含有蛋殼膜成分的肝保護劑、以及使用該肝保護劑的藥物組合物、食品添加劑及食品的制作方法【專利摘要】本發(fā)明提供消化吸收率被改善的肝保護劑及其應用；該肝保護劑含有含蛋殼膜的微粉末，該含蛋殼膜的微粉末是體積平均粒徑為6μm以下的含蛋殼膜的微粉末、和/或體積最大粒徑為20μm以下的含蛋殼膜的微粉末；在喂食含有上述值的含蛋殼膜微粉末(樣品C)的飼料時，與對照組(control)相比，肝損傷組(CCl4)的體重顯著減輕，相對于此，蛋殼膜攝取組(ESM)維持與對照組相等的體重?！緦＠f明】含有蛋殼膜成分的肝保護劑、以及使用該肝保護劑的藥物組合物、食品添加劑及食品【
技術(shù)領域：
】[0001]本發(fā)明涉及含有蛋殼膜成分例如含蛋殼膜的微粉末的肝保護劑及其應用。[0002]此處的"肝保護"也包括"肝功能改善"，且存在包括肝保護和肝功能改善兩者的情況、僅包括肝保護的情況、以及僅包括肝功能改善的情況這三種形態(tài)。另外，在本說明書中，原則上是以"肝保護"也包括"肝功能改善"的形態(tài)使用，但有時也將兩者分開使用?！?br>背景技術(shù)：
】[0003]蛋殼膜是位于雞蛋等禽類蛋的蛋殼內(nèi)側(cè)的膜，其具有由主要成分為卵角蛋白(Ovokeratin)和卵粘蛋白（Ovomucin)的結(jié)實的纖維性蛋白質(zhì)構(gòu)成的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)。這些蛋白質(zhì)相對于酸、堿、蛋白酶比較穩(wěn)定且不溶于水。因此，雞蛋蛋殼膜作為食品產(chǎn)業(yè)中的副產(chǎn)品幾乎未得到利用而被扔掉，但是，已知蛋殼膜具有促進皮膚再生的作用、和促進特別是也被稱為胎兒型膠原蛋白的III型膠原蛋白的生成的作用，因此，其對于生物體的有效性得到關(guān)注。[0004]本發(fā)明人等曾發(fā)表報告稱：在使四氯化碳誘發(fā)性肝損傷大鼠長期攝取蛋殼膜成分時，發(fā)現(xiàn)對于因注射四氯化碳而產(chǎn)生的、（1)體重減輕、（2)肝臟和腎臟腫大、（3)升高后的AST、ALT的活性具有改善效果，同樣地，血漿中的脂類、血漿F值以及肝臟中的脂類均呈恢復趨勢（非專利文獻1)。[0005]另外，在對長期攝取蛋殼膜成分的大鼠的基因表達譜的變化進行分析后得知，蛋殼膜的攝取對于脂類在肝臟中的積累進行抑制的作用可能與SREBP-Ic調(diào)節(jié)信號的、調(diào)節(jié)因子SHP介導的通路等多個通路有關(guān)，并且，在上述大鼠中，抗炎癥、抗氧化酶的血紅素加氧酶-I(HemeOxygenase-Ι)及其上游的調(diào)節(jié)基因AP-1、JUN的表達提高，產(chǎn)生保護身體以免誘發(fā)氧化應激的反應。[0006]另外，最近由Benson等人發(fā)表報告稱，在使用外周血單個核細胞的細胞實驗中，通過添加蛋殼膜粉末的水溶性提取物，減少了引起炎癥的因子TNF-α(非專利文獻2)。[0007]在上述使用蛋殼膜的現(xiàn)有實驗中，使用的是市售的蛋殼膜粉末，這些市售的粉末如具有90%以上通過70目篩的粒度的粉末（非專利文獻3)那樣其粒子較大。另外，70目也取決于篩眼的規(guī)格，相當于篩眼孔徑為約213μm左右。[0008]【在先技術(shù)文獻】[0009]【非專利文獻】[0010]非專利文獻1:"日本食品科學工學會第58屆大會演講集"、58頁、2Dal2、2011年9月[0011]非專利文獻2:Benson，K.F.etal.，JMedFood2012April;15(4):360-368[0012]非專利文獻3:日本丘比株式會社、"EMP0WDER300"的產(chǎn)品目錄http://www.kewpie.co.jp/finechemical/products/pdf/01d/em300/em300_pamph.pdf#search=?ΜP0WDER300'[0013]但是，對于上述蛋殼膜成分的作用機理或有效的作用增強方法尚未充分了解。另夕卜，如上所述，構(gòu)成蛋殼膜的材料本身是以網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的纖維質(zhì)為主要成分而構(gòu)成且難溶于水等，因此，本來就難以被人體消化吸收。因此，期望能夠進一步改善消化吸收率。[0014]為了改善消化吸收率，例如可以舉出下述方法等，即，通過（1)利用酸、堿等對蛋殼膜進行水解處理、或者（2)將蛋殼膜更細地進行粉碎從而增大蛋殼膜粒子的每單位體積的表面積，由此提高每單位時間內(nèi)溶解或析出蛋殼膜成分的效率。[0015]但是，在水解處理中，由于利用的是化學反應，因此，容易產(chǎn)生在水解過程中蛋殼膜中所包含的各種活性組分劣化或改性這樣的缺點?？紤]到這一點，可以認為將蛋殼膜機械性地粉碎較為有利。因此，為了調(diào)查將蛋殼膜更細地粉碎時的效果，本發(fā)明人等對于以70目進行分級處理后得到的蛋殼膜和以150目進行分級處理后得到的蛋殼膜進行了比較調(diào)查，但是，這兩種蛋殼膜的消化吸收率之間完全未發(fā)現(xiàn)顯著性差異。即，蛋殼膜的消化吸收率并非單純地與粒徑成比例地增加。