一種生產(chǎn)多成分高活性靈芝及靈芝菌粉的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種固體發(fā)酵生產(chǎn)多成分高活性靈芝及靈芝菌粉的方法，所述方法主要包括培養(yǎng)基的制備、靈芝菌種的接種以及發(fā)酵、干燥、粉碎等步驟；所用培養(yǎng)基包括如下按重量份數(shù)進行配比的組分：大米或麥子65-85份，黃豆1-12份，野葡萄籽1-10份，人參1-6份，杏仁1-10份，枸杞子1-10份，山楂1-6份，銀杏葉1-10份；利用本發(fā)明的培養(yǎng)基，將具有天然藥物活性成分的靈芝菌經(jīng)過固體發(fā)酵制得多成分高活性的靈芝菌粉，所獲靈芝菌粉中除含有靈芝本身活性成分外，還含有黃酮類化合物和皂角苷活性物質，是一種純生物不含有其他任何有害物質的靈芝菌粉；而且培養(yǎng)基的來源廣泛，易得，成本低，同時制備方法簡單易行。
【專利說明】—種生產(chǎn)多成分高活性靈芝及靈芝菌粉的方法
【技術領域】
[0001]本發(fā)明屬于生物固體發(fā)酵【技術領域】，具體涉及一種多成分高活性靈芝及靈芝菌粉的制備方法。
【背景技術】
[0002]靈芝:治愈萬癥，其功能應驗，靈通神效，故名靈芝，又名“不死藥”俗稱“靈芝草”，多孔菌科類、一年生真菌，靈芝作為藥物已正式被國家藥典收載，同時它又是國家批準的新資源食品，無毒副作用，可以藥食兩用?？茖W研究表明，靈芝的藥理成分非常豐富，其中有效成份可分為十大類，包括靈芝多糖、靈芝多肽、三萜類、16種氨基酸(其中含有七種人體必需氨基酸)、蛋白質、留類、甘露醇、香豆精苷、生物堿、有機酸(主含延胡索酸)，以及微量元素Ge、P、Fe、Ca、Mn、Zn等。靈芝對人體具有雙向調(diào)節(jié)作用，所治病種，涉及心腦血管、消化、神經(jīng)、內(nèi)分泌、呼吸、運動等各個系統(tǒng)，尤其對腫瘤、肝臟病變、失眠以及衰老的防治作用十分顯著。
[0003]通過生物發(fā)酵的方式提高靈芝藥用活性成分的含量因為其具有生產(chǎn)周期短、節(jié)省勞動力和受外部環(huán)境影響小等優(yōu)點被認為是一種有效的方法。但目前國內(nèi)外對靈芝的研究主要集中在發(fā)酵 條件及活性成分分離等層面上，整體發(fā)酵水平不高，如專利(申請?zhí)?0111953.2)公開了一種液體發(fā)酵法同時生產(chǎn)靈芝多糖和靈芝酸的工藝,靈芝酸含量可達
2.8mg/100mg，胞內(nèi)和胞外多糖總量高達2.34克/升，但該方法效率低，不能滿足工業(yè)化發(fā)酵生產(chǎn)的需要；而專利(申請?zhí)?01210110969.5)雖然公開了一種利用擴張蛋白提高靈芝菌絲體中總黃酮產(chǎn)量的方法，即通過向液體發(fā)酵培養(yǎng)基中加入擴張蛋白來提高總黃酮的產(chǎn)量，但此專利中所用的擴張蛋白液制備方法繁復，不利于工廠化生產(chǎn)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明提供一種簡單易行且成本低的利用具有天然活性成分的靈芝菌，通過培養(yǎng)基的選擇，經(jīng)固體發(fā)酵方式、生物轉化合成含有高比率黃酮類化合物和皂角苷活性成分的靈芝菌粉的方法，具體技術方案如下。
[0005]本發(fā)明提供的制備方法包括如下步驟:
1)制備培養(yǎng)基；所述培養(yǎng)基包括如下按重量份數(shù)進行配比的組分:大米或麥子65-85份，黃豆1-12份，野葡萄籽1-10份，人參1-6份，杏仁1-10份，枸杞子1-10份，山楂1_6份，銀杏葉1-10份；
