一種bhk-21細(xì)胞全懸浮培養(yǎng)的無血清培養(yǎng)基的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種BHK-21細(xì)胞全懸浮培養(yǎng)的無血清培養(yǎng)基，所述BHK-21細(xì)胞全懸浮培養(yǎng)的無血清培養(yǎng)基中，包含有氨基酸部分，維生素部分，無機(jī)鹽部分和其他添加物部分。本發(fā)明的有益效果為：本發(fā)明提供的一種BHK-21細(xì)胞全懸浮培養(yǎng)的無血清培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞密度高，成分明確，不含動物血清，有利于下游產(chǎn)品的純化，提高產(chǎn)品品質(zhì)，且配制和使用方便，適用于生物制品的規(guī)?；a(chǎn)。
【專利說明】—種BHK-21細(xì)胞全懸浮培養(yǎng)的無血清培養(yǎng)基
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種無血清培養(yǎng)基，具體涉及一種BHK-21細(xì)胞全懸浮培養(yǎng)的無血清培養(yǎng)基。
【背景技術(shù)】
[0002]BHK-21細(xì)胞即敘利亞倉鼠腎細(xì)胞,英文名稱:Baby Hamster Kidney cell簡稱BHK-21或BHK21，該細(xì)胞系于1961年由Macpherson IA,Stoker MGP建系，源自5只未辨性別的I天齡倉鼠腎，1963年進(jìn)行了單細(xì)胞克隆。原始的細(xì)胞株是成纖維細(xì)胞，貼壁依賴性生長，但后來經(jīng)無數(shù)次傳代馴化后可懸浮生長并用于病毒性疫苗的生產(chǎn)，如口蹄疫疫苗、狂犬病疫苗、乙腦疫苗等。采用無血清培養(yǎng)工藝將提高疫苗的品質(zhì)，主要表現(xiàn)在以下幾個方面:I)工藝中不再使用動物血清(傳統(tǒng)工藝生產(chǎn)疫苗時培養(yǎng)基中要添加牛血清)，降低了疫苗注射時引起動物的副反應(yīng)，提高疫苗的安全性；2)基質(zhì)細(xì)胞的無血清全懸浮培養(yǎng)工藝，生產(chǎn)規(guī)?？删€性放大,細(xì)胞單罐培養(yǎng)體積的增加,可提高疫苗產(chǎn)品的穩(wěn)定性；3)基質(zhì)細(xì)胞的無血清全懸浮培養(yǎng)工藝將采用成套的生物反應(yīng)器及培養(yǎng)技術(shù)，實現(xiàn)了程序化可控的工藝操作流程，降低了人為因素對產(chǎn)品的影響。然而無血清培養(yǎng)基是該工藝的實現(xiàn)產(chǎn)業(yè)化的技術(shù)難點(diǎn)，采用成分明確、細(xì)胞能高細(xì)胞的培養(yǎng)密度，而且還有較高的病毒表達(dá)量，將起到事半功倍的效果?，F(xiàn)有技術(shù)中，國外細(xì)胞無血清培養(yǎng)基配方保密且價格高，同時市場上已有培養(yǎng)基(國內(nèi)、國外)成分均不明確。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0003]本發(fā)明的目的就是針對上述現(xiàn)有技術(shù)中的缺陷，提供了一種低成本、成分明確的適用于BHK-21細(xì)胞全懸浮培養(yǎng)的無血清培養(yǎng)基。
