一種蚯蚓抽提物及其應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種蚯蚓抽提物及其應(yīng)用。所述蚯蚓抽提物為分子量為3000道爾頓以下的蚯蚓的水抽提物，所述的蚯蚓為威廉腔環(huán)蚓、赤子愛勝蚓和鋸齒遠(yuǎn)蚓中的一種或多種。本發(fā)明的蚯蚓抽提物具有明顯的降低血壓的功能，且其制備方法操作簡單，可以實(shí)現(xiàn)大規(guī)模的制備。
【專利說明】一種蚯蚓抽提物及其應(yīng)用
[0001]本申請為申請日為2010年10月12日、申請?zhí)枮?01010503564.9、發(fā)明名稱為“一
種蚯蚓抽提物、其制備方法、應(yīng)用及含其的藥物組合物”的專利申請的分案申請。
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0002]本發(fā)明具體的涉及一種蚯蚓抽提物及其應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0003]蚯蚓俗稱地龍，具有解熱、鎮(zhèn)驚、降壓、抑菌、抑癌及活血化瘀等功效，正廣泛應(yīng)用于中醫(yī)中治療多種疾病，特別在治療高血壓的過程中，地龍通常已成為中醫(yī)中藥中的一味不可或缺的藥材。迫切需對其進(jìn)行基礎(chǔ)及開發(fā)應(yīng)用研究。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供了具有降血壓作用的一種蚯蚓抽提物及其應(yīng)用。本發(fā)明的蚯蚓抽提物具有明顯的降低血壓的功能，且其制備方法操作簡單，可以實(shí)現(xiàn)大規(guī)模的制備。
[0005]本發(fā)明人經(jīng)過大量研究發(fā)現(xiàn)，在蚯蚓的中藥湯劑中能起到降血壓作用的物質(zhì)是小分子量的蚯蚓抽提物，而不是蚯蚓中的蛋白之類的物質(zhì)。然而，在這些小分子的蚯蚓化合物中能起到降血壓作用的有效成份究竟是什么以及它的作用機(jī)理如何，是一個亟待解決的課題。本發(fā)明人經(jīng)過研究，首先發(fā)現(xiàn)了一類新的小分子量蚯蚓抽提物以及一套大規(guī)模制備該蚯蚓抽提物的方法。
[0006]因此本發(fā)明涉及一種蚯蚓抽提物，其為蚯蚓的水抽提物，分子量為3000道爾頓以下。
`[0007]本發(fā)明進(jìn)一步涉及上述蚯蚓抽提物的制備方法，其包含下列步驟:將蚯蚓的水抽提物經(jīng)過3000分子量濾膜超濾，收集濾液，即可。
[0008]其中，所述的蚯蚓可為本領(lǐng)域中能夠入藥使用的各種蚯蚓，較佳的為威廉腔環(huán)蚓、赤子愛勝蚓和鋸齒遠(yuǎn)蚓中的一種或多種。
[0009]本發(fā)明的制備方法中，所述的蚯蚓的水抽提物可由本領(lǐng)域常規(guī)的用水對蚯蚓中有效成分進(jìn)行提取的方法制得，較佳的，其由下列方法制得:將經(jīng)吐泥、水洗處理后的蚯蚓搗碎成漿狀，加水混勻后浸泡，然后用1000-3000 (優(yōu)選1000-2000，更優(yōu)選1500)轉(zhuǎn)/分的離心機(jī)離心，得上清液1，將上清液I用10000-20000 (優(yōu)選15000-17000，更優(yōu)選16000)轉(zhuǎn)/分的離心機(jī)離心，得上清液2，即可。
