專利名稱：一種大規(guī)模封閉式原代細(xì)胞制備裝置的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本實(shí)用新型涉及生物制品的生產(chǎn)裝置，具體涉及一種大規(guī)模封閉式原代細(xì)胞制備
>J-U ρ α裝直。
背景技術(shù)：
原代細(xì)胞是人們掌握較早的用于病毒培養(yǎng)的基質(zhì)，在生物制品生產(chǎn)中有著廣泛的應(yīng)用。多種疫苗可應(yīng)用原代細(xì)胞進(jìn)行制備，包括原代沙鼠腎細(xì)胞制備的流行性出血熱疫苗、原代牛睪丸細(xì)胞制備的豬瘟疫苗、原代地鼠腎細(xì)胞制備的乙腦疫苗、原代雞胚成纖維細(xì)胞制備的雞馬立克氏病疫苗等。由此，原代細(xì)胞的制備是某些生物制品生產(chǎn)的基礎(chǔ)。盡管組織不同、需求量不同、條件不同，使得原代細(xì)胞的制備方法差異很大，但原代細(xì)胞制備的基本流程相同，即無(wú)菌采集組織，洗液將組織內(nèi)的血液洗去，胰酶將組織消化分散成疏松的結(jié)構(gòu)，細(xì)胞間連接不再緊密，加入血清中和胰酶，在外力作用下，分散出單個(gè)細(xì)胞，過(guò)濾將單個(gè)細(xì)胞和仍處于結(jié)團(tuán)狀態(tài)的細(xì)胞分離，過(guò)濾得到的單個(gè)細(xì)胞即為目的細(xì)胞。在傳統(tǒng)方法中，各個(gè)步驟涉及的操作多是開(kāi)放的，每次加入液體、排出液體都要將盛裝組織和/或細(xì)胞的容器敞開(kāi)瓶口，傾倒液體或吸管轉(zhuǎn)移液體。這樣組織和/或細(xì)胞會(huì)與外環(huán)境(空氣)接觸，且操作涉及了多次的液體加入和排出過(guò)程。唯一控制無(wú)菌的方法是凈化空氣，降低外 環(huán)境中的塵埃粒子數(shù)，做好環(huán)境消毒。但即使在GMP車間，百級(jí)環(huán)境操作，污染也時(shí)有發(fā)生。 再者，傳統(tǒng)方法用吸管手動(dòng)吹打細(xì)胞，使細(xì)胞分散，處理量往往很小，單次最多不過(guò)100ml，不適宜大規(guī)模制備原代細(xì)胞。而生物制品的生產(chǎn)往往對(duì)細(xì)胞的需求量較大，所以很多生物制品的制備首選易于放大的傳代細(xì)胞系，但某些生物制品的制備尚未找到理想的可替代原代細(xì)胞的傳代細(xì)胞系，比如雞馬立克氏病疫苗僅能使用原代雞胚成纖維細(xì)胞進(jìn)行生產(chǎn)。已有生物反應(yīng)器懸浮培養(yǎng)傳代細(xì)胞系制備的生物制品上市，但在原代細(xì)胞制備方面卻未有長(zhǎng)足進(jìn)展。究其原因，原代細(xì)胞的大規(guī)模制備技術(shù)是其瓶頸之一。

實(shí)用新型內(nèi)容本實(shí)用新型的目的是提供一種大規(guī)模封閉式原代細(xì)胞制備裝置，能夠?yàn)橥ㄟ^(guò)動(dòng)物組織制備原代細(xì)胞提供一個(gè)密閉無(wú)菌環(huán)境，且可以實(shí)現(xiàn)大規(guī)模制備，動(dòng)物組織在本裝置中經(jīng)過(guò)連續(xù)操作，最終獲得原代細(xì)胞。具體地，本實(shí)用新型提供一種大規(guī)模封閉式原代細(xì)胞制備裝置，包括組織消化單元1、細(xì)胞分散單元2、細(xì)胞過(guò)濾單元3、細(xì)胞盛裝單元4以及動(dòng)力系統(tǒng)，各單元之間、各單元內(nèi)部通過(guò)硅膠管、多通管相連通，其中:所述組織消化單元1，包括組織進(jìn)入端口 