一種中華被毛孢降血脂型保健飲料及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種中華被毛孢降血脂型保健飲料及其制備方法。該飲料中活性成分為未過濾或過濾后的中華被毛孢發(fā)酵液；發(fā)酵液的制備方法包括：將由女貞子10-40重量份、桑葉10-40重量份、絞股藍(lán)10-40重量份和淫羊藿10-40重量份組成的中藥材經(jīng)水溶液提取，得到中藥復(fù)合水提液；采用中藥復(fù)合水提液、甲魚油、香榧油、葡萄糖和水配制發(fā)酵培養(yǎng)基；將中華被毛孢菌種接入發(fā)酵培養(yǎng)基中，經(jīng)液體發(fā)酵，得到中華被毛孢發(fā)酵液。該飲料中含有利用甲魚油、香榧油及女貞子、桑葉、絞股藍(lán)和淫羊藿等天然保健成分搭配進(jìn)行發(fā)酵的中華被毛孢發(fā)酵液，具有顯著的降血脂功能。所述飲料的制備方法包括：將原料混合均勻，經(jīng)過濾和殺菌，即得；操作簡單，易于工業(yè)化生產(chǎn)。
【專利說明】
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及營養(yǎng)保健飲料，具體涉及一種中華被毛孢降血脂型保健飲料及其制備 方法，屬于保健食品領(lǐng)域。 一種中華被毛孢降血脂型保健飲料及其制備方法

【背景技術(shù)】
[0002] 中華被毛孢（Hirsutella sinensis)是從天然蟲草中分離得到的無性型蟲草菌 株。由于野生冬蟲夏草的稀缺性，現(xiàn)在人們大多采用人工方法分離和培育菌種來獲得冬蟲 夏草的替代品。雖然人工培育的蟲草菌絲體和天然野生的蟲草菌絲體在化學(xué)成分和藥效上 并不完全一樣，但是其活性成分仍然具有很高的藥效及經(jīng)濟(jì)價(jià)值。如中華被毛孢是以生物 工程發(fā)酵而來，其作為冬蟲夏草替代品，以單方或復(fù)方的形式廣泛用于治療多種疾病，是食 藥兩用的保健品。
[0003] 甲魚（Amyda Sinensis)是我國傳統(tǒng)的上等中藥材，具有極高的藥用價(jià)值，是滋陰 補(bǔ)腎的佳品，有滋陰壯陽，軟堅(jiān)散結(jié)、化瘀和延年益壽的功能。甲魚油來源于甲魚的脂肪油， 它富含 ω_3 多不飽和脂肪酸（co-3polyunsaturated fatty acids，co-3PUFAs)，尤其是其 中的二十碳五烯酸（EPA)和二十二碳六烯酸（DHA)，被稱為天然的血液凈化劑，具有減少血 栓形成、預(yù)防中風(fēng)、預(yù)防動脈硬化及心肌梗死、降血壓、減緩發(fā)炎、減輕并改善類風(fēng)濕性關(guān)節(jié) 炎、改善并減輕結(jié)腸性結(jié)腸炎等作用。當(dāng)人體內(nèi)有足夠ω-3多不飽和脂肪酸時(shí)，可以預(yù)防 腫瘤、智力障礙、記憶力下降以及自身免疫性疾病，并有效預(yù)防心血管疾病并提高運(yùn)動的耐 受力。
[0004] 榧子（Semen Torreyae)又稱細(xì)榧、真榧、香榧子等，為紅豆杉科（Taxaceae)榧屬 (Torreya)植物榧樹Torreyagrandis Fort.的種子。其種仁含油量約546. 2g/kg，不僅富含 多不飽和脂肪酸如油酸、亞油酸等，還有多種維生素、氨基酸、微量礦物質(zhì)、揮發(fā)油及鞣質(zhì)等 營養(yǎng)成分。香榧子是世界珍貴干果之一，有調(diào)節(jié)血脂、促進(jìn)血液循環(huán)，調(diào)節(jié)老化內(nèi)分泌系統(tǒng) 的療效。陳振德等已證實(shí)香榧子油對動脈粥樣硬化形成有明顯的預(yù)防作用（陳振德，陳志 良，侯連兵等，香榧子油對實(shí)驗(yàn)性動脈粥樣硬化形成的影響[J].中藥材，2000)。
[0005] 女貞子為木犀科植物女貞Ligustrum lucidum Ait.的干燥成熟果實(shí)。女貞子含有 齊墩果酸、熊果酸、甘露醇、葡萄糖、棕櫚酸、硬脂酸、油酸及亞麻酸等多種活性物質(zhì)，始載于 《神農(nóng)本草經(jīng)》，具有補(bǔ)益肝腎、清熱明目的功效，用于肝腎陰虛、頭昏目眩、耳鳴、腰膝疲軟、 須發(fā)早白等癥。現(xiàn)代藥理研究表明女貞子具有保肝利膽、抗肝纖維化、抗菌消炎、抗腫瘤、降 血脂、降血糖、降低血液黏度、增強(qiáng)機(jī)體免疫調(diào)節(jié)等多種藥理活性。
[0006] 桑葉（mulberry leaves)為桑樹植物的葉子，桑葉中主要含有黃酮、蛋白質(zhì)、γ-氨 基丁酸、桑葉多糖、生物堿、植物留醇、礦物質(zhì)等多種營養(yǎng)成分，并且具有降血糖，降血脂，降 膽固醇、抗血栓形成和抗動脈粥樣硬化、抗炎、抗衰老、抗病毒、抗腫瘤、清熱解毒等多種藥 理作用，桑葉已被衛(wèi)生部正式歸入"既是食品又是藥品"之列。
[0007] 絞股藍(lán)（Gynostemmapentaphyllum)為葫蘆科絞股藍(lán)屬多年生草質(zhì)藤本植物，另lj 名七葉膽、甘茶蔓、七葉參等。絞股藍(lán)主要有效成份是絞股藍(lán)皂甙、絞股藍(lán)糖甙（多糖）、水 溶性氨基酸、黃酮類、多種維生素、微量元素、礦物質(zhì)等，可降血脂，調(diào)血壓、防治血栓，防治 心血管疾患，調(diào)節(jié)血糖，促睡眠，緩衰老，防抗癌，提高免疫力，調(diào)節(jié)人體生理機(jī)能。
