用于制備固定化蛋白質(zhì)、多肽或寡肽的復(fù)合載體、制法及用途
【專利摘要】本發(fā)明提供一種用于制備固定化蛋白質(zhì)、多肽或寡肽的復(fù)合載體、制法及用途。所述的復(fù)合載體為多孔的，并且所述的復(fù)合載體包括：i）開孔的多孔有機泡沫材料；以及ii）固定在所述的多孔有機泡沫材料的一個或多個孔壁的表面上的、由殼聚糖通過交聯(lián)多元醛化合物形成的交聯(lián)產(chǎn)物，并且該交聯(lián)產(chǎn)物上具有能與蛋白質(zhì)、多肽或寡肽反應(yīng)的醛基。本發(fā)明具有以下優(yōu)點和積極效果：本發(fā)明的復(fù)合載體使蛋白質(zhì)、多肽或寡肽可容易地并且穩(wěn)定地固定化于載體上。制成的固定化產(chǎn)品比表面積大，比活性高，且制作簡單、成本低廉，適合工業(yè)化生產(chǎn)。
【專利說明】用于制備固定化蛋白質(zhì)、多肽或寡肽的復(fù)合載體、制法及用 途

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于固定化蛋白質(zhì)、多肽或寡肽【技術(shù)領(lǐng)域】，具體而言，涉及一種用于制備固 定化蛋白質(zhì)、多肽或寡肽的復(fù)合載體及其制備方法；復(fù)合物及其制備方法及用途。

【背景技術(shù)】
[0002] 隨著生物科技的發(fā)展，酶的應(yīng)用越趨廣泛。由于直接使用液體酶成本高，因此酶常 以固定化形態(tài)應(yīng)用于工業(yè)和其它領(lǐng)域。加之固定化酶易與產(chǎn)品分離并可重復(fù)使用，且也往 往較游離酶更為穩(wěn)定。酶的固定化方法眾多，如物理吸附、親和聯(lián)結(jié)、共價交聯(lián)、凝絮包埋等 (可參見科技文獻 Roger A. Sheldon, 2007, Advanced Synthesis&Catalysis, 349:1289-130 7)。
[0003] 固定化酶/固定化細胞通常以比活力（單位重量的固定化酶/固定化細胞的活性） 的高低來評估固定化的效率。比活力的高低與固定化方法有關(guān)，也與單位重量的固定化酶/ 固定化細胞的表面積（比表面積）有關(guān)。一般而言，比表面積越大，比活性也就越高。因此， 固定化方法都致力于提高酶顆粒的比表面積。目前，提高顆粒比表面積的方法一般采用多 孔、小顆粒的載體，用預(yù)制的含毛細孔的小顆粒載體來吸附或結(jié)合細胞或酶分子?，F(xiàn)有的有 機或無機載體因為多用硬質(zhì)材料做成，其多孔性一般只體現(xiàn)在顆粒表面，因內(nèi)部孔隙過多 易導(dǎo)致載體脆而易裂。因此，制備比表面積大且不易破碎的固定化載體一直是本領(lǐng)域科學(xué) 家努力的目標(biāo)。
[0004] 中國專利申請公開No. CN1982445A公開了一種用于制備固定化酶或固定化細胞 的載體以及使用該載體的固定化方法。所述的用于制備固定化酶或固定化細胞的載體的比 表面積大，物理及化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，但是該載體為隋性材料，表面缺乏活潑的官能團，不能直 接把蛋白質(zhì)、多肽或寡肽固定在載體上。因此在實際應(yīng)用中，固定某些蛋白質(zhì)與多肽(例如， a _葡萄糖轉(zhuǎn)苷酶、蛋白A等）的效果差，同時該載體無法固定寡肽(例如谷胱甘肽、多粘菌 素 B等)。
[0005] 親和層析技術(shù)是一種常用的層析分離法，其中也使用固定化技術(shù)。親和層析技術(shù) 的原理基于生物活性物質(zhì)與其配體之間專一而可逆的親和力。其通常的作法是：（1)將與 生物活性物質(zhì)相對應(yīng)之配體固定在層析柱之載體上；（2)加入需純化的目標(biāo)生物活性物 質(zhì)；（3)通過改變流動相條件(如改變pH、離子強度、濃度或加入競爭性配體等）減弱目標(biāo)生 物活性物質(zhì)與配體的親和力將二者解離，從而達到分離的目的。由于親和層析的分離過程 簡單、快速、專一，且具有很高的分辨率，因此受到廣泛的應(yīng)用。目前親和層析技術(shù)中常用的 層析柱載體為瓊脂糖凝膠，但是瓊脂糖凝膠存在成本昂貴以及在與配體蛋白進行偶聯(lián)的過 程中需使用(例如）高毒性的溴化氰（CNBr)進行活化等缺點，因此在工業(yè)化應(yīng)用方面受到了 很大的限制。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 為解決上述現(xiàn)有技術(shù)中存在的問題，本發(fā)明提供了一種用于制備固定化蛋白質(zhì)、 多肽或寡肽的復(fù)合載體及其制備方法；復(fù)合物及其制備方法及用途。
[0007] 具體而言，本發(fā)明提供：
[0008] (1)-種用于制備固定化蛋白質(zhì)、多肽或寡肽的復(fù)合載體，其中，所述的復(fù)合載體 為多孔的，并且所述的復(fù)合載體包括：
[0009] i )開孔的多孔有機泡沫材料；以及
[0010] ii)固定在所述的多孔有機泡沫材料的一個或多個孔壁的表面上的、由殼聚糖通 過交聯(lián)多元醛化合物形成的交聯(lián)產(chǎn)物，并且該交聯(lián)產(chǎn)物具有能與蛋白質(zhì)、多肽或寡肽反應(yīng) 的醛基。
[0011] (2)根據(jù)（1)所述的復(fù)合載體，其中，所述的多孔有機泡沫材料為三聚氰胺海綿。
[0012] (3)根據(jù)（1)所述的復(fù)合載體，其中，所述的用于制備固定化蛋白質(zhì)、多肽或寡肽的 復(fù)合載體為顆粒狀、條帶狀、塊狀、片狀或柱狀。
[0013] (4) 一種根據(jù)（1) - (3)中任意一項所述的復(fù)合載體的制備方法，其包括：
[0014] 1)提供開孔的多孔有機泡沫材料；
[0015] 2)將殼聚糖沉積于所述的多孔有機泡沫材料的一個或多個孔壁的表面上；以及
