用于治療疼痛和copd的極性糖脂的混合物的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及用于治療和/或預(yù)防疼痛和/或慢性阻塞性肺疾病(Chronic Obstructive Pulmonary Disease，COPD)的方法，所述方法包括對(duì)受試者施用包含極性糖脂的組合物，所述極性糖脂可從藍(lán)細(xì)菌顫藍(lán)細(xì)菌屬菌種(CyP)(cyanobacterium Oscillatoria species(CyP))的細(xì)胞獲得。
【專利說(shuō)明】用于治療疼痛和COPD的極性糖脂的混合物
[0001] 本發(fā)明涉及包含極性糖脂的組合物，所述極性糖脂可從藍(lán)細(xì)菌顫藍(lán)細(xì)菌屬菌種 (cyanobacterium Oscillatoria species, CyP)的細(xì)胞獲得，所述組合物用于治療和/或預(yù) 防疼痛和 / 或慢性阻塞性肺疾?。–hronic Obstructive Pulmonary Disease, C0PD)。
[0002] 發(fā)明背景
[0003] 藍(lán)細(xì)菌（也稱藍(lán)綠藻）是具有獨(dú)特特性的活性成分的一種天然源。眾所周 知，來(lái)自藍(lán)細(xì)菌的低分子量糖脂提取物含有一種屬于脂肪酸甘油酯類的脂質(zhì)組分，例 如單半乳糖甘油二酯（monogalactosyl diacylglycerols, MGDG)、雙半乳糖甘油二酯 (digalactosyl diacylglyceroIs, DGDG)、硫代異鼠李糖醜甘油二酯（sulfoquinovosyl diacylglycerols, SQDG)、磷脂酰甘油（phosphatidyl glycerol, PG),等等。這種從 藍(lán)細(xì)菌制備的低分子量的提取物已顯示出各種類型的生物活性，例如抗炎的特性， 例如專利申請(qǐng)EP1571203中所述的抗炎的特性，以及如Shiraashi等，1993,0^111· Pharm. Bull.，41:1664-66中所述的抗腫瘤的特性。此外，來(lái)自藍(lán)細(xì)菌的硫代脂 質(zhì)（sulpholipids)提取物也顯示出抗HIV 的活性（Gustafson，J. Natl. Cancer Instit.，1989, 81:1254-1258)。
[0004] 專利申請(qǐng)WO 2010/010172和WO 2010/094693描述了糖脂級(jí)分的制備物，其提取 自淡水（fresh water)藍(lán)細(xì)菌顫藍(lán)細(xì)菌屬菌種并包含一種具有脂多糖樣（LPS-Iike)結(jié)構(gòu) 的高分子量的極性糖脂（33KDa)，在此也稱"VB3323"。極性糖脂的這種高純度制備物可從 藍(lán)細(xì)菌Oscillatoria Plankothotrix菌種提取，其特征在于存在至少1個(gè)高分子量糖脂 種類，所述高分子量糖脂種類包含1個(gè)或多個(gè)鼠李糖單元。這種制備物的特征還在于蛋白 質(zhì)污染低于或等于總重量的2 %，具體地特征在于沒(méi)有蛋白質(zhì)污染，如例如通過(guò)Bradford 方法所評(píng)估的，以及特征在于核酸污染低于或等于總重量的5%，具體地低于或等于總重量 3%。在這種制備物中，能檢測(cè)到對(duì)ATP合酶（ATP-SX)的抑制活性，導(dǎo)致細(xì)胞外ATP水平降 低。
[0005] 專利申請(qǐng)WO 2010/010172和WO 2010/094693已顯示這種糖脂提取物具有強(qiáng)力 的抗炎活性。更準(zhǔn)確地說(shuō)，已顯示所述糖脂提取物具有強(qiáng)力的TLR4拮抗劑活性，因?yàn)槠?能夠在人樹(shù)突細(xì)胞中拮抗由TLR4受體LPS激動(dòng)劑觸發(fā)的促炎作用，例如來(lái)自大腸桿菌 (E.coli)和馬流產(chǎn)沙門(mén)氏菌（Salmonella abortus equi)的LPS，并拮抗來(lái)自牙銀卩卜啉單 胞菌（Porphyromonas gingivalis)的LPS的促炎作用。除了其對(duì)TLR4的作用以外，還顯 示VB3323部分地抑制細(xì)胞表面ATP合酶的活性，其結(jié)果是細(xì)胞外ATP水平的降低。
[0006] Toll樣受體（TLRs)代表了識(shí)別微生物病原性結(jié)構(gòu)和使其進(jìn)入負(fù)責(zé)免疫識(shí)別和 刺激的細(xì)胞的主要路徑之一。而且，近期的研究已顯示TLRs不僅在觸發(fā)針對(duì)潛在病原體 的炎癥反應(yīng)中有重要作用，而且在由受應(yīng)激或受損傷的組織所激活的應(yīng)答中也有重要作 用。TLR4是一種涉及炎癥放大（amplification)的關(guān)鍵受體。具體地，TLR4已被證明在響 應(yīng)應(yīng)激和/或組織損傷而產(chǎn)生的通過(guò)外源分子激活的細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)中具有重要作用；所 述TLR4已知為涉及對(duì)細(xì)菌脂多糖（LPS)的先天性免疫應(yīng)答的受體。這些分子中的一些 是壞死細(xì)胞釋放的介質(zhì)，如熱休克蛋白（Heat Shock Proteins, HSPs)和高遷移率族蛋白 BI (High-Mobility Group protein BI, HMGB1);其他是細(xì)胞外基質(zhì)的產(chǎn)物，如二聚糖、透明 質(zhì)酸的片段、以及肌腱蛋白C(tenascin-C)。
[0007] ATP是另一種重要的內(nèi)源促炎癥介質(zhì)，它的下調(diào)在減少與TLR4拮抗劑活性協(xié)同的 炎癥狀態(tài)方面具有相關(guān)作用。ATP合酶在很多不同細(xì)胞類型上表達(dá)，包括肝細(xì)胞、神經(jīng)元、星 形膠質(zhì)細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、免疫細(xì)胞、以及內(nèi)皮細(xì)胞，并且在腫瘤細(xì)胞的質(zhì)膜上以特別高的 水平表達(dá)。
[0008] 因此，專利申請(qǐng) WO 2010/010172 和 WO 2010/094693 公開(kāi)了所述從 Oscillatoria Planktothrix菌種提取的糖脂級(jí)分用于治療由促炎癥狀態(tài)的激活引起的大量多種急性或 慢性病況的用途。
[0009] 發(fā)明概述
[0010] 所述發(fā)明中一個(gè)實(shí)施方案包括用于治療和/或預(yù)防疼痛和/或慢性阻塞性肺炎 (Chronic Obstructive Pulmonary Disease, C0PD)的方法，其包括對(duì)受試者施用包含極性 糖脂的組合物，所述極性糖脂是從藍(lán)細(xì)菌顫藍(lán)細(xì)菌屬菌種（cyanobacterium Oscillatoria species，CyP)細(xì)胞獲得或可獲得的。所述極性糖脂通常是從藍(lán)細(xì)菌顫藍(lán)細(xì)菌屬菌種提取的 脂多糖（lip〇P〇lysaccharide，LPS)。 toon] 在所述方法的一個(gè)實(shí)施方案中，所述極性糖脂可從藍(lán)細(xì)菌顫藍(lán)細(xì)菌屬菌種通過(guò)如 下方法獲得，包括：(a)提供所述藍(lán)細(xì)菌；(b)從所述藍(lán)細(xì)菌提取所述極性糖脂；（c)沉淀來(lái) 自步驟（b)的極性糖脂；以及（d)將步驟（c)的經(jīng)提取并沉淀的極性糖脂純化。在一個(gè)具 體的實(shí)施方案中，步驟（b)包括用變性溶液來(lái)治療，所述變性溶液包含促溶劑和非質(zhì)子有 機(jī)溶劑。
[0012] 在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述方法包括步驟：⑴提供藍(lán)細(xì)菌的濃縮物；（ii)將所述 濃縮物懸浮于溶液中；（iii)任選地，用微波和/或液體/固體分離來(lái)處理，并收集液相（成 為上清）；（iv)將藍(lán)細(xì)菌的懸浮液或所述上清與包含促溶劑和非質(zhì)子有機(jī)溶劑的變性溶液 混合；(V)將步驟（iv)獲得的溶液進(jìn)行溫育；(vi)進(jìn)行液體/液體分離，并收集水性液相； (vii) 沉淀糖脂級(jí)分；(viii)將沉淀物重懸于水溶液中；（ix)任選地，用有機(jī)溶劑處理在 (viii) 中獲得的溶液，離心，并收集液相；以及（X)通過(guò)離子交換柱并收集包含所述極性糖 脂的級(jí)分。