[0008] 淫羊藿（Epimediumbrevicornu Maxim.)為小檗科淫羊藿屬植物，別名三枝九葉 草、仙靈脾、牛角花、三叉風(fēng)、羊角風(fēng)、三角蓮等，是我國國家衛(wèi)生部批準(zhǔn)的可用于保健食品 的中草藥之一，主要含黃酮類化合物、多糖、木脂素、生物堿、揮發(fā)油及一些微量元素等，味 辛甘性溫，歸肝腎經(jīng)，因其具有補(bǔ)腎陽、強(qiáng)筋骨、祛風(fēng)濕的功效，常用作滋補(bǔ)類中草藥，主治 腎陽虛衰、陽痿遺精、筋骨痿軟、風(fēng)濕痹痛等癥。
[0009] 中國專利ZL201110369312. 6公開了一種發(fā)酵蛹蟲草復(fù)合飲料的制備方法，以蛹 蟲草發(fā)酵液、紅棗、枸杞、金銀花的浸提液為主要原料制成飲料，營養(yǎng)豐富、具有提高人體 免疫力、增強(qiáng)體力、養(yǎng)肝明目、補(bǔ)脾胃、養(yǎng)血安神、補(bǔ)腎益精、抗衰老、抗突變、抗腫瘤等輔助 功效。中國專利ZL200910230033. 4公開了一種北蟲草紅茶菌活性保健飲料及其制備方 法，該飲料以北蟲草子實(shí)體、茶葉和白糖的提取液及蜂蜜、甜蜜素為培養(yǎng)液，接入紅茶菌進(jìn) 行發(fā)酵而制得，對于慢性胃炎、高血壓、糖尿病、惡性腫瘤等多種疾病的輔助康復(fù)效果顯 著。向培養(yǎng)基中添加適量中藥成分或油脂類物質(zhì)，可顯著促進(jìn)食藥用真菌的生長或提高 活性代謝產(chǎn)物的產(chǎn)量（李羿，楊勝，李晨等.茯苓搖瓶液體發(fā)酵復(fù)合藥性培養(yǎng)基及其 化學(xué)成分研究[J]·中草藥，2012, 43(8) :1519-1522 ;Zhou H，Bi P，Wu X，et al. Improved polysaccharide production in submerged culture of Ganodermalucidumn by the addition of coixenolide [J]. Applied Biochemistry and Biotechnology, 2014, 172:1497-1505.)。中藥發(fā)酵技術(shù)研究發(fā)現(xiàn)，真菌在代謝過程中還有可能對中藥中的萜類、黃酮類、生物 堿、皂甙類等某些活性物質(zhì)進(jìn)行生物轉(zhuǎn)化，以提高中藥藥效、消除中藥毒副作用、增加中藥 及復(fù)方制劑的安全性、改變中藥藥性（莊毅，謝小梅.藥用真菌新型（雙向性）固體發(fā)酵 工程對雷公藤解毒持效的初步研究[J].中國中藥雜志，2009, 34 (6) : 2083-2087.)，甚至形 成新的成分或是活性更高的物質(zhì)（李國紅，沈月毛，王啟方等.發(fā)酵三七中的皂苷成分研 究[J].中草藥，2005, 36(4) :499-500.)，明顯增強(qiáng)發(fā)酵產(chǎn)物的生物活性和藥理功能。但尚 未發(fā)現(xiàn)與甲魚油、香榧油及女貞子、桑葉、絞股藍(lán)和淫羊藿等天然保健成分搭配進(jìn)行發(fā)酵而 制得的具有降血脂功效的蟲草飲品。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0010] 本發(fā)明的目的在于提供一種中華被毛孢降血脂型保健飲料，該飲料中含有利用甲 魚油、香榧油及女貞子、桑葉、絞股藍(lán)和淫羊藿等天然保健成分搭配進(jìn)行發(fā)酵的中華被毛孢 發(fā)酵液，能夠顯著降低血清中的總膽固醇和甘油三酯含量，具有顯著的降血脂功能。
[0011] 本發(fā)明還提供了一種中華被毛孢降血脂型保健飲料的制備方法，通過添加甲魚 油、香榧油和特定種類的中藥復(fù)合水提液等天然保健成分，進(jìn)行中華被毛孢的液體發(fā)酵培 養(yǎng)，進(jìn)一步提升中華被毛孢保健飲料的降血脂保健功能。
[0012] 本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的：
[0013] 一種中華被毛孢降血脂型保健飲料，其活性成分為中華被毛孢發(fā)酵液或過濾后的 中華被毛孢發(fā)酵液；所述的中華被毛孢發(fā)酵液的制備方法包括：
[0014] (1)將由女貞子10-40重量份、桑葉10-40重量份、絞股藍(lán)10-40重量份和淫羊藿 10-40重量份組成的中藥材經(jīng)水溶液提取，得到中藥復(fù)合水提液；
[0015] (2)采用步驟（1)制備的中藥復(fù)合水提液、甲魚油、香榧油、葡萄糖和水配制發(fā)酵 培養(yǎng)基；
[0016] (3)將中華被毛孢菌種接入步驟（2)制得的發(fā)酵培養(yǎng)基中，經(jīng)液體發(fā)酵，得到中華 被毛孢發(fā)酵液。
[0017] 所述的中華被毛孢發(fā)酵液可以直接作為或用于配制中華被毛孢降血脂型保健飲 料，也可以將中華被毛孢發(fā)酵液過濾后作為或用于配制中華被毛孢降血脂型保健飲料，澄 清度和口感更佳。將中華被毛孢發(fā)酵液過濾的方法可采用本領(lǐng)域常用的過濾方法，優(yōu)選：將 中華被毛孢發(fā)酵液調(diào)整溫度至40°c -60°c，加占中華被毛孢發(fā)酵液重量0. 05% -1. 5%的殼 聚糖澄清lh-5h后過濾，得到過濾后的中華被毛孢發(fā)酵液。