[0004]為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供的技術(shù)方案為:一種BHK-21細(xì)胞全懸浮培養(yǎng)的無血清培養(yǎng)基，所述BHK-21細(xì)胞全懸浮培養(yǎng)的無血清培養(yǎng)基中，各原料物質(zhì)的終濃度為:
氨基酸部分:
L-丙氨酸200-300 mg/L,
L-精氨酸鹽酸鹽350-500 mg/L,
L-天冬酰胺200-300 mg/L,
L-天冬氨酸50-85 mg/L,
L-半胱氨酸一水合物 10-45 mg/L,
L-胱氨酸鹽酸鹽25-50 mg/L,
L-谷氨酸100-155 mg/L,
L-谷氨酰胺300-405 mg/L,
甘氨酸150-200 mg/L,
L-組氨酸鹽酸鹽155-200 mg/L,
L-異亮氨酸100-150 mg/L,L-亮氨酸150-180 mg/L,
L-賴氨酸鹽酸鹽150-250 mg/L,
L-蛋氨酸45-80 mg/L,
L-苯丙氨酸20-50 mg/L,
L-脯氨酸100-125 mg/L,
L-絲氨酸200-250 mg/L,
L-蘇氨酸100-150 mg/L,
L-色氨酸150-190 mg/L,
L-酪氨酸二鈉鹽50-90 mg/L,
L-繳氨酸100-135 mg/L,維生素部分:
生物素0.001-0.005 mg/L,``氯化膽堿5-15 mg/L,
D-泛酸?丐2-5 mg/L,
葉酸2-5 mg/L,
煙酰胺2-5 mg/L,
鹽酸批B多醇2-5 mg/L,
核黃素0.1-0.5 mg/L,
鹽酸硫胺素0.1-0.5 mg/L,
肌醇10-15 mg/L,
無機(jī)鹽部分:
無水氯化1丐100-125 mg/L,
氯化鉀300-350 mg/L,
氯化鎂25-35 mg/L,
無水硫酸鎂30-40 mg/L,
氯化鈉5000-7200 mg/L,
磷酸二氫鈉50-70 mg/L,
磷酸氫二鈉60-70 mg/L,
七水硫酸亞鐵0.1-0.5 mg/L,
七水硫酸鋅0.1-0.5 mg/L,
其余添加物部分:
D-葡萄糖3000-5000 mg/L,
丙酮酸鈉100-150 mg/L,
亞油酸0.01-0.1 mg/L,
大豆卵磷脂5-10 mg/L,
膽固醇2-5 mg/L,
硫辛酸0.1-0.5 mg/L,
胸苷0.1-0.5 mg/L,
腺嘌呤1-5 mg/L,胸腺嘧啶0.01-0.1 mg/L,
重組胰島素5-20 mg/L,
轉(zhuǎn)鐵蛋白5-20 mg/L,
酵母粉100-500 mg/L,
酚紅鈉鹽8-10 mg/L ο
[0005]PF-68100_500mg/L,
Ant1-Clumping100-500 mg/L。
[0006]進(jìn)一步的，上述的一種BHK-21細(xì)胞全懸浮培養(yǎng)的無血清培養(yǎng)基，所述BHK-21細(xì)胞
全懸浮培養(yǎng)的無血清培養(yǎng)基中，各原料物質(zhì)的終濃度為:
氨基酸部分:
L-丙氨酸213.1 mg/L，
L-精氨酸鹽酸鹽372.75 mg/L,
L-天冬酰胺153.5 mg/L,
L-天冬氨酸75.6`5 mg/L,
L-半胱氨酸一水合物 22.71 mg/L,
L-胱氨酸鹽酸鹽31.29 mg/L,
L-谷氨酸109.4 mg/L,
L-谷氨酰胺365 mg/L,
甘氨酸178.75 mg/L,
L-組氨酸鹽酸鹽177.64 mg/L,
L-異亮氨酸134 mg/L,
L-亮氨酸159.05 mg/L,
L-賴氨酸鹽酸鹽169.87 mg/L,
L-蛋氨酸63.37 mg/L,
L-苯丙氨酸35.48 mg/L,
L-脯氨酸103.75 mg/L,
L-絲氨酸200 mg/L,
