一種日溝維腸桿菌及其在麻瘋樹餅粕發(fā)酵脫毒中的應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種日溝維腸桿菌，它是由中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心保藏的保藏號(hào)：CCTCC?NO:M2013184的日溝維腸桿菌Enterobacter?gergoviae?zxy-15。本發(fā)明還公開了日溝維腸桿菌在麻瘋樹餅粕的發(fā)酵脫毒中的應(yīng)用。本發(fā)明保藏號(hào)為CCTCC?NO:M2013184的日溝維腸桿菌Enterobacter?gergoviae?zxy-15，可以有效降低麻瘋樹餅粕有毒成分，提高麻瘋樹餅粕的實(shí)用價(jià)值。
【專利說明】一種日溝維腸桿菌及其在麻瘋樹餅粕發(fā)酵脫毒中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001 ] 本發(fā)明涉及一株日溝維腸桿菌及其在麻瘋樹餅柏發(fā)酵脫毒中的應(yīng)用，屬于發(fā)酵領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002]麻瘋樹(Jatropha curcas L.)是世界公認(rèn)的最有可能成為未來替代化石能源的具有巨大開發(fā)潛力的樹種，利用麻瘋樹油加工生產(chǎn)的生物柴油在各項(xiàng)性能指標(biāo)上接近甚至超過國(guó)家“O”號(hào)柴油以及國(guó)家生物柴油標(biāo)準(zhǔn)，因此以麻瘋樹果生產(chǎn)生物柴油已經(jīng)成為現(xiàn)在研究生產(chǎn)生物柴油的一個(gè)活躍方向。麻瘋樹餅柏(Jatropha curcas seed cake, JCSC)是生物柴油生產(chǎn)過程中的副產(chǎn)物，具有很高的蛋白含量和較高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值，但是因其毒性大，主要被作為肥料用或直接排放于自然環(huán)境中，不但嚴(yán)重地浪費(fèi)了大量的優(yōu)質(zhì)蛋白資源，而且還造成了嚴(yán)重的環(huán)境污染，若能降低其毒性，則可作為飼用蛋白使用。
[0003]麻瘋樹餅柏的主要毒性物質(zhì)是佛波酯及其衍生物、胰蛋白酶抑制劑和Curcin。其中，胰蛋白酶抑制劑和Curcin是熱不穩(wěn)定性成分，簡(jiǎn)單的加熱處理就可以使它們的分子構(gòu)型發(fā)生變化，從而失去活性通過熱處理可以使其大量減少，至幾乎完全消失。但是，佛波酯(Phorbol-ester, PE)為熱穩(wěn)定性成分,毒性強(qiáng),可以在160°C下耐受30min而不受影響,其結(jié)構(gòu)屬于四環(huán)二萜型，巴豆 烷是佛波醇酯的基本結(jié)構(gòu)部分，因此，脫除佛波酯的是麻瘋樹餅柏利用的關(guān)鍵因素。
[0004]目前，國(guó)內(nèi)外多采用物理化學(xué)方法除去麻瘋樹油柏中的佛波酯，但是化學(xué)脫毒操作復(fù)雜過程繁瑣、易導(dǎo)致化學(xué)物殘留，而且脫毒范圍小、成本高；而酶解只能降解某種毒素，針對(duì)性較強(qiáng)，鈍化效果不一致；物理脫毒效率低，且對(duì)餅柏中的營(yíng)養(yǎng)成分造成一定的破壞。
[0005]微生物具有繁殖快、數(shù)量大、產(chǎn)酶系復(fù)雜等特點(diǎn)，利用微生物發(fā)酵工程技術(shù)脫毒是一種較為有效的方法，文獻(xiàn)報(bào)道采用銅綠假單胞菌(P.aeruginosa PseA)發(fā)酵能夠降解麻瘋樹籽柏中的佛波酯。但是，銅綠假單胞菌是醫(yī)院內(nèi)感染的主要病原菌之一，經(jīng)常引起術(shù)后傷口感染，也可引起褥瘡、膿腫、化膿性中耳炎等，還是尿路感染的常見病原菌。因而用銅綠假單胞菌處理的麻瘋樹餅柏作為飼料使用，存在潛在的安全隱患。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明提供了一種新的日溝維腸桿菌及其在麻瘋樹餅柏發(fā)酵脫毒中的應(yīng)用。
