一種植物冷誘導表達啟動子Poscold2及其應用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提供一種植物冷誘導表達啟動子Poscold2及其應用。本發(fā)明還提供了含有該啟動子的表達盒、植物表達載體、宿主菌和轉(zhuǎn)化子。具體而言，本發(fā)明獲得了上述啟動子并將上述啟動子應用在植物轉(zhuǎn)基因工程中。本發(fā)明提供的啟動子可以在冷誘導的條件下驅(qū)動外源基因在植物中表達，適用于單子葉禾谷類植物，尤其能夠驅(qū)動外源基因在水稻植株中誘導表達，因此可以用于提高和改善水稻的生長特性，從而培育出理想的耐冷水稻品種。
【專利說明】一種植物冷誘導表達啟動子Posco I d2及其應用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及生物技術(shù)和植物基因工程【技術(shù)領(lǐng)域】。具體而言，本發(fā)明涉及一種植物冷誘導基因表達啟動子及其應用，該啟動子能夠在水稻轉(zhuǎn)基因調(diào)控體系中在冷誘導條件下驅(qū)動目標基因在植株中表達。
【背景技術(shù)】
[0002]水稻是重要的糧食作物，屬喜溫作物，對低溫反應比較敏感，當氣溫低于某一臨界溫度時，水稻生長發(fā)育就會收到抑制或危害，即低溫冷害，因此，冷害是影響水稻生產(chǎn)的重要限制因子之一。根據(jù)對水稻影響不同，日本水稻專家把冷害分為延遲型、障礙型、稻瘟病型、混合型冷害。水稻從萌芽至成熟的各個時期都可能發(fā)生冷害，在世界范圍內(nèi)，高緯度、高海拔地區(qū)因低溫冷害造成水稻減產(chǎn)的現(xiàn)象普遍發(fā)生，在中國以東北地區(qū)，西南地區(qū)特別突出，我國每年因低溫冷害減產(chǎn)稻谷約30-50億kg，損失嚴重。因此迫切需要發(fā)掘水稻耐冷種質(zhì)資源，培育出水稻耐冷品種。
[0003]迄今，國內(nèi)外的研究人員進行了堅持不懈的探索與研究，開展了抗冷脅迫新品種選育工作，取得了一定成績。仲康等(2007)將鋅指蛋白類似蛋白OsCOIN基因在水稻中過量表達使轉(zhuǎn)基因水稻中脯氨酸含量升高，提高植物的耐冷性。張紅生等(2009)將水稻鋅指蛋白ZFP245基因在水稻中過量表達，發(fā)現(xiàn)超量表達ZFP245基因水稻在冷脅迫下使脯氨酸積累相關(guān)基因0sP5CS和脯氨酸轉(zhuǎn)運基因OsProT基因的表達量提高，促使脯氨酸的量增加，增強植物的耐冷性。余淑美等(2010)發(fā)現(xiàn)MYBS3超量表達水稻能在4°C條件下處理后可以存活，且不影響其主要農(nóng)藝性狀。另外，對一些包括DREB/CBF、NAC等轉(zhuǎn)錄因子的過量表達可以提高水稻的耐冷性。
[0004]目前，隨著分子生物學、生物信息學的飛速發(fā)展和轉(zhuǎn)基因技術(shù)的日趨成熟，通過現(xiàn)代基因工程技術(shù)進行分子育種已成為改良水稻耐冷性的一種高效途徑。
[0005]我國水稻資源豐富，從水稻種發(fā)掘、定位、克隆耐冷相關(guān)基因及其冷誘導啟動子，將對水稻生產(chǎn)具有重要意義。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明的目的是提供一種驅(qū)動外源基因在冷誘導條件下特異性表達的啟動子、獲得含有該啟動子序列的轉(zhuǎn)化子以及該啟動子的應用。其中，本文中所涉及的“植物”是指單子葉植物，例如水稻、小麥、玉米、大麥、高粱或燕麥，優(yōu)選為水稻。
[0007]為了實現(xiàn)上述目的，一方面，本發(fā)明提供一種植物冷誘導表達啟動子P0SC0ld2，所述植物冷誘導表達啟動子PoSCold2包含序列表中SEQ ID No:1所示的DNA序列。序列表中SEQ ID No:1所不的DNA序列為來源于日本晴水稻(Oryza sativa L cv.Nipponbare)的水稻冷誘導表達啟動子，本文中稱為Poscold2或啟動子Poscold2。
[0008]優(yōu)選地，本發(fā)明提供的植物冷誘導表達啟動子P0SC0ld2的DNA序列為SEQ IDNo:1所示的序列，即Poscold2或啟動子Poscold2。[0009]另一方面，本發(fā)明提供一種植物冷誘導表達啟動子PosCold2，其DNA序列與SEQID No:1所示的DNA序列有至少80%同源性；或者,所述植物冷誘導表達啟動子Poscold2為在SEQ ID No:1所示的DNA序列中添加、取代、插入或缺失一個或一個以上核苷酸生成的突變體或等位基因或衍生物；或者所述植物冷誘導表達啟動子Poscold2具有與SEQ ID No:1所示的DNA序列雜交的產(chǎn)物。這些植物冷誘導表達啟動子PoSCold2序列與SEQ ID No:1所示的DNA序列具有相同功能，即驅(qū)動目標基因在冷誘導條件下在植物中特異性表達。