[0013] 在一個(gè)另外的實(shí)施方案中，所述極性糖脂可從藍(lán)細(xì)菌顫藍(lán)細(xì)菌屬菌種通過(guò)如下方 法獲得，所述方法包括用變性的促溶劑提取，用核酸酶處理提取物直到達(dá)到核酸污染水平 低于或等于總重量的5%，在截留為30KDa的設(shè)備上進(jìn)行分子分離，然后是回收更高分子量 的級(jí)分。在一個(gè)具體的實(shí)施方案中，所述極性糖脂可從藍(lán)細(xì)菌顫藍(lán)細(xì)菌屬菌種通過(guò)如下方 法獲得，所述方法包括用變性的促溶劑提取，其中提取步驟如下述步驟（b)中所述進(jìn)行，核 酸酶處理如下述步驟（g)中所述進(jìn)行，分子分離如下述步驟（k)中所述進(jìn)行，并包括進(jìn)一 步的如下步驟（a)、（c)-(f)、e)、（h)-(j)和（l)-(m) :(a)以1:1-1:2的體積比用水溶液 懸浮藍(lán)細(xì)菌顫藍(lán)細(xì)菌屬菌種的濃縮物；(b)將藍(lán)細(xì)菌的懸浮物與2-4體積的變性溶液進(jìn)行 混合，所述變性溶液包含促溶劑、極性質(zhì)子有機(jī)溶劑、以及非質(zhì)子有機(jī)溶劑；(c)溫育短于 60分鐘的時(shí)間；（d)離心并收集液相（稱為上清）；（e)通過(guò)向所述上清添加鹽和有機(jī)溶劑 來(lái)沉淀糖脂級(jí)分，并用經(jīng)水稀釋的乙醇來(lái)洗滌沉淀物（或沉淀）；（f)將沉淀物重懸于水溶 液中；（g)用核酸酶處理，并隨后用蛋白酶處理；(h)通過(guò)添加鹽和有機(jī)溶劑來(lái)沉淀糖脂相； (i)任選地，用經(jīng)水稀釋的乙醇來(lái)洗滌沉淀并重懸于包含離子表面活性劑和季銨鹽的水溶 液中；（j)如步驟（b)-(f)中所述從水溶液中再提??；（k)在截留為30KDa的設(shè)備上進(jìn)行分 子分離；（1)用水或緩沖水溶液來(lái)回收高分子量極性糖脂級(jí)分并評(píng)估核酸或蛋白質(zhì)污染的 水平；(m)回收并使用具有低于總重量5%的核酸污染的級(jí)分。
[0014] 在一個(gè)進(jìn)一步的實(shí)施方案中，所述組合物包含極性糖脂的混合物，其包含硬脂酸 (C18:0,十八酸）和/或棕櫚酸（C16:0,十六酸）作為主要糖脂組分的脂肪酸，其中它們 的至少一種與包含至少一個(gè)單元的鼠李糖或其衍生物的糖類有關(guān)。在一個(gè)具體的實(shí)施方案 中，所述極性糖脂的混合物包含相對(duì)于所述糖脂混合物的總脂質(zhì)級(jí)分50% -80%的硬脂酸 ((：18:0，十八酸）和/或15%-40%的棕櫚酸（(：16:0，十六酸）。在另一個(gè)具體的實(shí)施方 案中，所述極性糖脂的混合物包含了相對(duì)于所述糖脂混合物的總脂質(zhì)級(jí)分65-75%的硬脂 酸（(：18:0，十八酸）和/或20-32%的棕櫚酸（(：16 :0，十六酸）。
[0015] 在一個(gè)實(shí)施方案中，所述藍(lán)細(xì)菌顫藍(lán)細(xì)菌屬菌種是以登錄號(hào)No. 1459/45保藏在 藻類和原生動(dòng)物培養(yǎng)物保藏中心（Culture Collection of Algae and Protozoa(CCAP)) 的顫藍(lán)細(xì)菌屬菌種。
[0016] 在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述方法用于治療和/或預(yù)防疼痛。在一個(gè)具體的實(shí)施方 案中，所述方法用于治療和/或預(yù)防神經(jīng)性疼痛。在另一個(gè)具體的實(shí)施方案中，所述方法用 于治療和/或預(yù)防周圍神經(jīng)性疼痛、中樞神經(jīng)性疼痛、或混合（周圍和中樞）神經(jīng)性疼痛。 在一個(gè)進(jìn)一步的具體實(shí)施方案中，所述方法用于治療和/或預(yù)防由糖尿病、獲得性免疫缺 陷綜合征或癌癥引起的神經(jīng)性疼痛。
[0017] 在一個(gè)實(shí)施方案中，所述方法用于治療和/或預(yù)防C0PD。
[0018] 在一個(gè)實(shí)施方案中，所述組合物進(jìn)一步包含藥學(xué)上可接受的賦形劑、稀釋劑和/ 或其他穩(wěn)定劑。
[0019] 在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述組合物用于口服、靜脈內(nèi)（i.v.)、通過(guò)吸入或局部施 用。
[0020] 附圖簡(jiǎn)述
[0021] 圖1 :圖IA和B是顯示VB3323急性治療對(duì)于弗氏完全佐劑模型（Freund complete adjuvant model)中機(jī)械性痛覺(jué)超敏（mechanical allodynia)和熱痛覺(jué)過(guò)敏（thermal hyperalgesia)的作用的圖。
[0022] 圖2 :圖2A和B是顯示VB3323 口服治療的慢性治療對(duì)于FCA模型中機(jī)械性痛覺(jué) 超敏和掌水腫（paw edema)的作用的圖。
[0023] 圖3 :圖3A和B是顯示VB3323 口服治療的慢性治療對(duì)于小鼠體重和器官總體形 態(tài)學(xué)評(píng)估的作用的圖。
[0024] 圖4 :圖4A和B是顯示VB3323慢性治療對(duì)于坐骨神經(jīng)結(jié)扎模型中機(jī)械性痛覺(jué)超 敏和熱痛覺(jué)過(guò)敏的作用的圖。
[0025] 圖5 :圖5是顯示VB3323慢性治療對(duì)于小鼠體重的作用的圖。
[0026] 圖6 :圖6是顯示VB3323對(duì)于大腸桿菌-LPS溫育過(guò)程中TNFa釋放的作用的圖。
[0027] 圖7 :圖7是不同的三批VB3323的NMR)概貌。
[0028] 圖8 :圖8是顯示VB3323治療對(duì)于（C0PD模型小鼠）體重變化的作用的圖。
[0029] 圖9 :圖9是顯示VB3323治療對(duì)于COro模型小鼠中肺水腫（肺重量）的作用的 圖。
[0030] 發(fā)明描述
[0031] 所述糖脂混合物的治療用途
[0032] 本發(fā)明的發(fā)明人顯示了來(lái)自顫藍(lán)細(xì)菌屬菌種的所述糖脂級(jí)分在疼痛的動(dòng)物模型 中減輕疼痛。特別是，他們已顯示用所述糖脂混合物的急性治療強(qiáng)力且劑量依賴性地在由 弗氏佐劑誘導(dǎo)的慢性炎癥小鼠模型中減少機(jī)械性痛覺(jué)超敏和熱痛覺(jué)過(guò)敏（實(shí)施例2)。他 們已顯示用如本申請(qǐng)所述的糖脂制備物的慢性治療顯著減少機(jī)械性痛覺(jué)超敏（實(shí)施例3)。 最后，他們已顯示用糖脂制備物的慢性治療在由坐骨神經(jīng)結(jié)扎誘導(dǎo)的神經(jīng)性疼痛小鼠模型 中顯著減少熱痛覺(jué)過(guò)敏和機(jī)械性痛覺(jué)超敏（實(shí)施例5)。
[0033] 因此，包含這種糖脂的組合物能夠有利地用于治療和/或預(yù)防疼痛，特別是神經(jīng) 性疼痛。
[0034] 神經(jīng)性疼痛是由于周圍或中樞神經(jīng)系統(tǒng)的損傷或功能障礙引起的。神經(jīng)性疼痛可 以由此被分為周圍神經(jīng)性疼痛、中樞神經(jīng)性疼痛、或混合（周圍或中樞）神經(jīng)性疼痛。
[0035] 神經(jīng)性疼痛通常是由神經(jīng)損傷或疾病引起的，如糖尿病、獲得性免疫缺陷綜合征 或癌癥，其損傷周圍神經(jīng)。與組織受損、感覺(jué)遲鈍（例如灼燒（burning)、麻刺（tingling))、 以及神經(jīng)學(xué)檢查過(guò)程中檢測(cè)出的神經(jīng)受損癥況不成比例的疼痛暗示了診斷。神經(jīng)性疼痛的 一個(gè)共同癥狀是觸覺(jué)性痛覺(jué)超敏，其特征是對(duì)正常無(wú)害的觸覺(jué)刺激的疼痛響應(yīng)。
[0036] 雖然神經(jīng)性疼痛響應(yīng)阿片類藥物，但治療通常用佐劑藥物（例如抗抑郁藥、抗痙 攣藥、巴氯芬、局部藥物）。
[0037] 疼痛在受傷后能夠進(jìn)展至任何水平的神經(jīng)系統(tǒng)，周圍或中樞；可能涉及交感 神經(jīng)系統(tǒng)（引起交感維持的疼痛）。具體的癥狀包括皰疹后神經(jīng)痛、根性撕脫傷（root avulsions)、疼痛性外傷性單一神經(jīng)病變（painful traumatic mononeuropathy)、疼痛性 多神經(jīng)?。ㄌ貏e是由于糖尿?。?、中樞性疼痛綜合征（由幾乎任何水平的神經(jīng)系統(tǒng)的任何損 害潛在引起）、術(shù)后疼痛綜合征（例如乳房切除術(shù)后綜合征、開(kāi)胸術(shù)后綜合征、幻痛）、以及 復(fù)雜的局部疼痛綜合征（反射交感性營(yíng)養(yǎng)不良和灼性神經(jīng)痛）。