因此，即使以現(xiàn)有技術(shù)中所利用范圍的級別來改變粒徑并將蛋殼膜粉碎，也無法實現(xiàn)消化吸收率的進一步提高?！?br/>發(fā)明內(nèi)容】[0016]本發(fā)明是鑒于上述情況而完成的，其課題在于提供一種相比現(xiàn)有技術(shù)進一步改善了消化吸收率的、含有含蛋殼膜微粉末的肝保護劑以及使用該肝保護劑的藥物組合物、食品添加劑等的應用。[0017]本發(fā)明人等在對使蛋殼膜成分對于四氯化碳誘發(fā)性肝損傷大鼠的作用有效地發(fā)揮的方法進行研究，而且對其作用機理詳細地調(diào)查后，發(fā)現(xiàn)通過以粒徑處于某一范圍內(nèi)的微粒子的形式攝取或注射蛋殼膜成分，能夠增強肝保護作用和/或肝功能改善作用，進而得知蛋殼膜成分是對哪些基因產(chǎn)生作用且如何發(fā)揮效果，由此完成了本發(fā)明。[0018]因此，上述課題是通過以下的本發(fā)明實現(xiàn)的。艮P，[0019]本發(fā)明的肝保護劑的特征在于，含有體積平均粒徑為6μπι以下的含蛋殼膜的微粉末。[0020]本發(fā)明的肝保護劑的一實施方式，優(yōu)選所使用的含蛋殼膜的微粉末的體積最大粒徑為20μm以下。[0021]在本發(fā)明的肝保護劑的一實施方式中，該肝保護劑是肝纖維化抑制劑。[0022]另外，在本發(fā)明的肝保護劑的一實施方式中，該肝保護劑是選自由Tgf-β3、Pdgfra、Vedgf、IgfbpULtbpl以及Ltbp4構(gòu)成的組中的任一種以上基因的表達抑制劑。[0023]本發(fā)明的肝保護劑的一實施方式，優(yōu)選利用于選自口服劑用和食品添加用中的至少任意一種用途中。[0024]本發(fā)明的食品添加劑的特征在于由本發(fā)明的肝保護劑構(gòu)成、或者含有本發(fā)明的肝保護劑。[0025]另外，本發(fā)明的食品的特征在于添加有該食品添加劑。[0026]本發(fā)明的藥物組合物優(yōu)選含有本發(fā)明的肝保護劑和賦形劑。該情況下，優(yōu)選將本發(fā)明的藥物組合物利用于口服用途中。[0027]本發(fā)明的藥物組合物的一實施方式，優(yōu)選該藥物組合物為片劑。[0028]本發(fā)明的片劑的另一實施方式，優(yōu)選以10wt%?40wt%的比例含有蛋殼膜成分。[0029]本發(fā)明中所使用的含蛋殼膜的微粉末的制造方法的特征在于，至少經(jīng)過微粉碎工序進行制造，其中，該微粉碎工序是使至少含有從蛋殼內(nèi)面剝離出的蛋殼膜的含蛋殼膜原料在氣體中相互碰撞從而進行微粉碎的工序。[0030]本發(fā)明中所使用的含蛋殼膜的微粉末的制造方法的特征在于，至少經(jīng)過微粉碎工序進行制造，其中，該微粉碎工序是使至少含有呈蛋殼膜附著于蛋殼內(nèi)面的狀態(tài)的蛋殼的含蛋殼膜原料在氣體中相互碰撞從而進行微粉碎的工序。[0031]本發(fā)明中所使用的含蛋殼膜的微粉末的制造方法的一實施方式，優(yōu)選在經(jīng)過微粉碎工序之后，實施利用篩眼孔徑為20μm以下的篩子進行分級從而除去粗大粒子的分級工序。[0032]本發(fā)明中所使用的含蛋殼膜的微粉末的制造方法的另一實施方式，優(yōu)選微粉碎工序包括第一微粉碎處理和第二微粉碎處理，并在利用高壓蒸汽對第一微粉碎處理結(jié)束后的原料粉末進行了殺菌處理之后進行第二微粉碎處理。[0033]劑型為片劑的本發(fā)明的藥物組合物的制造方法，優(yōu)選至少經(jīng)過未包衣片劑形成工序來制造片劑，其中，該未包衣片劑形成工序是使用至少含有含蛋殼膜的微粉末的壓片用原料進行壓片從而形成未包衣片劑的工序。[0034]劑型為片劑的本發(fā)明的藥物組合物的制造方法的一實施方式，優(yōu)選進而實施對未包衣片劑進行保護涂層處理的保護涂層工序。[0035]劑型為片劑的本發(fā)明的藥物組合物的制造方法的一實施方式，優(yōu)選壓片用原料含有含蛋殼膜的微粉末和賦形劑。[0036](發(fā)明效果）[0037]根據(jù)本發(fā)明，能夠提供由相比現(xiàn)有技術(shù)進一步改善了消化吸收率的含蛋殼膜微粉末構(gòu)成的肝保護劑及其應用。根據(jù)本發(fā)明的肝保護劑，能夠增強目前在蛋殼膜成分中觀察到的對于肝臟的作用，從而能夠通過更短時間的使用或攝取而得到更強的作用。另外，本發(fā)明的肝保護劑無需進行蛋殼膜成分的提取、精制等復雜工序便可制造，因此，在制造時幾乎不會產(chǎn)生廢棄物和損耗，從而能夠簡單且以較高的收獲率進行制造，由此從經(jīng)濟和環(huán)保方面來看也是有利的?！緦＠綀D】【附圖說明】[0038]圖1是表示含蛋殼膜的微粉末對于肝損傷模型大鼠的體重的影響的圖。左側(cè)部分表示使大鼠攝取在常規(guī)飼料中添加含蛋殼膜的微粉末樣品C(800目、2%、7周）的飼料后的體重，右側(cè)部分表示使大鼠攝取在常規(guī)飼料中添加含蛋殼膜的微粉末樣品A(70目、1%、13周）的飼料后的體重。在圖1及以下各圖中，"Control"表示未誘發(fā)肝損傷且僅喂食常規(guī)飼料，"CC14"表示誘發(fā)肝損傷且僅喂食常規(guī)飼料，"ESM"表示誘發(fā)肝損傷且喂食常規(guī)飼料+蛋殼膜微粉末樣品，各數(shù)值以1組6只的平均值土SD表示，附有不同字母（a、b、c)表示存在顯著性差異（Tukey、p<0.05)。[0039]圖2是表示含蛋殼膜的微粉末對于肝損傷模型大鼠的肝臟和腎臟重量的影響的圖?？v軸為各臟器相對于體重的重量（％)。