L-蘇氨酸113.45 mg/L,
L-色氨酸171.02 mg/L,
L-酪氨酸二鈉鹽55.79 mg/L,
L-繳氨酸117.23 mg/L,
維生素部分:
生物素0.0042 mg/L (國藥試劑，67000260)，
氯化膽堿8.98 mg/L,
D-泛酸鈣2.73 mg/L,
葉酸2.65 mg/L,
煙酰胺2.02 mg/L,
鹽酸吡哆醇2.03 mg/L,
核黃素0.22 mg/L,鹽酸硫胺素0.2 mg/L,
肌醇12.6 mg/L,
無機(jī)鹽部分:
無水氯化1丐116.69 mg/L,
氯化鉀311.8 mg/L,
氯化鎂28.64 mg/L,
無水硫酸鎂30-80 mg/L,
氯化鈉6995.5 mg/L,
磷酸二氫鈉62.5 mg/L,
磷酸氫二鈉60-100 mg/L,
七水硫酸亞鐵0.42 mg/L,
七水硫酸鋅0.432 mg/L,
其余添加物部分:
D-葡萄糖4500 mg/L,
丙酮酸鈉115 mg/L,`
亞油酸0.036 mg/L,
大豆卵磷脂6.1 mg/L,
膽固醇3.2 mg/L,
硫辛酸0.26 mg/L,
胸苷0.27 mg/L,
腺嘌呤3.1 mg/L,
胸腺嘧啶0.065 mg/L,
重組胰島素5.6 mg/L,
轉(zhuǎn)鐵蛋白11.4 mg/L,
酵母粉300 mg/L,
酹紅鈉鹽9.3 mg/L,
PF-68301 mg/L,
Ant1-Clumping328 mg/L。
[0007]進(jìn)一步的，上述的一種BHK-21細(xì)胞全懸浮培養(yǎng)的無血清培養(yǎng)基，將所述原料物質(zhì)根據(jù)其各自溶解特性分類溶解，然后將所得溶液于10°C -30°C蒸餾水中混合，使各原料物質(zhì)終濃度如上所述，調(diào)節(jié)所得混合液的PH值至7.1-7.4，定容后即得BHK-21細(xì)胞全懸浮培養(yǎng)的無血清培養(yǎng)基。
[0008]進(jìn)一步的，上述的一種BHK-21細(xì)胞全懸浮培養(yǎng)的無血清培養(yǎng)基，將所述原料物質(zhì)混合后磨成細(xì)粉，然后將所得細(xì)粉于10°c -30°c蒸餾水中溶解，使各原料物質(zhì)終濃度如上所述，調(diào)節(jié)所得混合液的PH值至7.1-7.4，定容后即得BHK-21細(xì)胞全懸浮培養(yǎng)的無血清培養(yǎng)基。
[0009]本發(fā)明的有益效果為:本發(fā)明提供的一種BHK-21細(xì)胞全懸浮培養(yǎng)的無血清培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞密度高，成分明確，不含動物血清，有利于下游產(chǎn)品的純化，提高產(chǎn)品品質(zhì)，且配制和使用方便，適用于生物制品的規(guī)模化生產(chǎn)。【專利附圖】
【附圖說明】
[0010]圖1為本發(fā)明提供的BHK-21細(xì)胞全懸浮培養(yǎng)的無血清培養(yǎng)基與現(xiàn)有市售的市售的BHK-21細(xì)胞無血清培養(yǎng)基在細(xì)胞活力和細(xì)胞密度方面的對比結(jié)果示意圖。
【具體實施方式】
[0011]實施例1:
一種BHK-21細(xì)胞全懸浮培養(yǎng)的無血清培養(yǎng)基，原料物質(zhì)根據(jù)其各自溶解特性分類溶
解，然后將所得溶液于23.1°C混合，使各原料物質(zhì)終濃度如上所述，調(diào)節(jié)所得混合液的pH值至7.15，定容后即得BHK-21細(xì)胞全懸浮培養(yǎng)的無血清培養(yǎng)基，其中，各原料物質(zhì)的終濃度為:
氨基酸部分:
L-丙氨酸200 mg/L,
L-精氨酸鹽酸鹽350 mg/L,
L-天冬酰胺200 mg/L,
L-天冬氨酸50 mg/L,
L-半胱氨酸一水合物10 mg/L,
L-胱氨酸鹽酸鹽25 mg/L,
L-谷氨酸100 mg/L,
L-谷氨酰胺300 mg/L,
甘氨酸150 mg/L,
L-組氨酸鹽酸鹽155 mg/L,
L-異亮氨酸100 mg/L,
L-亮氨酸150 mg/L,
L-賴氨酸鹽酸鹽150 mg/L,
L-蛋氨酸45 mg/L,
L-苯丙氨酸20 mg/L,
L-脯氨酸100 mg/L,
L-絲氨酸200 mg/L,
L-蘇氨酸100 mg/L,
L-色氨酸150 mg/L,
L-酪氨酸二鈉鹽50 mg/L,
L-繳氨酸100 mg/L,
維生素部分:
生物素0.001 mg/L,
氯化膽堿5 mg/L,
D-泛酸|丐2 mg/L,
葉酸2 mg/L,
煙酰胺2 mg/L,鹽酸吡哆醇2 mg/L,
核黃素0.1 mg/L,
鹽酸硫胺素0.1 mg/L,
肌醇10 mg/L,
無機(jī)鹽部分:
無水氯化1丐100 mg/L,
氯化鉀300 mg/L,
氯化鎂25 mg/L,
無水硫酸鎂30 mg/L,
氯化鈉5000 mg/L,
磷酸二氫鈉50 mg/L,
磷酸氫二鈉60 mg/L,
七水硫酸亞鐵0.1 mg/L,
七水硫酸鋅0.1 mg/L,
其余添加物部分:`
D-葡萄糖3000 mg/L,
丙酮酸鈉100 mg/L,
亞油酸0.01 mg/L,
大豆卵磷脂5 mg/L,
膽固醇2 mg/L,
硫辛酸0.1 mg/L,
胸苷0.1 mg/L,
腺嘌呤I mg/L，
胸腺嘧啶0.01 mg/L,
重組胰島素5 mg/L,
轉(zhuǎn)鐵蛋白5 mg/L,
酵母粉100 mg/L,
酹紅鈉鹽8 mg/L,
PF-68265 mg/L,
Ant1-Clumping170 mg/L。
[0012] 實施例2:
一種BHK-21細(xì)胞全懸浮培養(yǎng)的無血清培養(yǎng)基，原料物質(zhì)根據(jù)其各自溶解特性分類溶解，然后將所得溶液于25.9°C混合，使各原料物質(zhì)終濃度如上所述，調(diào)節(jié)所得混合液的pH值至7.21，定容后即得BHK-21細(xì)胞全懸浮培養(yǎng)的無血清培養(yǎng)基，其中，各原料物質(zhì)的終濃度為:
氨基酸部分:
L-丙氨酸300 mg/L,
L-精氨酸鹽酸鹽500 mg/L,
L-天冬酰胺300 mg/L,L-天冬氨酸85 mg/L,
L-半胱氨酸一水合物 45 mg/L,
L-胱氨酸鹽酸鹽50 mg/L,
L-谷氨酸155 mg/L,
L-谷氨酰胺405 mg/L,
甘氨酸200 mg/L,
L-組氨酸鹽酸鹽200 mg/L,
L-異亮氨酸150 mg/L,
L-亮氨酸180 mg/L,
L-賴氨酸鹽酸鹽250 mg/L,
L-蛋氨酸80 mg/L,
L-苯丙氨酸50 mg/L,
L-脯氨酸125 mg/L,
L-絲氨酸250 mg/L,`
L-蘇氨酸150 mg/L,
L-色氨酸190 mg/L,
L-酪氨酸二鈉鹽90 mg/L,
L-繳氨酸135 mg/L,維生素部分:
生物素0.005 mg/L,
氯化膽堿15 mg/L,
D-泛酸|丐5 mg/L,
葉酸5 mg/L,
煙酰胺5 mg/L,
鹽酸批B多醇5 mg/L,
核黃素0.5 mg/L,
鹽酸硫胺素0.5 mg/L,
肌醇15 mg/L,無機(jī)鹽部分:
無水氯化125 mg/L,
氯化鉀350 mg/L,