[0038] 因此，所述包含糖脂混合物的組合物能夠有利地用于治療和/或預(yù)防周圍神經(jīng)性 疼痛、中樞神經(jīng)性疼痛、或混合（周圍和中樞）神經(jīng)性疼痛。特別是，所述包含糖脂混合物 的組合物能夠有利地用于治療和/或預(yù)防由糖尿病、獲得性免疫缺陷綜合征或癌癥引起的 神經(jīng)性疼痛。
[0039] 發(fā)明人進(jìn)一步顯示了來(lái)自顫藍(lán)細(xì)菌屬的所述糖脂級(jí)分在人類支氣管實(shí)質(zhì)組織培 養(yǎng)物中抑制大腸桿菌-LPS誘導(dǎo)的TNF-α釋放（實(shí)施例7)。慢性阻塞性肺?。–OPD)是細(xì) 菌或細(xì)菌產(chǎn)物（LPS)引起的慢性炎癥。在人類支氣管實(shí)質(zhì)組織培養(yǎng)物中獲得的結(jié)果指示 VB3323能夠抑制細(xì)菌或細(xì)菌產(chǎn)物（LPS)誘導(dǎo)的體內(nèi)炎癥并由此能預(yù)防和/或治療C0PD。
[0040] 因此，所述發(fā)明中另一個(gè)方面是所述包含糖脂的組合物用于治療和/或預(yù)防COPD 的用途。
[0041] 慢性阻塞性肺?。–OPD)是炎癥反應(yīng)引起的部分可逆的氣流受限。癥狀為排痰性 咳嗽（productive cough)和進(jìn)展多年的呼吸困難。常見(jiàn)癥況包括呼吸聲減小、呼吸的呼氣 階段延長(zhǎng)、以及哮鳴（wheezing)。通常的治療包括支氣管擴(kuò)張藥、皮質(zhì)類固醇、以及（若需 要時(shí)）O 2和抗生素。患者中約50%在診斷的10年內(nèi)死亡。
[0042] coro包括慢性阻塞性支氣管炎和肺氣腫。許多患者兩種特征都具有。
[0043] 慢性阻塞性支氣管炎是有氣流阻塞的支氣管炎。若氣流阻塞的肺量測(cè)定證據(jù)進(jìn)展 了，慢性支氣管炎就變成慢性阻塞性支氣管炎。慢性哮喘性支氣管炎是一種類似的重疊的 癥況，其特征為慢性排痰性咳嗽、哮鳴、以及部分可逆的氣流阻塞；其主要在有哮喘史的吸 煙者中出現(xiàn)。在一些案例中，慢性阻塞性支氣管炎和慢性哮喘性支氣管炎之間的區(qū)別尚不 清楚。
[0044] 肺氣腫是肺實(shí)質(zhì)的毀壞，導(dǎo)致彈性回縮的丟失及肺泡隔和徑向氣道牽引（radial airway traction)的丟失,其增加了氣道崩潰的趨勢(shì)。隨之而來(lái)的是肺充氣過(guò)度（Lung hyperinflation)、氣道受限、以及空氣滯留。氣域（Airspaces)擴(kuò)大并且可能最終發(fā)展為 大泡。
[0045] 所述發(fā)明由此涉及包含糖脂的組合物，具體是從藍(lán)細(xì)菌顫藍(lán)細(xì)菌屬菌種獲得或可 獲得的極性糖脂，其用于治療和/或預(yù)防疼痛和/或慢性阻塞性肺?。–OPD)。
[0046] 所述發(fā)明也涉及治療和/或預(yù)防疼痛和/或coro的方法，所述方法包括向需要它 的受試者施用如本申請(qǐng)所述的包含極性糖脂混合物的組合物的步驟。所述組合物具體地以 治療上有效的量來(lái)施用。
[0047] 組合物可以包含藥學(xué)上可接受的賦形劑、稀釋劑和/或其他穩(wěn)定劑，并可以以任 何適當(dāng)?shù)穆窂绞┯?。具體的施用路徑包括口服、靜脈內(nèi)（i.v.)、局部施用或通過(guò)吸入。 [0048] 如本申請(qǐng)所述制備的包含藍(lán)細(xì)菌極性糖脂的組合物，顯示了蛋白質(zhì)污染水平低于 或等于總重量的2%，具體地顯示了無(wú)蛋白質(zhì)污染；以及核酸污染水平低于或等于總重量 的5%，具體為低于或等于總重量的3%，所述組合物對(duì)于哺乳動(dòng)物細(xì)胞沒(méi)有細(xì)胞毒性，如 在細(xì)胞系以及分離自人血液的PBMC中的細(xì)胞毒性測(cè)定法所評(píng)估的。所述組合物沒(méi)有細(xì)胞 毒性，這已在濃度高達(dá)100 μ g/ml的體外細(xì)胞系統(tǒng)中測(cè)試，其為最低有效濃度的100倍高。 在確保患者安全同時(shí)，它用于治療和/或預(yù)防疼痛和/或COPD的用途能夠因此而預(yù)見(jiàn)。
[0049] 此外，發(fā)明人顯示了 VB3323慢性治療在弗氏佐劑誘導(dǎo)的慢性炎癥小鼠模型中不 誘導(dǎo)任何顯著的體重變化及器官改變（實(shí)施例4)，并且在坐骨神經(jīng)結(jié)扎誘導(dǎo)的神經(jīng)性疼痛 小鼠模型中減少了由慢性疼痛誘導(dǎo)的體重減輕（實(shí)施例6)。這些數(shù)據(jù)進(jìn)一步支持所述極性 糖脂混合物作為治療化合物（compound)用于治療和/或預(yù)防神經(jīng)性疼痛和/或COro的潛 在用途。
[0050] 所述受試者可以是人或是非人哺乳動(dòng)物，如貓類（feline)、犬類（canine)、嚙齒 類（rodent)、靈長(zhǎng)類（primate)、牛類（bovine)、羊類（ovine)或馬。在一些實(shí)施方案中，所 述受試者是人，如小孩、女人或男人。
[0051] 如此處所用，術(shù)語(yǔ)"治療"（"treatment"或"treating"）表示逆轉(zhuǎn)、緩解、或 抑制此術(shù)語(yǔ)所適用的病癥或病況、或這類病癥或病況的一個(gè)或多個(gè)癥狀的進(jìn)展。"預(yù) 防"（"prevention"或"preventing"）意為防止此術(shù)語(yǔ)所適用的病癥或病況、或這類病癥 或病況的一個(gè)或多個(gè)癥狀的出現(xiàn)。
[0052] 本領(lǐng)域技術(shù)人員可以容易地確定所述來(lái)自顫藍(lán)細(xì)菌屬的極性糖脂在治療上有效 的量。它可以依賴于如受試者的年齡、體重、病況等等。通常，同樣地，所述來(lái)自顫藍(lán)細(xì)菌屬 的極性糖脂在治療上有效的每日劑量可包括〇· 〇lmg-50mg，例如0· lmg-5mg，如0· 3-3mg。
[0053] 包含所述極性糖脂的組合物的特征
[0054] 專利申請(qǐng) WO 2010/010172 和 WO 2010/094693 已顯示從 Bluegreen Biotech s. r. I.，via Massena 15, 20125Milano, Italy 以登錄號(hào) No. 1459/45 于 2008 年 7 月 9 日保 藏于藻類和原生動(dòng)物培養(yǎng)物保藏中心（CCAP, Scotland, United Kingdom)的藍(lán)細(xì)菌顫藍(lán)細(xì) 菌屬菌種的細(xì)胞通過(guò)提取獲得或可獲得的極性糖脂的高純度制備物的特征為存在至少一 種包含一個(gè)或多個(gè)鼠李糖單元的高分子量糖脂種類。
[0055] 因此，所述發(fā)明中使用的包含糖脂的組合物可從藍(lán)細(xì)菌顫藍(lán)細(xì)菌屬菌種，如例如 cyanobacterium Oscillatoria Planktothrix菌種的細(xì)胞獲得或可獲得的。這種極性糖脂 的制備物有時(shí)在科學(xué)文獻(xiàn)中被稱為"CyP"。
[0056] 所述藍(lán)細(xì)菌顫藍(lán)細(xì)菌屬菌種可為,例如,任何保藏在藻類和原生動(dòng)物培養(yǎng)物保藏 中心（CCAP)的顫藍(lán)細(xì)菌屬菌種，如例如以登錄號(hào)No. 1459/45、No. 1459/43、或No. 1459/44 保藏的那些菌株。
[0057] 在一個(gè)具體的實(shí)施方案中，所述顫藍(lán)細(xì)菌屬菌種是以以登錄號(hào)No. 1459/45保藏 在藻類和原生動(dòng)物培養(yǎng)物保藏中心（CCAP)的菌種。
[0058] 在另一個(gè)具體的實(shí)施方案中，所述藍(lán)細(xì)菌顫藍(lán)細(xì)菌屬菌種是淡水藍(lán)細(xì)菌。具體 說(shuō)，所述藍(lán)細(xì)菌顫藍(lán)細(xì)菌屬菌種可以是出現(xiàn)在Lake Varese，Italy中的藍(lán)細(xì)菌。例如，所 述藍(lán)細(xì)菌可以是 Oscillatoria Planktothrix FPl 菌種，如 Pomati 等，J. Phycol. 2000 ; 36 : 553-562, Macagno 等，J Exp Med. 2006;203 (6): 1481_92，Jemmett 等，Infect Immun. 2008 ;76 (7) :3156-63,以及Thorgersen等，Mol Immunol. 2008 ;45 (13) :3553-7 中所 述。
[0059] 根據(jù)所述發(fā)明的糖脂是一種極性糖脂。具體是，包含于所述組合物中的極性糖脂 可以是脂多糖（LPS)。