2)將靈芝菌種在斜面培養(yǎng)基上培養(yǎng)得到斜面菌種；
3)將斜面菌種接種到液體種子培養(yǎng)基中，進行擴繁培養(yǎng)，得到液體種子；
4)將步驟3)獲得的液體種子按5-10%的接種量接入到步驟I)制備的培養(yǎng)基中在20-25°C的條件下培養(yǎng)15-20天獲得發(fā)酵產(chǎn)物；
5)將步驟4)獲得的發(fā)酵產(chǎn)物挖塊干燥，條件為38-45°C，48-60h；
6)將步驟5)獲得的干燥后的發(fā)酵產(chǎn)物粉碎至80-100目，即得靈芝菌粉。[0006]具體來講，本發(fā)明中所述培養(yǎng)基的制備包括如下步驟:
1)將培養(yǎng)基的各個組分按重量配比后分別粉碎至30-80目；
2)將步驟I)得到的各個組分混合均勻；
3)向步驟2)的混合物中加入混合物1-10倍的水；
4)將步驟3)得到的混合物消毒滅菌，制得培養(yǎng)基。
[0007]優(yōu)選地，本發(fā)明中所述培養(yǎng)基包括如下按重量份數(shù)進行配比的組分:大米或麥子75-80份，黃豆6-10份，野葡萄籽5-6份，人參3_4份，杏仁5_6份，枸杞子5_6份，山楂3_4份，銀杏葉5-6份。
[0008]進一步地，本發(fā)明獲得的靈芝菌粉可以根據(jù)需要制成片劑、顆粒劑、丸劑、膠囊或者糖漿劑或者其他保健用品。
[0009]在本發(fā)明的制備方法中，步驟2)中所述的斜面培養(yǎng)基為PDA培養(yǎng)基，培養(yǎng)條件為22-25 °C，培養(yǎng) 5-7 天。
[0010]另外，在本發(fā)明的制備方法中，步驟3)中所述液體種子培養(yǎng)基為PDA培養(yǎng)基，培養(yǎng)條件為22-25°C，搖床轉數(shù)為100-120轉/min，暗培養(yǎng)3_5天。
[0011]目前，由于野生靈芝資源有限，而通過人工栽培獲得的靈芝實體所帶來的農(nóng)藥及污染很難去除。發(fā)酵法可以通過調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的組成、培養(yǎng)溫度及時間等條件，在短時間內(nèi)得到大量的靈芝菌絲體，其 在組成上與人工栽培得到的靈芝實體相似，但其克服了污染及農(nóng)藥問題。
[0012]靈芝本身藥理成分非常豐富，其中有效成份可分為十大類，包括靈芝多糖、靈芝多肽、三萜類、16種氨基酸(其中含有七種人體必需氨基酸)、蛋白質、留類、甘露醇、香豆精苷、生物堿、有機酸(主含延胡索酸)，以及微量元素Ge、P、Fe、Ca、Mn、Zn等。經(jīng)研究，野生靈芝含有極其微量的黃酮類化合物。而黃酮類化合物具有促進血液循環(huán)，阻抗動脈硬化形成，改善降低血液中膽固醇含量減少脂肪在血液血管壁上的積累，降低冠狀動脈阻塞，止痛、止血治療外傷引發(fā)的癥狀，對防止體內(nèi)各組織發(fā)炎形成的抗體和消除體內(nèi)過多的氧化自由基有明顯療效。目前經(jīng)研究已經(jīng)從野生靈芝中分離出黃酮類化合物，但其含量是抑制其應用的主要因素。
[0013]靈芝本身不含有皂角苷活性物質，但皂角苷具有抗癌抑制腫瘤，降低血糖，改善代謝，降低血脂，抑制肥胖，降低血小板凝聚，避免形成血栓，改善血液流變避免心肌梗塞和增強機體免疫抗病能力。
[0014]本發(fā)明就是利用固體發(fā)酵方法通過調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的組成，提高靈芝菌絲中黃酮類化合物和皂角苷活性物質的含量。具體來講，本發(fā)明培養(yǎng)基中所選用的組分中含有大量的黃酮類化合物和皂角苷活性物質，如山葡萄籽、銀杏葉等有效成分主要為黃酮類化合物，而人參、杏仁粉等則含有皂角苷等有效成分，這些組分通過固體發(fā)酵、生物轉化合成含有黃酮類化合物和皂角苷活性物質的靈芝或靈芝菌絲。