[0007]日溝維腸桿菌，其標(biāo)準(zhǔn)菌株為日溝維腸桿菌Enterobacter gergoviae Brenner etal.，保藏號(hào)為ATCC33028，分離自化妝品中，通常用于化妝品中抗菌防腐劑含量的檢測(cè)，極少引起人體或動(dòng)物體發(fā)病。
[0008]本發(fā)明日溝維腸桿菌，它是由中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心保藏的保藏號(hào)=CCTCCN0:M2013184 的日溝維腸桿菌 Enterobacter gergoviae zxy-15。
[0009]本發(fā)明還提供了日溝維腸桿菌在麻瘋樹餅柏的發(fā)酵脫毒中的用途。
[0010]其中，所述日溝維腸桿菌是保藏號(hào):CCTCC N0:M2013184的日溝維腸桿菌Enterobacter gergoviae zxy-15。
[0011]本發(fā)明麻瘋樹餅柏的發(fā)酵脫毒方法，包括如下步驟:
[0012](I)取日溝維腸桿菌，復(fù)蘇制備種子液；
[0013](2)取麻瘋樹餅柏，加水混勻，接種步驟(1)制備的種子液，其中，料水比為1:
0.8~1.2 (w/v)，種子液的接種量為麻瘋樹餅柏的10~30% (v/w)；
[0014](3)在溫度為30~37°C的條件下發(fā)酵2~8天，即可。
[0015]步驟(1)中，所述日溝維腸桿菌是保藏號(hào):CCTCC N0:M2013184的日溝維腸桿菌Enterobacter gergoviae zxy-15。
[0016]步驟(1)中，所述種子液由如下方法制備:在20ml牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基中接種2-3環(huán)日溝維腸桿菌，37°C、200r/min下振蕩培養(yǎng)10~14h，即可。
[0017]步驟(2)中，本發(fā)明方法的處理對(duì)象可以是未脫油的麻瘋樹餅柏，也可以是脫油后的餅柏。未脫油餅柏可按照如下方法制備:取麻瘋樹種仁，粉碎，過40目篩，即可；脫油餅柏可按照如下兩種方法制備:1、將干燥麻瘋樹種仁粉碎過40目篩，按照索氏脫油方法脫油，即得；2、將干燥麻瘋樹種仁粉碎過40目篩，采取榨油機(jī)榨取的方法脫油，即得。
[0018]步驟(2)中，所述料水比為1:0.8 (w/v);所述種子液的接種量為麻瘋樹餅柏的25%(v/w)。
[0019]步驟(2)中，所述 麻瘋樹餅柏中添加有碳源，碳源的添加量為麻瘋樹餅柏的10~20% (w/w)，所述碳源為葡萄糖、蔗糖或可溶性淀粉。
[0020]步驟(3)中，所述溫度為36~37°C ;所述發(fā)酵的時(shí)間為8天。
[0021]本發(fā)明菌株可以有效降低麻瘋樹餅柏有毒成分，操作簡(jiǎn)便，成本低廉，應(yīng)用前景良好。
[0022]顯然，根據(jù)本發(fā)明的上述內(nèi)容，按照本領(lǐng)域的普通技術(shù)知識(shí)和慣用手段，在不脫離本發(fā)明上述基本技術(shù)思想前提下，還可以做出其它多種形式的修改、替換或變更。
[0023]以下通過實(shí)施例形式的【具體實(shí)施方式】，對(duì)本發(fā)明的上述內(nèi)容再作進(jìn)一步的詳細(xì)說明。但不應(yīng)將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下的實(shí)例。凡基于本發(fā)明上述內(nèi)容所實(shí)現(xiàn)的技術(shù)均屬于本發(fā)明的范圍。
[0024]本發(fā)明日溝維腸桿菌zxy - 15 (Enterobactergergoviae zxy - 15),于 2013 年 5月8日保藏在中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心(CCTCC)，保藏號(hào)為CCTCC:M2013184，保藏地址為中國(guó).武漢.武漢大學(xué)。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0025]圖lzxy-15菌株16~24h的讀數(shù)結(jié)果
[0026]圖2zxy_15菌株的16S rDNAPCR擴(kuò)增電泳圖譜以及進(jìn)化樹
