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一種抗真菌肽及其在抑制黃曲霉毒素產(chǎn)生中的應(yīng)用的制作方法

文檔序號(hào):478286閱讀:452來源:國(guó)知局
一種抗真菌肽及其在抑制黃曲霉毒素產(chǎn)生中的應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提供一種抗真菌肽及其在抑制黃曲霉毒素產(chǎn)生中的應(yīng)用。所述抗真菌肽的氨基酸序列為:Ala-Asp-Leu-Pro-Val-Lys-Ser-Gly-Asp-Thr-Pro-Glu。本發(fā)明的抗真菌肽能夠有效抑制黃曲霉和寄生曲霉的生長(zhǎng)以及黃曲霉毒素的產(chǎn)生,抑制效果良好并且持久,適合進(jìn)行大規(guī)模生產(chǎn)和應(yīng)用。
【專利說明】一種抗真菌肽及其在抑制黃曲霉毒素產(chǎn)生中的應(yīng)用

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種多肽,特別是涉及一種抗真菌肽及其在抑制黃曲霉毒素產(chǎn)生中的 應(yīng)用。

【背景技術(shù)】
[0002] 黃曲霉毒素(Aflatoxins)是一類化學(xué)結(jié)構(gòu)類似的化合物,主要由黃曲霉 (Aspergillus flavus)和寄生曲霉(A. parasiticus))產(chǎn)生,目前已分離鑒定出B1、B2、G1、 G2、M1、M2等十幾種黃曲霉毒素,其基本結(jié)構(gòu)均為二氫呋喃環(huán)和香豆素。黃曲霉毒素是一種 毒性極強(qiáng)的劇毒物質(zhì),其危害性主要在于對(duì)人及動(dòng)物肝臟組織有破壞作用,嚴(yán)重時(shí)可導(dǎo)致 肝癌甚至死亡。
[0003] 黃曲霉和寄生曲霉在空氣和土壤中廣泛存在,其在侵染花生、玉米等糧食作物后, 會(huì)在這些作物貯藏過程中產(chǎn)生黃曲霉毒素。在天然污染的食品中以黃曲霉毒素 B1最為多 見,其毒性和致癌性也最強(qiáng)。由于黃曲霉毒素污染帶來的巨大經(jīng)濟(jì)損失和健康危害,因此國(guó) 內(nèi)外研究人員一直在尋找抑制黃曲霉毒素產(chǎn)生菌生長(zhǎng)和去除黃曲霉毒素的方法。
[0004] 目前,用于抑制黃曲霉毒素產(chǎn)生菌生長(zhǎng)和去除黃曲霉毒素的方法主要包括物理去 除法、化學(xué)去除法和生物去除法。物理去除法直接對(duì)黃曲霉毒素進(jìn)行去除或者使黃曲霉毒 素分解并轉(zhuǎn)變?yōu)闊o毒的中間產(chǎn)物,其包括萃取法、吸附法、熱處理法、輻射法等;化學(xué)去除法 主要是使用化學(xué)試劑去除黃曲霉毒素或抑制黃曲霉的生長(zhǎng),從而減少毒素的合成,常用的 化學(xué)試劑包括堿、氧化劑等;生物去除法主要是利用拮抗微生物及其代謝產(chǎn)物或者植物源 的抗菌物質(zhì)來抑制黃曲霉毒素的合成,許多研究已經(jīng)發(fā)現(xiàn)多種微生物例如細(xì)菌、放線菌、霉 菌、酵母菌和藻類都能夠抑制黃曲霉毒素的合成或降解黃曲霉毒素。
[0005] 物理去除法和化學(xué)去除法在抑制曲霉生長(zhǎng)和毒素合成方面雖具有一定效果,但是 不可避免地會(huì)破壞產(chǎn)品的營(yíng)養(yǎng)成分、降低產(chǎn)品的品質(zhì),同時(shí)還可能產(chǎn)生副產(chǎn)物和化學(xué)試劑 殘留,從而造成一定危害;而生物去除法目前大多處于實(shí)驗(yàn)室研究階段,其較為費(fèi)時(shí)費(fèi)力, 并且對(duì)毒素的抑制效果有限,不適合進(jìn)行大規(guī)模的生產(chǎn)和應(yīng)用。
