專利名稱：高效綠色降氟茯磚茶制備工藝的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及農(nóng)產(chǎn)品加工技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種高效降低茯磚茶氟含量的茯磚茶 制備工藝，綠色降氟指無污染降低黑毛茶原料中氟含量。
背景技術(shù)：
氟是人類生命活動所必需的微量元素之一，人每日約需要攝入1. O 1. 5 mg的 氟。適量的氟可以促進(jìn)人體骨骼和牙齒的鈣化，增強(qiáng)骨骼的強(qiáng)度。但是長期攝入過量氟 化物會引起氟中毒，如由于氟攝入過多可引起牙齒、骨骼等組織的病理改變，也可引起腎 臟、肝臟等器官的組織病變等。
茶樹是一種富集氟元素的植物，其中葉片是氟元素富集的一個重要場所，因茶樹 品種、葉片老嫩程度的不同每千克茶葉中的氟含量從幾十到上千毫克不等。因此，由氟元素 引起的茶的飲用安全性問題近年來逐漸引起人們的重視。目前，世界上大多數(shù)國家均制定 了人體每日氟攝入量標(biāo)準(zhǔn)。美國和德國提出的推薦標(biāo)準(zhǔn)是成人每日攝入量1. 5 4. O mg; 日本標(biāo)準(zhǔn)為2.1 2 .3 mg;世界衛(wèi)生組(WHO)規(guī)定，人均每天適宜的氟攝入量為2. 5 4 .0 mg;我國制定的最大日攝入量標(biāo)準(zhǔn)為3. 5mg。而對于茶葉氟含量標(biāo)準(zhǔn)目前有農(nóng)業(yè)部 2003年茶葉行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)NY65922003規(guī)定的每千克茶葉中氟化物含量應(yīng)低于200mg以及 GB1996522005中對磚茶含氟量規(guī)定的每千克中氟化物含量小于300 mg。地方病中心曾組 織全國專家對飲茶型氟中毒流行病學(xué)的系統(tǒng)研究，提出了我國磚茶含氟量衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)，磚茶 含氟應(yīng)小于300 mg/kg，這是一個可避免大多數(shù)人不發(fā)生氟骨癥的標(biāo)準(zhǔn)。
茯磚茶是邊疆少數(shù)民族不可缺少的重要飲料，由于茯磚茶的原料黑毛茶較為粗 老，其中氟的含量相當(dāng)高，為了提高邊銷茶的產(chǎn)品質(zhì)量和飲用安全性，確保證少數(shù)民族人民 的身體健康，1997年，時任國務(wù)院總理的朱镕基同志作了 “要趕快組織低氟磚茶的生產(chǎn)”的 批示，此后中央財政多年撥付專項資金用于低氟黑茶的研究和開發(fā)并獲得了一些重要進(jìn) 展。但氟含量降低問題目前仍未很好的解決，目前，降氟措施主要有選擇低氟品種、優(yōu)化栽 培技術(shù)、提高原料嫩度、加工過程中化學(xué)降氟、磚茶水化學(xué)降氟等，從目前的研究進(jìn)展看，培 育低氟品種是一項長期性措施，短期內(nèi)尚難解決黑茶含氟量高的問題，而提高原料等級，勢 必加重消費者的負(fù)擔(dān)，可能導(dǎo)致部分消費者流失，在茶湯中添加降氟劑雖然降氟效果顯著， 但其大多為化學(xué)試劑，在除氟的同時可能造成新的污染或?qū)е虏铚焚|(zhì)下降。因而亟待研 制一種無污染綠色降低茯磚茶中氟的具體工藝。發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是解決上述現(xiàn)有降氟技術(shù)存在的問題，而提供一種 高效綠色降氟茯磚茶制備工藝，能在茯磚茶制作期內(nèi)實現(xiàn)無污染綠色降氟，而且不影響茯 磚茶的湯色、茶香、茶味、耐沖泡度等各種品質(zhì)。