[0027]圖3zxy_15生長(zhǎng)曲線測(cè)定
[0028]圖4zxy_15接種量對(duì)脫毒效果的影響
[0029]圖5料水比對(duì)zxy-15脫毒效果的影響
[0030]圖6添加碳源對(duì)zxy-15脫毒效果的影響
[0031]圖7添加不同碳源對(duì)zxy-15脫毒效果的影響
[0032]圖8發(fā)酵溫度對(duì)zxy-15脫毒效果的影響[0033]圖9發(fā)酵時(shí)間對(duì)zxy-15脫毒效果的影響【具體實(shí)施方式】
[0034]實(shí)施例1本發(fā)明日溝維腸桿菌的鑒定特征
[0035](I)生理生化特征
[0036]對(duì)本發(fā)明分離菌株在NB和結(jié)晶紫平板上培養(yǎng)24h后，取NB平板上單個(gè)菌落進(jìn)行革蘭氏染色觀察，結(jié)合菌株在結(jié)晶紫平板上的生長(zhǎng)情況判斷其革蘭氏陰陽性，并進(jìn)行氧化酶實(shí)驗(yàn)和二糖鐵實(shí)驗(yàn)，結(jié)果見表1:
[0037]表1生理生化特征
[0038]
【權(quán)利要求】
1.一種日溝維腸桿菌，其特征在于:它是由中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心保藏的保藏號(hào):CCTCC N0:M2013184 的日溝維腸桿菌 Enterobacter gergoviae zxy-15。
2.日溝維腸桿菌在麻瘋樹餅柏的發(fā)酵脫毒中的用途。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的用途，其特征在于:所述日溝維腸桿菌是保藏號(hào)=CCTCCN0:M2013184 的日溝維腸桿菌 Enterobacter gergoviae zxy-15。
4.一種麻瘋樹餅柏的發(fā)酵脫毒方法，其特征在于:包括如下步驟: (1)取日溝維腸桿菌，復(fù)蘇制備種子液； (2)取麻瘋樹餅柏，加水混勻，接種步驟(1)制備的種子液，其中，料水比為1:0.8~1.2(w/v)，種子液的接種量為麻瘋樹餅柏的10~30% (v/w)； (3)在溫度為30~37°C的條件下發(fā)酵2~8天，即可。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于:步驟(1)中，所述日溝維腸桿菌是保藏號(hào):CCTCC N0:M2013184 的日溝維腸桿菌 Enterobacter gergoviae zxy-15。
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于:步驟(1)中，所述種子液由如下方法制備:在20ml牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基中接種2-3環(huán)日溝維腸桿菌，37°C、200r/min下振蕩培養(yǎng)10~14h,即可。
7.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于:步驟(2)中，所述麻瘋樹餅柏按照如下方法制備:取麻瘋樹種仁，粉碎，過40目篩，即可。
8.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于:步驟(2)中，所述麻瘋樹餅柏中添加有碳源，碳源的添加量為麻瘋樹餅柏的10~20%(w/w)，所述碳源為葡萄糖、蔗糖或可溶性淀粉。
9.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于:步驟(2)中，所述料水比為1:0.8(w/v)；所述種子液的接種量為麻瘋樹餅柏的25% (v/w)。
10.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于:步驟(3)中，所述溫度為36~37°C;所述發(fā)酵的時(shí)間為8天。
【文檔編號(hào)】C12N1/20GK103509738SQ201310296422
【公開日】2014年1月15日 申請(qǐng)日期:2013年7月15日 優(yōu)先權(quán)日:2013年7月15日
【發(fā)明者】陳放, 張曉喻, 唐琳, 劉瑩, 尹利 申請(qǐng)人:四川大學(xué)