上段是攝取了樣品A的大鼠的結(jié)果，下段是攝取了樣品C的大鼠的結(jié)果，在各段中，左側(cè)部分表示肝臟的重量，右側(cè)部分表示腎臟的重量。[0040]圖3是表示含蛋殼膜的微粉末對于肝損傷模型大鼠的血漿肝功能標志物的影響的圖。上段是攝取了樣品A的大鼠的結(jié)果，下段是攝取了樣品C的大鼠的結(jié)果，在各段中，左側(cè)部分表示谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST)的測量結(jié)果，右側(cè)部分表示谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT)的測量結(jié)果。[0041]圖4是表示含蛋殼膜的微粉末對于肝損傷模型大鼠的脂類過氧化物（TBARS)量的影響的圖。上段是攝取了樣品A的大鼠的結(jié)果，下段是攝取了樣品C的大鼠的結(jié)果，在各段中，左側(cè)部分表示血漿的測量結(jié)果，右側(cè)部分表示肝臟的測量結(jié)果。[0042]圖5是表示含蛋殼膜微粉末（樣品C)對于肝損傷模型大鼠的體重的影響和所經(jīng)過時間之間關(guān)系的圖。[0043]圖6?圖8是表示含蛋殼膜的微粉末（樣品C)對于肝損傷模型大鼠的基因表達的影響的圖。縱軸表示mRNA表達水平（對照組的表達水平為1時的相對值）。[0044]圖6表示關(guān)于以下各基因的結(jié)果，從上段左側(cè)起為"Collal"=I型膠原蛋白al(CollagerutypeI、alphal)、"Colla2"=I型膠原蛋白a2(CollagerutypeI、alpha2)、"Sppl"=分泌型焦磷酸蛋白l(Secretedphosphoproteinl)，從下段左側(cè)起為"Aspn"=無孢蛋白（Asporin)、"Sponl"=反應蛋白I(Spondinl，extracellularmatrixprotein)、"Timpl"=金屬蛋白酶組織抑制因子-I(TissueInhibitorofMetalloproteinase-1)。[0045]圖7表示關(guān)于以下各基因的結(jié)果，從左側(cè)起為"Pdgfra"=血小板衍生生長因子受體a(platelet-derivedgrowthfactoralphareceptor)、"Igfbpl，'=膜島素樣生長因子結(jié)合蛋白I(Insulin-likegrowthfactorbindingproteinl)、"Vegf"=血管內(nèi)皮生長因子（vascularendothelialgrowthfactor)〇[0046]圖8表示關(guān)于以下各基因的結(jié)果，從左側(cè)起為"Tgf-β3"=轉(zhuǎn)化生長因子β3(Transforminggrowthfactorβ3)、"Ltbpl"=潛轉(zhuǎn)化生長因子β結(jié)合蛋白I(Latenttransforminggrowthfactorbetabindingproteinl)、"Ltbp4，'=潛轉(zhuǎn)化生長因子β結(jié)合蛋白4(Latenttransforminggrowthfactorbetabindingprotein4)〇[0047]圖9是以蛋白水平說明TGF-β的作用的圖，其中，"TGF-β"表示轉(zhuǎn)化生長因子β(transforminggrowthfactor0)，"LTBP1"表不潛轉(zhuǎn)化生長因子β結(jié)合蛋白I(Latenttransforminggrowthfactorbetabindingproteinl)，"LAP"表不潛態(tài)相關(guān)性多膚(latencyassociatedprotein)〇[0048]圖10是以蛋白水平說明肝損傷、炎癥、纖維形成的產(chǎn)生機理的圖。【具體實施方式】[0049](肝保護劑）[0050]本發(fā)明的肝保護劑含有含蛋殼膜（ESM)的微粉末。本發(fā)明中所使用的含蛋殼膜的微粉末的特征在于，其體積平均粒徑為6μπι以下。另外，本發(fā)明中所使用的含蛋殼膜的微粉末的特征在于，其體積最大粒徑為20μπι以下。需要說明的是，在本申請說明書中，含蛋殼膜的微粉末的"體積平均粒徑"和"體積最大粒徑"是指使用激光衍射式粒度分布測量儀(LMS-30、日本株式會社清新企業(yè)制）測量的值。在此，"體積平均粒徑"是指粒度分布中從小粒徑側(cè)起的累積值為50%的粒徑。另外，在測量含蛋殼膜的微粉末的粒徑時，使用將含蛋殼膜的微粉末利用表面活性劑分散到水中的測量試樣。[0051]通過將含蛋殼膜的微粉末的粒度分布控制為含蛋殼膜的微粉末的體積平均粒徑為6μm以下、或者體積最大粒徑為20μm以下，與以70目或150目進行分級處理后得到的現(xiàn)有蛋殼膜粉末（最大粒徑為100μm?200μm的蛋殼膜粉末）相比，能夠進一步提高消化吸收率及肝保護或肝功能改善的效率。[0052]能夠得到如此效果的理由并不確定，但是，本發(fā)明人推斷如下：S卩，在最大粒徑為100μm?200μm左右、平均粒徑為數(shù)十?百數(shù)十μm級的現(xiàn)有蛋殼膜粉末中，即使在該粒徑范圍級別內(nèi)改變最大粒徑或平均粒徑而更細地進行粉碎，消化吸收率和肝保護效率也幾乎得不到改善。