[0060] 所述包含極性糖脂的組合物可以是，例如，級(jí)分、提取物、糖脂混合物、制備物，和/ 或藥物組合物。
[0061] 可用于獲得這種包含來(lái)自藍(lán)細(xì)菌顫藍(lán)細(xì)菌屬菌種（CyP)的細(xì)胞的極性糖脂 的組合物的方法被本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知，并且描述于，例如，Yi等，Analyst. 2000 ; 125(4):651-6，Macagno 等，J Exp Med. 2006 ;203 (6):1481_92，Jemmett 等，Infect Immun. 2008 ;76 (7) : 3156-63,以及 Thorgersen 等，Mol Immunol. 2008 ;45 (13) : 3553-7 中。 [0062] 在一個(gè)具體的實(shí)施方案中，所述極性糖脂可以從藍(lán)細(xì)菌顫藍(lán)細(xì)菌屬菌種提取。
[0063] 具體地，所述包含極性糖脂的組合物可為從藍(lán)細(xì)菌產(chǎn)藍(lán)細(xì)菌屬通過(guò)第一種方法可 獲得的，所述方法包括：
[0064] (a)提供所述藍(lán)細(xì)菌；
[0065] (b)從所述藍(lán)細(xì)菌提取極性糖脂；
[0066] (C)沉淀來(lái)自步驟（b)的極性糖脂；并且
[0067] (d)純化來(lái)自步驟（C)的經(jīng)提取并沉淀的極性糖脂。
[0068] 在另一個(gè)實(shí)施方案中，步驟（b)包括用包含促溶劑和非質(zhì)子有機(jī)溶劑如氯仿的變 性溶液的處理。
[0069] 在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述用于獲得包含極性糖脂的組合物的方法包括如下步 驟：
[0070] (i)提供藍(lán)細(xì)菌的濃縮物，如從培養(yǎng)基通過(guò)離心法收集藍(lán)細(xì)菌后獲得的經(jīng)冷凍干 燥的濃縮物；
[0071] (ii)將所述濃縮物懸浮于溶液中；
[0072] (iii)任選地用微波和/或液體/固體分離如通過(guò)離心處理，并收集液相（稱為上 清）；
[0073] (iv)將藍(lán)細(xì)菌的懸浮液或所述上清與包含促溶劑和非質(zhì)子有機(jī)溶劑如氯仿的變 性溶液混合；
[0074] (V)將步驟（iv)獲得的溶液進(jìn)行溫育；
[0075] (vi)進(jìn)行液體/液體分離，優(yōu)選通過(guò)離心進(jìn)行，并收集水性液相；
[0076] (vii)沉淀糖脂級(jí)分，例如通過(guò)向所述上清添加鹽和有機(jī)溶劑如丙酮；
[0077] (viii)將沉淀物重懸于水溶液中；
[0078] (ix)任選地用有機(jī)溶劑如異丙醇來(lái)處理在（viii)獲得的溶液，離心，并收集液 相，如通過(guò)離心進(jìn)行；并且
[0079] (X)通過(guò)離子交換柱并收集包含所述極性糖脂的級(jí)分。
[0080] 在另一個(gè)具體的實(shí)施方案中，所述極性糖脂可以從顫藍(lán)細(xì)菌屬菌種的培養(yǎng)物制 備，如專利申請(qǐng)WO 2010/094693(其通過(guò)本申請(qǐng)中的提述特定地并入）中所述。在這個(gè)第 二方法中，細(xì)菌的沉淀首先用變性劑處理，如有機(jī)溶劑和促溶劑的混合物，例如苯酚和硫氰 酸胍的混合物，以及用去蛋白劑（deproteinizing agents)處理。其過(guò)程進(jìn)一步特征為用 核酸酶處理直到達(dá)到核酸污染水平低于或等于總重量的5%，如低于或等于總重量的3%， 或低于或等于總重量的2%，以及在截留為30KDa的設(shè)備上進(jìn)行分子分離的步驟，然后是回 收更高分子量的級(jí)分。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述包含極性糖脂混合物的組合物顯示蛋白質(zhì) 污染水平低于或等于總重量的2%。具體地，所述組合物沒(méi)有蛋白質(zhì)污染物。
[0081] 具體來(lái)說(shuō)，所述包含極性糖脂的組合物可從藍(lán)細(xì)菌顫藍(lán)細(xì)菌屬菌種通過(guò)如下方法 獲得或可獲得的，所述方法包括用變性促溶劑提取，用核酸酶處理所述提取物直到達(dá)到核 酸污染水平低于或等于總重量的5%，例如低于或等于總重量的3%，在截留為30KDa的設(shè) 備上進(jìn)行分子分離，然后是回收更高分子量的級(jí)分。
[0082] 更精確地說(shuō)，包含從顫藍(lán)細(xì)菌屬菌種的培養(yǎng)物獲得的極性糖脂的組合物例如可如 下制備。
[0083] 藍(lán)細(xì)菌在培養(yǎng)基中，例如 BG-Il 培養(yǎng)基（Sigma-Aldrich, Cat No. C3061)，于 25°C 的溫度和冷白光下以5umol. πΓ2. set1的光強(qiáng)度并且在連續(xù)24小時(shí)光照方案中生長(zhǎng)。在達(dá) 到穩(wěn)定生長(zhǎng)期時(shí)沉積（sedimented)所述藍(lán)細(xì)菌培養(yǎng)物，例如通過(guò)離心（沉淀）；其沉積物 (或沉淀）可以在提取之前冷凍或冷凍干燥。在融化或再水化（在冷凍干燥的情況中）后， 所述沉積物通過(guò)如下步驟加工：
[0084] (a)通過(guò)稀釋來(lái)重懸所述沉淀，如用包含的水溶劑或水的體積1:1-1:2 ;
[0085] (b)獲得含有所述糖脂混合物的細(xì)胞提取物（也稱為上清），將所述重懸后的沉 淀如上所述與適當(dāng)體積的含有變性劑的溶液混合，例如，如Chomczynski P.和Mackey (Bio techniques, 1995, 19(6) :942-5)中所述，例如其包含基于極性質(zhì)子有機(jī)溶劑的試劑，如苯 酚，以及促溶劑（如硫氰酸胍），例如Trireagent? (Sigma Cat. N T3934)或類似的試劑如 Trizol? (Invitrogen)，以及非質(zhì)子有機(jī)溶劑，如氯仿，以約1體積的藍(lán)細(xì)菌的水性懸液、 2-4體積的提取溶液如約3體積的提取溶液、以及約0. 5-1體積的氯仿的比例，來(lái)進(jìn)行混 合；
[0086] (c)將所述細(xì)胞提取物在室溫溫育至少5分鐘或更久，如至少10分鐘但不超過(guò)50 分鐘的時(shí)長(zhǎng)；
[0087] (d)離心，例如以約2000xg，并收集所述含有極性糖脂級(jí)分的上清（水相）。這種 上清能通過(guò)例如電泳和銀染或通過(guò)生物活性測(cè)定法來(lái)測(cè)量，如在LPS存在下在源自單核細(xì) 胞/巨噬細(xì)胞的THPl細(xì)胞系中TNF-α生成的抑制、或?qū)TP合酶（ATP-SX)的結(jié)合或其活 性的抑制。通過(guò)（d)中離心所獲得的沉淀能通過(guò)添加水或水性緩沖液（以約等于所收集體 積的量）來(lái)重提取，然后是再次離心所述樣品。這第二次的上清與此前的上清合并，然后將 匯集的樣品進(jìn)行進(jìn)一步的步驟，包括：
[0088] (e)通過(guò)添加鹽（例如醋酸鈉（5_20mM最終的））和有機(jī)溶劑（如丙酮，例如也以 約2體積的量）來(lái)沉淀，然后是在與上述相同的條件下離心，然后是用在水中稀釋的乙醇 (例如70%乙醇）來(lái)洗滌沉淀至少1或2次，
[0089] (f)將沉淀重懸于溶液，如緩沖水溶液，如50mM TRIS中，
[0090] (g)通過(guò)用內(nèi)切和/或外切核酸酶（例如DNA酶和RNA酶）來(lái)對(duì)核酸酶污染物進(jìn) 行酶處理，然后是通過(guò)用蛋白酶（例如蛋白酶K，例如以lOOyg/ml進(jìn)行充足時(shí)間（在37°C 至少1小時(shí)））消化來(lái)對(duì)蛋白質(zhì)污染物進(jìn)行酶處理。
[0091] 在酶消化后再次離心所述樣品，收集上清,并通過(guò)添加鹽（例如醋酸鈉,約IOmM最 終的）和適當(dāng)體積（例如2體積）的有機(jī)溶劑（如丙酮）來(lái)進(jìn)一步沉淀所述上清，再次離 心，然后是在水或含有至少一種表面活性劑（如脫氧膽酸鹽（DOC))并且還含有例如陽(yáng)離子 表面活性劑如四乙銨的水溶液中重懸所述沉淀；用如（b)節(jié)所述的（變性的）提取溶液再 次提取其物質(zhì)，然后用醋酸鈉/丙酮如上所述進(jìn)一步沉淀，用70%乙醇洗滌，重懸于水或水 溶液中，并通過(guò)使用截留為30kDa的濾器（或其他合適的設(shè)備）進(jìn)行分子分離，從而消除了 通過(guò)濾器的物質(zhì)，并在水或緩沖水溶液中回收滲余物中的高分子量的糖脂級(jí)分，其核酸污 染水平低于總重量的5%。