[0016] 3)使所述的沉積的殼聚糖與多元醛化合物發(fā)生交聯(lián)反應(yīng)，從而得到所述的復(fù)合載 體。
[0017] (5)根據(jù)（4)所述的方法，其中，在步驟2)中，所述的殼聚糖通過與堿反應(yīng)而沉積 于所述的多孔有機泡沫材料的一個或多個孔壁的表面上；所述的堿優(yōu)選為氫氧化鈉。
[0018] (6)根據(jù)（4)所述的方法，其中，所述的多元醛化合物為戊二醛或雙醛淀粉。
[0019] (7)-種復(fù)合物，其包括根據(jù)（1)- (3)中任意一項所述的復(fù)合載體，以及固定在 所述的復(fù)合載體上的蛋白質(zhì)、多肽或寡肽。
[0020] (8)根據(jù)（7)所述的復(fù)合物，其中，所述的蛋白質(zhì)、多肽或寡肽是通過使所述的蛋 白質(zhì)、多肽或寡肽的氨基與所述的復(fù)合載體上的所述醛基發(fā)生反應(yīng)而固定在該復(fù)合載體上 的。
[0021] (9)根據(jù)（7)或（8)所述的復(fù)合物，其中，所述的蛋白質(zhì)、多肽或寡肽為酶；優(yōu)選為 葡萄糖轉(zhuǎn)苷酶。
[0022] ( 10)根據(jù)（7)或（8)所述的復(fù)合物，其中，所述的復(fù)合物用于殺滅細菌或抑制細菌 生長；所述的蛋白質(zhì)、多肽或寡肽優(yōu)選為多粘菌素 B。
[0023] (11)根據(jù)（7)或（8)所述的復(fù)合物，其中，所述的復(fù)合物用于親和層析純化；所述 的蛋白質(zhì)、多肽或寡肽優(yōu)選為谷胱甘肽、或蛋白A。
[0024] (12) -種根據(jù)（7)- (11)中任意一項所述的復(fù)合物的制備方法，其包括：將根據(jù) (1)- (3)中任意一項所述的復(fù)合載體與蛋白質(zhì)、多肽或寡肽的溶液發(fā)生反應(yīng)，從而得到所 述的復(fù)合物。
[0025] (13)-種生物催化方法，其包括：采用（7)- (9)中任意一項所述的復(fù)合物作為生 物催化劑對相應(yīng)底物進行催化。
[0026] (14) -種殺滅細菌或抑制細菌生長的方法，其包括：采用根據(jù)（7)、（8)或（10)中 任意一項所述的復(fù)合物作為殺滅細菌或抑制細菌生長的介質(zhì)。
[0027] (15) -種用于純化生物活性物質(zhì)的親和層析方法，其包括：采用根據(jù)（7)、（8)或 (11)中任意一項所述的復(fù)合物作為親和層析的介質(zhì)。
[0028] 本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有以下優(yōu)點和積極效果：
[0029] 1.本發(fā)明的復(fù)合載體上具有活潑的醛基官能團，所述的醛基官能團能夠與待固定 的蛋白質(zhì)、多肽或寡肽的氨基發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，從而使得蛋白質(zhì)、多肽或寡肽能夠容易地并且 穩(wěn)定地固定化于載體上，例如，本發(fā)明的復(fù)合載體能夠通過共價鍵穩(wěn)定地固定a_葡萄糖 轉(zhuǎn)苷酶、多粘菌素 B、谷胱甘肽、蛋白A。其次，本發(fā)明采用開孔的多孔有機泡沫材料作為固 定蛋白或寡肽的載體，可大幅度地提高固定化的蛋白質(zhì)、多肽或寡肽的比表面積，從而顯著 提高固定化的蛋白質(zhì)、多肽或寡肽的比活力。再次，本發(fā)明所使用的載體為通用惰性材料， 價格低廉，因而降低了制造成本。最后，本發(fā)明可以在不改變比表面積的同時根據(jù)需要制備 各種外形、尺寸的大體積整體產(chǎn)品，尤其適合于工業(yè)生產(chǎn)。
[0030] 2.本發(fā)明的復(fù)合物在應(yīng)用酶學(xué)和蛋白質(zhì)、多肽或寡肽領(lǐng)域具有廣泛的適用性，在 實際應(yīng)用中可適用于所有類型的能夠與醛基發(fā)生反應(yīng)的蛋白質(zhì)、多肽或寡肽的固定化，而 且制作簡單、成本低廉，適合工業(yè)化生產(chǎn)。
[0031] 此外，按本發(fā)明制備的圓柱形卷軸結(jié)構(gòu)的產(chǎn)品用于填充柱子時，其裝卸過程比顆 粒狀的固定化的蛋白質(zhì)、多肽或寡肽簡單高效，這一優(yōu)勢在大規(guī)模生產(chǎn)時尤其顯得突出。卷 軸結(jié)構(gòu)的無柱套應(yīng)用對節(jié)約固定成本投資也是顯而易見的。而且，由卷軸結(jié)構(gòu)單獨構(gòu)成的 反應(yīng)柱子可以隨意并聯(lián)或串聯(lián)，或由卷軸結(jié)構(gòu)拼接而成的反應(yīng)柱子的長度和數(shù)目可以隨意 調(diào)節(jié)，使得生產(chǎn)規(guī)模可以很方便地根據(jù)需要擴大或縮小。其次，反應(yīng)柱子在使用過程中，柱 子內(nèi)的蛋白質(zhì)、多肽或寡肽分子會逐漸失去活力，越靠近底物進口端位置的蛋白質(zhì)、多肽或 寡肽分子失活越快，因而柱子在使用一段時間之后，其兩端的活力會有顯著的差異。本發(fā)明 可以很方便地用新的高活力的反應(yīng)柱置換失活嚴(yán)重端的反應(yīng)柱。如此可有效調(diào)節(jié)整個柱子 的使用壽命和生產(chǎn)效率。這一點，現(xiàn)有的顆粒狀固定化的蛋白質(zhì)、多肽或寡肽產(chǎn)品均無法做 到。
[0032] 3.本發(fā)明的生物催化及親和層析方法與現(xiàn)有技術(shù)相比制作簡單、成本低廉，適合 工業(yè)化大生產(chǎn)。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0033] 圖1為固定化多粘菌素 B殺菌后涂布瓊脂平板結(jié)果圖，其中a為樣本甲的瓊脂平 板；b為樣本乙的瓊脂平板(即對照實驗)。