本發(fā)明采用的技術(shù)方案是一種高效綠色降氟茯磚茶制備工藝，具體步驟如下①黑毛茶分篩、拼配；②綠色降氟；③渥堆；④冠突散囊菌的分離、純化；⑤一定老化度冠突散囊菌孢子懸液制備與濃度確定；⑥添加冠突散囊菌孢子懸液；⑦壓制；⑧發(fā)花；⑨干燥和保存。
上述技術(shù)方案中，所述的黑毛茶分篩、拼配按照黑毛茶分級標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行；所述的綠色 降氟方法為80°C的干凈水4-8分鐘后棄浸泡液；所述渥堆為37°C渥堆24小時控制含水量 為28% ;所述的冠突散囊菌的分離純化方法為用添加10%茯磚茶汁的PDA瓊脂固體培養(yǎng)基 平板梯度稀釋分離；所述的一定老化度冠突散囊菌孢子懸液制備與濃度確定方法為挑取 純化的金花菌落，接種至添加10%茯磚茶汁、20%蔗糖和10%NaCl的PDA液體培養(yǎng)基培養(yǎng)， 28°C靜置培養(yǎng)5天，然后升高溫度至30-32°C培養(yǎng)14-30天，震蕩分散孢子，無菌水稀釋孢子 懸液濃度控制在IO7-1O8個/mL ;孢子懸液濃度最終確定控制在IO7 -1O8個/mL ;所述的添 加冠突散囊菌孢子懸液添加量為O. 25 mL/100g ;所述的壓制、發(fā)花、干燥及發(fā)花后保存條件 均為按照傳統(tǒng)處理方式。
PDA 指 Potato Dextrose Agar 的簡稱。
PDA瓊脂固體培養(yǎng)基指將馬鈴薯洗凈去皮，稱取200g，切成小塊放入燒杯中，加適 量蒸餾水，煮沸I小時，稍冷后用雙層紗布過濾，在濾液中加入15g瓊脂，加熱熔化，最后加 入蔗糖20g，混勻，用量筒定容至IOOOmL,趁熱分裝在三角瓶中，在1.1 kg/cm2 (121°C)中保 持20分鐘滅囷。
PDA液體培養(yǎng)基指上述培養(yǎng)基配制過程操作，但不添加瓊脂。
PDA平板指上述培養(yǎng)基滅菌結(jié)束后冷卻至50°C左右，在超凈工作臺上將培養(yǎng)基倒 入事先已經(jīng)滅菌并干燥的培養(yǎng)皿中，待冷卻即為制得的PDA瓊脂固體培養(yǎng)基平板。
10%茯磚茶汁的PDA固體培養(yǎng)基指將馬鈴薯洗凈去皮，稱取200g，切成小塊放入燒 杯中，加適量蒸餾水，煮沸I小時，稍冷后用雙層紗布過濾，在濾液中加IOOmL制備好的茯磚 茶汁，然后加入15g瓊脂，加熱熔化，最后加入蔗糖20g混勻，用量筒定容至IOOOmL,趁熱分 裝在三角瓶中，在1. lkg/cm2(12rC )中保持20分鐘滅菌。滅菌結(jié)束后冷卻至50°C左右， 在超凈工作臺上將10%茯磚茶汁的PDA瓊脂固體培養(yǎng)基倒入事先已經(jīng)滅菌并干燥的培養(yǎng)皿 中，待冷卻即為制得的10%茯磚茶汁的PDA瓊脂固體培養(yǎng)基平板。
10%茯磚茶汁的PDA液體培養(yǎng)基與上述操作過程相同，但不添加瓊脂。
平板梯度稀釋法為將成品茯磚樣本用植物微型粉碎機(jī)將樣品粉碎，200目過篩、65°C干燥2小時后稱取Ig 樣品，定容IOmL,即配成I X 10 — i/mL的獲磚樣本溶液,從上述溶液中取I mL定容10 mL 配成I X 10 — 'g/mL的茯磚樣本溶液，依次配制成濃度I X 10 —3、I X 10 —4、I X 10 — 5g/mL的茯 磚茶樣本溶液各10 mL備用。取1X10 —3、IX 10 —4、1X10 —5g/mL的茯磚樣本溶液各0.5 mL，用涂布器涂布到冠狀散囊菌快速分離培養(yǎng)基平板上，超凈臺上吹干15分鐘左右，倒置平皿，28°C培養(yǎng)，3 — 4天后挑取優(yōu)勢菌——金花菌，同樣條件繼代培養(yǎng)直至純化。
畫線接種指用滅菌的接種針在超凈臺上將已經(jīng)生長好的菌落挑取，在新的固體培 養(yǎng)基平皿畫線分離相應(yīng)微生物。