[0018] 本發(fā)明中，富含蟲草、甲魚油、香榧油、女貞子、桑葉、絞股藍(lán)和淫羊藿等天然保健 原料的有效成分，經(jīng)發(fā)酵后色澤淡黃、口感柔和、酸甜可口、清涼爽口、營養(yǎng)豐富、清香淡雅， 同時(shí)發(fā)酵過程中發(fā)生復(fù)雜的生物轉(zhuǎn)化，消除中藥毒副作用、增加安全性、提高降血脂功效， 產(chǎn)生多種對人體有益的活性成分，因此，本發(fā)明未過濾或過濾后的中華被毛孢發(fā)酵液可以 直接作為一種純天然降血脂保健飲料或在未過濾或過濾后的中華被毛孢發(fā)酵液中添加適 量的添加劑后作為一種降血脂保健飲料。所述的中華被毛孢降血脂型保健飲料中未過濾或 過濾后的中華被毛孢發(fā)酵液的質(zhì)量百分含量可為10% -100%，從節(jié)約原料并兼顧功效等 角度考慮，優(yōu)選為10% -50%。
[0019] 為了使所述的中華被毛孢降血脂型保健飲料具備優(yōu)良的口感，可在未過濾或過濾 后的中華被毛孢發(fā)酵液中添加適量的添加劑。優(yōu)選，所述的中華被毛孢降血脂型保健飲料 由以下質(zhì)量百分比的組分組成：
[0020] 中華被毛孢發(fā)酵液或者
[0021] 過濾后的+寧ft毛孢發(fā)酵'識 10%-50%, 111 糖 5%-10%, 朽 1 蒙酸 0.1%-0.3%, 蘋果酸 0.02%-0.1%， 果膠 0.05%-0,25%， 羧 Φ 纖維素鈉（CMC) 0.05%-0.25%, 水余
[0022]
[0023] 其中，所述的果膠與羧甲基纖維素鈉的質(zhì)量比進(jìn)一步優(yōu)選為1 :1。
[0024] 步驟（1)中，所述的中藥復(fù)合水提液的制備可采用本領(lǐng)域常規(guī)的水提法，優(yōu)選采 用以下方法：按所述量稱取中藥材，粉碎，加2倍-10倍水浸泡0. 5h_lh，然后加熱煎熬，保 持溫和的沸騰狀態(tài)20min-60min，過濾收集提取液；重復(fù)提取1次-4次，合并濾液，得到中 藥復(fù)合水提液。所述的中藥材優(yōu)選粉碎至60目-120目的粉末，更方便提取有效成分。
[0025] 步驟⑵中，所述的甲魚油和香榧油可采用市售產(chǎn)品，也可以采用現(xiàn)有的方法制 備，例如二氧化碳超臨界萃取法：所述的甲魚油的制備方法包括：將甲魚脂肪粉末經(jīng)二氧 化碳超臨界萃取制得甲魚油，萃取條件優(yōu)選為：壓力24MPa-32MPa，溫度35°C -45°C，二氧化 碳流量l〇L/h-25L/h，萃取時(shí)間3h-6h。所述的香榧油的制備方法包括：將香榧子粉末經(jīng)二 氧化碳超臨界萃取制得香榧油，萃取條件優(yōu)選為：壓力l〇MP a_25MPa，溫度35°C -50°C，二氧 化碳流量1 〇L/h-20L/h，萃取時(shí)間4h-6h。所述的甲魚脂肪粉末和香榧子粉末優(yōu)選80目-120 目的粉末，更方便提取有效成分。
[0026] 所述的發(fā)酵培養(yǎng)基每1000ml由以生藥材量計(jì)為15g_20g的中藥復(fù)合水提液、 2g_6g的甲魚油、lg-3g的香榧油、20g葡萄糖和余量的水組成。
[0027] 步驟（3)中，所述的中華被毛孢菌種可采用任意一種中華被毛孢菌種，可采用市 售產(chǎn)品，例如中華被毛孢菌株Hirsutella sinensis,保藏編號：CGMCC No. 2126,該菌株已于 2007年8月6日在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心（簡稱CGMCC)注冊保 藏。
[0028] 所述的中華被毛孢菌種的接入方法為本領(lǐng)域的常規(guī)方法，包括：將在PDA斜面培 養(yǎng)基中活化后的中華被毛孢菌種，接入滅菌后的液體種子培養(yǎng)基中培養(yǎng)，得到培養(yǎng)好的種 子液，然后將培養(yǎng)好的種子液接入步驟（2)制得的發(fā)酵培養(yǎng)基中。進(jìn)一步優(yōu)選：將在PDA斜 面培養(yǎng)基中活化后的中華被毛孢菌種，取5mm 2-8mm2接入滅菌后的液體種子培養(yǎng)基中，配制 成 100ml-200ml，20°C -30°C (最優(yōu)選 25°C )，100r/min-150r/min(最優(yōu)選 120r/min)下?lián)u 床培養(yǎng)3天-5天，得到培養(yǎng)好的種子液，然后將培養(yǎng)好的種子液接入步驟（2)制得的發(fā)酵 培養(yǎng)基中。
[0029] 所述的PDA斜面培養(yǎng)基和液體種子培養(yǎng)基均采用本領(lǐng)域種子培養(yǎng)常用的培養(yǎng)基， 可采用市售產(chǎn)品。進(jìn)一步優(yōu)選，所述的PDA斜面培養(yǎng)基：馬鈴薯200g、葡萄糖20g和瓊脂 15g-20g，用水定容至1000毫升。進(jìn)一步優(yōu)選，所述的液體種子培養(yǎng)基：葡萄糖20g，酵母粉 5g，KH 2P04lg 和 MgS040. 5g，用水定容至 1000 毫升。
[0030] 所述的中華被毛孢菌種的菌種接種量優(yōu)選為5% -15%。液體發(fā)酵條件優(yōu)選：在溫 度20°C -30°C，轉(zhuǎn)速60r/min-150r/min條件下，搖床培養(yǎng)10天-20天。
[0031] 所述的菌種接種量指接入的菌種體積或接入的培養(yǎng)好的種子液體積與發(fā)酵培養(yǎng) 基體積之比的百分?jǐn)?shù)。
[0032] 所述的中華被毛孢降血脂型保健飲料可以為液體飲料，也可以制備成其它形式的 飲料如固體飲料。
[0033] 本發(fā)明所用的培養(yǎng)基均需滅菌后使用。
[0034] 本發(fā)明中，所述的中藥材符合《中華人民共和國藥典》的要求，可采用市售產(chǎn)品。
[0035] 所述的中華被毛孢降血脂型保健飲料的制備方法，包括步驟：將原料混合均勻，經(jīng) 過濾和殺菌，得到中華被毛孢降血脂型保健飲料。