[0092] 所述包含極性糖脂的組合物因而可從藍(lán)細(xì)菌顫藍(lán)細(xì)菌屬菌種的細(xì)胞通過(guò)包括變 性促溶劑的方法獲得或可獲得的，其中所述提取步驟如下述步驟（b)中所述進(jìn)行，核酸酶 處理如下述步驟（g)中所述進(jìn)行，分子分離如下述步驟（k)中所述進(jìn)行，并包括進(jìn)一步的如 下步驟（a)、（c)_f)、e)、（h)_j)和⑴-m):
[0093] (a)用水溶液以包括例如1:1-1:2的體積比重懸藍(lán)細(xì)菌顫藍(lán)細(xì)菌屬菌種 (No. 1459/45)的濃縮物，所述濃縮物也任選地為冷凍干燥濃縮物；
[0094] (b)將藍(lán)細(xì)菌的懸浮物與2-4體積（例如約3體積）的變性溶液進(jìn)行混合，所述變 性溶液包含促溶劑、極性質(zhì)子有機(jī)溶劑，如苯酚、以及非質(zhì)子有機(jī)溶劑，如氯仿；
[0095] (c)溫育短于60分鐘的時(shí)間；
[0096] ⑷離心并收集液相，稱為上清；
[0097] (e)通過(guò)向所述上清添加鹽和有機(jī)溶劑（如丙酮）來(lái)沉淀糖脂級(jí)分，并用經(jīng)水稀釋 的乙醇來(lái)洗滌沉淀物（或沉淀）；
[0098] (f)將沉淀重懸于水溶液，如緩沖溶液中；
[0099] (g)用核酸酶，如內(nèi)切核酸酶和/或外切核酸酶處理，并且隨后用蛋白酶，如蛋白 酶K處理；
[0100] (h)通過(guò)添加鹽和有機(jī)溶劑，如丙酮來(lái)沉淀糖脂相；
[0101] (i)任選步驟為用經(jīng)水稀釋的乙醇來(lái)洗滌沉淀，并重懸于包含離子表面活性劑 (如脫氧膽酸鈉）以及季銨鹽的水溶液中；
[0102] (j)如步驟（b)-(f)所述從水溶液中再提??；
[0103] (k)在截留為30KDa的設(shè)備上進(jìn)行分子分離；
[0104] (1)用水或緩沖水溶液來(lái)回收高分子量極性糖脂級(jí)分并評(píng)估核酸或蛋白質(zhì)污染的 水平；
[0105] (m)回收并使用具有低于總重量5% (例如低于3% )的核酸污染的級(jí)分。
[0106] 如此獲得的糖脂級(jí)分的活性能夠通過(guò)生物測(cè)試和/或通過(guò)生化測(cè)定法，例如電泳 來(lái)測(cè)量，所述生物測(cè)試基于在產(chǎn)生細(xì)胞因子如IL-6、IL-8、TNF-a和/或IL-Ιβ的細(xì)胞，例 如THPl中由LPS(來(lái)自牙齦卟啉單胞菌（P. gingivalis)或大腸桿菌）誘導(dǎo)的促炎癥活性的 抑制?？蛇x擇的是，如此獲得的糖脂級(jí)分的活性可例如通過(guò)測(cè)量其在經(jīng)工程改造以穩(wěn)定地 共表達(dá)人TLR-4基因和NF-kB可誘導(dǎo)的SEAP報(bào)告基因的細(xì)胞中對(duì)于由LPS誘導(dǎo)的TLR4介 導(dǎo)的NF-kB活性的抑制效果來(lái)評(píng)估。所述糖脂級(jí)分活性也可通過(guò)在人類肺實(shí)質(zhì)上進(jìn)行LPS 溫育后測(cè)量其對(duì)于TNF-α釋放的抑制效果來(lái)觀察，如實(shí)施例7中。
[0107] WO 2010/094693進(jìn)一步描述了根據(jù)所述發(fā)明的包含糖脂的提取物的分析特征，所 述提取物通過(guò)上述方法獲得。
[0108] 對(duì)極性糖脂級(jí)分的糖類的分析說(shuō)明，糖類組分中（視為100% )，鼠李糖通常為 20-40%，葡萄糖（Glc)為20-40%，木糖（Xyl)為5-10%，甘露糖（Man)為3-5%，半乳糖 (Gal)為3-5%，葡糖胺（GlcN)為0.5-1%，半乳糖醛酸（GalA)為1-6%，其中這些糖可為單 糖或更通常地它們?yōu)閺?fù)合糖（complex sugars)和/或糖類衍生物。對(duì)于所述糖殘基的定性 和定量分析能通過(guò)在用甲醇-鹽酸（HCI lM/MeOH)于80°C將所述糖脂混合物水解20小時(shí)， 提取于己烷中，并用吡啶和乙酸酐來(lái)乙?；螅瑢?duì)乙?；谆擒眨╝cetylated methyl glycosides)的GC-MS分析來(lái)進(jìn)行；和/或通過(guò)在用2M三氟乙酸在120°C處理1小時(shí)，然后 是用硼氫化鈉處理1小時(shí)，隨后用吡啶和乙酸酐來(lái)乙?；螳@得的糖醇乙酸酯（alditol acetates)的分析來(lái)進(jìn)行。
[0109] 對(duì)所述糖脂混合物中主要糖脂組分的分析性分析顯示了如下的相對(duì)組成（重量/ 重量的百分比）：
[0110] -糖類：鼠李糖51%，半乳糖醛酸15%，甘露糖11%，半乳糖11%，木糖4%，葡萄 糖4%，葡糖胺4% ;以及
[0111] -脂肪酸：十八酸，（C 18:0, 55 %);十六酸及3-羥基十六烷酸 (C16:0+C16(30H))，35% ) ;3-羥基^-一烷酸（C15 (30H))，10% )。
[0112] 元素分析顯示存在碳41 %，氫6. 5 %，以及氮4 %。
[0113] 因此，所述極性糖脂特征在于其包含至少1個(gè)單元的鼠李糖或其衍生物，以及特 征為分子量大于30kDa，例如30-40kDa，如32-34kDa (約33kDa)，所述分子量能夠通過(guò)例如 DOC-PAGE然后用銀鹽染色來(lái)確定。
[0114] 具體來(lái)說(shuō)，所述發(fā)明中的組合物可包含極性糖脂的混合物，其中所述極性糖脂包 含硬脂酸（C18:0,十八酸）和/或棕櫚酸（C16:0,十六酸）作為主要糖脂組分的脂肪酸， 其中它們的至少一種與包含至少一個(gè)單元的鼠李糖或其衍生物的糖類有關(guān)。
[0115] 這些脂肪酸，例如以它們的飽和形式存在，并且它們通常以各自包含（當(dāng)總脂質(zhì) 級(jí)分為100)50% -80%硬脂酸和/或15% -40%棕櫚酸的量（分別相對(duì)于所述糖脂混合物 的總脂質(zhì)級(jí)分）存在，并且甚至更典型地這些脂肪酸分別以包含的65-75%和20-32%的量 存在。其他脂肪酸鏈可以不超過(guò)15%的量存在且通常以不超過(guò)10%，例如不多于脂質(zhì)級(jí)分 的5 %的量包含3-羥基十一烷酸或月桂烯酸（或十二烯酸（C12:1))。對(duì)脂肪酸的分析可 在用甲醇-鹽酸（HCI lM/MeOH)于80°C將所述化合物水解20小時(shí)并在己烷相中作為甲酯 提取后通過(guò)GC-MS來(lái)進(jìn)行，如WO 2010/094693中所述。
[0116] 所述糖脂混合物通常沒(méi)有磷脂和游離脂質(zhì)（free lipids)。此外，所述極性糖脂也 可沒(méi)有低分子量糖脂如甘油的脂肪酸衍生物（單半乳糖甘油二酯（MGDG)、雙半乳糖甘油二 酯（DGDG)、硫代異鼠李糖酰甘油二酯（SQDG))，這是藍(lán)細(xì)菌類囊體膜特有的，其分子量通常 低于lkDa。
[0117] 藥物組合物
[0118] 所述化合物的完全水溶性使得以含水性賦形劑和稀釋劑的藥物組合物形式的治 療用途成為可能，所述水性賦形劑和稀釋劑是本領(lǐng)域的專家熟知的，特別是對(duì)于液體配制 物。所述糖脂提取物可以在水和非質(zhì)子溶劑（如DMS0)中稀釋，并且在水溶液中是穩(wěn)定的。 而且，其也是熱穩(wěn)定的。
[0119] 因此，所述糖脂可以配制成藥物組合物。根據(jù)所述發(fā)明的組合物如以包括 0. 1-100 μ g/ml，例如1-50 μ g/ml，如4-20 μ g/ml的濃度包含來(lái)自顫藍(lán)細(xì)菌屬菌種的糖脂 提取物。
[0120] 對(duì)于口服，靜脈內(nèi)（i.v.)和局部施用，對(duì)患者施用的每日糖脂提取物劑量通常包 括 0· 01_50mg，例如 0· l_5mg，如 0· 3_3mg。
[0121] 而且，在一個(gè)具體的方面，這些組合物包含藥學(xué)上可接受的賦形劑、稀釋劑和/或 其他活性成分和穩(wěn)定劑。具體來(lái)說(shuō)，所述糖脂提取物能夠與藥學(xué)上可接受的載劑（carrier) 結(jié)合，所述載劑適于口服、靜脈內(nèi)（i.v.)、吸入或局部施用。
[0122] 如本申請(qǐng)所使用的，術(shù)語(yǔ)"藥學(xué)上可接受的載劑"包含溶劑、分散介質(zhì)、涂覆物、等 滲劑和吸收延遲劑等，其在對(duì)動(dòng)物或人酌情施用時(shí)，不產(chǎn)生不利或其他不良反應(yīng)。
[0123] 口服劑型包括，例如，固體形式、粘合片劑、生物膜或乳劑（cream)、軟膏劑 (ointment)和糊劑（paste)。在一個(gè)實(shí)施方案中，形式為片劑，如美國(guó)專利No. 5,244,663 中所述的那些。