可以認為其理由如下：即，蛋殼膜具有主要成分為纖維狀蛋白質(zhì)的牢固的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，即使以上述粒徑范圍級別進行粉碎，其粉碎后的蛋殼膜粒子也仍然維持牢固的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)。即，由于維持牢固的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，因此，即使在經(jīng)口攝取蛋殼膜時，也難以通過胃液或唾液等各種消化液促進蛋殼膜的分解或溶解。[0053]另外，一般來說，粒徑越小則粒子的每單位體積的表面積越大。因此，當粒子僅由相對于消化液呈可溶性或易溶性的物質(zhì)構(gòu)成時，隨著粒徑變小而消化吸收率得以改善，從而能夠期待提高肝保護或肝功能改善的效率。但是，即使在上述粒徑范圍內(nèi)改變粒徑，消化吸收率也幾乎得不到改善。由此可以推測出：僅僅是粉碎蛋殼膜的過程中生成的斷裂面或粉碎面等的一部分變得易溶于消化液，而呈維持牢固的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)狀態(tài)的蛋殼膜粒子主體部分依然維持相對于消化液不溶或難溶的狀態(tài)。[0054]另一方面，與現(xiàn)有的蛋殼膜粉末相比，根據(jù)本發(fā)明中所使用的含蛋殼膜的微粉末，消化吸收率、肝保護或肝功能改善效率分別得到大幅提高。這樣的消化吸收率及肝保護或肝功能改善效率提高的原因，并不是單純因為粒徑變小而產(chǎn)生的，而是推測如下：在將蛋殼膜微粉化的過程中，蛋殼膜微粒子整體中的、蛋殼膜本來所具有的纖維狀且牢固的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)被破壞，從而使蛋殼膜微粒子整體變得更易溶于消化液中。[0055]另外，從更進一步改善消化吸收率及肝保護或肝功能改善效率的觀點來看，更優(yōu)選含蛋殼膜的微粉末的體積平均粒徑為6μm以下且體積最大粒徑為20μm以下。另外，在并不過多追求效果而僅希望獲得適當效果時，也可以使含蛋殼膜的微粉末的體積最大粒徑超過20μm、或者使含蛋殼膜的微粉末的體積平均粒徑超過6μm、或者使含蛋殼膜的微粉末的體積最大粒徑超過20μm且體積平均粒徑超過6μm。[0056]在含有本實施方式的含蛋殼膜的微粉末的肝保護劑中，至少含有被微粉化的蛋殼膜成分，但是，除此之外還可以含有被微粉化的蛋殼I丐（Eggshellcalcium)成分。該情況下，本實施方式的含蛋殼膜的微粉末，尤其優(yōu)選為僅含有蛋殼膜成分的形態(tài)（第一形態(tài)）、或者僅含有蛋殼膜成分和蛋殼鈣的形態(tài)（第二形態(tài)）中的任一形態(tài)。在含有第一形態(tài)的含蛋殼膜的微粉末的肝保護劑的情況下，由于完全僅含有蛋殼膜成分，因此，能夠廣泛地利用于藥物組合物、尤其是片劑等固體劑型的藥物組合物、食品添加劑等各種用途中。另外，在第一形態(tài)的含蛋殼膜的微粉末和第二形態(tài)的含蛋殼膜的微粉末的任一種微粉末中，都允許含有制造過程等中混入的雜質(zhì)成分。另外，在含有本實施方式的含蛋殼膜微粉末的肝保護劑中，除了蛋殼膜成分和蛋殼鈣成分之外還可以含有其他的營養(yǎng)素等。[0057]蛋殼膜是位于蛋殼內(nèi)側(cè)的膜，蛋殼膜能夠從由蛋殼鈣構(gòu)成的蛋殼上剝離取出。另夕卜，在制造含有蛋殼膜成分的片劑時，可以將蛋殼鈣用作片劑的硬度提高劑。此外，蛋殼鈣也適合作為人攝取的鈣源。考慮到這一點，當片劑等成品中同時含有蛋殼膜成分和蛋殼鈣成分時，在制造該成品時尤其優(yōu)選使用第二形態(tài)的含蛋殼膜的微粉末。該情況下，由于在一系列制造過程中能夠省略將蛋殼膜從蛋殼剝離的工序，因此，能夠謀求制造工序的簡化和低成本化。另外，在使用第二形態(tài)的含蛋殼膜的微粉末的情況下，也可以使用被剝離的蛋殼膜。[0058]構(gòu)成本發(fā)明中所使用的含蛋殼膜的微粉末的蛋殼膜，只要是位于禽類蛋的蛋殼內(nèi)偵_膜（外蛋殼膜和/或內(nèi)蛋殼膜）均可以使用。其中，從獲取容易度、成本等方面來看，尤其優(yōu)選使用雞蛋的蛋殼膜。[0059]在制造本發(fā)明中所使用的含蛋殼膜的微粉末時，可以利用市售的蛋殼膜粉末、或者市售的蛋殼膜粉末和蛋殼鈣，并將其微粉碎至體積平均粒徑為6μm以下、和/或體積最大粒徑為20μm以下?；蛘?，也可以使用蛋殼膜附著于蛋殼上的狀態(tài)的原料、或者同時使用該原料和蛋殼膜粉末。另外，作為市售的蛋殼膜粉末，例如可以利用"EMP0WDER300"（商品名稱）（日本丘比株式會社制）。另外，關(guān)于本實施方式的含蛋殼膜的微粉末的制造方法之后詳細進行敘述。[0060](本發(fā)明的肝保護劑中所使用的含蛋殼膜的微粉末的制造方法）[0061]本發(fā)明的肝保護劑中的含蛋殼膜的微粉末，可以至少經(jīng)過使含蛋殼膜原料在氣體中相互碰撞從而進行微粉碎的微粉碎工序來制造。在該微粉碎工序中，使用的是：使從噴嘴噴射出的高壓空氣或蒸汽等氣體以超高速噴射流（Ultrahighspeedjet)的形式?jīng)_撞粒子，從而通過粒子彼此間的碰撞而將粒子粉碎至數(shù)微米級的微粒子的粉碎裝置、即所謂的噴射式粉碎機。與使旋轉(zhuǎn)刀等硬質(zhì)粉碎部件與原料碰撞從而進行粉碎的現(xiàn)有粉碎方法相t匕，上述粉碎方法在進行粉碎時幾乎不會因為粉碎部件與原料接觸、碰撞等而產(chǎn)生摩擦熱。