[0006] 除了上述方法之外,國(guó)內(nèi)外一些研究人員還利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)培植了一些抗黃曲霉 的農(nóng)作物,如抗黃曲霉花生、抗黃曲霉玉米等,在此基礎(chǔ)上結(jié)合物理、化學(xué)、生物去除毒素的 方法,從而對(duì)黃曲霉毒素進(jìn)行有效地控制,然而轉(zhuǎn)基因植物的安全性尚無定論,并且也不被 認(rèn)可。因此,急需一種高效且適合大規(guī)模生產(chǎn)和應(yīng)用的抑制黃曲霉毒素的方法。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 本發(fā)明提供一種抗真菌肽及其在抑制黃曲霉毒素產(chǎn)生中的應(yīng)用,用于解決現(xiàn)有技 術(shù)對(duì)黃曲霉毒素的抑制效果有限、不適合用于大規(guī)模生產(chǎn)和應(yīng)用等技術(shù)缺陷。
[0008] 本發(fā)明提供一種抗真菌肽,氨基酸序列為:Ala-Asp-Leu-Pro-Val-Lys-Ser-Gly-A sp-Thr-Pro-Glu(SEQ ID NO:1) 〇
[0009] 本發(fā)明還提供一種上述抗真菌肽在抑制黃曲霉毒素產(chǎn)生中的應(yīng)用。
[0010] 具體地,所述黃曲霉毒素可以由黃曲霉毒素產(chǎn)生菌所產(chǎn)生,例如可以由黃曲霉和 寄生曲霉中的至少一種產(chǎn)生。
[0011] 本發(fā)明的抗真菌肽的應(yīng)用方式靈活多樣,既可以直接噴灑在易產(chǎn)生黃曲霉毒素的 物質(zhì)上,從而在其貯藏期間高效且持久地抑制黃曲霉毒素的產(chǎn)生;此外,還可以在作物栽培 期間噴灑在作物的葉片或用于栽培所述作物的土壤中,從而在收獲作物后在其貯藏期間抑 制作物中的黃曲霉毒素的產(chǎn)生。
[0012] 本發(fā)明還提供一種抑制黃曲霉毒素產(chǎn)生的方法,對(duì)易產(chǎn)生黃曲霉毒素的物質(zhì)施予 上述的抗真菌肽。
[0013] 進(jìn)一步地,將所述抗真菌肽溶于水,配制成質(zhì)量百分比濃度為0. 01?0. 05%的抗 真菌肽溶液后,噴灑在所述易產(chǎn)生黃曲霉毒素的物質(zhì)上。
[0014] 進(jìn)一步地,所述易產(chǎn)生黃曲霉毒素的物質(zhì)為易感染黃曲霉和/或寄生曲霉的物 質(zhì),例如大米、小麥、玉米、花生、大豆、核桃、棉籽等,特別是玉米和花生;其包括但不限于糧 食、食品、飼料或中藥;并且控制噴灑所述抗真菌肽溶液后的所述易產(chǎn)生黃曲霉毒素的物質(zhì) 中的水分含量不大于25 %。
[0015] 本發(fā)明的抗真菌肽對(duì)黃曲霉毒素的抑制效果好,因此在施用時(shí)所需的濃度相對(duì) 較低;另一方面,濃度太低時(shí)會(huì)可能會(huì)導(dǎo)致噴灑量加大,從而使噴灑后的物質(zhì)中水分含量過 大,這樣容易導(dǎo)致產(chǎn)黃曲霉毒素的霉菌(例如黃曲霉和寄生曲霉)的生長(zhǎng),從而帶來不利影 響,因此較佳的濃度范圍為0. 01?0. 05%。
[0016] 進(jìn)一步地,所述糧食為大米、小麥或玉米,所述食品為花生。
[0017] 本發(fā)明還提供一種抑制黃曲霉毒素產(chǎn)生的方法,在作物栽培期間對(duì)所述作物或用 于栽培所述作物的土壤施予上述的抗真菌肽。
[0018] 特別是,在作物易于感染黃曲霉或寄生曲霉的期間進(jìn)行所述施予,例如,在花生栽 培期間,可以在其收獲前的30-50天施予所述抗真菌肽。并且,在進(jìn)行所述施予時(shí),可以間 隔10-30天進(jìn)行。此外,從抑制效果而言,間隔時(shí)間可以為10天;從成本角度而言,間隔時(shí) 間可以為20天。
[0019] 進(jìn)一步地,將所述抗真菌肽溶于水,配制成質(zhì)量百分比濃度為0. 01?0. 05%的抗 真菌肽溶液后,噴灑在所述作物的葉片表面或用于栽培所述作物的土壤中。
[0020] 進(jìn)一步地,所述抗真菌肽溶液的用量為8?12L/每畝,例如10L/每畝。
[0021] 本發(fā)明提供的抗真菌肽結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、制備方便,且容易進(jìn)行大規(guī)模生產(chǎn),該抗真菌肽 能夠有效抑制黃曲霉和寄生曲霉的生長(zhǎng)及黃曲霉毒素的產(chǎn)生,抑制效果良好且持久。此外, 本發(fā)明提供的抗真菌肽在應(yīng)用于抑制黃曲霉毒素產(chǎn)生時(shí),應(yīng)用方式簡(jiǎn)單且多樣化,并且應(yīng) 用成本低廉,特別適合用于大規(guī)模應(yīng)用。