[0015]本發(fā)明的優(yōu)點如下:
I)本發(fā)明通過靈芝菌經(jīng)固體發(fā)酵獲得比一般普通靈芝及其菌絲體粉活性成分多的靈芝或靈芝菌粉；
2)本發(fā)明獲得的靈芝菌粉中除含有靈芝本身活性成分外，還含有黃酮類化合物和皂角苷活性物質，是一種純生物不含有其他任何有害物質的多成分、高活性靈芝菌粉；3)培養(yǎng)基的來源廣泛，易得，成本低；
4)本發(fā)明所采用的制備方法工藝簡單，重復性好，環(huán)境可控，適合工業(yè)化生產(chǎn)。
【具體實施方式】
[0016]下面結合實施例對本發(fā)明做詳細說明
實施例中所用靈芝菌為黑靈芝(Ganoderma),赤靈芝(Ganoderma Lucidum)和紫靈芝(Ganoderma neo-japonicum)均購自于北京普天同創(chuàng)生物科技有限公司。
[0017]靈芝菌粉中活性成分的確定由國家藥物代謝產(chǎn)物分析中心和青島科標化工分析檢測有限公司完成。具體而言，相應的方法為:
蛋白質的測定:凱氏定氮法；活性多糖、三萜:紫外分光光度計；總黃酮:蘆丁計；皂角苷、腺苷:高效液相色譜方法。
[0018]實施例1
1)制備培養(yǎng)基:將大米65份，黃豆1份，野葡萄籽1份，人參1份，杏仁1份，枸杞子I份，山楂1份，銀杏葉1份分別粉碎；然后混合均勻；向混合物中加入I倍水后消毒滅菌；
2)將黑靈芝(Ganoderma)，接種到斜面PDA培養(yǎng)基上培養(yǎng)得到斜面菌種，溫度為22°C，培養(yǎng)5天；
3)將斜面菌種接種到PD A液體種子培養(yǎng)基中，進行擴繁培養(yǎng)，在22°C條件下，暗培養(yǎng)3天，得到液體種子；
4)將步驟3)獲得的液體種子按5%的接種量接入步驟I)制備的培養(yǎng)基中在20°C的條件下培養(yǎng)15天獲得發(fā)酵產(chǎn)物；
5)將步驟4)獲得的發(fā)酵產(chǎn)物在38°C的條件下干燥48h；
6)將步驟5)獲得的干燥后的發(fā)酵產(chǎn)物粉碎至80目，即得靈芝菌粉。
[0019]實施例2:與實施例1條件相同，靈芝菌種為赤靈芝(Ganoderma Lucidum),。
[0020]實施例3:與實施例1條件相同，靈芝菌種為紫靈芝(Ganoderma neo-japonicum)?
[0021]實施例4
1)制備培養(yǎng)基:將大米85份，黃豆12份，野葡萄籽10份，人參6份，杏仁10份，枸杞子10份，山楂6份，銀杏葉10份分別粉碎；然后混合均勻；向混合物中加入10倍水后消毒滅菌；
2)將黑靈芝(Ganoderma)，接種到斜面PDA培養(yǎng)基上培養(yǎng)得到斜面菌種，溫度為25°C，培養(yǎng)7天；
3)將斜面菌種接種到PDA液體種子培養(yǎng)基中，進行擴繁培養(yǎng)，在25°C條件下，暗培養(yǎng)5天，得到液體種子；
4)將步驟3)獲得的液體種子按10%的接種量接入到步驟I)制備的培養(yǎng)基中在25°C的條件下培養(yǎng)20天獲得發(fā)酵產(chǎn)物；
5)將步驟4)獲得的發(fā)酵產(chǎn)物在45°C的條件下干燥60h；
6)將步驟5)獲得的干燥后的發(fā)酵產(chǎn)物粉碎至100目，即得靈芝菌粉。
[0022]實施例5
I)制備培養(yǎng)基:將大米75份，黃豆6份，野葡萄籽5份，人參3份，杏仁5份，枸杞子5份，山楂3份，銀杏葉5份分別粉碎；然后混合均勻；向混合物中加入6倍水后消毒滅菌；2)將黑靈芝(Ganoderma)，接種到斜面PDA培養(yǎng)基上培養(yǎng)得到斜面菌種，溫度為23°C，培養(yǎng)5天；