101、洗液存放容器102、消化液存放容器103、廢液存放容器104、消化容器105、空氣過(guò)濾器5、硅膠管和連接頭；所述洗液存放容器102、消化液存放容器103、廢液存放容器104、消化容器105上設(shè)帶有穿通蓋體的中空不銹鋼管道的密封蓋；所述洗液存放容器102的密封蓋設(shè)有3根管道，第一管道1021上口和硅膠管相連，繼而硅膠管和空氣過(guò)濾器5相連；第二管道1022上口和硅膠管相連，繼而硅膠管和連接頭相連；第二管道1022下口和硅膠管相連，第三管道1023下口和硅膠管相連；所述消化液存放容器103的密封蓋設(shè)有3根管道，第一管道1031上口和硅膠管相連，繼而硅膠管和空氣過(guò)濾器5相連；第二管道1032上口和硅膠管相連，繼而硅膠管和連接頭相連；第二管道1032下口和硅膠管相連，第三管道1033下口和硅膠管相連；所述廢液存放容器104的密封蓋設(shè)有2根管道，第一管道1041上口和硅膠管相連，繼而硅膠管和空氣過(guò)濾器5相連；第二管道1042下口和硅膠管相連；所述消化容器105的密封蓋設(shè)有2根管道，第一管道1051上口和硅膠管相連，繼而硅膠管和空氣過(guò)濾器5相連；第二管道1052下口和硅膠管1053相連；所述細(xì)胞分散單元2，包括培養(yǎng)基存放容器201、細(xì)胞分散容器202、空氣過(guò)濾器5、硅膠管和連接頭；所述培養(yǎng)基存放容器201、細(xì)胞分散容器202上設(shè)帶有穿通蓋體的中空不銹鋼管道的密封蓋；所述培養(yǎng)基存放容器201的密封蓋設(shè)有3根管道，第一管道2011上口和硅膠管相連，繼而硅膠管和空氣過(guò)濾器5相連；第二管道2012上口和硅膠管相連，繼而硅膠管和連接頭相連；第二管道2012下口和硅膠管相連，第三管道2013下口和硅膠管相連；所述細(xì)胞分散容器202的密封蓋設(shè)有4根管道，第一管道2021上口和硅膠管相連，繼而硅膠管和空氣過(guò)濾器5相連；第二管道2022下口和硅膠管相連；下口為粗端口的第三管道2023和下口為細(xì)端口的第四管道2024在容器內(nèi)的長(zhǎng)度為細(xì)胞分散容器高度的1/3-1/2，且粗、細(xì)兩端口的出口朝向細(xì)胞分散容器202的容器內(nèi)壁。所述細(xì)胞過(guò)濾單元3，包括兩個(gè)以上細(xì)胞過(guò)濾器301，所述細(xì)胞過(guò)濾器301包括漏斗形外壁3011、過(guò)濾層3012、圓臺(tái)形過(guò)濾層支架3013、過(guò)濾器支架3014以及帶有穿通蓋體的中空不銹鋼管道3015的密封蓋；所述圓臺(tái)形過(guò)濾層支架3013由兩個(gè)不同直徑的圓形鐵圈通過(guò)4個(gè)支桿相連而成，直徑較大的圓形鐵圈用于固定過(guò)濾層3012 ；所述細(xì)胞盛裝單元4，包括細(xì)胞盛裝容器401、取樣瓶402、空氣過(guò)濾器5、硅膠管和連接頭；所述細(xì)胞盛裝容器401、取樣瓶402上設(shè)帶有穿通蓋體的中空不銹鋼管道的密封蓋；所述細(xì)胞盛裝容器401的密封蓋設(shè)有3根管道，第一管道4011上口和硅膠管相連，繼而硅膠管和空氣過(guò)濾器5相連；第二管道4012下口和硅膠管相連，第三管道4013下口和硅膠管相連；所述取樣瓶402的密封蓋設(shè)有2根管道,第一管道4021上口和娃膠管相連,繼而娃膠管和空氣過(guò)濾器5相連；第二管道4022下口和硅膠管相連；所述動(dòng)力系統(tǒng)包括磁力攪拌組件，蠕動(dòng)泵和/或微型氣泵；所述磁力攪拌組件包括位于消化容器105內(nèi)的磁力攪拌子601和位于消化容器105下方的磁力攪拌器602 ；所述多通管包括第一三通管701、第二三通管702、第一四通管703、第二四通管704、第三四通管705、五通管706、六通管707，其連接方式如下:所述六通管707通過(guò)硅膠管分別和組織進(jìn)入端口 