[0034] 圖2為固定化谷胱甘肽純化谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶的SDS-PAGE凝膠電泳結(jié)果圖，其中泳 道1為純化前的谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶；泳道2為純化后的谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶。
[0035] 圖3為使用蛋白A親和層析柱純化兔血清的SDS-PAGE凝膠電泳結(jié)果圖，其中泳道 1為純化前的兔血清；泳道2為純化后的兔血清。

【具體實施方式】
[0036] 以下通過【具體實施方式】的描述并參照附圖對本發(fā)明作進一步說明，但這并非是對 本發(fā)明的限制，本領(lǐng)域技術(shù)人員根據(jù)本發(fā)明的基本思想，可以做出各種修改或改進，但是只 要不脫離本發(fā)明的基本思想，均在本發(fā)明的范圍之內(nèi)。
[0037] 在本發(fā)明中，所述的"三聚氰胺海綿"指的是一種以三聚氰胺樹脂加工制成的泡沫 材料。該泡沫材料是一種軟的、吸水性強、密度不大于0. 02g/cm3,且具有開孔的多孔三維網(wǎng) 狀結(jié)構(gòu)。這種材料制成的載體可以各種形狀，例如顆粒狀、條帶狀、片狀、柱狀或塊狀。
[0038] 本發(fā)明人對固定化蛋白質(zhì)、多肽或寡肽的載體進行了大量地研究，例如，采用各種 方法對有機泡沫材料進行處理，以及對各類有機泡沫材料進行了篩選，以從中篩選出能夠 更好地固定化蛋白質(zhì)、多肽或寡肽的載體。結(jié)果本發(fā)明人出人意料地發(fā)現(xiàn)通過殼聚糖能夠 在多孔有機泡沫材料表面上添加活潑的醛基官能團，從而使得蛋白質(zhì)、多肽或寡肽能夠容 易地并且穩(wěn)定地固定化于載體上。本發(fā)明人在此發(fā)現(xiàn)的基礎(chǔ)上，進一步得到了本發(fā)明的技 術(shù)方案。
[0039] 具體而言，本發(fā)明提供了：
[0040](一）用于制備固定化蛋白質(zhì)、多肽或寡肽的復(fù)合載體
[0041] 本發(fā)明首先提供了一種用于制備固定化蛋白質(zhì)、多肽或寡肽的復(fù)合載體，其中，所 述的復(fù)合載體為多孔的，并且所述的復(fù)合載體包括：
[0042] i )開孔的多孔有機泡沫材料；以及
[0043] ii)固定在所述的多孔有機泡沫材料的一個或多個孔壁的表面上的由殼聚糖通過 交聯(lián)多元醛化合物形成的交聯(lián)產(chǎn)物，并且該交聯(lián)產(chǎn)物具有能與所述的蛋白質(zhì)、多肽或寡肽 反應(yīng)的醒基。
[0044] 本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的是，殼聚糖的化學(xué)名稱為￠-(1 - 4)-2-氨基-2-脫 氧-D-葡萄糖，是甲殼素脫N-乙?；漠a(chǎn)物，一般而言，N-乙酰基脫去55%以上的就可稱 之為殼聚糖，或者說，能在1%乙酸或1%鹽酸中溶解1%的脫乙酰甲殼素，這種脫乙酰甲殼素 被稱之為殼聚糖。事實上，N-脫乙酰度為55%以上的甲殼素，就能在這種稀酸中溶解。作 為工業(yè)品的殼聚糖，N-脫乙酰度在70%以上。N-脫乙酰度在55%?70%的是低脫乙酰度殼 聚糖，70%?85%的是中脫乙酰度殼聚糖，85%?95%的是高脫乙酰度殼聚糖，95%?100%的 是超高脫乙酰度殼聚糖。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以理解的是，本發(fā)明不受殼聚糖的N-脫乙酰度 的限制，各種N-脫乙酰度的殼聚糖均可使用，只要其能利用堿或其它方法減低殼聚糖的溶 解度使其沉積在多孔的有機泡沫材料上。
[0045] 本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的是，蛋白質(zhì)是由氨基酸以"脫水縮合"的方式組成的多肽鏈 經(jīng)過盤曲折疊形成的具有一定空間結(jié)構(gòu)的物質(zhì)。多肽是氨基酸以肽鏈連接在一起而形成的 化合物，通常將由20個以上的氨基酸殘基組成的肽稱為多肽，而將2-20個氨基酸殘基通過 肽鍵連接形成的肽稱為寡肽。
[0046] 優(yōu)選的是，所述的多孔有機泡沫材料為三聚氰胺海綿。
[0047] 優(yōu)選的是，所述的用于制備固定化蛋白質(zhì)、多肽或寡肽的復(fù)合載體為顆粒狀、條帶 狀、塊狀、片狀或柱狀。
[0048] 為了提高固定化蛋白質(zhì)、多肽或寡肽的比活力，本發(fā)明以開孔的多孔有機泡沫材 料為載體。該載體的內(nèi)部也具有開放的孔，即所述的孔不是封閉的，在該載體的內(nèi)部具有至 少兩個互為連通的孔。使用這樣的載體可以使所形成的固定化產(chǎn)品也具有開孔的三維網(wǎng)格 結(jié)構(gòu)，反應(yīng)液可以貫穿流動在固定相的內(nèi)部。這一方面顯著提高了產(chǎn)品的比表面積，一方面 也消除了傳統(tǒng)粒狀產(chǎn)品表里反應(yīng)速率之差異。同時，與現(xiàn)有的顆粒狀或片狀的產(chǎn)品不同，本 發(fā)明所述的固定化蛋白質(zhì)、多肽或寡肽可視需要制成大小任意的顆粒、塊狀、片狀及其它形 態(tài)的結(jié)構(gòu)而基本不影響其比表面積。
[0049] 本發(fā)明所述的載體為開孔的吸水性的有機多孔泡沫材料。載體的開孔特性便于固 定化時蛋白質(zhì)溶液/寡肽溶液進入載體內(nèi)部，便于底物或生物活性物質(zhì)充分有效地與載體 上的蛋白或寡肽分子接觸，以及便于反應(yīng)后產(chǎn)物或目標(biāo)分離物的傳質(zhì)。本發(fā)明載體的吸水 特性使得酶蛋白等親水性組分可以均勻地分布、良好地附著并固定于載體的多孔表面。
