一種高產(chǎn)糖化酶、α-淀粉酶和酸性蛋白酶的亮白曲霉及其應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種高產(chǎn)糖化酶、α-淀粉酶和酸性蛋白酶的亮白曲霉及其在白酒釀造中的應(yīng)用，所述亮白曲霉已于2014年3月7日保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心(CGMCC)，保藏編號(hào)是CGMCC No.8900。所述菌株能夠同時(shí)高產(chǎn)糖化酶、α-淀粉酶和酸性蛋白酶，屬于微生物和發(fā)酵工程領(lǐng)域。經(jīng)固態(tài)制曲，可以高產(chǎn)糖化酶、α-淀粉酶和酸性蛋白酶，增加白酒釀造中淀粉和蛋白的利用率，使用該霉菌可以提高白酒的出酒率并保持較好的風(fēng)味。CGMCC No. 89002014.03.07
【專利說明】一種高產(chǎn)糖化酶、ct -淀粉酶和酸性蛋白酶的亮白曲霉及 其應(yīng)用

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種亮白曲霉及其應(yīng)用，特別是一種利用亮白曲霉在提高釀酒過程中 酒精產(chǎn)率工藝中的應(yīng)用。

【背景技術(shù)】
[0002] 細(xì)菌、酵母和霉菌是中國(guó)白酒釀造過程中的三大類微生物，其中霉菌能夠分泌多 種酶類并降解淀粉、蛋白質(zhì)等大分子物質(zhì)，為細(xì)菌和酵母的生長(zhǎng)和發(fā)酵提供物質(zhì)基礎(chǔ)。霉菌 同時(shí)也能夠分泌一些酯化酶和代謝產(chǎn)物，對(duì)中國(guó)白酒的風(fēng)味也有一定的影響。中國(guó)白酒傳 統(tǒng)釀造過程中是開放式生產(chǎn)，過程中涉及到復(fù)雜的霉菌群落；復(fù)雜的霉菌群落既能產(chǎn)生了 豐富的酶系，對(duì)白酒釀造有著正面貢獻(xiàn)，但一些環(huán)境中有害的霉菌也可能被涉及，給白酒產(chǎn) 品的質(zhì)量帶來了潛在的風(fēng)險(xiǎn)。
[0003] 純種霉菌的篩選和使用已經(jīng)是行業(yè)的一種趨勢(shì)，純種霉菌麩曲能夠代替部分大 曲，提高白酒生產(chǎn)的出酒率，控制有害微生物的潛在危險(xiǎn)。目前白酒生產(chǎn)中常用的霉菌有河 內(nèi)白曲霉（Aspergillus kawachii)、米曲霉（Aspergillus oryzae)等，這些篩選的霉菌具 有較高的糖化力，提高了出酒率。但是傳統(tǒng)篩選麩曲霉菌只以糖化酶為指標(biāo)，所得菌株酶系 較為單一，生產(chǎn)的麩曲白酒的酒質(zhì)比大曲酒差，通常只能用于生產(chǎn)中低端白酒。
[0004] 糖化酶、α -淀粉酶都能夠降解淀粉，他們的含量和比例會(huì)控制發(fā)酵進(jìn)程的速度， 控制發(fā)酵溫度過快上升，使得整個(gè)微生物群落正常演變，保證白酒發(fā)酵的正常進(jìn)行。白酒釀 造的主要原料高粱的成分除了淀粉之外，蛋白質(zhì)也是一個(gè)重要的成分（8% -10% )，是酵母 細(xì)菌生長(zhǎng)的重要物質(zhì)基礎(chǔ)，也是形成風(fēng)味物質(zhì)的重要前體。同時(shí)，中國(guó)白酒發(fā)酵體系是一個(gè) 偏酸的環(huán)境，在發(fā)酵結(jié)束的時(shí)候pH最低能夠達(dá)到3. 5,因此酸性蛋白酶也在白酒發(fā)酵過程 中起到了重要的作用。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種高產(chǎn)糖化酶、α -淀粉酶和酸性蛋白酶的 亮白曲霉及其在釀造白酒中的應(yīng)用，以適應(yīng)白酒發(fā)酵的過程，提高酒精的產(chǎn)率。
[0006] 本發(fā)明所得亮白曲霉的ITS rDNA序列，在GenBank中進(jìn)行Blast對(duì)比確定其種屬， 與其同源序列最高的菌株分別為（Aspergillus candidus)，相似度為98%和98%。
[0007] 所述亮白曲霉在PDA培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，菌落開始為白色，圓形，向四周擴(kuò)散，然后從 菌落中間開始產(chǎn)生白色孢子，最后整個(gè)菌落全部變成白色。菌絲白色，纖細(xì)，分生孢子；菌落 背面略帶黃色。本菌株適應(yīng)性很強(qiáng)，孢子在PDA培養(yǎng)及平板上30°C萌發(fā)，培養(yǎng)3d，菌落直徑 為4.2_6.5cm。上述亮白曲霉（Aspergillus candidus)于2014年3月7日保藏至中國(guó)微 生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏編號(hào)為：CGMCC No. 8900,保藏地址為北京 市朝陽區(qū)北辰西路1號(hào)院3號(hào)，中國(guó)科學(xué)院微生物研究所。
[0008] 本發(fā)明菌株高產(chǎn)糖化酶、α -淀粉酶和酸性蛋白酶，其發(fā)酵工藝為：
[0009] 種子（PDA)培養(yǎng)基：馬鈴薯先洗凈去皮，再稱取200g馬鈴薯切成小塊，加水煮爛 (煮沸20-30min)用八層紗布過濾，加20g瓊脂，葡萄糖20g，再補(bǔ)足水分至1000毫升，121 °C 滅菌20min冷卻后貯存?zhèn)溆茫?br> [0010] 發(fā)酵培養(yǎng)基：稱取新鮮麩皮（或者其他粉碎原料）并加水，使水分含量約為50%， 121°C 滅菌 20min ;
[0011] 種子培養(yǎng)方法：挑取一環(huán)亮白曲霉的孢子，接種于種子培養(yǎng)基斜面，30°C培養(yǎng) 3d-7d ；
[0012] 發(fā)酵培養(yǎng)方法：250ml錐形瓶裝培養(yǎng)基20g，將活化的孢子懸浮液接入滅過菌的發(fā) 酵培養(yǎng)基并使最終濃度為5 X 106個(gè)/g麩皮，30°C靜止培養(yǎng)48h-72h。
[0013] 測(cè)定酶活如下：
[0014]