101、洗液存放容器102的第三管道1023上口、消化液存放容器103的第三管道1033上口、消化容器105的第二管道1052上口、第一三通管701、廢液存放容器104的第二管道1042上口相連；[0022]所述第一三通管701通過(guò)硅膠管分別和六通管707、細(xì)胞分散容器202的第三管道2023上口、第一四通管703相連；所述第一四通管703通過(guò)硅膠管分別和第一三通管701、細(xì)胞分散容器202的第二管道2022上口、第二四通管704、五通管706相連；所述第二四通管704通過(guò)硅膠管分別和第一四通管703、細(xì)胞分散容器202的第四管道2024上口、培養(yǎng)基存放容器201的第三管道2013上口、第三四通管705相連；所述第三四通管705通過(guò)硅膠管分別和第二四通管704、各細(xì)胞過(guò)濾器301的中空不銹鋼管道3015上口相連；所述五通管706通過(guò)硅膠管分別和第一四通管703、各細(xì)胞過(guò)濾器301的漏斗形外壁3011出液口、細(xì)胞盛裝容器401的第二管道4012上口相連；所述第二三通管702通過(guò)硅膠管分別和細(xì)胞盛裝容器401的第三管道4013上口、取樣瓶402的第二管道4022上口、供分裝用的連接頭相連。所述密封蓋，包括塑料外蓋、帶有穿通蓋體的中空不銹鋼管道的不銹鋼內(nèi)蓋和密封圈，密封蓋與所密封的容器為螺紋連接。所述細(xì)胞分散容器202的第三管道2023出口內(nèi)徑為3_5mm，第四管道2024出口內(nèi)徑為l-3mm。所述消化容器105和細(xì)胞分散容器202為圓底容器，下設(shè)支架。所述洗液存放容器102、消化液存放容器103、培養(yǎng)基存放容器201上的連接頭與過(guò)濾除菌設(shè)備上配置的連接頭為插拔相連或螺紋相連。所述細(xì)胞盛裝單元4所配有的連接頭為供分裝用的連接頭，所述連接頭與細(xì)胞盛裝單元以外的后續(xù)細(xì)胞盛裝容器的連接頭呈插拔相連或螺紋相連。所述洗液存放容器102的第三管道1023下口設(shè)置的硅膠管、消化液存放容器103的第三管道1033下口設(shè)置的硅膠管、培養(yǎng)基存放容器201的第三管道2013下口設(shè)置的硅膠管、細(xì)胞分散容器202的第二管道2022下口設(shè)置的硅膠管、細(xì)胞盛裝容器401的第三管道4013下口設(shè)置的硅膠管，其長(zhǎng)度深達(dá)容器底部。所述洗液存放容器102的第二管道1022下口設(shè)置的硅膠管、消化液存放容器103的第二管道1032下口設(shè)置的硅膠管、廢液存放容器104的第二管道1042下口設(shè)置的硅膠管、培養(yǎng)基存放容器201的第二管道2012下口設(shè)置的硅膠管、細(xì)胞盛裝容器401的第二管道4012下口設(shè)置的娃膠管、取樣瓶402的第二管道4022下口設(shè)置的娃膠管,其管口高于容器內(nèi)液面高度。所述消化容器105的第二管道1052下口連接的硅膠管1053，其管口距容器底部2_5cm0本實(shí)用新型一種大規(guī)模封閉式原代細(xì)胞制備裝置及其應(yīng)用方法的有益效果在于:本實(shí)用新型的原代細(xì)胞制備裝置使用管線連接各個(gè)功能單元，使用空氣過(guò)濾器保證進(jìn)入體系的氣體是無(wú)菌的，連為一體的裝置使得原代細(xì)胞的制備全程是相對(duì)密閉的，減少了內(nèi)容物與外環(huán)境接觸的次數(shù)，比傳統(tǒng)原代細(xì)胞制備的操作方法降低了污染幾率；本實(shí)用新型的原代細(xì)胞制備裝置使用動(dòng)力系統(tǒng)進(jìn)行組織和液體的流轉(zhuǎn)、組織和液體的混合、細(xì)胞分散，降低了人工操作的勞動(dòng)強(qiáng)度，比傳統(tǒng)操作方法提高了工作效率，放大了生產(chǎn)規(guī)模；本實(shí)用新型的原代細(xì)胞制備裝置使用了自體循環(huán)，模擬吹打法制備原代細(xì)胞，對(duì)細(xì)胞的損傷小，所獲細(xì)胞的活力高。本裝置可用于生物制品行業(yè)大規(guī)模制備原代細(xì)胞。