金花菌落指金花菌在固體培養(yǎng)基平板上生長到一定時候形成的一個菌落集合體， 菌落是指聚集在一起的微生物團(tuán)。
茯磚茶汁的具體制備方法按照Ig茯磚茶樣本比30mL蒸餾水的比例稱取20g茯 磚茶，加入600mL蒸餾水，100°C水浴2小時，待稍冷卻后用量筒定容至600mL即為制備好的茯磚茶汁。
配成ΙΟ'ΙΟ'ΙΟ'ΙΟ'ΙΟ—5是指濃度，單位為g/mLo孢子懸液濃度IO7-1O8個/ ml中的“個”是指單個的金花菌的子囊孢子。計數(shù)方法為用梯度稀釋法涂布在添加10%茯 磚茶汁的PDA瓊脂固體培養(yǎng)基平板上生長計數(shù)或用722型分光光度計測量其OD值，控制在 0. 6左右，使金花孢子懸液濃度控制在每毫升IO7-1O8個金花孢子。
上述金花即冠突散囊菌。
本發(fā)明提供了一種高效綠色降氟茯磚茶制備工藝，能在茯磚茶制作期內(nèi)實現(xiàn)無污 染綠色降氟，而且不影響茯磚茶的湯色、茶香、茶味、耐沖泡度等各種品質(zhì)。


圖1為本發(fā)明培養(yǎng)7天分離純化的冠突散囊菌落照片；圖2為本發(fā)明冠突散囊菌的孢子懸液20天培養(yǎng)結(jié)果照片；圖3為一品茯磚原料、百姓茯磚降氟茯磚茶發(fā)花結(jié)果照片；圖4為一品茯磚原料、百姓茯磚降氟茯磚茶多次沖泡效果圖；圖5為綠色降氟對茯磚茶中氟含量、茶多酚、水浸出物、咖啡堿成分影響鑒定表，所有 檢測方法均按照國標(biāo)進(jìn)行。
具體實施方式
1.黑毛茶分篩、拼配按照傳統(tǒng)黑毛茶分級標(biāo)準(zhǔn)對原料進(jìn)行分篩、拼配以方便壓制成對應(yīng)的不同檔次的茯磚茶。
2.綠色降氟以干凈水，水溫80°C維持浸泡4-8分鐘(依原料嫩度而定)后浙干,棄浸泡液。一級黑毛 茶水溫80°C維持浸泡4分鐘，二級黑毛茶水溫80°C維持浸泡5分鐘，三級黑毛茶水溫80°C 維持浸泡6分鐘，四級黑毛茶水溫80°C維持浸泡7分鐘，五級黑毛茶水溫80°C維持浸泡8 分鐘。
3.渥堆；37°C渥堆24小時控制含水量為28%。
4.冠突散囊菌的分離、純化冠突散囊菌即金花，從益陽茶廠成品湘益牌茯磚樣本中分離。具體分離和純化過程為 將成品湘益牌茯磚樣本粉碎，用平板梯度稀釋法在添加10%茯磚茶汁的PDA瓊脂固體培養(yǎng) 基平板上28°C培養(yǎng)，挑取金黃色優(yōu)勢菌落，用同樣的培養(yǎng)基繼代培養(yǎng)直至純化。
5. 一定老化度金花的孢子懸液制備與濃度確定挑取純化的金花菌落，接種至添加10%茯磚茶汁、20%蔗糖和10%NaCl的PDA液體培養(yǎng) 基培養(yǎng)，28°C靜置培養(yǎng)5天，然后升高溫度至30-32°C培養(yǎng)15天，震蕩分散孢子，無菌水稀釋 孢子懸液濃度控制在IO7-1O8個/mL。
6.添加冠突散囊菌孢子懸液按照每IOOg黑毛茶添加O. 25mL冠突散囊菌孢子懸液的比例，以噴霧的形式添加，混勻。
7.壓制按照傳統(tǒng)工藝條件處理方式壓制。
8.發(fā)花控制濕度和溫度發(fā)花條件為按照傳統(tǒng)工藝條件處理。
9.干燥和保存按照傳統(tǒng)工藝條件處理。
實施例1 :冠突散囊菌即金花的分離、純化將成品湘益牌茯磚樣本用植物微型粉碎機(jī)粉碎，200目過篩、65°C干燥2小時后稱取 Ig 樣品，定容 10mL，配成 ΙΟ'ΙΟ'ΙΟ'ΙΟ—4、10_5 各 10mL，取 10' 10_4、10_5 三個梯度各0.5mL涂布添加10%茯磚茶汁的PDA瓊脂固體培養(yǎng)基平板，超凈臺上吹干，28°C培養(yǎng)3天，挑 取金黃色優(yōu)勢菌落，畫線至添加10%茯磚茶汁的PDA瓊脂固體培養(yǎng)基平板上，同樣條件繼續(xù) 培養(yǎng)直至純化。
分離純化的金花菌落見附圖1。
