一種利用細(xì)菌發(fā)酵液制備納米銀的簡(jiǎn)單方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種利用細(xì)菌發(fā)酵液制備納米銀的簡(jiǎn)單方法。它是將金黃色葡萄球菌或糞腸球菌接種到Mueller–Hinton培養(yǎng)基中，于25～37℃振蕩培養(yǎng)12-72小時(shí)，然后將菌體和菌懸液分離開(kāi)，取菌懸液，往菌懸液中加入硝酸銀溶液，使銀離子的濃度為0.5-10mM，然后在25～37℃條件下振蕩反應(yīng)5-72小時(shí)，再經(jīng)超聲處理，超聲后的溶液再經(jīng)過(guò)濾，濾液即為納米銀溶液。本發(fā)明利用細(xì)菌的發(fā)酵液制備納米銀粒子，制備方法簡(jiǎn)便易行，可操作性強(qiáng)，成本低廉，且制備過(guò)程不會(huì)向環(huán)境排出有毒有害物質(zhì)，是一項(xiàng)既簡(jiǎn)單又環(huán)保的納米銀制備技術(shù)。
【專(zhuān)利說(shuō)明】一種利用細(xì)菌發(fā)酵液制備納米銀的簡(jiǎn)單方法
【技術(shù)領(lǐng)域】:
[0001]本發(fā)明屬于生物【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種利用細(xì)菌發(fā)酵液制備納米銀的簡(jiǎn)單方法。
【背景技術(shù)】:
[0002]納米銀(Silver nanoparticles,簡(jiǎn)稱(chēng)Ag-NPs)被稱(chēng)為二^--世紀(jì)新一代的抗菌
劑，它具有廣譜的抗菌性能、高效的抗菌活性、低毒和不易使微生物產(chǎn)生抗藥性的優(yōu)點(diǎn)。納米銀目前已被廣泛應(yīng)用于各種醫(yī)療材料中，如創(chuàng)傷敷料、外科醫(yī)生的面具、醫(yī)用導(dǎo)管、醫(yī)用手術(shù)器械、植入人體的組織等?；诩{米銀優(yōu)良的抗菌性能，其應(yīng)用前景廣闊，在生活用品領(lǐng)域、醫(yī)療衛(wèi)生領(lǐng)域、建材領(lǐng)域、電子工業(yè)領(lǐng)域等都有廣泛的市場(chǎng)需求。
[0003]納米銀粒子的制備方法很多，主要是液相化學(xué)還原法、電化學(xué)法、光化學(xué)還原法等化學(xué)方法，和還原球磨法、蒸發(fā)冷凝法、霧化法等物理方法，其中尤以化學(xué)還原法比較常見(jiàn)，但也需要嚴(yán)格控制反應(yīng)條件，對(duì)制備技術(shù)的要求比較高。

【發(fā)明內(nèi)容】
:
[0004]本發(fā)明的目的是提供一種簡(jiǎn)便易行、可操作性強(qiáng)、成本低廉，且制備過(guò)程不會(huì)向環(huán)境排出有毒有害物質(zhì)，比 較環(huán)保的利用細(xì)菌發(fā)酵液制備納米銀的簡(jiǎn)單方法。
[0005]本發(fā)明的利用細(xì)菌發(fā)酵液制備納米銀的簡(jiǎn)單方法，其特征在于，包括以下步驟:將金黃色葡萄球菌或糞腸球菌接種到Mueller - Hinton (MH)培養(yǎng)基中，于25~37°C振蕩培養(yǎng)12-72小時(shí)，然后將菌體和菌懸液分離開(kāi)，取菌懸液，往菌懸液中加入硝酸銀溶液，使銀離子的濃度為0.5-10mM，然后在25~37°C條件下振蕩反應(yīng)5_72小時(shí)，再經(jīng)超聲處理，超聲后的溶液再經(jīng)過(guò)濾，濾液即為納米銀溶液。
[0006]所述的超聲處理優(yōu)選為在冰浴條件下超聲l_5min左右，超聲輸出功率為150-200瓦特。
[0007]所述的過(guò)濾優(yōu)選是將超聲后的溶液用孔徑0.1-0.22 μ m的濾膜過(guò)濾。
[0008]本發(fā)明還提供了另外一種利用細(xì)菌發(fā)酵液制備納米銀的簡(jiǎn)單方法，其特征在于，包括以下步驟:將金黃色葡萄球菌或糞腸球菌接種到Mueller - Hinton (MH)培養(yǎng)基中，于25~37°C振蕩培養(yǎng)12-72小時(shí)，然后將菌體和菌懸液分離開(kāi)，取菌懸液，往菌懸液中加入硝酸銀溶液，使銀離子的濃度為0.5-lmM，然后在25~37°C條件下振蕩反應(yīng)5_24小時(shí)，再經(jīng)過(guò)濾，濾液即為納米銀溶液。