【具體實(shí)施方式】
[0022] 為使本發(fā)明的目的、技術(shù)方案和優(yōu)點(diǎn)更加清楚,下面將結(jié)合本發(fā)明的實(shí)施例,對(duì)本 發(fā)明實(shí)施例中的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完整地描述,顯然,所描述的實(shí)施例是本發(fā)明一部分實(shí) 施例,而不是全部的實(shí)施例?;诒景l(fā)明中的實(shí)施例,本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒有做出創(chuàng)造 性勞動(dòng)前提下所獲得的所有其他實(shí)施例,都屬于本發(fā)明保護(hù)的范圍。
[0023] 實(shí)施例1
[0024] 抗真菌肽的制備:
[0025] 采用ABI433A全自動(dòng)多肽合成儀合成氨基酸序列為Ala-Asp-Leu-Pro-Val-Lys-S er-Gly-Asp-Thr-Pro-Glu的抗真菌肽,通過HPLC反相柱層析脫鹽后,用Tricine-SDS-PAGE 法測(cè)定該抗真菌肽的分子量為1380Da。
[0026] 實(shí)施例2
[0027] 將實(shí)施例1制備的抗真菌肽溶解于無菌水中,分別配制成質(zhì)量百分比濃度為 0. 01 %和0. 03%的抗真菌肽溶液,進(jìn)行抑菌試驗(yàn)。
[0028] 將經(jīng)培養(yǎng)的黃曲霉和寄生曲霉分別配制成孢子濃度均為105CFU · ml/1左右的孢 子懸液,分別加入到裝有滅菌的固體培養(yǎng)基(例如PDA培養(yǎng)基)的平皿中,每皿加入20mL 左右,隨后在各平皿中放置滅菌的牛津杯,向各平皿的牛津杯中分別加入100 μ L上述濃度 分別為〇. 01%和〇. 03%的抗真菌肽溶液,作為試驗(yàn)例2-1和2-2,同時(shí)以無菌水作對(duì)照例 2-1。
[0029] 將各平皿置于28°C恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)72h后,測(cè)量抑菌圈直徑,其中每個(gè)試驗(yàn)重 復(fù)3次,取平均值,結(jié)果見表1。
[0030] 表1抗真菌肽的抑菌試驗(yàn)
[0031]

【權(quán)利要求】
1. 一種抗真菌肽,其特征在于,氨基酸序列為:Ala-Asp-Leu-Pro-Val-Lys-Ser-Gly-A sp-Thr-Pro-Glu 〇
2. 權(quán)利要求1所述的抗真菌肽在抑制黃曲霉毒素產(chǎn)生中的應(yīng)用。
3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的應(yīng)用,其特征在于,所述黃曲霉毒素由黃曲霉和寄生曲霉中 的至少一種產(chǎn)生。
4. 一種抑制黃曲霉毒素產(chǎn)生的方法,其特征在于,對(duì)易產(chǎn)生黃曲霉毒素的物質(zhì)施予權(quán) 利要求1所述的抗真菌肽。
5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法,其特征在于,將所述抗真菌肽溶于水,配制成質(zhì)量百分 比濃度為0. 01?0. 05%的抗真菌肽溶液后,噴灑在所述易產(chǎn)生黃曲霉毒素的物質(zhì)上。
6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法,其特征在于,所述易產(chǎn)生黃曲霉毒素的物質(zhì)為糧食、食 品、飼料或中藥,并且控制噴灑所述抗真菌肽溶液后的所述易產(chǎn)生黃曲霉毒素的物質(zhì)中的 水分含量不大于25%。
7. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法,其特征在于,所述糧食為大米、小麥或玉米,所述食品 為花生。
8. -種抑制黃曲霉毒素產(chǎn)生的方法,其特征在于,在作物栽培期間對(duì)所述作物或用于 栽培所述作物的土壤施予權(quán)利要求1所述的抗真菌肽。
9. 根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法,其特征在于,將所述抗真菌肽溶于水,配制成質(zhì)量百分 比濃度為0. 01?0. 05%的抗真菌肽溶液后,噴灑在所述作物的葉片表面或用于栽培所述 作物的土壤中。
10. 根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法,其特征在于,所述抗真菌肽溶液的用量為8?12L/每 畝。
【文檔編號(hào)】A23L3/3544GK104059129SQ201410244941
【公開日】2014年9月24日 申請(qǐng)日期:2014年6月4日 優(yōu)先權(quán)日:2014年6月4日
【發(fā)明者】于贊, 祝傳斌, 牛旼 申請(qǐng)人:北京源生元科技發(fā)展有限公司
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