microRNA-219試劑盒及其應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】microRNA-219試劑盒及其應(yīng)用，涉及microRNA-219。所述microRNA-219試劑盒包括用于擴(kuò)增microRNA-129的特異性逆轉(zhuǎn)錄引物及real-time?PCR引物對(duì)一套；用于擴(kuò)增對(duì)照RNA（U6）的特異性逆轉(zhuǎn)錄引物及real-time?PCR引物對(duì)一套及相關(guān)試劑。microRNA-219在診斷、預(yù)測(cè)癲癇和以癇性發(fā)作為特征的神經(jīng)系統(tǒng)疾病中的用途。通過(guò)檢測(cè)患者腦內(nèi)的小分子核酸microRNA-219的表達(dá)水平即可快捷方便靈敏地用于診斷或評(píng)估癲癇和以癇性發(fā)作為特征的神經(jīng)系統(tǒng)疾病。
【專利說(shuō)明】microRNA-219試劑盒及其應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及microRNA-219，尤其是涉及microRNA-219試劑盒及其應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]癲癇是一種以大腦神經(jīng)元異常同步化放電為特征的慢性反復(fù)性嚴(yán)重神經(jīng)系統(tǒng)疾病，全球約5千萬(wàn)患者深受其擾?？拱d癇藥物僅控制約三分之二患者的癲癇發(fā)作，且不能從根本上改善其病理生理狀態(tài)。癲癇的發(fā)生涉及到離子通道改變，突觸重塑，炎癥，神經(jīng)膠質(zhì)增生和神經(jīng)元死亡等。然而，迄今為止，針對(duì)這些過(guò)程的干預(yù)措施在臨床上很少表現(xiàn)出足夠的療效，我們對(duì)癲癇發(fā)生的細(xì)胞和分子機(jī)制仍缺乏完整了解。
[0003]microRNA是一類長(zhǎng)度為19~23個(gè)核苷酸的內(nèi)源性非編碼RNA，其被RNA誘導(dǎo)沉默復(fù)合體(RISC,由Dicer, Argonaute及其他蛋白質(zhì)組成)載入后可以與祀mRNA的3’非翻譯區(qū)(UTR)配對(duì)，引起靶mRNA的降解或抑制其翻譯效率，進(jìn)而調(diào)控基因表達(dá)(Vasudevan S，Tong Y,Steitz J A.Switching from repression to activation:miRNAscan up-regulate translation.Science, 2007; (5858):1931-1934 ；Lewis B P，Burge CB，Bartel D P.Conserved seed pairing, often flanked by adenosines, indicates thatthousands of human genes are miRNA targets Cel 12005 (I): 15-20)o miRNA 以復(fù)雜網(wǎng)絡(luò)調(diào)控的方式參與生物體生理過(guò)程，對(duì)在生理?xiàng)l件下神經(jīng)系統(tǒng)中miRNA分布、表達(dá)和功能的研究表明，miRNA通過(guò)調(diào)節(jié)多種基因的表達(dá)，廣泛參與對(duì)神經(jīng)元發(fā)育、細(xì)胞成熟與迀移、髓鞘形成、突觸發(fā)育成熟和可塑性、膠質(zhì)疤痕形成、神經(jīng)性疼痛、神經(jīng)修復(fù)和再支配等多種生理病理過(guò)程，miRNA生成異常或其功能通路發(fā)生障礙在神經(jīng)退行性疾病、精神病和腦腫瘤等的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮關(guān)鍵作用(Hebert S S，De Strooper B.Alterations of the miRNAnetwork cause n eurodegenerative disease.Trends Neuroscij 2009; (4):199-206 ；Saugstad JA.MiRNAs as effectors of brain function with roles in ischemiaand injury,neuroprotection, and neurodegeneration.J Cereb Blood FlowMetab.2010;30 (9):1564-1576)。
[0004]MiRNA-219為人和嚙齒類動(dòng)物腦組織所特有的miRNA之一(DostieJ，Mourelatos Zj Yang M，Sharma A,Dreyfuss G.Numerous microRNPs in neuronalcell containing novel miRNAs.RNA.2003; 9 (2): 180-6)，與腦組織的發(fā)育和高級(jí)神經(jīng)功能密切相關(guān)(Okabe Mj Imai Tj Kurusu Mj Hiromi Y，Okano H，Translationalrepression determines a neuronal potential in Drosophila asymmetric celldivison.Nature.2001;411 (6833):94-98 ；Miller S，Yasuda M，Coats JKj JonesY，Martone ME, Mayford M.Disruption of dendritic translation of CaMK II alphaimpairs stabilization of synaptic plasticity and memory consolidation.Neuron.2002; 36 (3): 507-19)。對(duì)其生理功能的深入研究逐步顯示出miRNA_219與癲癇發(fā)生的潛在相關(guān)性。如最近Jannet Kocerha等發(fā)現(xiàn)N-甲基-D-天冬氨酸受體功能減退與miRNA-219表達(dá)下調(diào)相關(guān)，miRNA_219通過(guò)調(diào)節(jié)NMDAR信號(hào)下游效應(yīng)蛋白CaMKII Y 而參與 NMDAR 功能異常所致行為失常(Kocerha J, Faghihi MA, Lopez-ToledanoMA, Huang J, Ramsey AJ, Caron MG,Sales N, Willoughby D, Elmen J, Hansen HF,OrumH, Kauppinen S, Kenny PJ, Wahlestedt C.MiRNA-219modulates NMDA receptor-mediatedneurobehavioral dysfunction.Proc Natl Acad Sci USA.2009; 106 (9): 3507-12);此外，研究發(fā)現(xiàn)，miRNA-219在海馬神經(jīng)元的胞體、樹突區(qū)域高表達(dá)，在軸突區(qū)也有表達(dá)(OkadoH,Ohtaka-Maruyama C，Sugitani Y,Fukuda Y,Ishida R, Hirai S，Miwa A, TakahashiA, Aoki K, Mawano H, Kasai M.The transcriptional repressor RP58is crucial forcell-division patterning and neuronal survival in the developing cortex.Dev Biol.2009;331 (2):140-51),表明其在突觸可塑性中發(fā)揮重要作用。以上研究提示，miRNA-219與癲癇的發(fā)生密切相關(guān)，其可能參與調(diào)控癲癇的發(fā)病過(guò)程。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的在于提供microRNA-219試劑盒及其應(yīng)用。
[0006]所述microRNA-219試劑盒的組成包括:
[0007]
【權(quán)利要求】
1.microRNA-219試劑盒，其特征在于其組成包括:
2.如權(quán)利要求1所述microRNA-219試劑盒在診斷、預(yù)測(cè)癲癇中應(yīng)用。
3.如權(quán)利要求1所述microRNA-219試劑盒在診斷、預(yù)測(cè)以癇性發(fā)作為特征的神經(jīng)系統(tǒng)疾病中的應(yīng)用。
【文檔編號(hào)】C12Q1/68GK103725786SQ201410011223
【公開日】2014年4月16日 申請(qǐng)日期:2014年1月10日 優(yōu)先權(quán)日:2014年1月10日
【發(fā)明者】鄭紅花, 鄭維紅, 唐榮, 計(jì)志林, 張?jiān)莆? 申請(qǐng)人:廈門大學(xué)