[0010]其中，所述的加水的量較佳的為漿狀蚯蚓體積的0.8-1.5倍(優(yōu)選I倍);浸泡的時間較佳的為3-10小時(優(yōu)選3-5小時，更優(yōu)選3小時)；浸泡的溫度較佳的為4-10°C ;在得到上清液2之后，較佳的還包含干燥步驟，如真空冷凍干燥。
[0011]本發(fā)明的制備方法中，較佳的，在用3000分子量濾膜超濾之前還包括下列步驟:將蚯蚓的水抽提物加水溶解后，再用離心機(jī)以10000-20000 (優(yōu)選15000-17000，更優(yōu)選16000)轉(zhuǎn)/分離心，得上清液；所述的蚯蚓的水抽提物為干燥物。其中，所述的加水的量較佳的為蚯蚓的水抽提物體積的1-5倍(優(yōu)選2倍)。所述的干燥物為蚯蚓的水抽提液干燥后的物質(zhì)。
[0012]在用3000分子量濾膜超濾后，還可包含下列步驟:將所得物質(zhì)干燥，即可。所述的干燥較佳的為真空冷凍干燥。
[0013]本發(fā)明進(jìn)一步涉及一種包含上述蚯蚓抽提物及藥學(xué)上可接受的載體的藥物組合物或者食品學(xué)上可接受的載體的藥物組合物或保健食品。
[0014]本發(fā)明的藥物組合物中，上述蚯蚓抽提物可以作為單一的活性成分發(fā)揮作用，也可以按照本領(lǐng)域常識與具備降血壓等功能，且不與蚯蚓抽提物發(fā)生不良反應(yīng)的藥物活性成分一起作為活性成分發(fā)揮作用。
[0015]本發(fā)明的蚯蚓抽提物可與藥學(xué)上各種常用添加劑(如稀釋劑和賦形劑等)制成藥物組合物。根據(jù)治療目的，可將藥物組合物制成各種類型的給藥單位劑型，如片劑、丸劑、粉齊?、液體、懸浮液、乳液、顆粒劑、膠囊、栓劑和針劑(溶液及懸浮液)等。
[0016]為了使片劑形式的藥物組合物成形，可使用本領(lǐng)域任何已知的并廣泛使用的賦形劑。例如，載體，如乳糖、白糖、氯化鈉、葡萄糖、尿素、淀粉、碳酸鈣、高嶺土、結(jié)晶纖維素和硅酸等；粘合劑，如水、乙醇、丙醇、普通糖漿、葡萄糖溶液、淀粉溶液、明膠溶液，羧甲基纖維素、紫膠、甲基纖維素和磷酸鉀、聚乙烯吡咯烷酮等；崩解劑，如干淀粉、藻酸鈉、瓊脂粉和海帶粉，碳酸氫鈉、碳酸鈣、聚乙烯脫水山梨醇的脂肪酸酯、十二烷基硫酸鈉、硬脂酸單甘酯、淀粉和乳糖等；崩解抑制劑，如白糖、甘油三硬脂酸酯、椰子油和氫化油；吸附促進(jìn)劑，如季胺喊和十二烷基硫酸納等；潤濕劑，如甘油、淀粉等；吸附劑，如淀粉、乳糖、聞嶺土、膨潤土和膠體硅酸等；以及潤滑劑，如純凈的滑石，硬脂酸鹽、硼酸粉和聚乙二醇等。如果需要的話，還可以用通常的涂潰材料使片劑作為糖衣片劑、涂明膠膜片劑、腸衣片劑、涂膜片劑、雙層膜片劑及多層片劑。
[0017]為了使丸劑形式的藥物組合物成形，可使用本領(lǐng)域任何已知的并廣泛使用的賦性劑，例如，載體，如乳糖，淀粉，椰子油，硬化植物油，高嶺土和滑石等；粘合劑，如阿拉伯樹膠粉，黃著膠粉，明膠和乙醇等；崩解劑，如瓊脂和海帶粉等。
[0018]為了使栓劑形式的藥物組合物成形，可使用本領(lǐng)域任何已知并廣泛使用的賦性劑，例如，聚乙二醇，椰子油，高級醇，高級醇的酯，明膠和半合成的甘油酯等。