圖1為本實(shí)用新型制備裝置的結(jié)構(gòu)示意圖。圖2為本實(shí)用新型制備裝置中消化液存放容器的剖面結(jié)構(gòu)示意圖。圖3為本實(shí)用新型制備裝置中利用物理力量分散細(xì)胞時(shí)用到的粗細(xì)端口的不銹鋼鋼管的剖面圖。圖4為本實(shí)用新型制備裝置中細(xì)胞過(guò)濾器的圓臺(tái)形過(guò)濾層支架的結(jié)構(gòu)示意圖。圖5為本實(shí)用新型制備裝置中細(xì)胞過(guò)濾器的結(jié)構(gòu)示意圖。圖中標(biāo)記:I為組織消化單元，2為細(xì)胞分散單元，3為細(xì)胞過(guò)濾單元，4為細(xì)胞盛裝單元，5為空氣過(guò)濾器；101為組織進(jìn)入端口，102為洗液存放容器，103為消化液存放容器，104為廢液存放容器，105為消化容器；1021為洗液存放容器的第一管道，1022為洗液存放容器的第二管道，1023為洗液
存放容器的第三管道；1031為消化液存放容器的第一管道，1032為消化液存放容器的第二管道，1033為
消化液存放容器的第三管道；1041為廢液存放容器的第一管道，1042為廢液存放容器的第二管道；1051為消化容器的第一管道，1052為消化容器的第二管道，1053為硅膠管；201為培養(yǎng)基存放容器，202為細(xì)胞分散容器；2011為培養(yǎng)基存放容器的第一管道，2012為培養(yǎng)基存放容器的第二管道，2013為培養(yǎng)基存放容器的第三管道；2021為細(xì)胞分散容器的第一管道，2022為細(xì)胞分散容器的第二管道，2023為細(xì)胞分散容器的第三管道，2024為細(xì)胞分散容器的第四管道；301為細(xì)胞過(guò)濾器，3011為漏斗形外壁，3012為過(guò)濾層，3013為圓臺(tái)形過(guò)濾層支架，3014為過(guò)濾器支架，3015為中空不銹鋼管道；401為細(xì)胞盛裝容器，402為取樣瓶；4011為細(xì)胞盛裝容器的第一管道，4012為細(xì)胞盛裝容器的第二管道，4013為細(xì)胞盛裝容器的第三管道；4021為取樣瓶的第一管道，4022為取樣瓶的第二管道；601為磁力攪拌子,602為磁力攪拌器；701為第一三通管，702第二三通管，703為第一四通管，704為第二四通管，705為第三四通管，706為五通管，707為六通管；8為控制夾，①表示控制夾的序號(hào)。
具體實(shí)施方式
以下結(jié)合附圖和實(shí)施例對(duì)本實(shí)用新型作進(jìn)一步說(shuō)明。應(yīng)當(dāng)理解的是，這些實(shí)施例僅僅是用于進(jìn)一步解釋和說(shuō)明本實(shí)用新型，其不應(yīng)被理解為是對(duì)本實(shí)用新型保護(hù)范圍的限制。本實(shí)用新型的大規(guī)模封閉式原代細(xì)胞制備裝置由六個(gè)部分組成，包括組織消化單元1、細(xì)胞分散單元2、細(xì)胞過(guò)濾單元3、細(xì)胞盛裝單元4、各單元內(nèi)和/或各單元間的連接管線、動(dòng)力系統(tǒng)。各單元用到的容器可由市售補(bǔ)料瓶做細(xì)部改動(dòng)得來(lái)，每個(gè)容器配有一個(gè)空氣過(guò)濾器5，用于過(guò)濾空氣，保證裝置內(nèi)部無(wú)菌。各單元內(nèi)和/或各單元間通過(guò)不銹鋼三通管(701、702)、不銹鋼四通管(703、704、705)、不銹鋼五通管706、不銹鋼六通管707和硅膠管連接。組織、細(xì)胞、液體在各單元間和/或單元內(nèi)流轉(zhuǎn)是由蠕動(dòng)泵和/或微型氣泵提供動(dòng)力實(shí)現(xiàn)。