[0036] 本發(fā)明的有益效果：
[0037] 本發(fā)明中華被毛孢降血脂型保健飲料，富含蟲草、甲魚油、香榧油及女貞子、桑葉、 絞股藍(lán)和淫羊藿等天然保健原料的有效成分，經(jīng)發(fā)酵后色澤淡黃、口感柔和、酸甜可口、清 涼爽口、營養(yǎng)豐富、清香淡雅，同時(shí)發(fā)酵過程中發(fā)生復(fù)雜的生物轉(zhuǎn)化，消除中藥毒副作用、增 加安全性、提高降血脂功效，產(chǎn)生多種對人體有益的活性成分，是一種新型的純天然降血脂 保健飲料，能夠顯著降低血清中的總膽固醇和甘油三酯含量，具有顯著的降血脂功能。
[0038] 本發(fā)明中華被毛孢降血脂型保健飲料的制備方法，操作簡單，易于工業(yè)化生產(chǎn)。

【具體實(shí)施方式】
[0039] 以下結(jié)合實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)描述，有助于本領(lǐng)域技術(shù)人員更全面地理 解本發(fā)明。
[0040] 菌種中華被毛孢（HirsutellaSinensis)，可在中國微生物菌種保藏管理委員會普 通微生物中心獲取，保藏編號：CGMCC No. 2126。
[0041] 所用的PDA斜面培養(yǎng)基：馬鈴薯200g、葡萄糖20g和瓊脂15g，用水定容至1000毫 升，自然pH,在121°C下滅菌20min。
[0042] 實(shí)施例1
[0043] 1.發(fā)酵培養(yǎng)
[0044] (1)搖瓶種子培養(yǎng)
[0045] 1L 液體種子培養(yǎng)基：葡萄糖 20g/L，酵母粉 5g/L，KH2P04 lg/L，MgS04 0· 5g/L，pH 自 然，在121°C下滅菌20min。
[0046] 培養(yǎng)方法：將在PDA斜面培養(yǎng)基中活化后的中華被毛孢菌種，取5mm2 (即黃豆大 ?。┙尤霚缇笠后w種子培養(yǎng)基中，500mL錐形瓶的裝瓶量為150mL，25°C，120r/min下?lián)u床 培養(yǎng)3d，得到培養(yǎng)好的種子液。
[0047] (2)中藥復(fù)合水提液制備
[0048] 稱取20g復(fù)合中藥材（已粉碎，過60目），由以下重量份的中草藥組成：女貞子10 份、桑葉40份、絞股藍(lán)20份和淫羊藿30份。加10倍水浸泡0. 5h，用電爐煎熬，調(diào)整適當(dāng)?shù)?加熱溫度，保持溫和的沸騰狀態(tài)，煮沸60min，過濾收集提取液。重復(fù)提取2次，濾液合并后 置于500mL容量瓶中，加水定容得以生藥材量計(jì)濃度為40mg/mL的中藥復(fù)合水提液。
[0049] (3)甲魚油和香榧油的制備
[0050] 首先將經(jīng)過篩選去除雜質(zhì)的甲魚脂肪在低溫冷凍干燥機(jī)內(nèi)，在-42°C條件下，冷凍 干燥24h，使其含水量達(dá)到8. 9 %，然后將香榧子在50°C的溫度下干燥至含水量為7. 7%;再 用粉碎機(jī)分別把干燥后的甲魚脂肪、香榧子粉碎成80目的粉末。將粉碎好的甲魚脂肪、香 榧子分別進(jìn)行二氧化碳超臨界萃取。其中甲魚脂肪的萃取條件是：萃取壓力為25Mpa，萃取 溫度為38°C，二氧化碳流量15L/h，萃取時(shí)間5. 5h ;香榧子粉末的萃取條件為：萃取壓力為 16Mpa，萃取溫度為38°C，二氧化碳流量12L/h，萃取時(shí)間6h。上述過程獲得油狀液體，分別 是甲魚油、香榧子油。
[0051] ⑷發(fā)酵培養(yǎng)
[0052] 液體發(fā)酵培養(yǎng)基：20g葡萄糖、2g甲魚油、3g香榧油、500mL40mg/mL中藥復(fù)合水提 液，pH自然，加水充分溶解并定容至1000mL，裝入發(fā)酵罐，121°C滅菌20min，冷卻后用于中 華被毛孢液體發(fā)酵。
[0053] 培養(yǎng)方法：將培養(yǎng)好的種子液以10%的接種量接入發(fā)酵罐中，在25°C，轉(zhuǎn)速60r/ min培養(yǎng)10d，得到中華被毛孢發(fā)酵液。
[0054] 2.飲料配制
[0055] (1)將上述中華被毛孢發(fā)酵液調(diào)整溫度至55°C，加殼聚糖澄清2h，殼聚糖與中華 被毛孢發(fā)酵液的重量百分比為〇. 15%，過濾，濾液即過濾后的中華被毛孢發(fā)酵液；
[0056] (2)將上述過濾后的中華被毛孢發(fā)酵液作為活性成分，添加白糖、檸檬酸、蘋果酸、 果膠、CMC和純凈水，攪拌均勻，經(jīng)過濾、殺菌，得到中華被毛孢降血脂型保健飲料。
[0057] 其中，中華被毛孢降血脂型保健飲料由以下質(zhì)量百分比的組分組成：
[0058] 過濾后的屮％被&孢發(fā)酵液 3(1% Ι? 糖 10% 檸梭酸 0.1% 蘋采酸 0.05% 果膠 0.25% CMC 0.25% 水 余l(xiāng)il: ο
[0059] 3.輔助降血脂實(shí)驗(yàn)
[0060] (1)實(shí)驗(yàn)動物分組
[0061] 小鼠24-28g，雌雄各半，適應(yīng)性生長1周后根據(jù)TC水平隨機(jī)分組，每組10只。通 過測定血清總膽固醇（TC)、甘油三酯（TG)水平判斷降血脂的效果。
[0062] (2)給藥方法及劑量