[0019]為了制備針劑形式的藥物組合物，可將溶液和懸浮液消毒，并最好加入適量的氯化鈉，葡萄糖或甘油等，制成與血液等滲壓的針劑。在制備針劑時，也可使用本領(lǐng)域內(nèi)任何常用的載體。例如，水，乙醇，丙二醇，乙氧基化的異硬脂醇，聚氧基化的異硬脂醇和聚乙烯脫水山梨醇的脂肪酸酯等。此外，還可加入通常的溶解劑、緩沖劑和止痛劑等。根據(jù)需要，在治療精神分裂癥期間，也可加入著色劑、防腐劑、香料、調(diào)味劑、香化劑和其它藥物等。
[0020]本發(fā)明的蚯蚓抽提物在藥物組合物中的含量無特殊限制，可在很寬的范圍內(nèi)進(jìn)行選擇。
[0021]本發(fā)明中，所述的藥物組合物的給藥方法沒有特殊限制?？筛鶕?jù)病人年齡、性別和其它條件及癥狀，選擇不同劑型的制劑給藥。例如，片劑、丸劑、溶液、懸浮液、乳液、顆粒劑和膠囊是口服給藥；針劑(較佳的為水針劑或凍干粉針劑)可以單獨(dú)給藥，或者和注射用輸送液(如葡萄糖溶液及氨基酸溶液)混合進(jìn)行靜脈注射，如有必要可以單純用針劑進(jìn)行肌肉、皮內(nèi)、皮下或腹內(nèi)注射；栓劑為給藥到直腸。
[0022]本發(fā)明中，可以根據(jù)服藥方法、病人年齡、性別和其它條件以及癥狀適當(dāng)?shù)剡x擇用藥劑量。
[0023]本發(fā)明還涉及上述蚯蚓抽提物在制備降血壓的藥物中的應(yīng)用。
[0024]本發(fā)明還涉及上述蚯蚓抽提物在制備治療或預(yù)防高血壓的保健食品或功能性食品中的應(yīng)用。
[0025]除特殊說明外，本發(fā)明涉及的原料和試劑均市售可得。
[0026]本發(fā)明的積極進(jìn)步效果在于:本發(fā)明的蚯蚓抽提物具有明顯的降低血壓的功能，且其制備方法操作簡單，可以實(shí)現(xiàn)大規(guī)模的制備。
【具體實(shí)施方式】
[0027]下面通過實(shí)施例的方式進(jìn)一步說明本發(fā)明，但并不因此將本發(fā)明限制在所述的實(shí)施例范圍之中。下列實(shí)施例中未注明具體條件的實(shí)驗(yàn)方法，按照常規(guī)方法和條件，或按照商品說明書選擇。
[0028]實(shí)施例1:威廉腔環(huán)蚓水抽提物的提取
[0029]1、新鮮的威廉腔環(huán)蚓(I千克)經(jīng)吐泥，水清洗后放入冷庫冰凍，備用。
[0030]2、將冰凍的威廉腔環(huán)蚓從冷庫取出，經(jīng)自然化凍后機(jī)械搗碎成漿狀。加I倍體積的水混勻，浸泡3小時后用1500轉(zhuǎn)/分的離心機(jī)離心10分鐘，留下上清液，棄掉沉淀。
[0031]3、將2的上清液經(jīng)離心機(jī)16000轉(zhuǎn)/分離心后留下上清液。
[0032]4、將3的上清液真空冷凍干燥，即可得到威廉腔環(huán)蚓水抽提物。
[0033]實(shí)施例2:威廉腔環(huán)蚓抽提物的提取
[0034]1、取實(shí)施例1制得的蚯蚓水抽提物加2倍的水溶解后用離心機(jī)16000轉(zhuǎn)/分離心。
留下上清液。
[0035]2、將I的上清液用 3000分子量超濾膜的超濾器超濾，可得到兩種組分，分別為3000分子量膜以下的水溶液物質(zhì)(以下稱為“混合物A”)(29.8克)和3000分子量膜以上的水溶液物質(zhì)(以下稱為“混合物B”)。
[0036]3、將2的混合物A真空冷凍干燥，得到威廉腔環(huán)蚓精制品的提取物，亦即本發(fā)明分子量在3000道爾頓以下的威廉腔環(huán)蚓抽提物。