氯化鎂35 mg/L,
無水硫酸鎂40 mg/L,
氯化鈉7200 mg/L,
磷酸二氫鈉70 mg/L,
磷酸氫二鈉70 mg/L,
七水硫酸亞鐵0.5 mg/L,
七水硫酸鋅0.5 mg/L,
其余添加物部分:D-葡萄糖5000 mg/L,
丙酮酸鈉150 mg/L,
亞油酸0.1 mg/L,
大豆卵磷脂10 mg/L,
膽固醇5 mg/L,
硫辛酸0.5 mg/L,
胸苷0.5 mg/L,
腺嘌呤5 mg/L,
胸腺嘧啶0.1 mg/L,
重組胰島素20 mg/L,
轉(zhuǎn)鐵蛋白20 mg/L,
酵母粉500 mg/L,
酹紅鈉鹽10 mg/L,
PF-68155 mg/L,` Ant1-Clumping190 mg/L。
[0013] 實施例3:
一種BHK-21細(xì)胞全懸浮培養(yǎng)的無血清培養(yǎng)基，將原料物質(zhì)混合后磨成細(xì)粉，然后將所得細(xì)粉于25.3°C蒸餾水中溶解，使各原料物質(zhì)終濃度如上所述，調(diào)節(jié)所得混合液的pH值至7.23，定容后即得BHK-21細(xì)胞全懸浮培養(yǎng)的無血清培養(yǎng)基，其中，各原料物質(zhì)的終濃度為:氨基酸部分:
L-丙氨酸213.1 mg/L，
L-精氨酸鹽酸鹽372.75 mg/L,
L-天冬酰胺153.5mg/L，
L-天冬氨酸75.65 mg/L,
L-半胱氨酸一水合物 22.71mg/L，
L-胱氨酸鹽酸鹽31.29mg/L，
L-谷氨酸109.4 mg/L,
L-谷氨酰胺365 mg/L,
甘氨酸178.75 mg/L,
L-組氨酸鹽酸鹽177.64 mg/L,
L-異亮氨酸134 mg/L,
L-亮氨酸159.05 mg/L,
L-賴氨酸鹽酸鹽169.87 mg/L,
L-蛋氨酸63.37 mg/L,
L-苯丙氨酸35.48 mg/L,
L-脯氨酸103.75 mg/L,
L-絲氨酸200 mg/L,
L-蘇氨酸113.45 mg/L,
L-色氨酸171.02 mg/L,L-酪氨酸二鈉鹽55.79 mg/L,
L-繳氨酸117.23 mg/L, 維生素部分:
生物素0.0042 mg/L,
氯化膽堿8.98 mg/L,
D-泛酸鈣2.73 mg/L,
葉酸2.65 mg/L,
煙酰胺2.02 mg/L,
鹽酸吡哆醇2.03 mg/L,
核黃素0.22 mg/L,
鹽酸硫胺素0.2 mg/L,
肌醇12.6 mg/L, 無機(jī)鹽部分:
無水氯化1丐116.69 mg/L,
氯化鉀311.8 mg/L,
`氯化鎂28.64 mg/L,
無水硫酸鎂48.84mg/L,
氯化鈉6995.5 mg/L,
磷酸二氫鈉62.5 mg/L,
磷酸氫二鈉71.02 mg/L,
七水硫酸亞鐵0.42 mg/L,
七水硫酸鋅0.432 mg/L, 其余添加物部分:
D-葡萄糖4500 mg/L,
丙酮酸鈉115 mg/L,
亞油酸0.036 mg/L,
大豆卵磷脂6.1 mg/L,
膽固醇3.2 mg/L,
硫辛酸0.26 mg/L,
胸苷0.27 mg/L,
腺嘌呤3.1 mg/L,
胸腺嘧啶0.065 mg/L,
重組胰島素5.6 mg/L,
轉(zhuǎn)鐵蛋白11.4 mg/L,
酵母粉300 mg/L,
酹紅鈉鹽9.3 mg/L,
PF-68301 mg/L,
Ant1-Clumping328 mg/L。
[0014]培養(yǎng)驗證過程:1、儀器設(shè)備:
生物反應(yīng)器，型號:BIOSTATEOR B plus (德國Sartorius)，培養(yǎng)罐體積5L
2、細(xì)胞:
全懸浮培養(yǎng)型BHK-21細(xì)胞，由甘肅省動物細(xì)胞工程技術(shù)研究中心提供。
[0015]3、培養(yǎng)方法:
將全懸浮培養(yǎng)型BHK-21細(xì)胞以5.0X IO5 cells/ml接種到生物反應(yīng)器中，反應(yīng)器參數(shù)設(shè)置為:溫度37°C，轉(zhuǎn)速90rpm/min，溶氧60%，pH值7.25。每24h取樣計數(shù)和檢查細(xì)胞活力。
[0016]4、培養(yǎng)結(jié)果如表1所不。
【權(quán)利要求】
1.一種BHK-21細(xì)胞全懸浮培養(yǎng)的無血清培養(yǎng)基，其特征在于，所述BHK-21細(xì)胞全懸浮培養(yǎng)的無血清培養(yǎng)基中，各原料物質(zhì)的終濃度為: 氨基酸部分: L-丙氨酸200-300 mg/L, L-精氨酸鹽酸鹽350-500 mg/L, L-天冬酰胺200-300 mg/L, L-天冬氨酸50-85 mg/L, L-半胱氨酸一水合物 10-45 mg/L, L-胱氨酸鹽酸鹽25-50 mg/L, L-谷氨酸100-155 mg/L, L-谷氨酰胺300-405 mg/L, 甘氨酸150-200 mg /L, L-組氨酸鹽酸鹽155-200 mg/L, L-異亮氨酸100-150 mg/L, L-亮氨酸150-180 mg/L, L-賴氨酸鹽酸鹽150-250 mg/L, L-蛋氨酸45-80 mg/L, L-苯丙氨酸20-50 mg/L, L-脯氨酸100-125 mg/L, L-絲氨酸200-250 mg/L, L-蘇氨酸100-150 mg/L, L-色氨酸150-190 mg/L, L-酪氨酸二鈉鹽50-90 mg/L, L-繳氨酸100-135 mg/L, 維生素部分: 生物素0.001-0.005 mg/L, 氯化膽堿5-15 mg/L, D-泛酸?丐2-5 mg/L, 葉酸2-5 mg/L, 煙酰胺2-5 mg/L, 鹽酸批B多醇2-5 mg/L, 核黃素0.1-0.5 mg/L, 鹽酸硫胺素0.1-0.5 mg/L, 肌醇10-15 mg/L, 無機(jī)鹽部分: 無水氯化鈣100-125 mg/L, 氯化鉀300-350 mg/L, 氯化鎂25-35 mg/L, 無水硫酸鎂30-40 mg/L,氯化鈉5000-7200 mg/L, 磷酸二氫鈉50-70 mg/L, 磷酸氫二鈉60-70 mg/L, 七水硫酸亞鐵0.1-0.5 mg/L, 七水硫酸鋅0.1-0.5 mg/L, 其余添加物部分: D-葡萄糖3000-5000 mg/L, 丙酮酸鈉100-150 mg/L, 亞油酸0.01-0.1 mg/L, 大豆卵磷脂5-10 mg/L, 膽固醇2-5 mg/L, 硫辛酸0.1-0.5 mg/L, 胸苷0.1-0.5 mg/L, 腺嘌呤1-5 mg/L, 胸腺嘧啶0.01-0.1 mg/L, 重組胰島素5-20 mg/L, 轉(zhuǎn)鐵蛋白5-20 mg/L, 酵母粉100-500 mg/L, 酚紅鈉鹽8-10 mg/L, PF-68100-500mg/L, Ant1-Clumping100-500 mg/L。