因此，減少了對于蛋殼膜中所含的氨基酸或蛋白質(zhì)等容易因為熱而發(fā)生改性、劣化、分解的成分的破壞。即，在制造過程中不易損失蛋殼膜中的活性組分。此外，由于為了粉碎原料使用的是高壓氣體而不是粉碎部件，因此，不會發(fā)生來自粉碎裝置的雜質(zhì)混入含蛋殼膜的微粉末中的情況。[0062]另一方面，在使粉碎部件與原料碰撞從而進行粉碎的粉碎方法中，難以粉碎成粒徑小于30μm級的粉末。關(guān)于利用這樣的粉碎方法粉碎原料時的粉碎臨界粒徑，例如在切碎機（cuttermill)中為500μm左右，在破碎機（crackingmachine)中為150μm左右，在霧化器（atomizer)中為50μm左右，在葉輪式粉碎機（impellermill)中為70μm左右，在寬腔針盤磨機（contraplexmill)、球磨機以及ACM磨粉機（ACMpulverizermill)中為30μm左右。因此，即使使用篩眼孔徑為20μm左右的篩子進行分級處理，也幾乎無法得到本實施方式的含蛋殼膜的微粉末，而且收獲率也極低。另外，在上述粉碎方法中，粉碎時被加熱的粉末在粉碎后的冷卻階段中容易吸收空氣中的水分。其結(jié)果是，還存在易于滋生腐生菌或霉菌這一缺點。[0063]另外，作為微粉碎工序中所使用的含蛋殼膜原料，可以使用（1)至少含有從蛋殼內(nèi)面剝離出的蛋殼膜的原料（第一形態(tài)的含蛋殼膜原料），和/或，（2)至少含有呈蛋殼膜附著于蛋殼內(nèi)面的狀態(tài)的蛋殼和蛋殼膜的原料（第二形態(tài)的含蛋殼膜原料）中的任一種原料。在此，作為至少含有從蛋殼內(nèi)面剝離出的蛋殼膜的含蛋殼膜原料，例如可以使用"EMP0WDER300"（日本丘比株式會社制）。另外，在如后述的片劑制造等那樣在后工序中同時使用蛋殼鈣和蛋殼膜的情況下，從生產(chǎn)率的觀點來看，優(yōu)選使用第一及第二形態(tài)的含蛋殼膜原料中的、使用未從蛋殼剝離的蛋殼膜的第二形態(tài)的含蛋殼膜原料。[0064]在微粉碎工序中，優(yōu)選通過噴射式粉碎機粉碎至含蛋殼膜原料的體積平均粒徑達到40μm以下為止，更優(yōu)選粉碎至體積平均粒徑達到20μm以下為止，進一步優(yōu)選粉碎至體積平均粒徑達到10μm以下為止。另外，該情況下，優(yōu)選粉碎至體積最大粒徑達到20μm以下為止。另一方面，利用噴射式粉碎機粉碎后的含蛋殼膜原料的體積平均粒徑的下限并沒有特別限定，但是，從生產(chǎn)率等實用性方面出發(fā)，優(yōu)選為4μm以上，更優(yōu)選為5μm以上。[0065]關(guān)于利用噴射式粉碎機粉碎后的含蛋殼膜原料，只要體積最大粒徑為20μπι以下、和/或體積平均粒徑為6μm以下，便可以直接將其用作本發(fā)明的含有含蛋殼膜微粉末的肝保護劑。另一方面，當粒度分布中含有粒徑超過20μm的粗大粒子時，也可以在經(jīng)過微粉碎工序之后進而實施分級工序，其中，該分級工序是利用篩眼孔徑為20μm以下的篩子進行分級從而除去粗大粒子的工序。[0066]另外，在本發(fā)明的肝保護劑中的含蛋殼膜微粉末的制造方法中，也可以根據(jù)需要實施其他的工序或工藝。例如，微粉碎工序也可以包括第一微粉碎處理和第二微粉碎處理，并且在利用高壓蒸汽對第一微粉碎處理結(jié)束后的原料粉末進行了殺菌處理之后進行第二微粉碎處理。在通過噴射式粉碎機將含蛋殼膜原料粉碎并且微細化的過程中，蛋殼膜的抗菌性容易降低，但是，通過如上所述進行殺菌處理，可容易地防止在本實施方式的含蛋殼膜的微粉末中滋生霉或細菌。[0067](藥物組合物）[0068]本發(fā)明的藥物組合物含有本發(fā)明的肝保護劑和至少一種賦形劑。在將本發(fā)明的肝保護劑制成藥物組合物時，優(yōu)選制成經(jīng)口攝取的用途、即片劑、散劑、顆粒劑、膠囊劑、液劑等的口服藥物組合物。用于制造包括以上所例示劑型在內(nèi)的各種劑型的藥物組合物的各種成分和制造方法為制劑學領域中公知的成分和方法，本領域技術(shù)人員可根據(jù)需要適當?shù)剡M行選擇。從高濃度且均勻地含有蛋殼膜，在保存時、流通時、服用時等不會發(fā)生變形或損壞，使用性出色，并且能夠經(jīng)口簡單地服用的觀點來看，本發(fā)明的藥物組合物尤其優(yōu)選以片劑的形式使用。[0069]本發(fā)明的肝保護用和/或肝功能改善用的藥物組合物的有效給藥量，根據(jù)欲治療或預防的肝疾病或癥狀的種類或程度、給藥對象的狀態(tài)、劑型等的不同而不同。本發(fā)明的肝保護用和/或肝功能改善用的藥物組合物由于有效性高，因此，一般來說其用量可以明顯少于公知蛋殼膜的有效量、或者在以與公知蛋殼膜相同的用量進行使用的情況下可以減少給藥次數(shù)或者給藥期間。[0070]另外，此處的"藥物組合物"并不限定于人用藥物組合物，還包括作為寵物或家畜飼養(yǎng)的狗或貓等哺乳動物用的藥物組合物。該藥物組合物相對于人（體重為60kg的成年人）的給藥量，在換算成蛋殼膜成分的量時優(yōu)選為每日IOmg?50000mg。具體來說，例如本發(fā)明的藥物組合物的有效給藥量可以是每日的蛋殼膜成分共計為18mg?48000mg，進而優(yōu)選的值可為500mg?25000mg。[0071](片劑）[0072]以下，作為使用本發(fā)明的肝保護劑的藥物組合物的例子，對片劑進行說明。本實施方式的片劑含有上述含蛋殼膜的微粉末和賦形劑。