[0037]4、將2的混合物B真空冷凍干燥，備用。
[0038]實(shí)施例3:在實(shí)施例2中，使用3000分子量的超濾膜超濾分離得到的混合物A，故證明該超濾后得到的混合物A為分子量小于3000道爾頓的威廉腔環(huán)蚓蚓抽提物。
[0039]實(shí)施例4:赤子愛勝蚓水抽提物的提取
[0040]1、新鮮的赤子愛勝蚓(I千克)經(jīng)吐泥，水清洗后放入冷庫冰凍，備用。
[0041]2、將冰凍的赤子愛勝蚓從冷庫取出，經(jīng)自然化凍后機(jī)械搗碎成漿狀。加I倍體積的水混勻，浸泡3小時后用1500轉(zhuǎn)/分的離心機(jī)離心10分鐘，留下上清液，棄掉沉淀。
[0042]3、將2的上清液經(jīng)離心機(jī)16000轉(zhuǎn)/分離心后留下上清液。
[0043]4、將3的上清液真空冷凍干燥，即可得到赤子愛勝蚓水抽提物。
[0044]實(shí)施例5:赤子愛勝蚓抽提物的提取
[0045]1、取實(shí)施例4制得的蚯蚓水抽提物制品加2倍的水溶解后用離心機(jī)16000轉(zhuǎn)/分離心。留下上清液。
[0046]2、將I的上清液用3000分子量超濾膜的超濾器超濾，可得到兩種組分，分別為3000分子量膜以下的水溶液物質(zhì)(以下稱為“混合物C”)(28.7克)和3000分子量膜以上的水溶液物質(zhì)(以下稱為“混合物D”)。
[0047]3、將2的混合物C真空冷凍干燥，得到赤子愛勝蚓精制品的提取物，亦即本發(fā)明分子量在3000道爾頓以下的赤子愛勝蚓抽提物。
[0048]4、將2的混合物D真空冷凍干燥，備用。
[0049]實(shí)施例6:在實(shí)施例5中，使用3000分子量的超濾膜超濾分離得到的混合物C，故證明該超濾后得到的混合物C為分子量小于3000道爾頓的赤子愛勝蚓抽提物。
[0050]實(shí)施例7:鋸齒遠(yuǎn)蚓水抽提物的提取
[0051]1、新鮮的鋸齒遠(yuǎn)蚓(I千克)經(jīng)吐泥，水清洗后放入冷庫冰凍，備用。
[0052]2、將冰凍的鋸齒遠(yuǎn)蚓從冷庫取出，經(jīng)自然化凍后機(jī)械搗碎成漿狀。加I倍體積的水混勻，浸泡3小時后用1500轉(zhuǎn)/分的離心機(jī)離心10分鐘，留下上清液，棄掉沉淀。
[0053]3、將2的上清液經(jīng)離心機(jī)16000轉(zhuǎn)/分離心后留下上清液。
[0054]4、將3的上清液真空冷凍干燥，即可得到鋸齒遠(yuǎn)蚓制品水抽提物。
[0055]實(shí)施例8:鋸齒遠(yuǎn)蚓 抽提物的提取
[0056]1、取實(shí)施例7制得的鋸齒遠(yuǎn)蚓水抽提物加2倍的水溶解后用離心機(jī)16000轉(zhuǎn)/分
離心。留下上清液。
[0057]2、將I的上清液用3000分子量超濾膜的超濾器超濾，可得到兩種組分，分別為3000分子量膜以下的水溶液物質(zhì)(以下稱為“混合物E”)(29.1克)和3000分子量膜以上的水溶液物質(zhì)(以下稱為“混合物F”)。
[0058]3、將2的混合物E真空冷凍干燥，得到鋸齒遠(yuǎn)蚓精制品的提取物，亦即本發(fā)明分子量在3000道爾頓以下的鋸齒遠(yuǎn)蚓抽提物。
[0059]4、將2的混合物F真空冷凍干燥，備用。