[0010]本發(fā)明所提到的冷誘導指的是對轉(zhuǎn)基因植株施加一段時間的低溫(例如，4攝氏度)，從而通過本發(fā)明的啟動子誘導特定基因表達。
[0011]另一方面，本發(fā)明還提供一種包含上述植物冷誘導表達啟動子P0SC0ld2的表達盒。
[0012]又一方面，本發(fā)明還提供一種重組表達載體，所述重組表達載體包含上述的植物冷誘導表達啟動子Poscold2,在所述重組表達載體中，所述植物冷誘導表達啟動子Poscold2連接于待表達的基因序列的上游；優(yōu)選地，所述待表達的基因為Gus基因，所述重組表達載體為pCAMBIA1391-Poscold2，該重組表達載體為將SEQ ID No:1所示的序列即Poscold2或啟動子Poscold2構(gòu)建于pCAMBIA1391中得到的重組表達載體，本文中稱為pCAMBIA1391-Poscold2?；蛘?，在實際應用中，選擇耐冷基因作為待表達基因，通過本發(fā)明的啟動子在冷誘導條件下，驅(qū)動耐 冷基因表達，從而提高植物的耐冷性。
[0013]另一方面，本發(fā)明還提供一種宿主菌，所述宿主菌包含本發(fā)明提供的上述植物冷誘導表達啟動子Poscold2、上述表達盒、或上述重組表達載體；優(yōu)選地,所述宿主菌為根癌農(nóng)桿菌。
[0014]另一方面，本發(fā)明提供一種轉(zhuǎn)化子，所述轉(zhuǎn)化子包含本發(fā)明提供的上述植物冷誘導表達啟動子P0SC0ld2、上述表達盒、上述重組表達載體。其中，所述轉(zhuǎn)化子優(yōu)選為轉(zhuǎn)基因細胞系、愈傷組織或植株。
[0015]再一方面，本發(fā)明提供了上述植物冷誘導表達啟動子P0SC0ld2在培育轉(zhuǎn)基因植物中的應用。所述應用包括將本發(fā)明提供的上述植物冷誘導表達啟動子P0SC0ld2連接于載體的待表達的基因序列上游(例如，將所述啟動子序列置于目標基因之前)，從而構(gòu)建重組表達載體，將所述重組表達載體轉(zhuǎn)化到植物細胞、組織或器官中進行培育。所述待表達基因優(yōu)選能夠為植物提供耐冷性，即耐冷基因。
[0016]并且優(yōu)選地，所述應用可以用于改良植物生長特性，所述植物為單子葉植物，例如水稻、小麥、玉米、大麥、高粱或燕麥，優(yōu)選為水稻。
[0017]本發(fā)明中所提供的啟動子的DNA序列為(與序列表中SEQ ID No:1中相同):
[0018]tccagttgat taccatcaga tgacacatga acatcaggat cagccgggag tgcacgtgat 60
[0019]tgtgccacca tgggtccatg gctgttttgg acacattgcg tgtgacgacg cccctcaatc 120
[0020]atctcaaacc tgatcaggtt ttctcaccgg agatgctcct atgatggctg tttggaataa 180
[0021]ccaggtagga gtagtactag tactacccaa gtggtgcacg tggcatggtg cgcctgacag 240
[0022]gtcgggccca cgggtcacga tccacatcgc ccccgaaaaa ggtcagtgga gaaaacaatg 300
[0023]agcggttgag cgcaaaacat gtggccgagg cgtgtctcgg agccctgcag cgccaacccg 360
[0024]taagcttgtg gccagggata gtccatttgt tcctctcacg gtggtacgga gaagagaaca 420
[0025]acaaacagcg ggttctctcc ctgctgtgcg cctctggttg ggcgacatgt ggcgggcggt 480[0026]gagttggcag ctgcgtgtct cggtggcttt gacgtgtcca aaaagcgagc gggtgggggc 540
[0027]cccctcctcc gctgcgcttt tcttttcttt ctatccatcc aaacagggac agtcctgtct 600
[0028]cctgtgccta gatttgcatg tcgccagata cgtctcctgt actcccttcg actacctccg 660