[0063] 高脂飼料為北京華阜康生物科技有限公司的KK鼠料，粗脂肪質(zhì)量百分含量 16. 15%，在給予高脂飼料的同時(shí)給予不同劑量的受試樣品（即中華被毛孢降血脂型保健 飲料）。實(shí)驗(yàn)設(shè)5個(gè)處理，即高、中、低3個(gè)劑量組（8. Oml/kg、16. 0ml/kg、24. Oml/kg)、基礎(chǔ) 對照組和高脂對照組，高脂對照組和基礎(chǔ)對照組均以蒸餾水灌胃，并分別給予高脂飼料和 基礎(chǔ)飼料（購自廣東省醫(yī)用動物場），與劑量組同步進(jìn)行。各劑量組每天灌胃1次中華被毛 孢降血脂型保健飲料，連續(xù)飼喂30天，在給予受試樣品的同時(shí)喂高脂飼料，自由進(jìn)食和飲 水。
[0064] (3)測定內(nèi)容及方法
[0065] 本實(shí)驗(yàn)為預(yù)防性給藥，在給予高脂飼料的同時(shí)給予不同劑量的受試樣品，于實(shí) 驗(yàn)結(jié)束禁食16小時(shí)，根據(jù)總膽固醇測定試劑盒（C0D-PAP法）及甘油三酯測定試劑盒 (GP0-PAP法）中說明書所述，分別測血清總膽固醇（TC)、甘油三酯（TG)水平。
[0066] 檢測結(jié)果見表1、表2。
[0067] 實(shí)施例2
[0068] 1.發(fā)酵培養(yǎng)
[0069] (1)搖瓶種子培養(yǎng)
[0070] 1L 液體種子培養(yǎng)基：葡萄糖 20g/L，酵母粉 5g/L，KH2P04 lg/L，MgS04 0· 5g/L，pH 自 然，在121°C下滅菌20min。
[0071] 培養(yǎng)方法：將在PDA斜面培養(yǎng)基中活化后的中華被毛孢菌種，取5mm2 (即黃豆大 小）接入滅菌后液體種子培養(yǎng)基中，500mL錐形瓶的裝瓶量為150mL，25°C，120r/min下?lián)u床 培養(yǎng)3d，得到培養(yǎng)好的種子液。
[0072] (2)中藥復(fù)合水提液制備
[0073] 稱取20g復(fù)合中藥材（已粉碎，過60目），由以下重量份的中草藥組成：女貞子20 份、桑葉30份、絞股藍(lán)30份和淫羊藿20份。加10倍水浸泡0. 5h，用電爐煎熬，調(diào)整適當(dāng)?shù)?加熱溫度，保持溫和的沸騰狀態(tài)，煮沸60min，過濾收集提取液。重復(fù)提取2次，濾液合并后 置于500mL容量瓶中，加水定容得以生藥材量計(jì)濃度為40mg/mL的中藥復(fù)合水提液。
[0074] (3)甲魚油和香榧油的制備
[0075] 首先將經(jīng)過篩選去除雜質(zhì)的甲魚脂肪在低溫冷凍干燥機(jī)內(nèi)，在-45°C條件下，冷凍 干燥24h，使其含水量達(dá)到8. 5 %，然后將香榧子在55°C的溫度下干燥至含水量為7. 5%;再 用粉碎機(jī)分別把干燥后的甲魚脂肪、香榧子粉碎成80目的粉末。將粉碎好的甲魚脂肪、香 榧子分別進(jìn)行二氧化碳超臨界萃取。其中甲魚脂肪的萃取條件是：萃取壓力為28Mpa，萃取 溫度為40°C，二氧化碳流量18L/h，萃取時(shí)間4. 5h ;香榧子粉末的萃取條件為：萃取壓力為 20Mpa，萃取溫度為42°C，二氧化碳流量16L/h，萃取時(shí)間5h。上述過程獲得油狀液體，分別 是甲魚油、香榧子油。
[0076] ⑷發(fā)酵培養(yǎng)
[0077] 液體發(fā)酵培養(yǎng)基：20g葡萄糖、4g甲魚油、2g香榧油、500mL40mg/mL中藥復(fù)合水提 液，pH自然，加水充分溶解并定容至1000mL，裝入發(fā)酵罐，121°C滅菌20min，冷卻后用于中 華被毛孢液體發(fā)酵。
[0078] 培養(yǎng)方法：將培養(yǎng)好的種子液以10%的接種量接入發(fā)酵罐中，在25°C，轉(zhuǎn)速120r/ min培養(yǎng)14d，得到中華被毛孢發(fā)酵液。
[0079] 2.飲料配制
[0080] (1)將上述中華被毛孢發(fā)酵液調(diào)整溫度至60°C，加殼聚糖澄清2h，殼聚糖與中華 被毛孢發(fā)酵液的重量百分比為〇. 5%，過濾，濾液即過濾后的中華被毛孢發(fā)酵液；
[0081] (2)將上述過濾后的中華被毛孢發(fā)酵液作為活性成分，添加白糖、檸檬酸、蘋果酸、 果膠、CMC和純凈水，攪拌均勻，經(jīng)過濾、殺菌，得到中華被毛孢降血脂型保健飲料。
[0082] 其中，中華被毛孢降血脂型保健飲料由以下質(zhì)量百分比的組分組成：
[0083] 過漶發(fā)酵灌 50% -- 糖 X% W-'樣酸 0.3% 蘋果酸 0.1% 果膠 0.15% CMC 0.15% 水 余.Φ-: c
[0084] 3.輔助降血脂實(shí)驗(yàn)同實(shí)施例1。檢測結(jié)果見表1、表2。
[0085] 實(shí)施例3
[0086] 1.發(fā)酵培養(yǎng)
[0087] (1)搖瓶種子培養(yǎng)
[0088] 1L 液體種子培養(yǎng)基：葡萄糖 20g/L，酵母粉 5g/L，KH2P04 lg/L，MgS04 0· 5g/L，pH 自 然，在121°C下滅菌20min。
[0089] 培養(yǎng)方法：將在PDA斜面培養(yǎng)基中活化后的中華被毛孢菌種，取5mm2 (即黃豆大 ?。┙尤霚缇笠后w種子培養(yǎng)基中，500mL錐形瓶的裝瓶量為150mL，25°C，120r/min下?lián)u床 培養(yǎng)3d，得到培養(yǎng)好的種子液。
[0090] (2)中藥復(fù)合水提液制備
[0091] 稱取20g復(fù)合中藥材（已粉碎，過60目），由以下重量份的中草藥組成：女貞子30 份、桑葉10份、絞股藍(lán)40份和淫羊藿20份。加10倍水浸泡0. 5h，用電爐煎熬，調(diào)整適當(dāng)?shù)?加熱溫度，保持溫和的沸騰狀態(tài)，煮沸60min，過濾收集提取液。重復(fù)提取2次，濾液合并后 置于500mL容量瓶中，加水定容得以生藥材量計(jì)濃度為40mg/mL的中藥復(fù)合水提液。