[0060]實(shí)施例9:在實(shí)施例8中，使用3000分子量的超濾膜超濾分離得到的混合物E，故證明該超濾后得到的混合物E為分子量小于3000道爾頓的鋸齒遠(yuǎn)蚓抽提物。
[0061]實(shí)施例10:威廉腔環(huán)蚓水抽提物的提取
[0062]1、新鮮的威廉腔環(huán)蚓(I千克)經(jīng)吐泥，水清洗后放入冷庫冰凍，備用。
[0063]2、將冰凍的威廉腔環(huán)蚓從冷庫取出，經(jīng)自然化凍后機(jī)械搗碎成漿狀。加0.8倍體積的水混勻，浸泡10小時后(浸泡溫度4°C )用1000轉(zhuǎn)/分的離心機(jī)離心10分鐘，留下上
清液，棄掉沉淀。
[0064]3、將2的上清液經(jīng)離心機(jī)10000轉(zhuǎn)/分離心后留下上清液。
[0065]4、將3的上清液真空冷凍干燥，即可得到威廉腔環(huán)蚓水抽提物。
[0066]實(shí)施例11:威廉腔環(huán)蚓抽提物的提取
[0067]1、取實(shí)施例10制得的蚯蚓水抽提物加I倍的水溶解后用離心機(jī)10000轉(zhuǎn)/分離
心。留下上清液。
[0068]2、將I的上清液用3000分子量超濾膜的超濾器超濾，可得到兩種組分，分別為3000分子量膜以下的水溶液物質(zhì)(以下稱為“混合物Al”)(29克)和3000分子量膜以上的水溶液物質(zhì)(以下稱為“混合物BI ”)。[0069]3、將2的混合物A真空冷凍干燥，得到威廉腔環(huán)蚓精制品的提取物，亦即本發(fā)明分子量在3000道爾頓以下的威廉腔環(huán)蚓抽提物。
[0070]4、將2的混合物BI真空冷凍干燥，備用。
[0071]實(shí)施例12:赤子愛勝蚓水抽提物的提取
[0072]1、新鮮的赤子愛勝蚓(I千克)經(jīng)吐泥，水清洗后放入冷庫冰凍，備用。
[0073]2、將冰凍的赤子愛勝蚓從冷庫取出，經(jīng)自然化凍后機(jī)械搗碎成漿狀。加1.5倍體積的水混勻，浸泡6小時后(浸泡溫度10°C )用3000轉(zhuǎn)/分的離心機(jī)離心10分鐘，留下上
清液，棄掉沉淀。
[0074]3、將2的上清液經(jīng)離心機(jī)20000轉(zhuǎn)/分離心后留下上清液。
[0075]4、將3的上清液真空冷凍干燥，即可得到赤子愛勝蚓水抽提物。
[0076]實(shí)施例13:赤子愛勝蚓抽提物的提取
[0077]1、取實(shí)施例12制得的蚯蚓水抽提物制品加5倍的水溶解后用離心機(jī)20000轉(zhuǎn)/
分離心。留下上清液。
[0078]2、將I的上清液用3000分子量超濾膜的超濾器超濾，可得到兩種組分，分別為3000分子量膜以下的水溶液物質(zhì)(以下稱為“混合物Cl”)(28.6克)和3000分子量膜以上的水溶液物質(zhì)(以下稱為“混合物D1”)。
[0079]3、將2的混合物Cl真空冷凍干燥，得到赤子愛勝蚓精制品的提取物，亦即本發(fā)明分子量在3000道爾頓以下的赤子愛勝蚓抽提物。
[0080]4、將2的混合物Dl真空冷凍干燥，備用。
[0081]對比實(shí)施例1:混合物A與混合物B的降壓實(shí)驗(yàn)
[0082]I制備樣品
[0083]( I)將混合物A、B用重蒸水配制成三個不同的濃度。
[0084]混合物A:8mg/ml 4mg/ml 2mg/ml
[0085]混合物B:8mg/ml 4mg/ml 2mg/ml