[0050] 該多孔有機泡沫材料的開孔特性和親水性有助于：（1)固定化時蛋白質(zhì)液/酶液/ 多肽液/寡肽液進入載體內(nèi)部，并平均分布于載體上；（2)進行酶反應(yīng)時，底物能充分的與 固定化酶接觸；以及（3)進行層析分離時，流動相中的目標(biāo)分離物可充分有效地與載體上 的配體結(jié)合，從而達到分離純化的效果。本發(fā)明所述的用于制備固定化蛋白質(zhì)、多肽或寡肽 的復(fù)合載體可視需要制成大小任意的顆粒、塊狀、片狀、柱狀及其它形態(tài)的結(jié)構(gòu)。
[0051] (二）用于固定化蛋白質(zhì)、多肽或寡肽的復(fù)合載體的制備方法
[0052] 本發(fā)明其次提供了一種制備如(一）所述的復(fù)合載體的方法，其包括：
[0053] 1)提供開孔的多孔有機泡沫材料；
[0054] 2)將殼聚糖沉積于所述的多孔有機泡沫材料的一個或多個孔壁的表面上；以及
[0055] 3)使所述的沉積的殼聚糖與多元醛化合物發(fā)生交聯(lián)反應(yīng)，從而得到所述的復(fù)合載 體。
[0056] 優(yōu)選的是，在步驟2)中，所述的殼聚糖是通過與堿反應(yīng)而沉積于所述的多孔有機 泡沫材料的一個或多個孔壁的表面上的；所述的堿優(yōu)選為氫氧化鈉。但是本發(fā)明并不局限 于此，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以理解的是，任何能夠降低殼聚糖的溶解度從而使其沉積在所述 的多孔有機泡沫材料上的方法均涵蓋在本發(fā)明中。
[0057] 在步驟3)中，所述的交聯(lián)反應(yīng)所得的復(fù)合載體的活潑基團為醛基，即多元醛化合 物上未反應(yīng)的醛基。
[0058] 優(yōu)選的是，所述的多元醛化合物為戊二醛或雙醛淀粉。
[0059] 在本發(fā)明的一個實施方案中，該方法的具體實施如下：
[0060] (1)將多孔有機泡沫材料切割成薄片或顆粒狀；
[0061] (2)將適量的殼聚糖水溶液(例如，0. 01-10% (w/v))加入多孔有機泡沫材料中，擠 壓多孔有機泡沫材料使溶液在多孔有機泡沫材料中分布均勻；
[0062] (3)將步驟2的載體浸泡在堿性水溶液(例如，0. 01-10M)中（例如：氫氧化鈉水溶 液)，以將殼聚糖沉積于多孔有機泡沫材料的表面孔壁上；
[0063] (4)反應(yīng)合適時間后，用去離子水洗滌載體直到pH值約為中性；
[0064] (5)將步驟4的載體浸泡在交聯(lián)劑水溶液(例如，0? 01-30% (v/v))中；
[0065] (6)反應(yīng)合適時間后，用pH值約為中性的磷酸鹽緩沖溶液(例如，0. 001-10M)洗滌 載體，除去剩余未反應(yīng)的交聯(lián)劑溶液。
[0066] (三）復(fù)合物
[0067] 本發(fā)明再次提供了一種復(fù)合物，其包括如（一）所述的復(fù)合載體，以及固定在所述 的復(fù)合載體上的蛋白質(zhì)、多肽或寡肽。
[0068] 優(yōu)選的是，所述的蛋白質(zhì)、多肽或寡肽是通過其所具有的氨基與如(一）所述的復(fù) 合載體上的所述醛基發(fā)生反應(yīng)，而固定在如(一）所述的復(fù)合載體上的。
[0069] 上述反應(yīng)的原理如下：所述的蛋白質(zhì)、多肽或寡肽上的氨基通過與殼聚糖和多元 醛化合物的交聯(lián)產(chǎn)物上的醛基反應(yīng)形成席夫堿，以共價鍵把所述的蛋白質(zhì)、多肽或寡肽固 定在如(一）所述的復(fù)合物上的。
[0070] 從上述原理可以看出，本發(fā)明的方法是直接把蛋白質(zhì)、多肽或寡肽通過化學(xué)反 應(yīng)固定在由開孔的多孔有機泡沫材料、殼聚糖及多元醛化合物形成的復(fù)合載體上，其固 相過程并沒有改變蛋白質(zhì)、多肽或寡肽的溶解度。而與之不同的是，中國專利申請公開 No. CN1982445A中所述的方法是利用絮凝劑和交聯(lián)劑改變蛋白質(zhì)的溶解度，使之在多孔的 三聚氰胺海綿的孔內(nèi)沉淀。
[0071] 優(yōu)選的是，所述的蛋白質(zhì)、多肽或寡肽為酶；本發(fā)明對所述的酶的種類沒有特別的 限制，只要能夠與醛基發(fā)生反應(yīng)的酶均可應(yīng)用至本發(fā)明中。例如，本發(fā)明的一個優(yōu)選的酶為 a-葡萄糖轉(zhuǎn)苷酶。但是本發(fā)明并不局限于此。
[0072] 優(yōu)選的是，所述的復(fù)合物用于殺滅細菌或抑制細菌生長；本發(fā)明對所述的蛋白質(zhì)、 多肽或寡肽的種類沒有特別的限制，只要能夠與醛基發(fā)生反應(yīng)的蛋白質(zhì)、多肽或寡肽均可 應(yīng)用至本發(fā)明中。例如，本發(fā)明的一個優(yōu)選的蛋白質(zhì)、多肽或寡肽為多粘菌素 B。但是本發(fā) 明并不局限于此。
[0073] 優(yōu)選的是，所述的復(fù)合物用于親和層析純化，該復(fù)合物中的蛋白質(zhì)、多肽或寡肽能 與待純化的生物活性物質(zhì)發(fā)生特異性可逆反應(yīng)；本發(fā)明對所述的蛋白質(zhì)、多肽或寡肽的種 類沒有特別的限制，只要能夠與醛基發(fā)生反應(yīng)的蛋白質(zhì)、多肽或寡肽均可應(yīng)用至本發(fā)明中。 例如，本發(fā)明的兩個優(yōu)選的蛋白質(zhì)、多肽或寡肽為谷胱甘肽和蛋白A。
[0074] 優(yōu)選的是，所述的固定化的蛋白質(zhì)、多肽或寡肽的固相載體為片狀或柱狀。更優(yōu)選 的是，所述的固定化的蛋白質(zhì)、多肽或寡肽的固相載體為片狀載體修剪成圓片狀后堆砌成 層析柱或固定化酶柱，或卷繞成柱形的卷軸結(jié)構(gòu)而制成層析柱或固定化酶柱。