【權(quán)利要求】
1. 一種高產(chǎn)糖化酶、α-淀粉酶和酸性蛋白酶的亮白曲霉（Aspergillus candidus), 于2014年3月7日保藏于微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏編號(hào)為CGMCC No.8900〇
2. 權(quán)利要求1所述亮白曲霉（Aspergillus candidus)在白酒釀造中的應(yīng)用。
3. 權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征在于所述亮白曲霉高產(chǎn)糖化酶、α -淀粉酶和酸性蛋 白酶，能增加白酒釀造中淀粉和蛋白的利用率，改善出酒率。
4. 權(quán)利要求2或3所述的應(yīng)用，其特征在于可以將活化的亮白曲霉孢子懸浮液接種至 固體培養(yǎng)基，接種濃度為1-5 % w/w，在25-35°C環(huán)境中固態(tài)發(fā)酵32-72h，制成固態(tài)菌制劑， 再將固態(tài)菌制劑作為種子接種到曲池中進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)24-72h，二級(jí)種子按照5-20 % w/w接 種量加入白酒生產(chǎn)中。
5. 權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征在于可以將活化的亮白曲霉孢子懸浮液接種于滅菌 的液態(tài)培養(yǎng)基，接種濃度為1-5% w/w，25-35°C培養(yǎng)24h-72h，制成液態(tài)菌制劑，再將液態(tài)菌 制劑作為種子接種到曲池中進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)24-72h，二級(jí)種子按照5-20% w/w接種量加入白 酒生產(chǎn)中。
6. 權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其特征在于，固態(tài)原料培養(yǎng)基，原料包括高粱、麩皮、小麥、 大麥、豌豆、大米、玉米、糯米、青稞或其組合。
7. 權(quán)利要求5所述的液體培養(yǎng)基，其特征在于，液態(tài)培養(yǎng)基為原料提取物，原料包括： 高粱、麩皮、小麥、大麥、豌豆、大米、玉米、糯米、青稞或其組合。
8. 權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征在于所述亮白曲霉以固態(tài)接種或者液態(tài)接種的形式 加入。
9. 權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征在于所述亮白曲霉可以將白酒出酒率從20-28%提 高到25-33%，淀粉利用率提高3% -5%，并保持酒的風(fēng)味。
【文檔編號(hào)】C12N1/14GK104250618SQ201410187376
【公開日】2014年12月31日 申請(qǐng)日期:2014年5月5日 優(yōu)先權(quán)日:2014年5月5日
【發(fā)明者】徐巖, 吳群 申請(qǐng)人:江南大學(xué)