[0086](2 )設(shè)重蒸水作陰性對照
[0087]2實(shí)驗(yàn)方法
[0088]取大鼠，稱重后用20 %烏拉坦麻醉。仰位固定，分離頸總動脈，插管記錄血壓(儀器:觀6000四導(dǎo)生理記錄儀，AP-601, AP-611記錄血壓)，動物的舒張壓和收縮壓由儀器直接讀出。
[0089]手術(shù)后穩(wěn)定30min，記錄血壓。灌胃分別給予溶于重蒸水的混合物A、B，兩種混合物劑量分別為40mg/Kg, 20mg/Kg, 10mg/Kg,另外設(shè)灌胃給予重蒸水作陰性對照。在給予混合物 A、B 后 30min, 60min, 90min, 120min, 150min, 180min 分別記錄血壓。
[0090]3數(shù)據(jù)處理
[0091]分別計(jì)算收縮壓和舒張壓的均值和標(biāo)準(zhǔn)差，組間差別采用t檢驗(yàn)分析?；旌衔顰與混合物B之間P < 0.05，有顯著差異。
[0092]4結(jié)果(見下表1和2)[0093]表1混合物A的降壓試驗(yàn)
[0094]
【權(quán)利要求】
1.用于降血壓或者治療或預(yù)防高血壓的蚯蚓抽提物，其特征在于:所述蚯蚓抽提物為分子量為3000道爾頓以下的蚯蚓的水抽提物，所述的蚯蚓為威廉腔環(huán)蚓、赤子愛勝蚓和鋸齒遠(yuǎn)蚓中的一種或多種。
2.權(quán)利要求1所述的蚯蚓抽提物，其中所述蚯蚓抽提物是由包含下列步驟的制備方法制備的:將蚯蚓的水抽提物經(jīng)過3000分子量濾膜超濾，收集濾液，即可。
3.權(quán)利要求2所述的蚯蚓抽提物，其中所述的蚯蚓的水抽提物是由下列方法制得的:將經(jīng)吐泥、水洗處理后的艇蚓搗碎成衆(zhòng)狀，加水混勻后浸泡，然后用1000-3000轉(zhuǎn)/分的離心機(jī)離心，得上清液1，將上清液I用10000-20000轉(zhuǎn)/分的離心機(jī)離心，得上清液2，在得到上清液2之后還包含干燥步驟。
4.權(quán)利要求3所述的蚯蚓抽提物，其中，所述的加水的量為漿狀蚯蚓體積的0.8-1.5倍；所述的浸泡的時間為3-10小時；所述的浸泡的溫度為4-10°C。
5.權(quán)利要求2所述的蚯蚓抽提物，其中，在用3000分子量濾膜超濾之前還包括下列步驟:將蚯蚓 的水抽提物加水溶解后，再用離心機(jī)以10000-20000轉(zhuǎn)/分離心，得上清液；其中所述的蚯蚓的水抽提物為干燥物。
6.權(quán)利要求5所述的蚯蚓抽提物，其中所述的加水的量為蚯蚓的水抽提物體積的1-5倍。
7.權(quán)利要求1所述的蚯蚓抽提物，其中所述蚯蚓為威廉腔環(huán)蚓。
8.權(quán)利要求1所述的蚯蚓抽提物，其中所述蚯蚓為赤子愛勝蚓。
9.權(quán)利要求1所述的蚯蚓抽提物，其中所述蚯蚓為鋸齒遠(yuǎn)蚓。
10.權(quán)利要求1-9之任一所述的蚯蚓抽提物在制備降血壓的藥物或者在制備治療或預(yù)防高血壓的保健食品中的應(yīng)用。
【文檔編號】A23L1/29GK103751213SQ201310565898
【公開日】2014年4月30日 申請日期:2010年10月12日 優(yōu)先權(quán)日:2010年10月12日
【發(fā)明者】唐培克, 周遠(yuǎn)聰, 王益清 申請人:唐培克