[0029]tccaaaaata taataacttt ttactataaa tctggacaca catgtgtcca aatttatagc 720
[0030]taaaaatgct tacatttttt tatggaggga gtatttcaat tgcagccatg attttccgtg 780
[0031]tctaacttta accgtctgtt ttatttaatt ttttttaaaa aaataaaaac ataagtcagg 840
[0032]agtaaagtat tgtttatatt ttatcatctc ataaaaaaaa ctaattacaa aattttttta 900
[0033]aataagatgg acgatcaaat tatgatcgca cttaaaataa aacggaggga gtagaagaga 960
[0034]aaaagctcaa taattcgtgt agtaccccga aagccagccg aggtgacatc accgcagttc 1020
[0035]tgctcatagt ttgatccaaa acagttttag agtttgttct cactactaag ttcaaccccc 1080
[0036]caagatattt tcattctttg cttgccaaaa atcatcagca gaaaaaaaca tgaactgctt 1140
[0037]gttaattcga tctataccaa ccgaagttta cctgaaactc tgataactgc agcctatcat 1200
[0038]gctccaccag ctgccagggc aattatggta ctatctccag agcacgcaca cagtaaatag 1260
[0039]cagcctaaca tccttcgatc ttatcgtcgg caaaacacac acgcatagag tggataggat 1320
[0040]cacaggaaca tgccatcgat tcgtgaagac ccacgaaagc gcacggtttt actcctacac 1380
[0041]ccacatacta gtagtagtag cggtagcagt acggtacatg tggctagtac tagcagtaat 1440
[0042]gcttggtccg gagcagcgag ccgtgtggtt gctgcagtgt gcgagtagcc aactagtggc 1500
[0043]aaccagacac atggacaagt agcagcgaag caggcgaagg aaggggcaag tgagtgccgt 1560
[0044]gaagcagcga gagccacaag aatcgagcgg cttccggggc tctctacagg attgaggcga 1620
[0045]aaagtgcaaa gccggaaagg gagagagaga aaaaagcgta gaaaaatccg atccgacgtg 1680
[0046]gcgccctggc ctgtgccctt tttctcctct ctcctgcctc ctcttggtct catttcccct 1740 [0047]tcctgccttg cctcctcgtc tccttctctg ctgctctcca agctcttcct gcttccatca 1800
[0048]ggttgtctcg agaaagattg gagtttttgg tggtttgggt tgtgcggttc ttgcttttgt 1860
[0049]tggcgcaagc gcatggctgg ttctgggaca tagtgagctg agatagagtt cttgtgttcg 1920
[0050]gtggagtttg gctttggtga atcttcgatt caagtctgga g 1961
[0051]需要說明的是:上述啟動子的DNA序列中，序列開頭以斜體并加粗表示的序列“tccagttgat taccatcaga tg”為獲得啟動子過程中使用的正向引物的留存序列，共計22bp ;序列末尾以斜體并加粗表示的序列“a atcttcgatt caagtctggag”為獲得啟動子過程中使用的反向引物的留存序列(該留存序列與反向引物的相應序列互補)，共計22bp ；該DNA序列中剩余的部分則為獲自日本晴水稻中的DNA序列。需要強調(diào)的是，本文中所提到的啟動子既可以指上述整個DNA序列，也可以指去除上述引物留存序列后的DNA序列。