[0075] 本發(fā)明所制備的顆粒狀固定化蛋白質(zhì)、多肽或寡肽可用于懸浮攪拌反應(yīng)，也可用 于填充式反應(yīng)柱；本發(fā)明所制備的片狀產(chǎn)品可卷繞成為圓柱形卷軸結(jié)構(gòu)，直接構(gòu)成反應(yīng)柱。 這種卷軸結(jié)構(gòu)的產(chǎn)品可以作為模塊上下堆積安裝在生化反應(yīng)器內(nèi)，也可直接包裹后單獨或 相互拼接組合而成直徑和長度可以調(diào)節(jié)的柱子用于工業(yè)生產(chǎn)。
[0076] 本發(fā)明所制備的片狀產(chǎn)品在卷繞的過程中，依借卷繞動作本身所產(chǎn)生的張力和持 續(xù)外加的壓軸擠壓力導(dǎo)致多孔材料適當(dāng)被壓縮。因而此一卷繞的過程既是圓柱狀結(jié)構(gòu)的形 成過程，也是壓縮多孔材料的過程。根據(jù)應(yīng)用需要，通過改變壓軸的作用壓力可以改變卷軸 結(jié)構(gòu)的松緊程度；通過改變卷繞的圈數(shù)或卷繞材料的厚度可以控制卷軸結(jié)構(gòu)的直徑；通過 改變卷繞材料的寬度或直接對卷軸結(jié)構(gòu)進行裁切可以控制卷軸圓柱體的高度。
[0077] 本發(fā)明所述的圓柱形卷軸結(jié)構(gòu)的柱狀面可以用適當(dāng)?shù)陌牧厦芊夤潭?，以防?卷繞結(jié)構(gòu)松脫。在產(chǎn)品用于填充反應(yīng)柱套時，如果固定化蛋白質(zhì)、多肽或寡肽產(chǎn)品本身不具 備吸水膨脹的特性，此包裹材料應(yīng)具備吸水膨脹的特性，如干的PVA海綿及木漿海綿，以便 于在反應(yīng)床充水后消除模塊的柱面與柱子的殼體內(nèi)壁之間可能存在的間隙，該間隙也可用 顆粒材料填實。圓柱形卷軸結(jié)構(gòu)在無柱套的條件下單獨或相互拼接而直接構(gòu)成實體柱子應(yīng) 用時，其包裹材料應(yīng)具防水和保溫特性，如聚氨酯泡沫塑料，以減少能耗。另一方面，如果圓 柱形卷軸結(jié)構(gòu)在灌流應(yīng)用的過程中會發(fā)生收縮而體積變小，則要求作為床壁的包裹材料具 有持續(xù)的收縮抱緊功能，如橡膠或含橡膠的材料，以免柱子在運行的過程中會逐漸形成床 壁間隙。
[0078] 圓柱形卷軸結(jié)構(gòu)直接或拼接應(yīng)用時，柱體的兩端應(yīng)配有用于連接柱體和管路的接 口裝置。該接口裝置可以具有液體過濾功能，并能有效地將液體向柱體輸入和輸出。圓柱 形卷軸結(jié)構(gòu)拼接應(yīng)用時，為防止液體自模塊之間的連接處滲出，模塊之間應(yīng)有防止液體滲 漏的密封膠帶。
[0079](四）復(fù)合物的制備方法
[0080] 本發(fā)明還提供了一種制備如(三）所述的復(fù)合物的方法，其包括：將如（一）所述的 復(fù)合載體與蛋白質(zhì)、多肽或寡肽的溶液發(fā)生反應(yīng)，從而得到所述的復(fù)合物。
[0081] 上述反應(yīng)的原理如下：所述的蛋白質(zhì)、多肽或寡肽上的氨基通過與殼聚糖與多元 醛化合物的交聯(lián)產(chǎn)物上的醛基反應(yīng)形成席夫堿，以共價鍵把所述的蛋白質(zhì)、多肽或寡肽固 定在如(一）所述的復(fù)合物上的。
[0082] 在蛋白質(zhì)、多肽或寡肽的固定化過程中，載體的擠壓操作可以手工進行，也可以用 器械或機器完成；一般而言，所用蛋白質(zhì)、多肽或寡肽的濃度為〇. 3-30% (W/V)，交聯(lián)劑的濃 度為0. 01%-30%(V/V)。交聯(lián)劑一般為多元醛化合物(如戊二醛、雙醛淀粉、雙醛葡聚糖等)。
[0083] (五）復(fù)合物的用途
[0084] 本發(fā)明還提供了一種如(三）所述的復(fù)合物的用途，其中，所述的用途包括生物催 化和親和層析。
[0085] 優(yōu)選的是，所述的蛋白質(zhì)、多肽或寡肽為酶，其用途為用作生物催化劑。本發(fā)明對 所述的酶的種類沒有特別的限制，只要能夠與醛基發(fā)生反應(yīng)的酶均可應(yīng)用至本發(fā)明中。例 如，本發(fā)明的一個優(yōu)選的酶為a-葡萄糖轉(zhuǎn)苷酶。但是本發(fā)明不限于此。
[0086] 優(yōu)選的是，所述的復(fù)合物用于殺滅細菌或抑制細菌生長；本發(fā)明對所述的蛋白質(zhì)、 多肽或寡肽的種類沒有特別的限制，只要能夠與醛基發(fā)生反應(yīng)的蛋白質(zhì)、多肽或寡肽均可 應(yīng)用至本發(fā)明中。例如，本發(fā)明的一個優(yōu)選的蛋白質(zhì)、多肽或寡肽為多粘菌素 B。但是本發(fā) 明并不局限于此。
[0087] 例如，多粘菌素 B可殺滅細菌或抑制細菌生長(可參見科技文獻M. Mohorcie ,I. Jerman, M. Zorko, L. Butinar, B. Orel, R. Jerala, J. Friedrich, 2010, Journal of Materials Science !Materials in Medicine, 21:2775-2782.)?？蓱?yīng)用本發(fā)明的如（一)所 述的復(fù)合載體與多粘菌素 B反應(yīng)而形成的復(fù)合物來殺滅細菌或抑制細菌生長。
[0088] 優(yōu)選的是，所述的蛋白質(zhì)、多肽或寡肽的用途為在親和層析中的用途，以純化與所 述的蛋白質(zhì)、多肽或寡肽相對應(yīng)的蛋白質(zhì)/酶/多肽/抗體/抗原。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以 理解的是，本發(fā)明對所述的蛋白質(zhì)、多肽或寡肽的種類沒有特別的限制，只要現(xiàn)有技術(shù)中的 作為親和層析中的配體的蛋白質(zhì)、多肽或寡肽的氨基能夠與醛基發(fā)生反應(yīng)，均可作為本發(fā) 明所述的蛋白質(zhì)、多肽或寡肽，而應(yīng)用至本發(fā)明中。