[0073]本實施方式的片劑中所含的微粉末狀蛋殼膜成分的含有量并沒有特別限制，但是，從能夠順利地進行粒子的造粒和壓片（Tabletting)，經(jīng)口攝取（服用）片劑時對于肝損傷的預防和/或治療效果更佳，生物體內(nèi)生成的活性氧的減少或消除能力增強等觀點來看，優(yōu)選相對于片劑的總質(zhì)量而以5wt%?40wt%的比例含有蛋殼膜成分，更優(yōu)選以IOwt%?25wt%的比例含有蛋殼膜成分。[0074]通過將蛋殼膜成分的含有量設為5wt%以上，無需為了得到肝保護效果、活性氧的減少或消除能力而攝取大量片劑。另一方面，通過將片劑中的蛋殼膜成分的含有量設為40wt%以下，粒子的造粒和壓片變得容易，從而易于制造片劑。[0075]在本實施方式的片劑中，作為用于形成片劑的各種添加劑，除了賦形劑之外例如還可以適當?shù)靥砑咏Y(jié)合劑、崩解劑、潤滑劑及其他營養(yǎng)素等。[0076]賦形劑是在活性組分較少時以適于使用的量進行添加的添加劑。賦形劑可以適宜地利用公知的賦形劑，但是，作為片劑用賦形劑優(yōu)選使用化工淀粉和乳糖中的至少一種。從賦形性的觀點而言，賦形劑的含有量優(yōu)選為蛋殼膜成分的質(zhì)量的〇.5倍?3倍，更優(yōu)選為1倍?2.5倍。作為化工淀粉可以舉出焙燒糊精（白糊精、黃糊精等）等糊精類、氧化淀粉(次氯酸氧化淀粉等）、低粘性改性淀粉（酸浸淀粉、酶處理淀粉等）等，可以使用上述化工淀粉中的一種或兩種以上。其中，作為化工淀粉優(yōu)選使用糊精，作為具體例可以舉出日本日食株式會社制的"WAXYa(^ia)，，、日本松谷化學株式會社制的"PINEFIBER(パ4774一）"等。從能夠更加順利地進行壓片這一點來看，化工淀粉更優(yōu)選同時使用"WAXYa"和"PINEFIBER"。在同時使用"WAXYa"和"PINEFIBER"時，優(yōu)選以l:4?4:l的質(zhì)量比來使用"WAXYa"和"PINEFIBER"。[0077]另外，在作為賦形劑同時使用化工淀粉（尤其是"WAXYa"和"PINEFIBER"）和乳糖時，化工淀粉：乳糖的使用比例（質(zhì)量比）優(yōu)選為1:5?5:1，更優(yōu)選為1:3?3:1〇[0078]結(jié)合劑是為了將構(gòu)成片劑原料的粉體彼此間粘結(jié)起來而使用的添加劑。作為結(jié)合劑可以適宜地利用公知的結(jié)合劑，例如可以舉出淀粉糊、阿拉伯膠糊、羥丙基纖維素等。[0079]崩解劑是為了通過其吸收唾液等水分而進行膨脹等從而使片劑崩解，由此使蛋殼膜成分等活性組分容易釋放而添加的添加劑。作為崩解劑可以適宜地利用公知的崩解劑，例如可以使用纖維素類等。另外，淀粉也具有作為崩解劑的功能。[0080]潤滑劑是為了提高構(gòu)成片劑原料的粉體的流動性，從而使壓片時的壓縮成形變得容易而使用的添加劑。作為潤滑劑可以適宜地利用公知的潤滑劑，例如可以舉出硬脂酸鎂、蔗糖脂肪酸酯等的石蠟類、滑石或者維生素C等。[0081]進而，本實施方式的片劑尤其優(yōu)選作為硬度提高劑而含有蛋殼鈣，以提高片劑的硬度，防止片劑的變形或損傷，提高包裝時、保存時、流通時等片劑的使用性，使攝取性變得良好。在片劑含有蛋殼鈣的情況下，作為片劑的制造中所使用的原料，可以至少使用第一形態(tài)的含蛋殼膜的微粉末和蛋殼鈣、或者至少使用第二形態(tài)的含蛋殼膜的微粉末。[0082]蛋殼鈣是將雞蛋等的禽類蛋的殼粉碎并干燥后形成的微粉末，只要是人可攝取的蛋殼鈣，均可使用于本實施方式的片劑中。作為蛋殼鈣，例如可以直接使用目前市售的日本丘比株式會社制的"CALH0PE"（商品名稱）、日本太陽化學株式會社制的蛋殼鈣等。另外，在使用第二形態(tài)的含蛋殼膜的微粉末來制造片劑時，也可以省略上述蛋殼鈣的使用。片劑中所含的蛋殼I丐的含有量，優(yōu)選相對于片劑的總質(zhì)量為5wt%?20wt%，更優(yōu)選為8wt%?15wt%〇[0083]為了加快蛋殼膜在體內(nèi)的吸收，進一步提高肝臟疾病的預防和/或治愈效果，另外為了進一步提高生物體內(nèi)生成的活性氧的減少或消除能力，本實施方式的片劑優(yōu)選在含有蛋殼膜成分的同時還含有以下物質(zhì)。即，本實施方式的片劑優(yōu)選含有：（1)公知的具有肝保護作用和/或肝功能改善作用的物質(zhì)、（2)健康增進劑（例如維生素類、β-胡蘿卜素以及蜂王漿等）、（3)可同時使用的各種醫(yī)療用成分（例如抗炎癥劑等）中的至少一種。[0084]本實施方式的片劑中所含有的維生素的種類并沒有特別限制，只要是人或哺乳動物能夠攝取的維生素均可使用。例如可以舉出維生素A、維生素D、維生素E、維生素F、維生素K等脂溶性維生素類，維生素Β、維生素C、維生素Η、維生素L等水溶性維生素類等，本實施方式的片劑可以含有這些維生素類的一種或兩種以上。β-胡蘿卜素和維生素類的含有量，可以根據(jù)適于人等對象攝取的各種維生素的量而適宜地確定。[0085]另外，從能夠充分發(fā)揮本實施方式的片劑的上述作用效果方面、成本等方面而言，蜂王漿的含有量優(yōu)選為蛋殼膜成分的總質(zhì)量的〇.1倍?1.5倍，更優(yōu)選為0.2倍?1倍，進一步優(yōu)選為〇.5倍?0.8倍。[0086]為了達成防止片劑中所含的成分變質(zhì)或分解，另外提高片劑表面的耐損傷性等目的，本實施方式的片劑優(yōu)選被涂膜包覆。涂膜可以由與作為片劑的涂膜目前正使用的涂膜相同的皮膜形成材料而形成。