[0092] (3)甲魚油和香榧油的制備
[0093] 首先將經(jīng)過篩選去除雜質(zhì)的甲魚脂肪在低溫冷凍干燥機(jī)內(nèi)，在_50°C條件下，冷凍 干燥24h，使其含水量達(dá)到8. 1 %，然后將香榧子在60°C的溫度下干燥至含水量為7. 2%;再 用粉碎機(jī)分別把干燥后的甲魚脂肪、香榧子粉碎成120目的粉末。將粉碎好的甲魚脂肪、香 榧子分別進(jìn)行二氧化碳超臨界萃取。其中甲魚脂肪的萃取條件是：萃取壓力為30Mpa，萃取 溫度為43°C，二氧化碳流量22L/h，萃取時(shí)間3. 5h ;香榧子粉末的萃取條件為：萃取壓力為 25Mpa，萃取溫度為48°C，二氧化碳流量18L/h，萃取時(shí)間4h。上述過程獲得油狀液體，分別 是甲魚油、香榧子油。
[0094] (4)發(fā)酵培養(yǎng)
[0095] 液體發(fā)酵培養(yǎng)基：20g葡萄糖、6g甲魚油、lg香榧油、500mL40mg/mL中藥復(fù)合水提 液，pH自然，加水充分溶解并定容至1000mL，裝入發(fā)酵罐，121°C滅菌20min，冷卻后用于中 華被毛孢液體發(fā)酵。
[0096] 培養(yǎng)方法：將培養(yǎng)好的種子液以10%的接種量接入發(fā)酵罐中，在25°C，轉(zhuǎn)速80r/ min培養(yǎng)20d，得到中華被毛孢發(fā)酵液。
[0097] 2.飲料配制
[0098] (1)將上述中華被毛孢發(fā)酵液調(diào)整溫度至45°C，加殼聚糖澄清lh，殼聚糖與中華 被毛孢發(fā)酵液的重量百分比為〇. 8%，過濾，濾液即過濾后的中華被毛孢發(fā)酵液；
[0099] (2)將上述過濾后的中華被毛孢發(fā)酵液作為活性成分，添加白糖、檸檬酸、蘋果酸、 果膠、CMC和純凈水，攪拌均勻，經(jīng)過濾、殺菌，得到中華被毛孢降血脂型保健飲料。
[0100] 其中，中華被毛孢降血脂型保健飲料由以下質(zhì)量百分比的組分組成：
[0101] 過濾G的屮中被+THte發(fā)酵液 40% 111 糖 5% 檸像酸 0.2% 蘋果酸 0.08% 果膠 0.1% CMC 0.1% 水 余JS
[0102] 3.輔助降血脂實(shí)驗(yàn)同實(shí)施例1。檢測結(jié)果見表1、表2。
[0103] 實(shí)施例4
[0104] 1.發(fā)酵培養(yǎng)
[0105] (1)搖瓶種子培養(yǎng)
[0106] 1L 液體種子培養(yǎng)基：葡萄糖 20g/L，酵母粉 5g/L，KH2P04 lg/L，MgS04 0· 5g/L，pH 自 然，在121°C下滅菌20min。
[0107] 培養(yǎng)方法：將在PDA斜面培養(yǎng)基中活化后的中華被毛孢菌種，取5mm2 (即黃豆大 ?。┙尤霚缇笠后w種子培養(yǎng)基中，500mL錐形瓶的裝瓶量為100mL，20°C，100r/min下?lián)u床 培養(yǎng)5d，得到培養(yǎng)好的種子液。
[0108] (2)中藥復(fù)合水提液制備
[0109] 稱取15g復(fù)合中藥材（已粉碎，過120目），由以下重量份的中草藥組成：女貞子 40份、桑葉10份、絞股藍(lán)10份和淫羊藿40份。力卩2倍水浸泡lh，用電爐煎熬，調(diào)整適當(dāng)?shù)?加熱溫度，保持溫和的沸騰狀態(tài)，煮沸20min，過濾收集提取液。重復(fù)提取1次，濾液合并后 置于500mL容量瓶中，加水定容得以生藥材量計(jì)濃度為30mg/mL的中藥復(fù)合水提液。
[0110] (3)甲魚油和香榧油的制備
[0111] 首先將經(jīng)過篩選去除雜質(zhì)的甲魚脂肪在低溫冷凍干燥機(jī)內(nèi)，在-45°C條件下，冷凍 干燥24h，使其含水量達(dá)到8. 5 %，然后將香榧子在55 °C的溫度下干燥至含水量為7. 5 % ; 再用粉碎機(jī)分別把干燥后的甲魚脂肪、香榧子粉碎成80目的粉末。將粉碎好的甲魚脂肪、 香榧子分別進(jìn)行二氧化碳超臨界萃取。其中甲魚脂肪的萃取條件是：萃取壓力為24Mpa，萃 取溫度為35°C，二氧化碳流量10L/h，萃取時(shí)間6h ;香榧子粉末的萃取條件為：萃取壓力為 lOMpa，萃取溫度為35°C，二氧化碳流量10L/h，萃取時(shí)間5h。上述過程獲得油狀液體，分別 是甲魚油、香榧子油。
[0112] (4)發(fā)酵培養(yǎng)
[0113] 液體發(fā)酵培養(yǎng)基：20g葡萄糖、5g甲魚油、2g香榧油、500mL30mg/mL中藥復(fù)合水提 液，pH自然，加水充分溶解并定容至1000mL，裝入發(fā)酵罐，121°C滅菌20min，冷卻后用于中 華被毛孢液體發(fā)酵。
[0114] 培養(yǎng)方法：將培養(yǎng)好的種子液以5%的接種量接入發(fā)酵罐中，在20°C，轉(zhuǎn)速150r/ min培養(yǎng)12d，得到中華被毛孢發(fā)酵液。
[0115] 2.飲料配制
[0116] (1)將上述中華被毛孢發(fā)酵液調(diào)整溫度至40°C，加殼聚糖澄清5h，殼聚糖與中華 被毛孢發(fā)酵液的重量百分比為〇. 05%，過濾，濾液即過濾后的中華被毛孢發(fā)酵液；
[0117] (2)將上述過濾后的中華被毛孢發(fā)酵液作為活性成分，添加白糖、檸檬酸、蘋果酸、 果膠、CMC和純凈水，攪拌均勻，經(jīng)過濾、殺菌，得到中華被毛孢降血脂型保健飲料。