[0124] 載劑可進(jìn)一步包括但不限于崩解劑、粘合劑、潤(rùn)滑劑、調(diào)味劑、色素、防腐劑。 合適的崩解劑包括干淀粉、碳酸I丐、聚氧乙烯山梨聚糖脂肪酸酯（polyoxyethylene sorbitan fatty acid esters)、十二燒基硫酸鈉 （sodium lauryl sulfate)、硬脂酸單 甘油酯（stearic monoglyceride)、乳糖、以及交聯(lián)的聚乙烯批咯燒酮（cross-linked polyvinylpyrrolidones)如交聚維酮（crospovidone)(例如 Polyplasdone?. XL，其可 從 GAF 獲?。?、交聯(lián)的竣甲基纖維素（cross-linked carboxylic methylcelluloses)如 Croscarmelose (例如Ac-di-sol?，其可從FMC獲得），海藻酸，和羧甲基淀粉鈉 （sodium carboxymethyl starches)(例如 Explotab?，其可從 Edward Medell Co.，Inc.獲得）、甲 基纖維素、瓊脂膨潤(rùn)土（agar bentonite)和海藻酸。粘合劑，若使用的話，為增強(qiáng)粘合的那 些。這些粘合劑的例子包括但不限于淀粉、明膠和糖類如鹿糖、右旋糖（dextrose)、糖蜜、和 乳糖。優(yōu)選的潤(rùn)滑劑是硬脂酸酯（鹽）和硬脂酸。
[0125] 乳糖、甘露醇、和Croscarmelose是優(yōu)選的賦形劑。
[0126] 對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員，可以并入劑型的其他組分是已知的或會(huì)是明顯的，參見(jiàn) Remington:The Science and Practice of Pharmacy,第19版（Mack Publishing, 1995)〇
[0127] 在一個(gè)具體的實(shí)施方案中，所述藥物組合物是液體形式。
[0128] 對(duì)于水性懸液的制備，可采用多種甜味劑和調(diào)味劑、著色物質(zhì)，以及（如果需要的 話）乳化和/或懸浮劑，連同稀釋劑如水、乙醇、丙二醇、甘油及其多種組合。優(yōu)選為甘油。
[0129] 根據(jù)進(jìn)一步的方面，所述混合物也適于制備用于獸醫(yī)用途的所述組合物，有與上 述相同的治療目的。 實(shí)施例
[0130] 實(shí)施例1 :材料與方法
[0131] VB3323
[0132] VB3323 從 Bluegreen Biotech (Milano, Italy)獲得。VB3323 對(duì)應(yīng)于包含脂多糖 (LPS)的糖脂級(jí)分的組合物，所述糖脂級(jí)分是從以登錄號(hào)No. 1459/45保藏在藻類和原生動(dòng) 物培養(yǎng)物保藏中心（CCAP)的顫藍(lán)細(xì)菌屬菌株中提取的。三個(gè)不同批次的VB3323的NMR概 貌在圖7中顯不。
[0133] 用于疼痛和COPD的模型
[0134] 實(shí)施例1至6中所用的動(dòng)物模型為本領(lǐng)域中所熟知。實(shí)驗(yàn)用標(biāo)準(zhǔn)步驟進(jìn)行。坐骨 神經(jīng)結(jié)扎小鼠模型和傷害性測(cè)試在下文進(jìn)一步描述。實(shí)施例7和8中使用的細(xì)胞模型在相 應(yīng)的實(shí)施例中描述。
[0135] 坐骨神經(jīng)結(jié)扎
[0136] 重量為28 ± 3g的C57BL/6N，Cr I BR小鼠（野生型）用戊巴比妥鈉（65mg/kg，腹 腔注射（i. P.))進(jìn)行麻醉并進(jìn)行手術(shù)程序。簡(jiǎn)言之，將總坐骨神經(jīng)暴露于大腿中部以及坐 骨神經(jīng)三根分叉部近端，用4根結(jié)扎線松弛地繞其打結(jié)，留下Imm的間隙從而保留神經(jīng)弓上 的循環(huán)（epineural circulation)。在小鼠中，將結(jié)扎線打結(jié)直至看到各條后肢短暫顫搐。 用假的動(dòng)物（坐骨神經(jīng)暴露而無(wú)結(jié)扎線）作為對(duì)照。
[0137] 傷害性測(cè)試
[0138] 根據(jù) Hargreave 法（足底測(cè)試），使用特定的儀器（Ugo Basile, Varese, Italy), 通過(guò)記錄對(duì)福射熱刺激的縮爪潛伏期（paw withdrawal latencies)來(lái)評(píng)估熱痛覺(jué)過(guò)敏 (Hargreaves等，1988)。將動(dòng)物置于玻璃平臺(tái)上的干凈丙烯酸類的盒中，并允許其適應(yīng)環(huán) 境。通過(guò)平臺(tái)將強(qiáng)度恒定的福射加熱源應(yīng)用于后爪的妬面（plantar surface)。通過(guò)檢測(cè) 縮爪并顯示潛伏期秒數(shù)的光電管來(lái)記錄對(duì)刺激的反應(yīng)。于CFA注射后7和14天（最后一 次藥物處理后24小時(shí)）在之前注射的和對(duì)側(cè)后爪中評(píng)估熱痛覺(jué)過(guò)敏，或在CCI模型中在不 同的時(shí)間進(jìn)行評(píng)估。
[0139] 根據(jù)von Frey (Villetti等，2003)所述的方法，使用測(cè)量對(duì)機(jī)械性刺激的反應(yīng)的 儀器（足底觸覺(jué)計(jì)，Ugo Basile, Italy)來(lái)評(píng)估機(jī)械性痛覺(jué)超敏。簡(jiǎn)言之，將小鼠放置在金 屬網(wǎng)桌上并在適應(yīng)環(huán)境后將電子針以漸增的機(jī)械力（50g在20秒時(shí)間中）向跖足表面推壓 直到小鼠縮爪。通過(guò)在FCA注射后7和14天（最后一次藥物處理后24小時(shí)）在之前注射 的和對(duì)側(cè)后爪中測(cè)量縮回的閾值（按克計(jì)）來(lái)評(píng)估機(jī)械性痛覺(jué)超敏，或?qū)τ贑CI模型在不 同的時(shí)間評(píng)估。
[0140] 實(shí)施例2 :VB3323在FCA處理的小鼠中強(qiáng)力地且劑量依賴性地減少熱痛覺(jué)過(guò)敏和 機(jī)械性痛覺(jué)超敏
[0141] 足底內(nèi)（intraplantar)注射弗氏完全佐劑（FCA)后14天，小鼠在FCA處理的爪 中在熱縮回潛伏期和機(jī)械性痛覺(jué)超敏閾值方面顯示顯著的下降（約50% )。
[0142] 在施用FCA后第14天口服VB3323(30和100mg/kg)，在VB3323的施用后2小時(shí) (恢復(fù)28和67% )和6小時(shí)（分別恢復(fù)15%和69% )顯著且劑量依賴性地抑制機(jī)械性 痛覺(jué)超敏。在同一個(gè)實(shí)驗(yàn)中，VB3323在2小時(shí)（恢復(fù)19和80% )和6小時(shí)（恢復(fù)39%和 38% )顯示對(duì)于熱痛覺(jué)過(guò)敏的活性。與100mg/kg劑量類似，VB3323以10mg/kg腹腔注射 (ip)能夠減少機(jī)械性痛覺(jué)超敏和熱痛覺(jué)過(guò)敏。
[0143] 實(shí)施例3 :VB3323以30mg/kg慢性治療顯著減少機(jī)械性痛覺(jué)超敏
[0144] 在用足底內(nèi)弗氏完全佐劑（FCA)處理的小鼠中，用VB3323慢性口服治療（30mg/ kg，7天），在施用FCA后第14天顯著減少機(jī)械性痛覺(jué)超敏（59%恢復(fù)）。此效果在最后一 次VB3323處理后24小時(shí)評(píng)估。
[0145] 實(shí)施例4 :通過(guò)總體形態(tài)學(xué)評(píng)估，VB3323慢性治療不誘導(dǎo)任何顯著的體重變化和 器官改變
[0146] 從VB3323處理開(kāi)始每日監(jiān)測(cè)小鼠體重。在最后一次VB3323處理后24小時(shí)處死 的動(dòng)物中評(píng)估通過(guò)總體形態(tài)學(xué)評(píng)估的器官改變和脾重量。
[0147] VB3323慢性治療不誘導(dǎo)任何上述參數(shù)的變化。
[0148] 實(shí)施例5 :VB3323顯著減少機(jī)械性痛覺(jué)超敏和熱痛覺(jué)過(guò)敏
[0149] 在坐骨神經(jīng)的慢性壓縮（constriction)損傷（一種慢性神經(jīng)性疼痛的模型）后 14天，小鼠在結(jié)扎的爪中在熱縮回潛伏期和機(jī)械性痛覺(jué)超敏閾值方面顯示顯著的下降（約 50% )?？诜B3323(10和30mg/kg/天，8天）在其最后一次施用2h時(shí)顯著地抑制痛覺(jué)超 敏（恢復(fù)45%和50% )和熱痛覺(jué)過(guò)敏（恢復(fù)42%和43% )。