[0009]所述的過(guò)濾優(yōu)選是用孔徑0.1-0.22 μ m的濾膜過(guò)濾。
[0010]本發(fā)明的Mueller-Hinton (MH)培養(yǎng)基是現(xiàn)有技術(shù)中已知的培養(yǎng)基，即水解酪蛋白(Mueller-Hinton)培養(yǎng)基,可以直接從試劑公司購(gòu)買(mǎi)。
[0011]本發(fā)明利用細(xì)菌的發(fā)酵液制備納米銀粒子，制備方法簡(jiǎn)便易行，可操作性強(qiáng)，成本低廉，且制備過(guò)程不會(huì)向環(huán)境排出有毒有害物質(zhì)，是一項(xiàng)既簡(jiǎn)單又環(huán)保的納米銀制備技術(shù)?！緦?zhuān)利附圖】

【附圖說(shuō)明】:
[0012]圖1-圖7分別是實(shí)施例1-7的納米銀溶液的電鏡圖。
【具體實(shí)施方式】:
[0013]以下實(shí)施例是對(duì)本發(fā)明的進(jìn)一步說(shuō)明，而不是對(duì)本發(fā)明的限制。
[0014]實(shí)施例1:
[0015]將金黃色葡萄球菌接種到100ml的滅菌MH培養(yǎng)基中，充分混勻后置于恒溫水浴搖床37°C振蕩培養(yǎng)24h，將培養(yǎng)液加到離心管中置于離心機(jī)上5000rpm離心5分鐘，將菌沉淀與上清液(菌懸液)分離。向20ml上清液中加入200 μ I的0.1M的硝酸銀溶液，使銀離子的濃度為ImM，置于水浴搖床上37°C振蕩反應(yīng)24h，然后振蕩后的溶液在冰浴條件下進(jìn)行超聲破碎，輸出功率為150瓦特，超聲30s，間歇30s，重復(fù)6次。將超聲后的溶液用0.22 μ m的濾膜過(guò)濾，得到澄清的納米銀溶液。該納米銀溶液的電鏡圖如圖1所示，從圖1可以看出，本實(shí)施例的納米銀溶液確實(shí)為納米銀溶液。
[0016]實(shí)施例2:
[0017]將金黃色葡萄球菌接種到100ml的滅菌MH培養(yǎng)基中，充分混勻后置于恒溫水浴搖床37°C振蕩培養(yǎng)24h，將培養(yǎng)液加到離心管中置于離心機(jī)上5000rpm離心5分鐘，將菌沉淀與上清液(菌懸液)分離。向20ml上清液中加入Iml的0.1M的硝酸銀溶液，使銀離子的濃度為5mM，置于水浴搖床上37°C振蕩反應(yīng)24h，然后振蕩后的溶液在冰浴條件下進(jìn)行超聲破碎，輸出功率為200瓦特，超聲30s，間歇30s，重復(fù)6次。將超聲后的溶液用0.22 μ m的濾膜過(guò)濾，得到澄清的納米銀溶液。該納米銀溶液的電鏡圖如圖2所示，從圖2可以看出，本實(shí)施例的納米銀溶液確實(shí)為納米銀溶液。
[0018]實(shí)施例3:
[0019]將金黃色葡萄球菌接種到100ml的滅菌MH培養(yǎng)基中，充分混勻后置于恒溫水浴搖床37°C振蕩培養(yǎng)24h，將培養(yǎng)液加到離心管中置于離心機(jī)上5000rpm離心5分鐘，將菌沉淀與上清液(菌懸液)分離。向20ml上清液中加入2ml的0.1M的硝酸銀溶液，使銀離子的濃度為10禮，置于水浴搖床上37°C振蕩反應(yīng)5h，然后振蕩后的溶液在冰浴條件下進(jìn)行超聲破碎，輸出功率為200瓦特，超聲30s，間歇30s，重復(fù)10次。將超聲后的溶液用0.22 μ m的濾膜過(guò)濾，得到澄清的納米銀溶液。該納米銀溶液的電鏡圖如圖3所示，從圖3可以看出，本實(shí)施例的納米銀溶液確實(shí)為納米銀溶液。
[0020]實(shí)施例4:
[0021]將糞腸球菌接種到100ml的滅菌MH培養(yǎng)基中，充分混勻后置于恒溫水浴搖床37°C振蕩培養(yǎng)12h，將培養(yǎng)液加到離心管中置于離心機(jī)上5000rpm離心5分鐘，將菌沉淀與上清液(菌懸液)分離。向20ml上清液中加入200 μ I的0.1M的硝酸銀溶液，使銀離子的濃度為ImM，置于水浴搖床上37°C振蕩反應(yīng)72h，然后振蕩后的溶液在冰浴條件下進(jìn)行超聲破碎，輸出功率為200瓦特，超聲30s，間歇30s，重復(fù)2次。將超聲后的溶液用0.22 μ m的濾膜過(guò)濾，得到澄清的納米銀溶液。該納米銀溶液的電鏡圖如圖4所示，從圖4可以看出，本實(shí)施例的納米銀溶液確實(shí)為納米銀溶液。
[0022] 實(shí)施例5:
[0023]將糞腸球菌接種到100ml的滅菌MH培養(yǎng)基中，充分混勻后置于恒溫水浴搖床25°C振蕩培養(yǎng)72h，將培養(yǎng)液加到離心管中置于離心機(jī)上5000rpm離心5分鐘，將菌沉淀與上清液(菌懸液)分離。向20ml上清液中加入100 μ I的0.1M的硝酸銀溶液，使銀離子的濃度為0.5mM，置于水浴搖床上25°C振蕩反應(yīng)72h，然后振蕩后的溶液在冰浴條件下進(jìn)行超聲破碎，輸出功率為150瓦特，超聲30s，間歇30s，重復(fù)2次。將超聲后的溶液用0.1 μ m的濾膜過(guò)濾，得到澄清的納米銀溶液。該納米銀溶液的電鏡圖如圖5所示，從圖5可以看出，本實(shí)施例的納米銀溶液確實(shí)為納米銀溶液。
[0024]實(shí)施例6:
[0025]將金黃色葡萄球菌接種到100ml的滅菌MH培養(yǎng)基中，充分混勻后置于恒溫水浴搖床25°C振蕩培養(yǎng)72h，將培養(yǎng)液加到離心管中置于離心機(jī)上5000rpm離心5分鐘，將菌沉淀與上清液(菌懸液)分離。向20ml上清液中加入200 μ I的0.1M的硝酸銀溶液，使銀離子的濃度為ImM，置于水浴搖床上37°C振蕩反應(yīng)5h，然振蕩后的溶液用0.22 μ m的濾膜過(guò)濾,得到澄清的納米銀溶液。該納米銀溶液的電鏡圖如圖6所示，從圖6可以看出，本實(shí)施例的納米銀溶液確實(shí)為納米銀溶液。
[0026]實(shí)施例7:
[0027]將糞腸球菌接種到100ml的滅菌MH培養(yǎng)基中，充分混勻后置于恒溫水浴搖床37°C振蕩培養(yǎng)12h，將培養(yǎng)液加到離心管中置于離心機(jī)上5000rpm離心5分鐘，將菌沉淀與上清液(菌懸液)分離。向20ml上清液中加入100 μ I的0.1M的硝酸銀溶液，使銀離子的濃度為
0.5mM,置于水浴搖床上25°C振蕩反應(yīng)24h，然振蕩后的溶液用0.1 μ m的濾膜過(guò)濾，得到澄清的納米銀溶液。該納米銀溶液的電鏡圖如圖7所示，從圖7可以看出，本實(shí)施例的納米銀溶液確實(shí)為納米銀溶液·。
【權(quán)利要求】
1.一種利用細(xì)菌發(fā)酵液制備納米銀的簡(jiǎn)單方法，其特征在于，包括以下步驟:將金黃色葡萄球菌或糞腸球菌接種到Mueller - Hinton培養(yǎng)基中，于25~37°C振蕩培養(yǎng)12-72小時(shí)，然后將菌體和菌懸液分離開(kāi)，取菌懸液，往菌懸液中加入硝酸銀溶液，使銀離子的濃度為0.5-10mM，然后在25~37°C條件下振蕩反應(yīng)5_72小時(shí)，再經(jīng)超聲處理，超聲后的溶液再經(jīng)過(guò)濾，濾液即為納米銀溶液。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用細(xì)菌發(fā)酵液制備納米銀的簡(jiǎn)單方法，其特征在于，所述的超聲處理為在冰浴條件下超聲l_5min左右，超聲輸出功率為150-200瓦特。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用細(xì)菌發(fā)酵液制備納米銀的簡(jiǎn)單方法，其特征在于，所述的過(guò)濾是將超聲后的溶液用孔徑0.1-0.22 μ m的濾膜過(guò)濾。
4.一種利用細(xì)菌發(fā)酵液制備納米銀的簡(jiǎn)單方法，其特征在于，包括以下步驟:將金黃色葡萄球菌或糞腸球菌接種到Mueller - Hinton培養(yǎng)基中，于25~37°C振蕩培養(yǎng)12-72小時(shí)，然后將菌體和菌懸液分離開(kāi)，取菌懸液，往菌懸液中加入硝酸銀溶液，使銀離子的濃度為0.5-lmM，然后在25~37°C條件下振蕩反應(yīng)5_24小時(shí)，再經(jīng)過(guò)濾，濾液即為納米銀溶液。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的利用細(xì)菌發(fā)酵液制備納米銀的簡(jiǎn)單方法，其特征在于，所述的過(guò)濾是 用孔徑0.1-0.22 μ m的濾膜過(guò)濾。
【文檔編號(hào)】C12R1/46GK103710390SQ201310703854
【公開(kāi)日】2014年4月9日 申請(qǐng)日期:2013年12月18日 優(yōu)先權(quán)日:2013年12月18日
【發(fā)明者】李文茹, 施慶珊, 梁青, 謝小保, 陳儀本 申請(qǐng)人:廣東省微生物研究所