解淀粉芽孢桿菌及其應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開一株海洋解淀粉芽孢桿菌(Bacillus?amyloliquefaciens)M001及其應(yīng)用，所述的解淀粉芽孢桿菌M001保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏日期2013年11月4日，保藏號(hào)為CGMCC?No.8433。該菌株分離篩選自牙鲆魚腸道，能明顯提高養(yǎng)殖魚非特異性免疫水平，增強(qiáng)養(yǎng)殖魚抵御細(xì)菌病原感染的能力。
【專利說明】解淀粉芽孢桿菌及其應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及水產(chǎn)微生物應(yīng)用【技術(shù)領(lǐng)域】，具體的說是一種解淀粉芽孢桿菌(Bacillus amyloliquefaciens)及其應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]我國(guó)水產(chǎn)養(yǎng)殖產(chǎn)量連續(xù)十多年居世界首位，成為大農(nóng)業(yè)中發(fā)展最快的產(chǎn)業(yè)之一。由于養(yǎng)殖業(yè)多年的集約式快速發(fā)展，加上養(yǎng)殖環(huán)境不斷惡化、養(yǎng)殖品種抗逆性衰退，最終導(dǎo)致養(yǎng)殖動(dòng)物病害頻繁發(fā)生，直接造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。病害已成為限制水產(chǎn)養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)持續(xù)健康發(fā)展的瓶頸。我國(guó)水產(chǎn)病害的防治手段主要依賴抗生素等化學(xué)藥物，由于抗生素帶來的生態(tài)、環(huán)境以及食品安全等的不良影響，其在水產(chǎn)養(yǎng)殖的應(yīng)用在國(guó)內(nèi)外受到很多限制。益生菌是一類能夠抑制病原微生物、改善養(yǎng)殖生態(tài)環(huán)境、調(diào)節(jié)動(dòng)物體內(nèi)生態(tài)平衡、增強(qiáng)肌體免疫功能、提高飼料利用效率等作用的有益微生物，許多商品化的益生菌制劑已在畜牧養(yǎng)殖業(yè)中廣泛應(yīng)用，以達(dá)到減少抗生素使用、控制疾病發(fā)生、促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)的目的。目前用于水產(chǎn)養(yǎng)殖的益生菌多數(shù)來源于陸生環(huán)境或陸生動(dòng)物，這些益生菌多數(shù)不適合在水生環(huán)境特別是海洋環(huán)境中生長(zhǎng)和繁殖，導(dǎo)致其益生效應(yīng)難以有效發(fā)揮。因此，從海洋環(huán)境或海洋動(dòng)物中分離篩選土著菌作為益生菌來源，對(duì)保證海洋益生菌制劑的高效性和安全性特別關(guān)鍵。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明目的在于提供一種海洋解淀粉芽孢桿菌及其應(yīng)用。
[0004]為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案為:
[0005]—種海洋解淀粉芽孢桿菌，海洋解淀粉芽孢桿菌(Bacillus amyloliquefaciens)MOOl保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏日期2013年10月5日，保藏號(hào)為CGMCC N0.8433，保藏單位地址為北京市朝陽區(qū)北辰西路I號(hào)院3號(hào)。
[0006]一種解淀粉芽孢桿菌的應(yīng)用，所述解淀粉芽孢桿菌用于制備微生物制劑。
[0007]所述解淀粉芽孢桿菌作為添加劑用于抑制海水魚類病原菌、增強(qiáng)魚類免疫功能的微生物制劑。
[0008]將所述解淀粉芽孢桿菌制成干菌粉。
[0009]進(jìn)一步的說，將解淀粉芽抱桿菌(Bacillus amyloliquefaciens)MOOI在Zobell2216E海水固體培養(yǎng)基上劃線，取一單菌落接種于2216E液體培養(yǎng)基中，在25_30°C培養(yǎng)6-8小時(shí)，即為種子液，將所得種子液按體積比1:100轉(zhuǎn)接于新鮮的2216E液體培養(yǎng)基，在25-30°C、120-200rpm培養(yǎng)24-36小時(shí)，即為發(fā)酵液；所得發(fā)酵液在5000g離心30min，取菌泥在60°C恒溫干燥至衡重，而后與玉米淀粉混合制成干菌粉。