[0150] 在這個(gè)模型中VB3323在單施用后對(duì)痛覺(jué)超敏沒(méi)有效果，并且其對(duì)熱痛覺(jué)過(guò)敏效 果不足。VB3323在重復(fù)施用后活性明顯，表明了重要的治療活性。
[0151] 實(shí)施例6 :VB3323慢性治療減少了由慢性疼痛誘導(dǎo)的體重減輕
[0152] 由坐骨神經(jīng)結(jié)扎引起的神經(jīng)性疼痛誘導(dǎo)了小鼠體重的減少（從基礎(chǔ)體重的Λ % 為約4)。
[0153] VB3323慢性治療（10和30mg/kg/天，8天）減少了慢性疼痛誘導(dǎo)的體重減輕。
[0154] -并考慮，實(shí)施例1至6的結(jié)果證明了 VB3323能夠治療疼痛，并具體為神經(jīng)性和 /或慢性疼痛。
[0155] 實(shí)施例7 :VB3323在人支氣管實(shí)質(zhì)中抑制LPS誘導(dǎo)的TNF α釋放
[0156] 人實(shí)質(zhì)肺組織是從San Gerardo Hospital, Monza, Italy的經(jīng)受癌瘤切除術(shù)的患 者獲得的。患者沒(méi)有接受放療或以類固醇、阿片類或化療的慢性治療。所有實(shí)質(zhì)組織的樣本 是從遠(yuǎn)離腫瘤的位點(diǎn)獲得的。研究經(jīng)San Gerardo Hospital Monza Italy制度倫理委員 會(huì)批準(zhǔn)，并且所有志愿者給出了知情同意。在用Kreb's緩沖液（(nM組成：NaCl 118. 4, KCl 4. 7, CaCl22. 5, KH2PO4L 2, NaHC0325,葡萄糖11. 7)數(shù)次洗滌過(guò)程中，將切下的肺組織上的腫 瘤、大的氣道、胸膜和可見(jiàn)的血管切除，并用解剖剪精細(xì)地切成2_碎片。六個(gè)外植塊（總 重量約30mg)在培養(yǎng)生物反應(yīng)器（Synthecon/NASA USA)中用包含1%青霉素、1%鏈霉素、 以及1%慶大霉素的1?^1-164培養(yǎng)基在371：在5%二氧化碳/空氣中溫育16小時(shí)。然后 或是用l〇〇ng/ml LPS(Sigma-Aldrich)來(lái)刺激組織，或是單獨(dú)在細(xì)胞培養(yǎng)基中將組織維持 4小時(shí)。為了中和TNF，在用100ng/ml LPS刺激之前，用0. 01、0. 1、或ΙμΜ的VB3323將組 織溫育1小時(shí)。收獲肺組織碎片及上清并均儲(chǔ)存于_80°C直至分析。稱量所述組織碎片以 確定總組織重量而將釋放的細(xì)胞因子水平標(biāo)準(zhǔn)化（normalize)。上清中TNFa的水平通過(guò) 酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法（ELISA)和按組織重量校正的濃度來(lái)測(cè)量。人TNF-特異性的ELISA試 劑盒（檢測(cè)極限為〇.2pg/mg的組織）購(gòu)自Pirce，對(duì)于每個(gè)ELISA都遵從制造商的規(guī)程。
[0157] VB3323,在人類支氣管實(shí)質(zhì)組織培養(yǎng)物中（IC50為0. ΙμΜ)濃度依賴性地 (0. 01，0. 1，或1 μ Μ)抑制由大腸桿菌-LPS誘導(dǎo)的TNF α的釋放。與同濃度的參考標(biāo)準(zhǔn)的 地塞米松（69% )相比，VB3323在1 μ M時(shí)更為強(qiáng)力（89% )地抑制TNFa釋放。
[0158] 地塞米松是用于在人中治療COPD的藥物。此處，發(fā)明人發(fā)現(xiàn)VB3323比地塞米松 更為強(qiáng)力。因此，VB3323是一種非常有前途的治療COPD的藥物。
[0159] 實(shí)施例8 :VB3323在小鼠支氣管實(shí)質(zhì)中抑制LPS誘導(dǎo)的TNF a釋放
[0160] 所述動(dòng)物（BALB/c雄性小鼠，體重20_22g)用頸脫位法處死。打開(kāi)胸廓切斷肋骨。 用手術(shù)鑷夾住心臟，用手術(shù)剪將肺和心臟從胸腔切下，并放進(jìn)冷的Krebs溶液（nM組成： 似(：1118.4，1((：14.7，〇&(：1 22.5，腿2?041.2，似!1(：0325，葡萄糖11.7)。大的氣道和可見(jiàn)的血 管被切下。將肺分為30mg的碎片（約5片/小鼠）并用解剖刀精細(xì)地切碎（六片，每個(gè)碎 片約2mm 3)。六個(gè)外植體（總重量30mg)在24孔板的每個(gè)孔（2. Ocm2)用Iml的RPMI-1640 基質(zhì)（RPMI-1640+抗菌抗真菌溶液lOOx，Sigma-Aldrich)在37°C在5%二氧化碳/空氣溫 育16小時(shí)。然后所述基質(zhì)用新鮮基質(zhì)替換，并用化合物處理組織1小時(shí)。在1小時(shí)后，用 100ng/ml LPS大腸桿菌055:B5(Sigma-Aldrich)來(lái)刺激組織。LPS刺激4小時(shí)后，收獲上清 并儲(chǔ)存在_80°C直至ELISA分析。六個(gè)外植體中的三個(gè)在10%福爾馬林緩沖液中固定以用 于組織學(xué)/免疫組化分析。另外三個(gè)組織外植體置于RNA保存緩沖液（RNA-later buffer) 中過(guò)夜，然后儲(chǔ)存在_80°C。
[0161] 小鼠 TNF特異的ELISA試劑盒（檢測(cè)極限為0· 2pg/mg的組織）購(gòu)自Pirce，對(duì)于 每個(gè)ELISA都遵從制造商的規(guī)程。
[0162] VB3323在ΙμΜ時(shí)在小鼠支氣管實(shí)質(zhì)組織培養(yǎng)物中抑制由大腸桿菌LPS誘導(dǎo)的 TNFa釋放。68%的活性與同濃度的參考標(biāo)準(zhǔn)的地塞米松的活性（67% )相似。
[0163] 所述實(shí)驗(yàn)確認(rèn)了 VB3323是一種非常有前途的治療COPD的藥物。
[0164] 實(shí)施例9 : 口服VB3323的對(duì)小鼠中COro模型的效果
[0165] 組合的香煙煙霧/臭氧暴露：
[0166] 使用的動(dòng)物為Balb/CBYJ小鼠（雌性，15-17周齡）。將動(dòng)物暴露于香煙煙霧和 臭氧的組合。簡(jiǎn)言之，在第一次對(duì)香煙煙霧（CS)適應(yīng)3天后，將4種研究香煙的主流煙霧 (2R4F)和臭氧（O 3)與I. 7LPM(升/分鐘的空氣）稀釋空氣混合，并將動(dòng)物暴露于CS+0320 分鐘。在這之后是1小時(shí)的恢復(fù)期。此步驟再重復(fù)2次（每日總暴露為1小時(shí)）。05+0 3暴 露的總持續(xù)期為14天。
[0167] 動(dòng)物的處理：
[0168] 在整個(gè)暴露期間將動(dòng)物進(jìn)行處理（CS適應(yīng)及CS+03暴露）。每天在第一次CS或 CS+03暴露前1小時(shí)給予VB3323 (10mg/kg/天）。假的（未處理的）和CS+03對(duì)照的動(dòng)物用 空介質(zhì)（vehicle)處理。
[0169] 測(cè)量參數(shù)：
[0170] 測(cè)量了不同的參數(shù)：
[0171] -每日測(cè)量體重變化。
[0172] -實(shí)現(xiàn)肺功能檢查（Buxco)以在最后一次CS+03暴露后18-24小時(shí)測(cè)量靜態(tài)和動(dòng)態(tài) 的肺功能（FRC (功能余氣量））、TLC (總肺活量）、FEV2(I/FVC ([20秒內(nèi)用力呼氣體積]/ [用 力呼氣值])
[0173] -通過(guò)在最后一次CS+03暴露后5小時(shí)進(jìn)行支氣管肺泡灌洗來(lái)測(cè)量肺炎。評(píng)估總 細(xì)胞數(shù)和中性粒細(xì)胞數(shù)。
[0174] 結(jié)果：
[0175] 在圖8中，TLR4拮抗劑VB3323處理顯示了對(duì)05+03暴露誘導(dǎo)的體重減少僅輕微但 顯著的效力。
[0176] 在圖9中，TLR4拮抗劑VB3323處理顯著改善了 CS+03暴露誘導(dǎo)的肺水腫。
[0177] 進(jìn)行了其他實(shí)驗(yàn)并顯示用TLR4拮抗劑處理對(duì)于靜態(tài)和動(dòng)態(tài)的肺功能參數(shù)沒(méi)有效 力，這對(duì)于肺氣腫/肺充氣過(guò)度和氣道阻塞是預(yù)測(cè)性的。
[0178] 口服施用TLR4拮抗劑VB3323(每天10mg/kg，2周）引起香煙煙霧/臭氧誘導(dǎo)的 體重減輕的輕度減少，并顯著改善CS+0 3暴露誘導(dǎo)的肺水腫。