[0052]綜上所述,本發(fā)明的發(fā)明人從日本晴水稻(Oryza sativa L cv.Nipponbare)中分離克隆得到結(jié)構(gòu)包括轉(zhuǎn)錄起始位點在內(nèi)的1961bp的DNA序列，并將其命名為P0SC0ld2(序列表中的SEQ ID No:1)。將該序列經(jīng)酶切后連接到植物雙元表達載體PCAMBIA1391上，獲得相應的重組質(zhì)粒(即重組表達載體)，利用該重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化根癌農(nóng)桿菌菌株EHA105，然后用農(nóng)桿菌介導的方法進行水稻的轉(zhuǎn)化，得到轉(zhuǎn)基因水稻植株。對獲得的轉(zhuǎn)基因水稻進行組織化學檢測發(fā)現(xiàn)，轉(zhuǎn)基因植株在冷誘導處理后，整體上的Gus基因表達水平相對較高并顯藍色，從而證明該1961bp的序列具有驅(qū)動基因表達的活性，而且該啟動子驅(qū)動的Gus基因在水稻冷誘導處理后特異性表達。[0053]本發(fā)明所述的啟動子序列可與植物雙元表達載體連接，用于取代組成型啟動子。并且，該啟動子序列可以與所需的靶標基因鏈接，構(gòu)建重組植物表達載體，經(jīng)轉(zhuǎn)化，在冷誘導處理后可驅(qū)動靶標基因在植株中特異性表達，從而提高外源靶標基因在植物中的表達量，增加轉(zhuǎn)基因的效果。在具體應用時，可以將靶標基因選擇為具有提高植株耐冷性功能的基因(耐冷基因)，這樣，通過冷誘導處理之后，該基因大量表達，增強植株的耐冷性。
[0054]技術(shù)效果
[0055]本發(fā)明所克隆的水稻啟動子P0SC0ld2能夠調(diào)控基因在植株中適時集中表達，在實際應用中具有顯著價值。通過該啟動子對農(nóng)作物品種進行基因改造，如通過該啟動子調(diào)控目標基因在植株中表達，代替35S等組成型啟動子，從而培育出理想的生物安全性高的耐冷的轉(zhuǎn)基因植物品種。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0056]以下，結(jié)合附圖來詳細說明本發(fā)明的實施方案，其中:
[0057]圖1為將Poscold2啟動子構(gòu)建于pCAMBIA1391載體質(zhì)粒中的示意圖，其中圖1中A為pCAMBIA1391示意圖，圖1中B為pCAMBIA1391_Poscold2示意圖，其中示出了利用Poscold2啟動子驅(qū)動位于其下游的⑶S基因表達；
[0058]圖2為萌發(fā)21天后的Poscold2::⑶S轉(zhuǎn)基因植株組織染色圖。在28°C條件下正常生長的水稻植株，經(jīng)24小時染色后，根(A)，莖(B)，葉(C)均無⑶S活性，而在4°C冷處理24小時后，再經(jīng)過30min染色后，在根(D)，莖(E)，葉(F)中均有⑶S強烈表達(標尺=10mm)η
[0059]圖3為對本發(fā)明的啟動子進行酶切驗證的結(jié)果示意圖。
【具體實施方式】
[0060]以下參照具體的實施例來說明本發(fā)明。本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠理解，這些實施例僅用于說明本發(fā)明，其不以任何方式限制本發(fā)明的范圍。
[0061]下述實施例中的實驗方法，如無特殊說明，均為常規(guī)方法。下述實施例中所用的藥材原料、試劑材料等，如無特殊說明，均為市售購買產(chǎn)品。
[0062]含有酶切位點的P0SC0ld2啟動子的獲得
[0063]步驟1、引物的設(shè)計
[0064]根據(jù)NCBI中提供的水稻品種日本晴(Oryza sativa L cv.Nipponbare)全基因組序列，依據(jù)水稻PColel基因的序列設(shè)計擴增引物，并根據(jù)選用的載體及靶標基因的特點，設(shè)計引物的酶切位點。
[0065]本實施例中以水稻雙元表達載體pCAMBIA1391 (圖1A，來自于CAMBIA，公開使用載體，安徽省農(nóng)業(yè)科學院農(nóng)業(yè)部轉(zhuǎn)基因生物產(chǎn)品成分監(jiān)督檢驗測試中心水稻組保存)為例，靶標基因為Gus基因，具體設(shè)計的引物為:正向引物(SEQ ID No:2)5’端帶Sail，酶切位點(GTCGAC)，反向引物(SEQ ID No: 3) 5’端帶Smal，酶切位點(CCCGGG)，引物序列如下:
[0066]正向引物:GTCGACTCCAGTTGATTACCATCAGATGSail