[0010]海洋解淀粉芽孢桿菌，即來源于牙鲆魚類消化道的內(nèi)源性解淀粉芽孢桿菌M001，該菌株不僅有抑制病原菌的效果，還能增強(qiáng)養(yǎng)殖魚非特異性免疫水平和抵御病原菌感染的能力。
[0011] 本發(fā)明所涉及的菌株信息如下:[0012]1.來源。該菌株分離自健康牙鲆(Paralichthys olivaceus)消化道,經(jīng)高劑量注射和投喂確定對(duì)養(yǎng)殖大菱鲆、牙鲆、舌鰨、小白鼠等安全，無致病性。
[0013]2.形態(tài)學(xué)特征。革蘭氏染色陽性，在Zobell2216E海水固體培養(yǎng)基上、28°C培養(yǎng)2天的菌落形態(tài)直徑大小為2~3_，圓形，凸起，乳白色，表面粗糙，邊緣不整。具有莢膜和芽孢，芽孢呈橢圓形。
[0014]3.生理生化特征。氧化酶反應(yīng)陰性，過氧化氫酶反應(yīng)陽性，鳥氨酸脫羧酶反應(yīng)陰性，精氨酸雙水解酶陽性，賴氨酸脫羧酶反應(yīng)陽性，脲酶反應(yīng)陰性，L-阿拉伯糖醇反應(yīng)陰性，半乳糖酸鹽反應(yīng)陰性，5-酮基-葡萄糖酸鈉反應(yīng)陰性，脂肪酶反應(yīng)陽性，酚紅反應(yīng)陰性，β -葡萄糖苷反應(yīng)陽性，甘露醇反應(yīng)陽性，麥芽糖反應(yīng)陽性，吲哚產(chǎn)生陰性，N-乙酰-β -葡萄糖反應(yīng)陰性，β_半乳糖苷酶反應(yīng)陰性，葡萄糖反應(yīng)陽性，蔗糖反應(yīng)陽性，L-阿拉伯糖反應(yīng)陰性，α-葡萄糖反應(yīng)陽性，α-半乳糖苷酶反應(yīng)陽性，海藻糖反應(yīng)陽性，鼠李糖反應(yīng)陽性，肌醇反應(yīng)陽性，側(cè)金盞花醇反應(yīng)陰性，帕拉金糖反應(yīng)陰性，β_葡萄糖酸酶反應(yīng)陽性，纖維二糖反應(yīng)陰性，山梨醇反應(yīng)陽性，α-麥芽糖苷反應(yīng)陽性，丙二酸利用陽性，L-天門冬素芳胺酶反應(yīng)陽性。
[0015]I) 16SrRNA 基因序列如 SEQ ID:1 所示。
[0016]2)抗生素敏感性。用藥敏紙片擴(kuò)散法檢測(cè)解淀粉芽孢桿菌MOOl對(duì)抗生素的敏感性，結(jié)果表1所示，該菌對(duì)6種抗生素敏感。
[0017]表1M001的抗生素敏感性
[0018]
【權(quán)利要求】
1.一種海洋解淀粉芽孢桿菌，其特征在于:海洋解淀粉芽孢桿菌(Bacillusamyloliquefaciens)M001保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心,保藏日期2013年11月5日，保藏號(hào)為CGMCC N0.8433。
2.—種權(quán)利要求1所述的解淀粉芽孢桿菌的應(yīng)用，其特征在于:所述解淀粉芽孢桿菌用于制備微生物制劑。
3.按權(quán)利要求2所述的解淀粉芽孢桿菌的應(yīng)用，其特征在于:所述解淀粉芽孢桿菌作為添加劑用于抑制海水魚類病原菌、增強(qiáng)魚類免疫功能的微生物制劑。
4.按權(quán)利要求2或3所述的解淀粉芽孢桿菌的應(yīng)用，其特征在于:將所述解淀粉芽孢桿菌制成干菌粉。
5.按權(quán)利要求4所述的解淀粉芽孢桿菌的應(yīng)用，其特征在于: 將解淀粉芽抱桿菌(Bacillus amyloliquefaciens)M001 在 Zobell2216E 海水固體培養(yǎng)基上劃線，取一單菌落接種于2216E液體培養(yǎng)基中，在25-30°C培養(yǎng)6_8小時(shí)，即為種子液，將所得種子液按體積比1:100轉(zhuǎn)接于新鮮的2216E液體培養(yǎng)基，在25-30°C、120-200rpm培養(yǎng)24-36小時(shí)，即為發(fā)酵液；所得發(fā)酵液在5000g離心30min，取菌泥在60°C恒溫干燥至 衡重，而后與玉米淀粉混合制成干菌粉。
【文檔編號(hào)】C12R1/07GK103966118SQ201310711090
【公開日】2014年8月6日 申請(qǐng)日期:2013年12月20日 優(yōu)先權(quán)日:2013年12月20日
【發(fā)明者】莫照蘭, 李貴陽, 黃倢, 李 杰 申請(qǐng)人:中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院黃海水產(chǎn)研究所