實施例2 :冠突散囊菌即金花的孢子懸液制備挑取純化的金花菌落，接種至添加10%茯磚茶汁、20%蔗糖和10%NaCl的PDA液體培養(yǎng) 基培養(yǎng)，28°C靜置培養(yǎng)5天，然后升高溫度至30-32°C培養(yǎng)15天，震蕩分散分生孢子，用雙層 無菌紗布過濾，再后280rpm振蕩培養(yǎng)分散分生孢子，無菌水稀釋孢子懸液至OD值為0. 6，孢 子懸液濃度控制在IO7-1O8個/mL，即為可用的金花孢子懸液。
金花的孢子懸液培養(yǎng)結(jié)果見附圖2。
實施例3 :降氟茯磚茶發(fā)花驗證分別取益陽茶廠一品茯磚原料、百姓茯磚原料各lOKg，以不進(jìn)行綠色降氟作為對照，按 照具體實施方式
中1-9步方法，在湖南省黑茶品質(zhì)與發(fā)酵關(guān)鍵技術(shù)控制產(chǎn)學(xué)研示范基地進(jìn) 行發(fā)花實驗，其降氟率能達(dá)到50%以上，金花生長普遍茂盛、色澤鮮艷金黃、顆粒肥大，菌花 香濃郁。沖泡結(jié)果說明湯色與對照幾乎沒有差別，同樣泡十遍湯色不變，味道更醇和，無新 茶的澀味；檢測結(jié)果表明，經(jīng)過水浸降氟處理后的茯磚茶中茶多酚、水浸出物、咖啡堿成分 與對照相比，下降量十分微弱，口味與對照相比，嘗不出明顯改變，故而可以說對茯磚茶品 質(zhì)影響甚微。
降氟茯磚茶發(fā)花見附圖3。
低氟茯磚茶多次沖泡效果見圖4。
高效綠色降氟對茯磚茶中氟含量、茶多酚、水浸出物、咖啡堿成分影響見圖5。
權(quán)利要求
1.一種高效綠色降氟茯磚茶制備工藝，其特征在于具體步驟如下①黑毛茶分篩、拼配；②綠色降氟；③渥堆；④冠突散囊菌的分離、純化；⑤一定老化度冠突散囊菌孢子懸液制備與濃度確定；⑥添加冠突散囊菌孢子懸液；⑦壓制；⑧發(fā)花；⑨干燥和保存。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的高效綠色降氟茯磚茶制備工藝，其特征在于所述的黑毛茶分篩、拼配按照黑毛茶分級標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行；所述的綠色降氟方法為80°C的干凈水浸泡4-8分鐘后棄浸泡液；所述渥堆為37°C渥堆24小時控制含水量為28% ;所述的冠突散囊菌的分離純化方法為用添加10%茯磚茶汁的PDA瓊脂固體培養(yǎng)基平板梯度稀釋分離；所述的一定老化度冠突散囊菌孢子懸液制備與濃度確定方法為挑取純化的金花菌落，接種至添加10% 茯磚茶汁、20%蔗糖和10%NaCl的PDA液體培養(yǎng)基培養(yǎng)，28°C靜置培養(yǎng)5天，然后升高溫度至30-32°C培養(yǎng)14-30天，震蕩分散孢子，無菌水稀釋孢子懸液濃度控制在IO7-1O8個/mL ； 孢子懸液濃度最終確定控制在IO7 -1O8個/mL ;所述的添加冠突散囊菌孢子懸液添加量為 O. 25 mL/100g ;所述的壓制、發(fā)花、干燥及發(fā)花后保存條件均為按照傳統(tǒng)處理方式。
全文摘要
一種高效綠色降氟茯磚茶制備工藝，具體步驟如下①黑毛茶分篩、拼配；②綠色降氟；③渥堆；④冠突散囊菌的分離、純化；⑤一定老化度冠突散囊菌孢子懸液制備與濃度確定；⑥添加冠突散囊菌孢子懸液；⑦壓制；⑧發(fā)花；⑨干燥和保存。本發(fā)明提供了一種高效綠色降氟茯磚茶制備工藝，能在茯磚茶制作期內(nèi)實現(xiàn)無污染綠色降氟，而且不影響茯磚茶的湯色、茶香、茶味、耐沖泡度等各種品質(zhì)。
文檔編號A23F3/06GK103053722SQ20131001470
公開日2013年4月24日 申請日期2013年1月16日 優(yōu)先權(quán)日2013年1月16日
發(fā)明者劉石泉, 趙運林, 龍立平, 胡治遠(yuǎn) 申請人:湖南城市學(xué)院