皮膜形成材料并沒有特別的限定，例如可以利用日本岐阜紫膠株式會社制的"Shellac"（Track30)(商品名稱）等。[0087]另外，本實施方式的片劑優(yōu)選被糖衣包覆，以易于經(jīng)口攝取。作為此時的糖衣，只要是片劑中目前使用的糖衣均可使用。另外，本實施方式的片劑也可以根據(jù)需要著色成適當?shù)念伾?，以提高其商品價值。另外，也可以在著色后進行拋光處理。[0088]本實施方式的片劑的大小并沒有特別限制，可以適宜地進行確定，但是，從使用性、服用容易度等方面出發(fā)，一般優(yōu)選形成為直徑約為7mm?IOmm左右的圓形或橢圓形的片劑。[0089]進而，本實施方式的片劑例如優(yōu)選1粒片劑的重量約為350mg?600mg左右，并且優(yōu)選在這樣的1粒片劑中含有約18mg?240mg的量的蛋殼膜成分，更優(yōu)選為35mg?150mg。[0090]例如，假設本實施方式的每粒片劑以約18mg?240mg的比例含有蛋殼膜成分。該情況下，當成人每日攝取或服用1粒?200粒該片劑（每日的蛋殼膜成分共計為ISmg?48000mg)時，能夠消除或減少體內(nèi)生成的活性氧從而促進各種肝疾病的預防或恢復。[0091](片劑的制造方法）[0092]本實施方式的片劑，可以使用至少含有本實施方式的含蛋殼膜的微粉末的壓片用原料，并適宜地利用公知的片劑制造方法來制造。具體而言，可以至少經(jīng)過未包衣片劑(Uncoatedtablet)形成工序（壓片工序）來制造本實施方式的片劑，其中，該未包衣片劑形成工序（壓片工序）是通過使用壓片用原料進行壓片從而形成未包衣片劑的工序。[0093]另外，在壓片用原料中，除了本實施方式的含蛋殼膜的微粉末之外，還可以含有上述的蛋殼膜成分以外的其他活性組分。此外，通常含有選自賦形劑、結(jié)合劑、崩解劑等中的至少一種添加劑，但是，優(yōu)選至少含有賦形劑。另外，也可以作為硬度提高劑進而含有蛋殼鈣。[0094]在未包衣片劑形成工序中，可以利用公知的壓片法，例如，可以利用直接對稱量、混合規(guī)定原料而得到的壓片用原料進行壓片的直接壓片法來實施，也可以利用在經(jīng)過將壓片用原料造粒成顆粒的造粒工序后進行壓片的顆粒壓片法來實施。[0095]在造粒工序中，例如可以按照以下順序?qū)浩迷线M行顆?；Ｊ紫?，相對于壓片用原料100質(zhì)量份而以約10質(zhì)量份?20質(zhì)量份的比例添加醇類（乙醇）從而制成含醇混合物。接著，使用該含醇混合物并采用目前已知的造粒法、例如攪拌造粒法、轉(zhuǎn)動造粒法、噴霧造粒法等造粒方法進行造粒。然后，通過對所得到的粒子進行以例如40°C?70°C左右的溫度加熱的干燥工序，從而能夠得到壓片用的顆粒。另外，優(yōu)選在使用篩子對得到的壓片用顆粒進行分級從而使粒度均勻后進行壓片。[0096]未包衣片劑形成工序中所使用的壓片裝置，可以使用與醫(yī)藥等領域中目前用于制造片劑的裝置相同的壓片裝置。另外，在進行壓片時，優(yōu)選在經(jīng)過造粒工序和干燥工序得到的壓片用顆粒中添加維生素C和蔗糖脂肪酸酯等潤滑劑后進行壓片。此時，粒子的流動性和光滑性提高，從而能夠更加順利地進行壓片。在此，在潤滑劑使用維生素C和蔗糖脂肪酸酯時，其添加量優(yōu)選如下：即，壓片時維生素C的添加量優(yōu)選相對于干燥狀態(tài)的壓片用顆粒100質(zhì)量份為8質(zhì)量份?10質(zhì)量份，另外，蔗糖脂肪酸酯的添加量優(yōu)選相對于干燥狀態(tài)的壓片用顆粒100質(zhì)量份為〇.1質(zhì)量份?3.0質(zhì)量份。[0097]經(jīng)過未包衣片劑形成工序后得到的未包衣片劑可以直接作為本實施方式的片劑，也可以進一步實施對未包衣片劑實施保護涂層處理的保護涂層工序。保護涂層工序中所使用的涂層劑種類如上所述并沒有特別限制，例如可以使用日本岐阜紫膠株式會社制的"Shellac"等。保護涂層的涂層量沒有特別限制，一般優(yōu)選在1粒片劑中為Img?5mg左右。[0098]另外，被施以保護涂層處理后的片劑可以直接作為產(chǎn)品流通、銷售，但是，優(yōu)選包覆糖衣以便容易服用片劑。包覆糖衣的糖衣包覆工序可以由一個階段進行，但是，為了使表面的加工質(zhì)量光潔美觀而優(yōu)選使用下述分多個階段進行的方法，即：在利用高粘度的含糖分糊狀物包覆片劑之后進行干燥，進而利用低粘度的含糖分糊狀物或含糖分溶液再次進行包覆的多個階段。[0099]糖衣材料的種類并沒有特別限制，目前用于片劑的糖衣處理中的糖衣材料等均可以使用，例如可以使用含有砂糖、阿拉伯膠或明膠等增粘劑、蛋殼鈣、煅燒牛骨粉等的糖衣材料。[0100]包覆有糖衣的片劑可以直接進行流通、銷售，但是，通過進一步實施著色，能夠形成為更美觀且商品價值高的片劑。此時的著色方法并沒有特別限制，可以采用與目前已知的對片劑表面實施著色的方法相同的方法進行。另外，通過在著色之后進行拋光處理，能夠使片劑的外觀變得更好。拋光可以使用例如巴西棕櫚錯（carnaubawax)等的拋光劑進行，由此得到的本實施方式的片劑在進行分選、稱重、包裝等之后上市。[0101](食品添加劑）[0102]本發(fā)明的肝保護劑可以單獨或者與其他食品添加劑等的生理學上允許的各種成分組合而作為點心類、健康食品、保藏食品、加工食品等食品中添加用的食品添加劑進行使用。本發(fā)明的食品添加劑可以通過本【