[0067]反向引物:CCCGGGCTCCAGACTTGAATCGAAGATTSmaI
[0068]由深圳華大基因公司合成。[0069]步驟2、啟動子Poscold2的獲得
[0070]以水稻品種日本晴DNA為模板，利用正向引物、反向引物擴增啟動子PoscoId2，按常規(guī)PCR體系，采用如下擴增程序:
[0071]95°C預變性 5min ;95°C變性 30s，58°C退火 30s，72°C延伸 2min30s，執(zhí)行 35 個從95°C預變性到72°C延伸的循環(huán)；最后72°C延伸lOmin。
[0072]回收PCR擴增的目的片段，目的片段長度1961bp，將其連接到PGEM-T-Easy載體(購自Promega公司，按載體說明書中的比例混合)上,按照熱激法轉(zhuǎn)化大腸桿菌XL-Blue感受態(tài)細胞后，使感受態(tài)細胞激活，進而將目的片段轉(zhuǎn)入到激活的感受態(tài)細胞中，然后，經(jīng)菌落PCR篩選獲得陽性克隆，挑取單克隆搖菌液提質(zhì)粒，用SalI和SmaI進行雙酶切驗證，如圖3所示。將經(jīng)過鑒定的陽性克隆送交Invitrogen公司測序。驗證正確的克隆即為所要獲得的啟動子Poscold2，其核酸序列如SEQ ID No:1所示。
[0073]植物表達載體的構(gòu)建和農(nóng)桿菌的轉(zhuǎn)化
[0074]從上面“啟動子P0SC0ld2的獲得”過程中獲得的陽性克隆中提取質(zhì)粒，用Sail和SmaI雙酶切，回收啟動子Poscold2片段。同時利用SalI和SmaI對pCAMBIA1391進行線性化處理、回收PCAMBIA1391，將上述的Poscold2片段和pCAMBIA1391片段用T4連接酶(購于TaKaRa公司)進行連接，得到啟動子PoscoId2與Gus基因融合的植物表達載體pCAMBIA1391-Poscold2 (圖1B)，利用凍融法將植物表達載體轉(zhuǎn)入根癌農(nóng)桿菌(Agrobacterium tumefaciens) EHA105 (安徽省農(nóng)業(yè)科學院農(nóng)業(yè)部轉(zhuǎn)基因生物產(chǎn)品成分監(jiān)督檢驗測試中心水稻組保存)，從凍融法所得產(chǎn)物中提取陽性質(zhì)粒，用SalI和SmaI進行酶切驗證,驗證結(jié)果如圖3中所示。
[0075]利用啟動子Poscold2驅(qū)動Gus報告基因在水稻中表達
[0076]步驟1:農(nóng)桿菌介導的水稻遺傳轉(zhuǎn)化
[0077]將成熟水稻種子去掉穎殼后，用70%酒精浸泡種子lmin，倒掉酒精。用含有I滴Tween20的50%次氯酸鈉(原液有效氯濃度大于4%)溶液浸泡種子40min (150r/min)。倒掉次氯酸鈉，無菌水洗5遍至溶液澄清，無次氯酸鈉味道。無菌水浸泡種子過夜。用解剖刀對種子沿糊粉層將胚剝下，將胚接種于愈傷誘導培養(yǎng)基上。30°C下暗培養(yǎng)11天后將愈傷與胚乳及胚芽分離，將去芽的狀態(tài)良好、分裂旺盛的初級愈傷組織進行預培養(yǎng)3~5天后用于農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化。
[0078]采用上述“植物表達載體的構(gòu)建和農(nóng)桿菌的轉(zhuǎn)化”過程中轉(zhuǎn)入了重組表達載體的根癌農(nóng)桿菌進行農(nóng)桿菌介導的遺傳轉(zhuǎn)化，該遺傳轉(zhuǎn)化、轉(zhuǎn)化子篩選及轉(zhuǎn)基因植株再生等參照 Yongbo Duan (Yongbo Duan, Chenguang Zhai, et al.An efficient andhigh-throughput protocol for Agrobacterium mediated transformation based onphosphomannose isomerase positive selection in Japonica rice (Oryza sativa L)[J].Plant Cell Report, 2012.D0I10.1007/s00299-012-1275_3.)等提出的方法。
[0079]共獲得22 株 pCAMBIA1391-Poscold2 植株(Poscold2::gus 轉(zhuǎn)基因水稻植株)。
[0080]步驟2、冷處理和⑶S組織化學染色