[0179] 口服施用VB3323對(duì)于在支氣管肺泡灌洗流體中評(píng)估的CS+03誘導(dǎo)的氣道發(fā)炎是 無(wú)效的。這個(gè)結(jié)果可通過(guò)低劑量測(cè)試的和/或VBR322通過(guò)口服施用而非通過(guò)吸入的事實(shí) 來(lái)解釋。
【權(quán)利要求】
1. 一種包含極性糖脂的組合物，所述極性糖脂可從藍(lán)細(xì)菌顫藍(lán)細(xì)菌屬菌種 (cyanobacterium Oscillatoria species, CyP)的細(xì)胞獲得，所述組合物用于治療和/或預(yù) 防疼痛和 / 或慢性阻塞性肺疾?。–hronic Obstructive Pulmonary Disease, COPD)。
2. 根據(jù)權(quán)利要求I的用于所述用途的組合物，其中所述極性糖脂是脂多糖（LPS)。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1或2的用于所述用途的組合物，其中所述極性糖脂是從藍(lán)細(xì)菌顫藍(lán) 細(xì)菌屬菌種中提取的。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1至3任一項(xiàng)的用于所述用途的組合物，其中所述極性糖脂可從藍(lán)細(xì) 菌顫藍(lán)細(xì)菌屬菌種通過(guò)如下方法獲得，所述方法包括： (a) 提供所述藍(lán)細(xì)菌； (b) 從所述藍(lán)細(xì)菌提取極性糖脂； (c) 沉淀步驟（b)的極性糖脂；并且 (d) 純化步驟（c)的經(jīng)提取并沉淀的極性糖脂。
5. 根據(jù)權(quán)利要求4的用于所述用途的組合物，其中步驟（b)包括用包含促溶劑和非質(zhì) 子有機(jī)溶劑如氯仿的變性溶液的處理。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1至5任一項(xiàng)的用于所述用途的組合物，其中所述方法包括如下步 驟： (i) 提供藍(lán)細(xì)菌的濃縮物，如通過(guò)離心從培養(yǎng)基收集藍(lán)細(xì)菌后獲取的經(jīng)冷凍干燥的濃 縮物； (ii) 將所述濃縮物懸浮于溶液中； (iii) 任選地用微波和/或液體/固體分離如通過(guò)離心處理，并收集液相（稱為上 清）； (iv) 將藍(lán)細(xì)菌的懸浮液或所述上清與包含促溶劑和非質(zhì)子有機(jī)溶劑如氯仿的變性溶 液混合； (V)將步驟（iv)獲得的溶液進(jìn)行溫育； (vi) 進(jìn)行液體/液體分離，優(yōu)選通過(guò)離心并收集水性液相； (vii) 沉淀糖脂級(jí)分，例如通過(guò)向所述上清添加鹽和有機(jī)溶劑如丙酮； (viii) 將沉淀物重懸于水溶液中； (ix) 任選地用有機(jī)溶劑如異丙醇來(lái)處理在（viii)獲得的溶液，離心，并收集液相，優(yōu) 選通過(guò)離心進(jìn)行；并且 (X)通過(guò)離子交換柱并收集包含所述極性糖脂的級(jí)分。
7. 根據(jù)權(quán)利要求1至3任一項(xiàng)的用于所述用途的組合物，其中所述極性糖脂可從藍(lán)細(xì) 菌顫藍(lán)細(xì)菌屬菌種通過(guò)如下方法獲得，所述方法包括用變性促溶劑提取，用核酸酶處理所 述提取物直到核酸污染水平低于或等于總重量的5%，在截留為30KDa的設(shè)備上進(jìn)行分子 分離，然后是回收更高分子量的級(jí)分。
8. 根據(jù)權(quán)利要求7的用于所述用途的包含極性糖脂的組合物，其可從藍(lán)細(xì)菌顫藍(lán)細(xì)菌 屬菌種的細(xì)胞通過(guò)包括用變性促溶劑提取的方法來(lái)獲得，其中所述提取步驟是如下述步驟 (b)所述進(jìn)行，核酸酶處理是如下述步驟（g)所述進(jìn)行，分子分離是如下述步驟（k)所述進(jìn) 行，并包括進(jìn)一步的下述步驟（a)、（c)-(f)、（h)-(j)和（l)-(m): (a)用水溶液懸浮藍(lán)細(xì)菌顫藍(lán)細(xì)菌屬菌種的濃縮物，任選地為冷凍干燥濃縮物，其體積 比優(yōu)選包含1:1-1:2 ; (b) 將藍(lán)細(xì)菌的懸浮物與2-4體積（優(yōu)選約3體積）的變性溶液進(jìn)行混合，所述變性溶 液包含促溶劑、極性質(zhì)子有機(jī)溶劑（優(yōu)選苯酚）、以及非質(zhì)子有機(jī)溶劑如氯仿； (c) 溫育短于60分鐘的時(shí)間； (d) 離心并收集液相，稱為上清； (e) 通過(guò)向所述上清添加鹽和有機(jī)溶劑（優(yōu)選丙酮）來(lái)沉淀糖脂級(jí)分，并用水稀釋過(guò)的 乙醇來(lái)洗滌沉淀物（或沉淀）； (f) 將沉淀重懸于水溶液中，優(yōu)選緩沖的水溶液； (g) 用核酸酶處理，優(yōu)選內(nèi)切核酸酶和/或外切核酸酶，并且隨后用蛋白酶，優(yōu)選蛋白 酶K處理； (h) 通過(guò)添加鹽和有機(jī)溶劑，優(yōu)選丙酮來(lái)沉淀糖脂相； (i) 任選地用水稀釋過(guò)的乙醇來(lái)洗滌沉淀，并重懸于包含離子表面活性劑，優(yōu)選脫氧膽 酸鈉，以及季銨鹽的水溶液中； (j) 如步驟（b)-(f)所述從所述水溶液中重新提??； (k) 在截留為30KDa的設(shè)備上進(jìn)行分子分尚； (l) 用水或緩沖的水溶液來(lái)回收高分子量極性糖脂級(jí)分并評(píng)估核酸或蛋白質(zhì)污染的水 平； (m) 回收并使用具有低于總重量5%的核酸污染的級(jí)分。
9. 根據(jù)權(quán)利要求1至7任一項(xiàng)的用于所述用途的組合物，其中所述組合物包含極性糖 脂的混合物，所述混合物包含硬脂酸（C18:0,十八酸）和/或棕櫚酸（C16:0,十六酸）作 為主要糖脂組分的脂肪酸，其中它們的至少一種與包含至少一個(gè)單元的鼠李糖或其衍生物 的糖類有關(guān)。
10. 根據(jù)權(quán)利要求9的用于所述用途的組合物，其中所述極性糖脂的混合物包含相對(duì) 于所述糖脂混合物的總脂質(zhì)級(jí)分50%-80%的硬脂酸（C18:0,十八酸）和/或15%-40% 的棕櫚酸（C16:0,十六酸）。
11. 根據(jù)權(quán)利要求9或10的用于所述用途的組合物，其中所述極性糖脂的混合物包含 了相對(duì)于所述糖脂混合物的總脂質(zhì)級(jí)分65-75%的硬脂酸（C18:0,十八酸）和/或20-32% 的棕櫚酸（C16:0,十六酸）。
12. 根據(jù)權(quán)利要求1至11任一項(xiàng)的用于所述用途的組合物，其中所述藍(lán)細(xì)菌顫藍(lán) 細(xì)菌屬菌種是以登錄號(hào)No. 1459/45保藏在藻類和原生動(dòng)物培養(yǎng)物保藏中心（Culture Collection of Algae and Protozoa, CCAP)的顫藍(lán)細(xì)菌屬菌種。
13. 根據(jù)權(quán)利要求I至12任一項(xiàng)的用于所述用途的包含極性糖脂的組合物，用于治療 和/或預(yù)防疼痛。
14. 根據(jù)權(quán)利要求13的用于所述用途的包含極性糖脂的組合物，用于治療和/或預(yù)防 神經(jīng)性疼痛。
15. 根據(jù)權(quán)利要求13的用于所述用途的包含極性糖脂的組合物，用于治療和/或預(yù)防 周圍神經(jīng)性疼痛、中樞神經(jīng)性疼痛、或混合（周圍和中樞）神經(jīng)性疼痛。
16. 根據(jù)權(quán)利要求13的用于所述用途的包含極性糖脂的組合物，用于治療和/或預(yù)防 由糖尿病、獲得性免疫缺陷綜合征或癌癥引起的神經(jīng)性疼痛。
17. 根據(jù)權(quán)利要求1至12任一項(xiàng)的用于所述用途的包含極性糖脂的組合物，用于治療 和 / 或預(yù)防慢性阻塞性肺?。╟hronic obstructive pulmonary disease, COPD)。
18. 根據(jù)權(quán)利要求I至17任一項(xiàng)的用于所述用途的包含極性糖脂的組合物，其中所述 組合物進(jìn)一步包含藥學(xué)上可接受的賦形劑、稀釋劑和/或其他穩(wěn)定劑。
19. 根據(jù)權(quán)利要求1至18任一項(xiàng)的用于所述用途的包含極性糖脂的組合物，其中所述 組合物用于口服、靜脈內(nèi)（i.v.)、通過(guò)吸入或局部施用。
【文檔編號(hào)】C12P19/04GK104321066SQ201380026466
【公開(kāi)日】2015年1月28日 申請(qǐng)日期:2013年3月13日 優(yōu)先權(quán)日:2012年3月21日
【發(fā)明者】T·克洛西, F·瓜格尼尼, E·扎里尼 申請(qǐng)人:賽諾菲