技術(shù)領域：
】公知的方法添加在各種食品中進行使用，以達成肝保護或肝功能改善的目的。例如，關(guān)于蛋殼膜在食品中的應用，提出了含有粉碎成粉末狀的蛋殼膜的片劑或點心類等（日本特許第3862600號、日本特開2009-165421號公報）。上述專利文獻中記載的片劑或點心類中所使用的蛋殼膜粉末，可以使用含有本發(fā)明的肝保護劑的食品添加劑。[0103]另外，此處的"食品"并不限定于人用食品，還包括作為寵物或家畜飼養(yǎng)的狗或貓等哺乳動物用的飼料。另外，在"食品"概念中，除了通常的食品之外，還包括飲料、所謂的補充劑（supplement)、健康食品、腸內(nèi)營養(yǎng)食品、特殊用途食品、營養(yǎng)功能食品、特定保健用食品等。[0104]【實施例】[0105]以下，舉以實施例對本發(fā)明進行說明，但是，本發(fā)明并不僅限于以下的實施例。[0106]1.含蛋殼臘粉末的制誥[0107](1)含蛋殼膜粉末樣品A的準備[0108]含蛋殼膜粉末樣品A(以下稱為"樣品A"）使用日本丘比株式會社制的"EMP0WDER300"（商品名稱）。該樣品具有90%以上可通過70目篩（篩眼孔徑約為213μm左右）的粒度。使用激光衍射式粒度分布測量儀（日本株式會社清新企業(yè)制、LMS-30)測量粒徑的結(jié)果是,體積最大粒徑為213μm，體積平均粒徑為35μm。[0109](2)含蛋殼膜粉末樣品B的準備[0110]含蛋殼膜粉末樣品B(以下稱為"樣品B"）使用利用噴射式粉碎機將"EMP0WDER300"粉碎后的物質(zhì)。作為噴射式粉碎機而使用單軌噴射式粉碎機（Single-trackjetmill)(日本株式會社清新企業(yè)制、FS-4)，并以風量為I.2m3/min、動力為Ilkw的條件實施粉碎直到體積最大粒徑變?yōu)?25目（篩眼孔徑約為45μm)左右為止。[0111](3)含蛋殼膜粉末樣品C的準備[0112]含蛋殼膜粉末樣品C(以下稱為"樣品C"）使用利用噴射式粉碎機將"EMP0WDER300"粉碎后的物質(zhì)。作為噴射式粉碎機而使用單軌噴射式粉碎機（日本株式會社清新企業(yè)制、FS-4)，并以風量為I.2m3/min、動力為Ilkw的條件實施粉碎直到體積最大粒徑變?yōu)?00目（篩眼孔徑約為20μm)左右為止。使用激光衍射式粒度分布測量儀（日本株式會社清新企業(yè)制、LMS-30)測量粉碎后的粒徑的結(jié)果是，體積最大粒徑為19.6μm，體積平均粒徑為5.8μm。[0113]2.消化測試[0114]使用按照上述方式制成的含蛋殼膜粉末樣品進行消化效率試驗。準備四支裝有0.8ml稀釋200倍后的樣品A的懸浮液的試管。接著，在各試管中加入消化酶（取自豬胰臟的胰酶），并以37°C的溫度分別加熱0分鐘、30分鐘、60分鐘以及180分鐘。然后，以KKTC的溫度加熱5分鐘，在反應停止后以1500rpm進行10分鐘離心分離處理，然后利用考馬斯亮藍法（Bradford法）測量上清液中的可溶性蛋白質(zhì)。測量結(jié)果以牛血清白蛋白為標準進行換算。另外，作為空白組（Blank)，取代懸浮液而使用0.IM的磷酸緩沖液。另外，對于樣品B、C也實施了同樣的測試。[0115]根據(jù)加熱時間對檢測出的可溶性蛋白質(zhì)進行整理后的結(jié)果如表1所示。由表1明確可知，在分散有樣品C的懸浮液中加入消化酶時的可溶性蛋白質(zhì)的檢測量，相比在分散有樣品A、B的懸浮液中加入消化酶時要多約20%左右。相對于此，在分散有樣品A的懸浮液中加入消化酶時和在分散有樣品B的懸浮液中加入消化酶時的可溶性蛋白質(zhì)的檢測量未發(fā)現(xiàn)差異。[0116][表1]【權(quán)利要求】1.一種肝保護劑，其特征在于，所述肝保護劑含有含蛋殼膜的微粉末，所述含蛋殼膜的微粉末的體積平均粒徑為6μm以下，并且，所述肝保護劑為肝纖維化抑制劑。2.-種肝保護劑，其特征在于，所述肝保護劑含有含蛋殼膜的微粉末，所述含蛋殼膜的微粉末的體積最大粒徑為20μm以下，并且，所述肝保護劑為肝纖維化抑制劑。3.-種肝保護劑，其特征在于，所述肝保護劑含有含蛋殼膜的微粉末，所述含蛋殼膜的微粉末的體積平均粒徑為6μηι以下，并且，所述肝保護劑為Tgf-β3、Pdgfra、Vedgf、Igfbpl、Ltbpl以及Ltbp4中的任意一種以上基因的表達抑制劑。4.一種肝保護劑，其特征在于，所述肝保護劑含有含蛋殼膜的微粉末，所述含蛋殼膜的微粉末的體積最大粒徑為20μm以下，并且，所述肝保護劑為Tgf-β3、Pdgfra、Vedgf、Igfbpl、Ltbpl以及Ltbp4中的任意一種以上基因的表達抑制劑。5.-種肝保護用和/或肝功能改善用的藥物組合物，其特征在于，含有權(quán)利要求1?4中任一項所述的肝保護劑和賦形劑。6.如權(quán)利要求5所述的肝保護用和/或肝功能改善用的藥物組合物，其特征在于，所述藥物組合物為片劑。7.-種食品添加劑，其特征在于，含有權(quán)利要求1?4中任一項所述的肝保護劑。8.-種食品，其特征在于，添加有權(quán)利要求7所述的食品添加劑?！疚臋n編號】A23L1/29GK104274491SQ201310285283【公開日】2015年1月14日申請日期:2013年7月9日優(yōu)先權(quán)日:2013年7月9日【發(fā)明者】加藤久典,賈慧娟,長谷部由紀夫申請人:國立大學法人東京大學,株式會社璦蘭夢朵