[0118] 其中，中華被毛孢降血脂型保健飲料由以下質(zhì)量百分比的組分組成：
[0119] 過濾〗,的屮τ:被〇：抱發(fā)酵液 ?ο% 1:._ 8% 檸橡幾 0.2% 蘋梁* 0.02% 果膠 0.05% CMC 0.05% 水余最=
[0120]
[0121] 3.輔助降血脂實(shí)驗(yàn)同實(shí)施例1。檢測結(jié)果見表3、表4。
[0122] 實(shí)施例5
[0123] 1.發(fā)酵培養(yǎng)
[0124] (1)搖瓶種子培養(yǎng)
[0125] 1L 液體種子培養(yǎng)基：葡萄糖 20g/L，酵母粉 5g/L，KH2P04 lg/L，MgS04 0· 5g/L，pH 自 然，在121°C下滅菌20min。
[0126] 培養(yǎng)方法：將在PDA斜面培養(yǎng)基中活化后的中華被毛孢菌種，取8mm2 (即黃豆大 ?。┙尤霚缇笠后w種子培養(yǎng)基中，500mL錐形瓶的裝瓶量為200mL，30°C，150r/min下?lián)u床 培養(yǎng)4d，得到培養(yǎng)好的種子液。
[0127] (2)中藥復(fù)合水提液制備
[0128] 稱取18g復(fù)合中藥材（已粉碎，過80目），由以下重量份的中草藥組成：女貞子30 份、桑葉30份、絞股藍(lán)30份和淫羊藿10份。加6倍水浸泡50min，用電爐煎熬，調(diào)整適當(dāng)?shù)?加熱溫度，保持溫和的沸騰狀態(tài)，煮沸40min，過濾收集提取液。重復(fù)提取4次，濾液合并后 置于500mL容量瓶中，加水定容得以生藥材量計(jì)濃度為36mg/mL的中藥復(fù)合水提液。
[0129] (3)甲魚油和香榧油的制備
[0130] 首先將經(jīng)過篩選去除雜質(zhì)的甲魚脂肪在低溫冷凍干燥機(jī)內(nèi)，在_45°C條件下，冷凍 干燥24h，使其含水量達(dá)到8. 5 %，然后將香榧子在55 °C的溫度下干燥至含水量為7. 5 % ; 再用粉碎機(jī)分別把干燥后的甲魚脂肪、香榧子粉碎成80目的粉末。將粉碎好的甲魚脂肪、 香榧子分別進(jìn)行二氧化碳超臨界萃取。其中甲魚脂肪的萃取條件是：萃取壓力為32Mpa，萃 取溫度為45°C，二氧化碳流量25L/h，萃取時(shí)間3h ;香榧子粉末的萃取條件為：萃取壓力為 18Mpa，萃取溫度為50°C，二氧化碳流量20L/h，萃取時(shí)間4h。上述過程獲得油狀液體，分別 是甲魚油、香榧子油。
[0131] (4)發(fā)酵培養(yǎng)
[0132] 液體發(fā)酵培養(yǎng)基：20g葡萄糖、5g甲魚油、2g香榧油、500mL36mg/mL中藥復(fù)合水提 液，pH自然，加水充分溶解并定容至1000mL，裝入發(fā)酵罐，121°C滅菌20min，冷卻后用于中 華被毛孢液體發(fā)酵。
[0133] 培養(yǎng)方法：將培養(yǎng)好的種子液以15%的接種量接入發(fā)酵罐中，在30°C，轉(zhuǎn)速100r/ min培養(yǎng)15d，得到中華被毛孢發(fā)酵液。
[0134] 2.飲料配制
[0135] (1)將上述中華被毛孢發(fā)酵液調(diào)整溫度至50°C，加殼聚糖澄清4h，殼聚糖與中華 被毛孢發(fā)酵液的重量百分比為1. 5%，過濾，濾液即過濾后的中華被毛孢發(fā)酵液；
[0136] (2)將上述過濾后的中華被毛孢發(fā)酵液作為活性成分，添加白糖、檸檬酸、蘋果酸、 果膠、CMC和純凈水，攪拌均勻，經(jīng)過濾、殺菌，得到中華被毛孢降血脂型保健飲料。
[0137] 其中，中華被毛孢降血脂型保健飲料由以下質(zhì)量百分比的組分組成：
[0138] 過濾A7的屮平波毛孢發(fā)醇液 20% Γ_ (、％ 檸檬酸 0.1% 蘋果 ft 0.05% 果膠 0.2% CMC 0.2% 水 余。
[0139] 3.輔助降血脂實(shí)驗(yàn)同實(shí)施例1。檢測結(jié)果見表3、表4。
[0140] 對照例1
[0141] 1.發(fā)酵培養(yǎng)
[0142] (1)搖瓶種子培養(yǎng)
[0143] 1L 液體種子培養(yǎng)基：葡萄糖 20g/L，酵母粉 5g/L，KH2P04 lg/L，MgS04 0. 5g/L，pH 自 然，在121°C下滅菌20min。
[0144] 培養(yǎng)方法：將在PDA斜面培養(yǎng)基中活化后的中華被毛孢菌種，取5mm2 (即黃豆大 ?。┙尤霚缇笠后w種子培養(yǎng)基中，500mL錐形瓶的裝瓶量為150mL，25°C，120r/min下?lián)u床 培養(yǎng)3d，得到培養(yǎng)好的種子液。
[0145] ⑵發(fā)酵培養(yǎng)
[0146] 液體發(fā)酵培養(yǎng)基：20g葡萄糖，pH自然，加水充分溶解并定容至lOOOmL，裝入發(fā)酵 罐，121°C滅菌20min，冷卻后用于中華被毛孢液體發(fā)酵。
[0147] 培養(yǎng)方法：將培養(yǎng)好的種子液以10%的接種量接入發(fā)酵罐中，在25°C，轉(zhuǎn)速120r/ min培養(yǎng)14d，得到中華被毛孢發(fā)酵液。
[0148] 2.飲料配制
[0149] (1)將上述中華被毛孢發(fā)酵液調(diào)整溫度至60°C，加殼聚糖澄清2h，殼聚糖與中華 被毛孢發(fā)酵液的重量百分比為〇. 5%，過濾，濾液即過濾后的中華被毛孢發(fā)酵液；
