈工作臺中放置5h后于32°C下倒置培養(yǎng)2d，統(tǒng)計每平板的微生物菌落數(shù)，并對 所得的內(nèi)生酵母進(jìn)行純化、保存和鑒定，得到了長孢洛德酵母（L. elongisporus 0F-08)。
[0026] 實(shí)施例2
[0027] -發(fā)酵煙草材料
[0028] 取適量煙草材料（包括碎煙片、煙梗、煙梗末等），分別用蒸餾水稀釋5倍、10倍、 15倍、20倍、30倍和50倍，高壓滅菌后按1 %的接種量接入長孢洛德酵母菌CGMCC6645對 其進(jìn)行發(fā)酵，培養(yǎng)兩天后觀察發(fā)酵液變化情況，結(jié)果表明，發(fā)酵液具有天然香味。通過比較 不同的煙草材料發(fā)酵情況，結(jié)果表明，發(fā)酵煙梗末所得的香料，香味比較純正、濃厚。并且， 發(fā)酵材料和水的比例不同，發(fā)酵液的變化情況不一樣，產(chǎn)香效果也不一樣。煙草材料和水的 比例為1:20時，發(fā)酵效果比較明顯。
[0029] 實(shí)施例3
[0030] --發(fā)酵液的萃取
[0031] 將實(shí)施例2所得的發(fā)酵液過濾除渣后，用二氯甲烷溶劑同時蒸餾萃取3h，萃取液 用無水硫酸鈉干燥，置于4°C過夜，過濾，減壓濃縮至約lml，濃縮液用于GC-MS分析（詳見 表1)。對照為不接種酵母菌的培養(yǎng)基。
[0032] --發(fā)酵液物質(zhì)成分測定
[0033] 酵母菌發(fā)酵煙草材料所得香料中含有多種煙用香料成分，包括苯乙醇、鄰苯二甲 酸二丁酯、4-羥基丁酸內(nèi)酯、糠醛、7-羥基-6-甲氧基香豆素、對羥基苯乙醇、莨菪亭、二輕 獼猴桃內(nèi)酯等。其中，最主要的成分為具有天然香味的苯乙醇，為29. 312%。其次為4-羥 基丁酸內(nèi)酯，含量為6. 795%，再次為鄰苯二甲酸二丁酯，為6. 591 %。而在對照中，5-羥 甲基糠醛的含量最高，為19. 918%，其次為煙堿，占總物質(zhì)成分的9. 312%，再次為7-羥 基-6-甲氧基香豆素，占總含量的9. 765%。另外，經(jīng)酵母菌發(fā)酵后，發(fā)酵液中的煙堿含量也 有所降低，從原來的11. 259%降到1. 831%。結(jié)果表明，酵母菌0F-08對煙草材料的發(fā)酵不 僅可以產(chǎn)生天然香料，對煙草等還具有顯著地改善作用。
[0034] 表1煙草材料發(fā)酵液物質(zhì)成分含量檢測結(jié)果 [0035]

【權(quán)利要求】
1. 一種煙草發(fā)酵所得煙用香料，其特征在于：將煙草粉碎后與水按1:5?1:50的質(zhì)量 比配制成發(fā)酵培養(yǎng)基，高壓滅菌后按1 %的質(zhì)量比接種長孢洛德酵母CGMCC6645,發(fā)酵培養(yǎng) 2天后對發(fā)酵液進(jìn)行過濾濃縮，即得所需煙用香料。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的煙草發(fā)酵所得煙用香料，其特征在于：所述的煙草與水的質(zhì) 量比優(yōu)選為1:20。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的煙草發(fā)酵所得煙用香料，其特征在于：所述的煙草包括煙片、 煙?；驘熌粌?yōu)選為煙梗。
4. 權(quán)利要求1所述煙草發(fā)酵所得煙用香料在卷煙生產(chǎn)中的應(yīng)用，具體為：在卷煙制絲 加料階段，將所述煙用香料噴灑在預(yù)先平衡好的煙絲上，添加量為8?12g/箱煙絲；其中， 平衡的條件為：溫度22±2°C，相對濕度60% ±2%，平衡時間24h。
【文檔編號】C12R1/645GK104223353SQ201410408908
【公開日】2014年12月24日 申請日期:2014年8月19日 優(yōu)先權(quán)日:2014年8月19日
【發(fā)明者】馮斌, 段焰青, 李利君, 楊培香, 夏建軍, 黨立志, 王文元, 劉亞 申請人:云南中煙工業(yè)有限責(zé)任公司