一種穩(wěn)定性強的同型半胱氨酸檢測試劑盒的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種穩(wěn)定性強的同型半胱氨酸檢測試劑盒，包括試劑1和試劑2，本發(fā)明通過對試劑1和試劑2的進一步的改進，使其能夠有效的提高同型半胱氨酸檢測試劑盒的穩(wěn)定性，而對試劑的準確度和分析靈敏度沒有影響。因此，本發(fā)明提供的穩(wěn)定性強的同型半胱氨酸檢測試劑盒有利于在市場中進一步的推廣使用。
【專利說明】-種穩(wěn)定性強的同型半胱氨酸檢測試劑盒

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及臨床體外檢測試劑【技術(shù)領(lǐng)域】，特別涉及一種同型半胱氨酸檢測試劑 盒。

【背景技術(shù)】
[0002] 同型半胱氨酸（又稱高半胱氨酸，homocysteine, Hey)是蛋氨酸代謝過程中的中 間產(chǎn)物。同型半胱氨酸在體內(nèi)的分解代謝，受兩方面因素影響最大。一是與先天遺傳有關(guān) 的某些生物酶的缺乏，另一個就是體內(nèi)葉酸、維生素 B6、維生素 B12等營養(yǎng)元素的缺乏。這 兩種缺乏都會影響同型半胱氨酸轉(zhuǎn)化為其他物質(zhì)，導致高同型半胱氨酸血癥。Hey的測定， 對心血管疾病、尿毒癥、動脈粥樣硬化、糖尿病、老年癡呆癥等疾病的判定中，有重要的臨床 意義。
[0003] 血漿中的同型半胱氨酸約70%與白蛋白結(jié)合，為結(jié)合型。其余的游離型則主要以 二硫同型半胱氨酸和以二硫鍵結(jié)合的同型半胱氨酸-半胱氨酸化合物形式存在，只有少量 以還原型同型半胱氨酸存在于血漿中。我們通常所指的是總的同型半胱氨酸濃度。
[0004] 影響同型半胱氨酸水平最主要的因素莫過于遺傳于食物營養(yǎng)缺乏。遺傳因素主要 包括N5甲基四氫葉酸轉(zhuǎn)甲基酶及胱硫醚-β-合成酶的基因發(fā)生突變，引起酶的活性降低， 從而導致高同型半胱氨酸血癥。現(xiàn)在已經(jīng)證明Ν5甲基四氫葉酸轉(zhuǎn)甲基酶的缺陷，在體內(nèi)葉 酸缺乏的情況下，可以引起同型半胱氨酸濃度的明顯升高。而根據(jù)Mudd等的研究，由遺傳 缺陷引起的胱硫醚-β-合成酶的活性降低，可導致血漿中同型半胱氨酸的濃度超過正常 值的十倍左右。
[0005] 對近1200名老人的研究表明，體內(nèi)同型半胱氨酸的水平與飲食有著密切的關(guān)系， 血漿中維生素 Β6、Β12和葉酸的濃度越低，其同型半胱氨酸的濃度越高。由于動物蛋白中蛋 氨酸的含量比植物蛋白約高三倍左右，可以產(chǎn)生較多的同型半胱氨酸，因此可對人體的動 脈組織造成損傷。
[0006] 其它因素包括性別、年齡、腎功能的損害、以及服用影響葉酸和Β族維生素的藥 物，都可影響同型半胱氨酸的水平。尤其是腎功的損害，會嚴重影響那些含硫氨基酸的排 出，因為腎小管內(nèi)皮細胞的胱硫醚-β -合成酶對同型半胱氨酸的轉(zhuǎn)化作用，被認為血液中 的非蛋白結(jié)合型同型半胱氨酸很重要的代謝途徑。
[0007] 通常認為成人空腹血漿總Hey水平正常值為Γ12 μ mol/L，理想值為〈10 μ mol/ L，高于15 μ mol/L則被認為是高同型半胱氨酸敗血癥；老年人（彡60歲）空腹血漿總Hey 水平正常值為15~20 μπιοΙ/L，高于20 μπιοΙ/L被認為是高同型半胱氨酸敗血癥。
[0008] 目前,實驗室常用的Hey測定方法有色譜法、酶聯(lián)免疫法及熒光偏振免疫法。色 譜法具有特異性強、靈敏度高、重復性好等優(yōu)點，現(xiàn)在公認其為測定血漿Hey濃度的首選方 法，但因色譜法（HPLC及GC-MS)需要的設(shè)備復雜且昂貴，難以適應(yīng)常規(guī)臨床化學實驗室應(yīng) 用，而酶聯(lián)免疫測定法可以實現(xiàn)自動化，且可測定大量標本，因此受到臨床廣泛歡迎。
[0009] 酶聯(lián)免疫法檢測同型半胱氨酸的原理是基于小分子捕獲技術(shù)（SMT)的S-腺苷同 型半胱氨酸水解酶。Hey被轉(zhuǎn)化為游離型后，通過與共價底物反應(yīng)，循環(huán)放大，同時產(chǎn)生腺 苷。腺苷立即水解成氨和次黃嘌呤，氨在谷氨酸脫氫酶的作用下，使NADH轉(zhuǎn)化為NAD，樣本 中的Hey濃度與NADH轉(zhuǎn)化速率成正比。 如所示：

【權(quán)利要求】
1. 一種穩(wěn)定性強的同型半胱氨酸檢測試劑盒，其特征在于，包括組分1和組分2,體積 比為 R1 :R2=240:65， 各組分原料含量如下： 組分1 : S-腺苷甲硫氨酸 0. 1-lmM NADH 0.3-3mM 三（2羧乙基）膦氯化氫 0. 5-5 mM α -酮戊二酸 5_50mM 疊氮鈉 0. l-10g/L 抗壞血酸氧化酶 2-10 KU/L ; 組分2 : Hey甲基轉(zhuǎn)移酶 1-10KU/L 谷氨酸脫氫酶 1-10KU/L S-腺苷同型半胱氨酸（SAH)水解酶 2. 5-25KU/L 腺苷脫氨酶 5-50KU/L 牛血清白蛋白 20-40g/L 椰油酰胺丙基甜菜堿 2-5g/L 。
【文檔編號】C12Q1/32GK104120165SQ201410202785
【公開日】2014年10月29日 申請日期:2014年5月14日 優(yōu)先權(quán)日:2014年5月14日
【發(fā)明者】譚柏清, 董雯, 甘宜梧, 王綺 申請人:山東博科生物產(chǎn)業(yè)有限公司