[0150] (2)將上述過濾后的中華被毛孢發(fā)酵液作為活性成分，添加白糖、檸檬酸、蘋果酸、 果膠、CMC和純凈水，攪拌均勻，經(jīng)過濾、殺菌，得到中華被毛孢降血脂型保健飲料。
[0151] 其中，中華被毛孢降血脂型保健飲料由以下質(zhì)量百分比的組分組成：
[0152] 過濾U的中中波毛孢發(fā)酵洩 50% Ci 糖 8% 檸椽酸 0.3% 蘋果酸 0.1% 果膠 0.15% CMC 0.15% 水 余
[0153] 3.輔助降血脂實(shí)驗(yàn)同實(shí)施例1。檢測結(jié)果見表3、表4。
[0154] 表1中華被毛孢降血脂型保健飲料對小鼠總膽固醇和甘油三酯的影響（X土S，n = 10)
[0155]

【權(quán)利要求】
1. 一種中華被毛孢降血脂型保健飲料，其特征在于，所述的飲料中活性成分為中華被 毛孢發(fā)酵液或過濾后的中華被毛孢發(fā)酵液；所述的中華被毛孢發(fā)酵液的制備方法包括： (1) 將由女貞子1〇_40重量份、桑葉10-40重量份、絞股藍(lán)10-40重量份和淫羊藿10-40 重量份組成的中藥材經(jīng)水溶液提取，得到中藥復(fù)合水提液； (2) 采用步驟（1)制備的中藥復(fù)合水提液、甲魚油、香榧油、葡萄糖和水配制發(fā)酵培養(yǎng) 基； (3) 將中華被毛孢菌種接入步驟（2)制得的發(fā)酵培養(yǎng)基中，經(jīng)液體發(fā)酵，得到中華被毛 孢發(fā)酵液。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的中華被毛孢降血脂型保健飲料，其特征在于，所述的中藥復(fù) 合水提液的制備方法包括：按所述量稱取中藥材，粉碎，加2倍-10倍水浸泡0. 5h-lh，然后 加熱煎熬，保持溫和的沸騰狀態(tài)20min-60min，過濾收集提取液；重復(fù)提取1次-4次，合并 濾液，得到中藥復(fù)合水提液。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的中華被毛孢降血脂型保健飲料，其特征在于，所述的發(fā)酵培 養(yǎng)基每lOOOmL由以生藥材量計(jì)為15g-20g的中藥復(fù)合水提液、2g-6g甲魚油、lg-3g香榧 油、20g葡萄糖和余量的水組成。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的中華被毛孢降血脂型保健飲料，其特征在于，所述的中華被 毛孢菌種的接入方法包括：將在PDA斜面培養(yǎng)基中活化后的中華被毛孢菌種，接入滅菌后 的液體種子培養(yǎng)基中培養(yǎng)，得到培養(yǎng)好的種子液，然后將培養(yǎng)好的種子液接入步驟（2)制 得的發(fā)酵培養(yǎng)基中。
5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的中華被毛孢降血脂型保健飲料，其特征在于，所述的中華被 毛孢菌種的接入方法包括：將在PDA斜面培養(yǎng)基中活化后的中華被毛孢菌種，取5mm 2-8mm2 接入滅菌后的液體種子培養(yǎng)基中，配制成100ml-200ml，20°C -30°C，100r/min-150r/min下 搖床培養(yǎng)3天-5天，得到培養(yǎng)好的種子液，然后將培養(yǎng)好的種子液接入步驟（2)制得的發(fā) 酵培養(yǎng)基中。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的中華被毛孢降血脂型保健飲料，其特征在于，所述的中華被 毛孢菌種的菌種接種量為5% -15%。
7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的中華被毛孢降血脂型保健飲料，其特征在于，所述的液體發(fā) 酵條件：在溫度20°C -30°C，轉(zhuǎn)速60r/min-150r/min條件下，搖床培養(yǎng)10天-20天。
8. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的中華被毛孢降血脂型保健飲料，其特征在于，所述的過濾后 的中華被毛孢發(fā)酵液的制備方法包括：將中華被毛孢發(fā)酵液調(diào)整溫度至40°C -60°C，加占 中華被毛孢發(fā)酵液重量〇. 05% -1. 5%的殼聚糖澄清lh-5h后過濾，得到過濾后的中華被毛 孢發(fā)酵液。
9. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的中華被毛孢降血脂型保健飲料，其特征在于，所述的飲料中 還含有添加劑，由以下質(zhì)量百分比的組分組成飲料： 中華被毛孢發(fā)酵液或者 過濾.G的中％被€孢發(fā)酵液 10%-50%； III 糖 5%-1?%; 檸樣酸 0.1%-0.3%： 蘋果酸 0.02%-0.1%; 果膠 0.05%-0.25%; 羧φ基纖維素輸 0.05%-0.25%； 水 余Sa
10.根據(jù)權(quán)利要求1-9任一項(xiàng)所述的中華被毛孢降血脂型保健飲料的制備方法，其特 征在于，包括步驟：將原料混合均勻，經(jīng)過濾和殺菌，得到中華被毛孢降血脂型保健飲料。
【文檔編號】A23L1/29GK104055184SQ201410298666
【公開日】2014年9月24日 申請日期:2014年6月27日 優(yōu)先權(quán)日:2014年6月27日
【發(fā)明者】賀亮, 程俊文, 李肖娟, 金李潔, 方良珍, 李其 申請人:杭州雪域生物技術(shù)有限公司