[0089] 例如，以谷胱甘肽為配體的親和層析廣泛應(yīng)用在谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶的純化(可參 見科技文獻 Hong Jin, Heng ffu, Gregory Osterhaus, Jianning Wei, Kathleen Davis, Di Sha,Eric Floor,Che-Chang Hsu, Richard D.Kopke, Jang-Yen ffu, 2003,Proceedings of the National Academy of Sciences of the USA, 100:4293-4298;Cheng Xiang Hou,Zhi Qiang Fu, Byung Rae Jin, Zhong Zheng Gui, 2008, African Journal of Biotechnology, 7:311-316.)?？蓱?yīng)用本發(fā)明的如（一）所述的復(fù)合載體與谷胱甘肽反應(yīng)而 形成的復(fù)合物來純化谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶。
[0090] 又例如，抗體蛋白在機體免疫防護中起主要的作用。單克隆抗體(單抗）和多 克隆抗體(多抗）廣泛地應(yīng)用在治療及診斷等方面。制備單抗和多抗的辦法很多，但 所得的抗體使用前均需經(jīng)純化。蛋白A親和層析柱是純化抗體的主要手段之一(可參 見科技文獻 Kishore K. R. Tetala, Teris A. van Beek, 2010, Journal of Separation Science, 33:422-438.)。例如，蛋白A是金黃色葡萄球菌細胞壁蛋白質(zhì)，可特異地與抗體的 Fc段結(jié)合，并可通過改變pH使二者分離。因此，蛋白A親和層析是純化單抗和多抗的有效 工具。與本發(fā)明相對應(yīng)的是，目前使用的蛋白A親和層析柱的載體通常是瓊脂糖凝膠。瓊 脂糖凝膠在堿性條件下經(jīng)溴化氰（CNBr)活化后與配體蛋白A偶聯(lián)(可參見科技文獻Rolf Axen, Sverker Ernback, 1971, European Journal Biochemistry, 18:351-360. )〇 溴化氰有 劇毒，操作和運輸均危險，局限了工業(yè)化的應(yīng)用。而應(yīng)用本發(fā)明的如(一)所述的復(fù)合載體與 蛋白A反應(yīng)而形成的復(fù)合物，則不存在上述問題。
[0091](六）生物催化方法、殺菌方法或親和層析方法
[0092] 本發(fā)明再次提供了一種生物催化方法，其包括：采用如(三）所述的復(fù)合物作為生 物催化劑對相應(yīng)底物進行催化。其中，所述的蛋白質(zhì)、多肽或寡肽為酶。
[0093] 本發(fā)明對所述的酶的種類沒有特別的限制，只要能夠與醛基發(fā)生反應(yīng)的酶均可應(yīng) 用至本發(fā)明中。優(yōu)選的是，所述的酶為a-葡萄糖轉(zhuǎn)苷酶。
[0094] 本發(fā)明再次提供了一種殺滅細菌或抑制細菌生長方法，其包括：采用如(三）所述 的復(fù)合物作為殺滅細菌或抑制細菌生長的介質(zhì)。
[0095] 優(yōu)選的是，所述的復(fù)合物中的蛋白質(zhì)、多肽或寡肽為多粘菌素 B。
[0096] 本發(fā)明最后提供一種用于純化生物活性物質(zhì)的親和層析方法，其包括：采用如 (三）所述的復(fù)合物作為親和層析的介質(zhì)。
[0097] 優(yōu)選的是，所述的復(fù)合物中的蛋白質(zhì)、多肽或寡肽為谷胱甘肽、或蛋白A。
[0098] 在本發(fā)明的一個實施方案中，用新載體制備親和層析柱的方法包括如下步驟：
[0099] a)采用開孔的多孔有機泡沫材料作為基底；
[0100] b)添加活潑的官能團至開孔多孔有機泡沫材料以改善其活性；
[0101] C)將蛋白質(zhì)、多肽或寡肽固定在上述的復(fù)合物上；
[0102] d)以上述攜有固定化蛋白質(zhì)、多肽或寡肽之載體作為親和層析柱的配體和載體。
[0103] 在本發(fā)明的一個實施方案中，以三聚氰胺海綿為載體，通過添加活潑的官能團以 改良其活性從而用于固相蛋白質(zhì)/酶/多肽/寡肽。該方法的具體實施如下：
[0104] (1)將多孔有機泡沫材料切割成薄片或顆粒狀；
[0105] (2)將適量的殼聚糖水溶液(例如，0. 01-10% (w/v))加入多孔有機泡沫材料中，擠 壓多孔有機泡沫材料使溶液在多孔有機泡沫材料中分布均勻；
[0106] (3)將步驟2的載體浸泡在堿性水溶液(例如，0. 01-10M)中（例如：氫氧化鈉水溶 液)，以將殼聚糖沉積于多孔有機泡沫材料的表面孔壁上；
[0107] (4)反應(yīng)合適時間后，用去離子水洗滌載體直到pH值約為中性；
[0108] (5)將步驟4的載體浸泡在交聯(lián)劑水溶液(例如，0. 01-30% (v/v))中；
[0109] (6)反應(yīng)合適時間后，用pH值約為中性的磷酸鹽緩沖溶液(例如，0. 001-10M)洗滌 載體，除去剩余未反應(yīng)的交聯(lián)劑溶液；
[0110] (7)用去離子水或緩沖溶液將蛋白質(zhì)/酶/多肽/寡肽配成適當(dāng)濃度(例如， 0. 01-30% (w/v))；
[0111] (8)將步驟6的載體浸泡在步驟7的蛋白質(zhì)溶液/酶/多肽/寡肽溶液中進行固 定化；
[0112] (9)反應(yīng)完成后，用pH值約為中性的磷酸鹽緩沖溶液(例如，0. 001-10M)洗滌載 體，除去剩余未反應(yīng)的蛋白質(zhì)/酶/多肽/寡肽。
[0113] (10)將所述的固定化蛋白質(zhì)/酶/多肽/寡肽修剪成圓片狀后堆砌成層析柱或卷 繞成柱形的卷軸結(jié)構(gòu)以構(gòu)成生物催化反應(yīng)柱或?qū)游鲋?br> [0114] 殼聚糖加入多孔有機泡沫材料時，多孔有機泡沫材料的擠壓操作可以手工進行。 交聯(lián)劑為多元醛化物，如戊二醛、雙醛淀粉等。
