人源抗h7n9禽流感病毒中和性抗體h8、其制備方法及應(yīng)用的制作方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明提供一種利用噬菌體表面展示技術(shù)篩選獲得的人源抗H7N9禽流感病毒中和性抗體H8，其輕鏈和重鏈可變區(qū)的氨基酸序列分別如SEQ?ID?No.1和SEQ?ID?No.2所示。該抗體能夠特異性識(shí)別H7N9病毒顆?？乖?，可與H7N9病毒發(fā)生顯著的酶聯(lián)免疫反應(yīng)且具有抗H7N9病毒感染的中和活性功能。此外，可將本發(fā)明的抗體制成預(yù)防和治療H7N9禽流感病毒的特異性抗體藥物，從而在臨床中用于預(yù)防和治療由H7N9病毒引起的急性呼吸道傳染病。
【專(zhuān)利說(shuō)明】人源抗H7N9禽流感病毒中和性抗體H8、其制備方法及應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及基因工程及噬菌體表面展示技術(shù)，具體地說(shuō)，涉及人源抗H7N9禽流感病毒中和性抗體H8、其制備方法及應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]H7N9禽流感是由H7N9禽流感病毒引起的急性呼吸道傳染病。自2013年2月以來(lái)，上海市、安徽省、江蘇省先后發(fā)生不明原因重癥肺炎病例?；颊咭话惚憩F(xiàn)為流感樣癥狀，如發(fā)熱，咳嗽，少痰，可伴有頭痛、肌肉酸痛和全身不適。重癥患者病情發(fā)展迅速，表現(xiàn)為重癥肺炎，體溫大多持續(xù)在39°C以上，出現(xiàn)呼吸困難，可伴有咯血痰；可快速發(fā)展出現(xiàn)急性呼吸窘迫綜合征、縱隔氣腫、膿毒癥、休克、意識(shí)障礙及急性腎損傷等，死亡率較高。
[0003]由H7N9病毒引起的急性呼吸道傳染病目前沒(méi)有相應(yīng)的疫苗和特異性藥物，因此制備高效、價(jià)廉、副反應(yīng)小的被動(dòng)免疫制劑成為研究的熱點(diǎn)。利用含有特異性抗體的人源或動(dòng)物血清免疫球蛋白來(lái)預(yù)防和治療傳染病由來(lái)已久。單克隆抗體的體外抗病毒中和活性和體內(nèi)保護(hù)機(jī)體抵抗病毒攻擊已獲得許多實(shí)驗(yàn)證明，如漢坦病毒、麻疹病毒、RSV病毒、狂犬病毒等中和性單克隆抗體可以在體內(nèi)100%保護(hù)動(dòng)物免受病毒攻擊。
[0004]免疫球蛋白(Immunoglobulin, Ig)作為抗體成分主要來(lái)自捐獻(xiàn)者(恢復(fù)期病人)免疫血清，從獲得陽(yáng)性血清到通過(guò)安全性檢測(cè)耗時(shí)較長(zhǎng)，且需投入大量的人力和財(cái)力，這就使其大量制備受到限制，同時(shí)由于抗體主要來(lái)源于血清，因此容易發(fā)生血源性傳播疾病的感染。而使用人源基因工程產(chǎn)品替代血制品則可克服這些缺陷，隨著人源基因工程抗體研究的不斷深入，給這一 領(lǐng)域的生物制品發(fā)展帶來(lái)了新的希望和廣闊前景。
[0005]90年代初興起的噬菌體抗體基因庫(kù)技術(shù)(Barbas, C.F.等，1991)和整個(gè)基因工程抗體技術(shù)研究領(lǐng)域的發(fā)展，極大促進(jìn)了人源或基因工程抗體的開(kāi)發(fā)研究，并已由基礎(chǔ)研究階段步入實(shí)質(zhì)性應(yīng)用研究和開(kāi)發(fā)階段。人源抗病毒基因工程抗體，尤其是人源全抗體的研究成功，給各種病毒性傳染病的特異性預(yù)防和治療開(kāi)辟了新思路，并在抗病毒感染生物醫(yī)藥領(lǐng)域中逐漸開(kāi)發(fā)出一類(lèi)新的抗病毒藥物。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明的目的是提供一種人源抗H7N9禽流感病毒中和性抗體H8、其制備方法及應(yīng)用。
[0007]為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明目的，本發(fā)明的一種人源抗H7N9禽流感病毒中和性抗體HS或其活性片段，其輕鏈高變區(qū)⑶R1、⑶R2和⑶R3以及重鏈高變區(qū)⑶R1、⑶R2和⑶R3的氨基酸序列如表1所示:
[0008]表1輕鏈和重鏈高變區(qū)的氨基酸序列
[0009]
【權(quán)利要求】
1.人源抗H7N9禽流感病毒中和性抗體HS或其活性片段，其特征在于，其輕鏈及重鏈高變區(qū)⑶R1、⑶R2和⑶R3的氨基酸序列如下表所示:
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的中和性抗體HS，其特征在于， i)其輕鏈可變區(qū)的氨基酸序列如SEQ ID N0.1所示，或該序列經(jīng)替換、缺失或添加一個(gè)或幾個(gè)氨基酸形成的具有同等功能的氨基酸序列；以及 ?)其重鏈可變區(qū)的氨基酸序列如SEQ ID N0.2所示，或該序列經(jīng)替換、缺失或添加一個(gè)或幾個(gè)氨基酸形成的具有同等功能的氨基酸序列。
3.編碼權(quán)利要求2所述中和性抗體HS的基因。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的基因，其特征在于，編碼輕鏈可變區(qū)和重鏈可變區(qū)的核苷酸序列分別如SEQ ID N0.3和SEQ ID N0.4所示。
5.含有權(quán)利要求3或4所述基因的載體。
6.含有權(quán)利要求3或4所述基因的宿主細(xì)胞。
7.權(quán)利要求1所述中和性抗體HS或其活性片段經(jīng)改造得到的單鏈抗體ScFv或全抗體免疫球蛋白IgG。
8.一種制備人源抗H7N9禽流感病毒中和性抗體方法，其特征在于，利用噬菌體表面展示技術(shù)，采集H7N9禽流感病人恢復(fù)期外周血淋巴細(xì)胞，通過(guò)基因工程方法構(gòu)建了人源抗H7N9禽流感病毒基因工程抗體文庫(kù)，并篩選獲得特異性抗H7N9禽流感病毒的基因工程抗體Fab段。
9.權(quán)利要求1或2所述中和性抗體H8或其活性片段在制備預(yù)防或治療由H7N9禽流感病毒引起的疾病的藥物中的應(yīng)用。
10.含有權(quán)利要求1或2所述中和性抗體HS或其活性片段的藥物或檢測(cè)試劑。
【文檔編號(hào)】C12N15/13GK104031147SQ201410272745
【公開(kāi)日】2014年9月10日 申請(qǐng)日期:2014年6月18日 優(yōu)先權(quán)日:2013年8月2日
【發(fā)明者】陳哲, 金奇 申請(qǐng)人:中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院病原生物學(xué)研究所