[0081]將所獲得植株在4°C下冷處理24小時后，再經(jīng)過30min⑶S染色，染色方法參照Jefferson (Jefferson RA 等人.GUS fusion: β -Glucuronidase as a sensitive andversatile gene fusion marker in higher plant [J].EMBO J.，1987，6:3901-3907)等提出的方法，將需要染色的組織抽真空，然后浸入染色液中。脫色時在37°C條件下用95%乙醇處理，至陰性對照材料呈白色。
[0082]把萌發(fā)21天后的Poscold2::⑶S轉(zhuǎn)基因植株組織進行染色。如圖2所示，在28°C條件下正常生長的水稻植株，經(jīng)24小時染色后，根(A)、莖(B)、葉(C)均無⑶S活性，而在4°C冷處理24小時后，再經(jīng)過30min染色后，在根(D)、莖(E)、葉(F)中均有⑶S強烈表達。
[0083 ]以上對本發(fā)明【具體實施方式】的描述并不限制本發(fā)明，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以根據(jù)本發(fā)明作出各種改變或變形，只要不脫離本發(fā)明的精神，均應屬于本發(fā)明所附權(quán)利要求的范圍。
【權(quán)利要求】
1.一種植物冷誘導表達啟動子Poscold2,其特征在于,所述植物冷誘導表達啟動子Poscold2包含SEQ ID No:1所示的DNA序列。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的植物冷誘導表達啟動子P0SC0ld2，其特征在于，所述植物冷誘導表達啟動子Poscold2的DNA序列為SEQ ID No:1所示的序列。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的植物冷誘導表達啟動子P0SC0ld2，其特征在于，所述植物冷誘導表達啟動子Poscold2的DNA序列與SEQ ID No:1所示的DNA序列有至少80%同源性； 或者，所述植物冷誘導表達啟動子Poscold2為在SEQ ID No:1所示的DNA序列中添加、取代、插入或缺失一個或一個以上核苷酸生成的突變體或等位基因或衍生物； 或者，所述植物冷誘導表達啟動子Poscold2具有與SEQ ID No:1所示的DNA序列雜交的產(chǎn)物。
4.一種表達盒,其特征在于,所述表達盒包含權(quán)利要求1-3中任意一項所述的植物冷誘導表達啟動子Poscold2。
5.—種重組表達載體,其特征在于,所述重組表達載體包含權(quán)利要求1-3中任意一項所述的植物冷誘導表達啟動子PoSCold2，在所述重組表達載體中，所述植物冷誘導表達啟動子Poscold2連接于載體中待表達的基因序列的上游； 優(yōu)選地，所述待表達的基因為Gus基因，所述重組表達載體為pCAMBIA1391-Poscold2，其中pCAMBIA1391為植物雙元表達載體，或者，所述待表達基因是具有耐冷性的基因。
6.—種宿主菌，其特征 在于，所述宿主菌包含權(quán)利要求1-3中任意一項所述的植物冷誘導表達啟動子P0SC0ld2、權(quán)利要求4所述的表達盒、或根據(jù)權(quán)利要求5所述的重組表達載體，其中，所述宿主菌為根癌農(nóng)桿菌。
7.一種轉(zhuǎn)化子，其特征在于，所述轉(zhuǎn)化子包含權(quán)利要求1-3中任意一項所述的植物冷誘導表達啟動子P0SC0ld2、權(quán)利要求4所述的表達盒、或根據(jù)權(quán)利要求5所述的重組表達載體。
8.一種根據(jù)權(quán)利要求1-3中任意一項所述的植物冷誘導表達啟動子P0SC0ld2在培育轉(zhuǎn)基因植物中的應用，其特征在于，所述應用包括:將根據(jù)權(quán)利要求1-3中任意一項所述的植物冷誘導表達啟動子Poscold2連接于載體中待表達的基因序列上游，從而構(gòu)建重組表達載體；將所述重組表達載體轉(zhuǎn)化到植物細胞、組織或器官中進行培育。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的應用，其特征在于，所述應用用于改良植物生長特性，所述植物為單子葉植物:水稻、小麥、玉米、大麥、高粱或燕麥。
【文檔編號】C12N15/113GK103849622SQ201410119971
【公開日】2014年6月11日 申請日期:2014年3月27日 優(yōu)先權(quán)日:2014年3月27日
【發(fā)明者】魏鵬程, 楊劍波, 李 浩, 秦瑞英, 張銀萍, 李莉, 馬卉, 楊亞春, 宋豐順, 倪金龍 申請人:安徽省農(nóng)業(yè)科學院水稻研究所