[0115] 以下通過實施例的方式進一步解釋或說明本
【發(fā)明內(nèi)容】
，但這些實施例不應(yīng)被理解 為對本發(fā)明保護范圍的限制。
[0116] 實施例1固定化a -葡萄糖轉(zhuǎn)苷酶
[0117] 取三聚氰胺片狀海綿(珠海天虹特殊海綿廠)0.02g，加0.8g2% (w/v)殼聚糖（山東 萊州市海力生物制品有限公司）溶液于海綿中，反復(fù)擠壓使殼聚糖溶液在海綿上分布均勻； 浸泡于5mlIM氫氧化鈉溶液30分鐘；用去離子水洗漆海綿至pH為中性；浸泡于5% (v/v) 戊二醛(天津市大茂化學(xué)試劑廠)溶液(含1% (v/v)乙酸)6mll小時；用20mM pH7. 4的磷酸 鹽緩沖溶液（即磷酸鉀緩沖溶液，下同）洗滌海綿除去剩余未反應(yīng)的戊二醛溶液；用濾紙除 去多余的水分，所得的載體濕重為〇. 5g。
[0118] 浸泡載體于5ml a -葡萄糖轉(zhuǎn)苷酶(天野酶制品株式會社）溶液（以20mM pH7. 4的 磷酸鹽緩沖溶液配至濃度2mg/ml) 24小時；用10ml20mM pH7. 4的磷酸鹽緩沖溶液洗滌除 去剩余未反應(yīng)的a -葡萄糖轉(zhuǎn)苷酶溶液，重復(fù)洗滌十次；用濾紙除去多余的水分，得固定化 a-葡萄糖轉(zhuǎn)苷酶〇.46g。
[0119] 精密稱取按上述方法制備的固定化a -葡萄糖轉(zhuǎn)苷酶l〇mg，加1% (w/v) a -D-甲 基葡萄糖苷(購于Sigma-Aldrich Company Ltd)溶液（以IOmM乙酸鈉 pH5.0配備，預(yù)熱至 45°C ) 10ml，在振蕩式培養(yǎng)箱反應(yīng)60分鐘（45°C，振動速度為180轉(zhuǎn)每分鐘)，置沸水5分鐘 終止反應(yīng)。
[0120] 在上述反應(yīng)條件下每小時產(chǎn)生I U g葡萄糖所需的酶量定義為一個a -葡萄糖轉(zhuǎn) 苷酶活力單位，葡萄糖的含量以葡萄糖測定試劑盒（中生北控生物科技股份有限公司）檢 測。
[0121] 經(jīng)測定實施例1制得的固定化a -葡萄糖轉(zhuǎn)苷酶的比活力為240, 000U/g。
[0122] 實施例2固定化多粘菌素 B
[0123] 取三聚氰胺片狀海綿0. 04g，加 I. 6g2% (w/v)殼聚糖溶液于海綿中，反復(fù)擠壓使殼 聚糖溶液在海綿上分布均勻；浸泡于IOmllM氫氧化鈉溶液30分鐘；用去離子水洗滌海綿 至PH為中性；浸泡于12ml5% (v/v)戊二醛溶液1小時；用20mM pH7. 4的磷酸鹽緩沖溶液 洗滌海綿除去剩余未反應(yīng)的戊二醛溶液；用濾紙除去多余的水分，所得的載體濕重為lg。
[0124] 把載體浸泡于20ml多粘菌素 B (江蘇沃爾德實業(yè)有限公司）溶液（以20mM pH7. 4 的磷酸鹽緩沖溶液配至濃度I. 8mg/ml) 24小時；用10ml20mM pH7. 4的磷酸鹽緩沖溶液洗 滌除去剩余未反應(yīng)的多粘菌素 B溶液，重復(fù)洗滌十次；用濾紙除去多余的水分，得固定化多 粘菌素 Big。
[0125] 將載有pRSET-lac-kan (中國專利申請公開No.CN1912127A)的大腸桿菌接種到 IOml LB培養(yǎng)基(含lOOmg/ml卡那霉素)，生長溫度為37°C，振動速度為250轉(zhuǎn)每分鐘。生 長過夜至600nm吸收值為為2. 5-3. 0。將上述的培養(yǎng)液稀釋至IO6個細胞/ml，并加入適量 的卡那霉素(最終濃度為IOOu g/ml)。
[0126] 樣本甲：取固定化多粘菌素 Big,加 IOml上述培養(yǎng)液(含100 ii g/ml卡那霉素)，樣 本乙：10ml培養(yǎng)液作為空白對照。樣本甲及乙同時在搖床振動(溫度為37°C，振動速度為 250轉(zhuǎn)每分鐘)。
[0127] 16. 5小時后收集樣本，樣本甲的吸收值（600nm)為0,空白對照為2. 67。取樣本甲 IOOy 1及樣本乙I U 1涂布瓊脂平板(含50 ii g/ml卡那霉素),結(jié)果顯示經(jīng)固定化多粘菌素 B處理之樣本甲中無大腸桿菌生存（圖1)。
[0128] 實施例3固定化谷胱甘肽
[0129] 取三聚氰胺片狀海綿0. 02g，加0. 8g2% (w/v)殼聚糖溶液于海綿中，反復(fù)擠壓使殼 聚糖溶液在海綿上分布均勻；浸泡于5ml IM氫氧化鈉溶液30分鐘；用去離子水洗滌海綿至 pH為中性；浸泡于6ml5% (v/v)戊二醛溶液(含1% (v/v)乙酸）1小時；用20mM pH7. 4的 磷酸鹽緩沖溶液洗滌海綿除去剩余未反應(yīng)的戊二醛溶液；用濾紙除去多余的水分，所得的 載體濕重為〇? 5g。
[0130] 把載體浸泡于30ml谷胱甘肽（山東金城藥業(yè)）溶液（以去離子水配至濃度1% (w/ v)，pH調(diào)至5. 5) 24小時；用10ml20mM pH7. 4的磷酸鹽緩沖溶液洗滌除去剩余未反應(yīng)的谷 胱甘肽溶液，重復(fù)洗滌十次；用濾紙除去多余的水分，得固定化谷胱甘肽0. 5g。
[0131] 取固定化谷胱甘肽0. 5g，加20ml未經(jīng)純化的2mg/ml谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶（GE Healthcare, Life Sciences)溶液，在搖床反應(yīng)1小時（25°C，振動速度為70轉(zhuǎn)每分鐘)，用 IOml結(jié)合緩沖液（20mM磷酸鹽緩沖溶液，pH7. 4)洗滌固定化谷胱甘肽，重復(fù)洗滌五次，除去 剩余未吸附的谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶，加5ml洗脫緩沖液（50mM谷胱甘肽、50mMTris-HCl，pH7. 5)， 25°C振搖(速度為70轉(zhuǎn)每分鐘）反應(yīng)45分鐘，得純化的谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶。