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種BHK-21細(xì)胞全懸浮培養(yǎng)的無血清培養(yǎng)基，其特征在于，所述BHK-21細(xì)胞全懸浮培養(yǎng)的無血清培養(yǎng)基中，各原料物質(zhì)的終濃度為: 氨基酸部分: L-丙氨酸213.1 mg/L， L-精氨酸鹽酸鹽372.75 mg/L, L-天冬酰胺153.5 mg/L, L-天冬氨酸75.65 mg/L, L-半胱氨酸一水合物 22.71 mg/L, L-胱氨酸鹽酸鹽31.29 mg/L, L-谷氨酸109.4 mg/L, L-谷氨酰胺365 mg/L, 甘氨酸178.75 mg/L, L-組氨酸鹽酸鹽177.64 mg/L, L-異亮氨酸134 mg/L, L-亮氨酸159.05 mg/L, L-賴氨酸鹽酸鹽169.87 mg/L, L-蛋氨酸63.37 mg/L, L-苯丙氨酸35.48 mg/L,L-脯氨酸103.75 mg/L,L-絲氨酸200 mg/L,L-蘇氨酸113.45 mg/L,L-色氨酸171.02 mg/L,L-酪氨酸二鈉鹽55.79 mg/L,L-繳氨酸117.23 mg/L,維生素部分:生物素0.0042 mg/L,氯化膽堿8.98 mg/L,D-泛酸鈣2.73 mg/L,葉酸2.65 mg/L,煙酰胺2.02 mg/L,鹽酸吡哆醇2.03 mg/L,核黃素0.22 mg/L,鹽酸硫胺素0.2 mg/L,肌醇 12.6 mg/L,無機(jī)鹽部分:無水氯化1丐116.69 mg/L,氯化鉀311.8 mg/L,氯化鎂28.64 mg/L,無水硫酸鎂30-80 mg/L,氯化鈉6995.5 mg/L,磷酸二氫鈉62.5 mg/L,磷酸氫二鈉60-100 mg/L,七水硫酸亞鐵0.42 mg/L,七水硫酸鋅0.432 mg/L,其余添加物部分:D-葡萄糖4500 mg/L,丙酮酸鈉115 mg/L,亞油酸0.036 mg/L,大豆卵磷脂6.1 mg/L,膽固醇3.2 mg/L,硫辛酸0.26 mg/L,胸苷0.27 mg/L,腺嘌呤3.1 mg/L,胸腺嘧啶0.065 mg/L,重組胰島素5.6 mg/L,轉(zhuǎn)鐵蛋白11.4 mg/L,酵母粉300 mg/L,酹紅鈉鹽9.3 mg/L, PF-68301 mg/L, Ant1-Clumping328 mg/L。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種BHK-21細(xì)胞全懸浮培養(yǎng)的無血清培養(yǎng)基，其特征在于，將所述原料物質(zhì)根據(jù)其各自溶解特性分類溶解，然后將所得溶液于10°c -30°c蒸餾水中混合，使各原料物質(zhì)終濃度如權(quán)利要求1或2所述，調(diào)節(jié)所得混合液的pH值至7.1-7.4，定容后即得BHK-21細(xì)胞全懸浮培養(yǎng)的無血清培養(yǎng)基。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種BHK-21細(xì)胞全懸浮培養(yǎng)的無血清培養(yǎng)基，其特征在于，將所述原料物質(zhì)混合后磨成細(xì)粉，然后將所得細(xì)粉于10°C _30°C蒸餾水中溶解，使各原料物質(zhì)終濃度如權(quán)利要求1或2所述，調(diào)節(jié)所得混合液的pH值至7.1-7.4，定容后即得BHK-21細(xì)胞全懸浮培養(yǎng)的無血清培養(yǎng)基。
【文檔編號】C12N5/02GK103555658SQ201310546756
【公開日】2014年2月5日 申請日期:2013年11月7日 優(yōu)先權(quán)日:2013年11月7日
【發(fā)明者】令世鑫, 馬忠仁, 李明生, 馮若飛, 王家敏, 馬祺, 馮玉萍, 喬自林 申請人:令世鑫, 馬忠仁, 李明生, 馮若飛, 王家敏, 馬祺, 馮玉萍, 喬自林