3)將斜面菌種接種到PDA液體種子培養(yǎng)基中，進行擴繁培養(yǎng)，在24°C條件下，暗培養(yǎng)3天，得到液體種子；
4)將步驟3)獲得的液體種子按7%的接種量接入到步驟I)制備的培養(yǎng)基中在23°C的條件下培養(yǎng)18天獲得發(fā)酵產(chǎn)物；
5)將步驟4)獲得的發(fā)酵產(chǎn)物在42°C的條件下干燥54h；
6)將步驟5)獲得的干燥后的發(fā)酵產(chǎn)物粉碎至80目，即得靈芝菌粉。
[0023]實施例中各個主要活性成分通過相應的測定方法得到表1和表2的數(shù)據(jù):
表1為相同條件下不同接種菌種的活性成分測定:
【權利要求】
1.一種生產(chǎn)多成分高活性靈芝及靈芝菌粉的方法，其特征在于，包括如下步驟: 制備培養(yǎng)基；所述培養(yǎng)基包括如下按重量份數(shù)進行配比的組分:大米或麥子65-85份，黃豆1-12份，野葡萄籽1-10份，人參1-6份，杏仁1-10份，枸杞子1-10份，山楂1-6份，銀杏葉1-10份； 將靈芝菌種接在斜面培養(yǎng)基上培養(yǎng)得到斜面菌種； 將斜面菌種接種到液體種子培養(yǎng)基中，進行擴繁培養(yǎng)，得到液體種子； 將步驟3)獲得的液體種子按5-10%的接種量接入步驟1)制備的培養(yǎng)基中在20-25°C的條件下培養(yǎng)15-20天獲得發(fā)酵產(chǎn)物； 將步驟5)獲得的發(fā)酵產(chǎn)物挖塊干燥，條件為38-45°C，48-60h ； 將步驟6)獲得的干燥后的發(fā)酵產(chǎn)物粉碎至80-100目，即得靈芝菌粉。
2.根據(jù)權利要求1所述的生產(chǎn)多成分高活性靈芝及靈芝菌粉的方法，其特征在于，步驟I)所述培養(yǎng)基的制備包括如下步驟: 1)將培養(yǎng)基的各個組分按重量配比后分別粉碎至30-80目； 2)將步驟1)得到的各個組分混合均勻； 3)向步驟2)的混合物中加入混合物1-10倍的水； 4)將步驟3)得到的混合物消毒滅菌，制得培養(yǎng)基。
3.根據(jù)權利要求1或2所述的生產(chǎn)多成分高活性靈芝及靈芝菌粉的方法，其特征在于，所述培養(yǎng)基包括如下按重量份數(shù)進行配比的組分:大米或麥子75-80份，黃豆6-10份，野葡萄籽5-6份，人參3-4份，杏仁5-6份，枸杞子5-6份，山楂3_4份，銀杏葉5_6份。
4.根據(jù)權利要求1所述的生產(chǎn)多成分高活性靈芝及靈芝菌粉的方法，其特征在于，將步驟6)獲得的靈芝菌粉制成片劑、顆粒劑、丸劑、膠囊或者糖漿劑。
5.根據(jù)權利要求1所述的生產(chǎn)多成分高活性靈芝及靈芝菌粉的方法，其特征在于，步驟2)中所述的斜面培養(yǎng)基為PDA培養(yǎng)基，培養(yǎng)條件為22-25 °C，培養(yǎng)5_7天。
6.根據(jù)權利要求1所述的生產(chǎn)多成分高活性靈芝及靈芝菌粉的方法，其特征在于，步驟3)中所述液體種子培養(yǎng)基為PDA培養(yǎng)基，培養(yǎng)條件為22-25°C，搖床轉數(shù)為100-120轉/min,暗培養(yǎng)3_5天。
【文檔編號】A23L1/29GK104000855SQ201410199039
【公開日】2014年8月27日 申請日期:2014年5月13日 優(yōu)先權日:2014年5月13日
【發(fā)明者】王曉坤, 王玉順, 王仁岐 申請人:大連佳騰生物科技有限公司