[0132] 由SDS-PAGE判斷純度為90%以上，實驗結(jié)果參見圖2。
[0133] 實施例4固定化蛋白A親和層析柱
[0134] 取三聚氰胺片狀海綿0. 06g，加 I. 2g2% (w/v)殼聚糖溶液于海綿中，反復(fù)擠壓使殼 聚糖溶液在海綿上分布均勻；浸泡于15mllM氫氧化鈉溶液30分鐘；用去離子水洗滌海綿 至pH為中性；浸泡于18ml5% (v/v)戊二醛溶液(含1% (v/v)乙酸）1小時；用20mM pH7. 4 的磷酸鹽緩沖溶液洗滌海綿除去剩余未反應(yīng)的戊二醛溶液；用濾紙除去多余的水分，所得 的載體濕重為lg。
[0135] 把載體浸泡于15ml蛋白A (上海雅心生物技術(shù)有限公司）溶液（以20mM pH7. 4的 磷酸鹽緩沖溶液配至濃度5mg/ml) 24小時；用30ml20mM pH7. 4的磷酸鹽緩沖溶液洗滌除 去剩余未反應(yīng)的蛋白A溶液，重復(fù)洗滌十次；用濾紙除去多余的水分，得固定化蛋白Al. 5g。
[0136] 將上述的片狀固定化蛋白A修剪為圓片狀后，制成柱子體積2. 6ml的親和層析柱。 取標(biāo)準(zhǔn)兔血清樣本(上海江萊生物科技有限公司)過柱，接著用15ml結(jié)合緩沖液（0. IM磷酸 鹽緩沖液、〇. 15M氯化鈉，pH7. 2)沖洗柱子，再用20ml洗脫緩沖液（0. 25M-0. IM甘氨酸溶液、 0. 02M 鹽酸，pH2. 9)洗脫。
[0137] 由SDS-PAGE判斷純度為90%以上，實驗結(jié)果參見圖3。
【權(quán)利要求】
1. 一種用于制備固定化蛋白質(zhì)、多肽或寡肽的復(fù)合載體，其中，所述的復(fù)合載體為多孔 的，并且所述的復(fù)合載體包括： i) 開孔的多孔有機泡沫材料；以及 ii) 固定在所述的多孔有機泡沫材料的一個或多個孔壁的表面上的、由殼聚糖通過交 聯(lián)多元醛化合物形成的交聯(lián)產(chǎn)物，并且該交聯(lián)產(chǎn)物具有能與蛋白質(zhì)、多肽或寡肽反應(yīng)的醛 基。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的復(fù)合載體，其中，所述的多孔有機泡沫材料為三聚氰胺海綿。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的復(fù)合載體，其中，所述的用于制備固定化蛋白質(zhì)、多肽或寡肽 的復(fù)合載體為顆粒狀、條帶狀、塊狀、片狀或柱狀。
4. 一種根據(jù)權(quán)利要求1-3中任意一項所述的復(fù)合載體的制備方法，其包括： 1) 提供開孔的多孔有機泡沫材料； 2) 將殼聚糖沉積于所述的多孔有機泡沫材料的一個或多個孔壁的表面上；以及 3) 使所述的沉積的殼聚糖與多元醛化合物發(fā)生交聯(lián)反應(yīng)，從而得到所述的復(fù)合載體。
5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其中，在步驟2)中，所述的殼聚糖通過與堿反應(yīng)而沉積 于所述的多孔有機泡沫材料的一個或多個孔壁的表面上；所述的堿優(yōu)選為氫氧化鈉。
6. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其中，所述的多元醛化合物為戊二醛或雙醛淀粉。
7. -種復(fù)合物，其包括根據(jù)權(quán)利要求1-3中任意一項所述的復(fù)合載體，以及固定在所 述的復(fù)合載體上的蛋白質(zhì)、多肽或寡肽。
8. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的復(fù)合物，其中，所述的蛋白質(zhì)、多肽或寡肽是通過使所述的蛋 白質(zhì)、多肽或寡肽的氨基與所述的復(fù)合載體上的所述醛基發(fā)生反應(yīng)而固定在該復(fù)合載體上 的。
9. 根據(jù)權(quán)利要求7或8所述的復(fù)合物，其中，所述的蛋白質(zhì)、多肽或寡肽為酶；優(yōu)選為 α-葡萄糖轉(zhuǎn)苷酶。
10. 根據(jù)權(quán)利要求7或8所述的復(fù)合物，其中，所述的復(fù)合物用于殺滅細菌或抑制細菌 生長；所述的蛋白質(zhì)、多肽或寡肽優(yōu)選為多粘菌素 Β。
11. 根據(jù)權(quán)利要求7或8所述的復(fù)合物，其中，所述的復(fù)合物用于親和層析純化；所述 的蛋白質(zhì)、多肽或寡肽優(yōu)選為谷胱甘肽、或蛋白Α。
12. -種根據(jù)權(quán)利要求7-11中任意一項所述的復(fù)合物的制備方法，其包括：將根據(jù)權(quán) 利要求1-3中任意一項所述的復(fù)合載體與蛋白質(zhì)、多肽或寡肽的溶液發(fā)生反應(yīng)，從而得到 所述的復(fù)合物。
13. -種生物催化方法，其包括：采用權(quán)利要求7-9中任意一項所述的復(fù)合物作為生物 催化劑對相應(yīng)底物進行催化。
14. 一種殺滅細菌或抑制細菌生長的方法，其包括：采用根據(jù)權(quán)利要求7、8或10中任 意一項所述的復(fù)合物作為殺滅細菌或抑制細菌生長的介質(zhì)。
15. -種用于純化生物活性物質(zhì)的親和層析方法，其包括：采用根據(jù)權(quán)利要求7、8或11 中任意一項所述的復(fù)合物作為親和層析的介質(zhì)。
【文檔編號】C12N11/08GK104277111SQ201310284535
【公開日】2015年1月14日 申請日期:2013年7月8日 優(yōu)先權(quán)日:2013年7月8日
【發(fā)明者】張仲康, 王駿 申請人:百瑞全球有限公司