細(xì)胞分散容器202設(shè)計(jì)了自體循環(huán)，組織和/或細(xì)胞液吹打容器瓶體內(nèi)壁，機(jī)械力量促使已經(jīng)消化疏松的組織和/或細(xì)胞團(tuán)分散成單個(gè)細(xì)胞，使用兩個(gè)管口直徑不同的不銹鋼管道2023、2024進(jìn)行吹打分散，先用粗端口，再用細(xì)端口，既可避免堵塞，又能夠達(dá)到較高的沖擊力度。具體地，本實(shí)用新型提供一種大規(guī)模封閉式原代細(xì)胞制備裝置，其由六部分組成，包括，組織消化單元1、細(xì)胞分散單元2、細(xì)胞過(guò)濾單元3、細(xì)胞盛裝單元4、各單元內(nèi)和/或各單元間的連接管線、動(dòng)力系統(tǒng)，其中:組織消化單元I由組織進(jìn)入端口 101、洗液存放容器102、消化液存放容器103、廢液存放容器104、消化容器105組成；其中，組織經(jīng)組織進(jìn)入端口流轉(zhuǎn)到消化容器，洗液、消化液則分別由洗液存放容器、消化液存放容器流轉(zhuǎn)到消化容器，消化容器中用畢廢棄的洗液或消化液則再由消化容器流轉(zhuǎn)到廢液存放容器；消化好的組織上清經(jīng)流轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)移到細(xì)胞分散單元2;細(xì)胞分散單元2由培養(yǎng)基存放容器201和細(xì)胞分散容器202組成；其中，培養(yǎng)基存放容器201中的培養(yǎng)基經(jīng)流轉(zhuǎn)與由消化容器流轉(zhuǎn)過(guò)來(lái)的消化好的組織上清的混合液先后進(jìn)入細(xì)胞分散容器202，此時(shí)培養(yǎng)基中的血清能夠中和消化液，使消化液不再有消化活力；所述細(xì)胞分散容器202設(shè)有出口端一粗一細(xì)的兩個(gè)不銹鋼管道2023、2024，鋼管出口端正對(duì)細(xì)胞分散容器202的容器內(nèi)壁，由此，所述混合液先后經(jīng)粗細(xì)端口不銹鋼鋼管在細(xì)胞分散容器內(nèi)自體循環(huán)，所述混合液沖擊吹打細(xì)胞分散容器內(nèi)壁，借助沖擊吹打細(xì)胞分散容器內(nèi)壁的力量，消化好的組織進(jìn)一步分散為單個(gè)細(xì)胞；在細(xì)胞分散單元2分散后，所述混合液經(jīng)流轉(zhuǎn)進(jìn)入細(xì)胞過(guò)濾單元3 ；細(xì)胞過(guò)濾單元3由多個(gè)獨(dú)立的細(xì)胞過(guò)濾器301組成，使用時(shí)各細(xì)胞過(guò)濾器301逐個(gè)使用，可避免因堵塞引發(fā)的濾速減慢；細(xì)胞過(guò)濾單元3用于將經(jīng)細(xì)胞分散單元2流轉(zhuǎn)過(guò)來(lái)的混合液中的單個(gè)細(xì)胞與未分散的組織塊兒分開(kāi)，經(jīng)細(xì)胞過(guò)濾器301過(guò)濾后，細(xì)胞流轉(zhuǎn)到細(xì)胞盛裝單元4 ；細(xì)胞盛裝單元4由細(xì)胞盛裝容器401、取樣瓶402、連接頭組成，其中，細(xì)胞盛裝容器401用于盛裝或保存制備好的原代細(xì)胞，取樣瓶402則用于取樣計(jì)數(shù)細(xì)胞密度，根據(jù)需要將細(xì)胞稀釋到適宜濃度；各單元內(nèi)和/或各單元間的連接管線總計(jì)由2個(gè)不銹鋼三通管(701、702)、3個(gè)不銹鋼四通管(703、704、705)、1個(gè)不銹鋼五通管706、I個(gè)不銹鋼六通管707和若干硅膠管組成，根據(jù)需要硅膠管上配有控制硅膠管通路的控制夾8 ;連接管線將各單元內(nèi)和/或各單元間的各組件相互連接后，之間無(wú)斷開(kāi)或敞口的環(huán)節(jié)，由此實(shí)現(xiàn)原代細(xì)胞制備全程為封閉式操作；動(dòng)力系統(tǒng)由蠕動(dòng)泵、微型氣泵、磁力攪拌組件組成，其中磁力攪拌組件由磁力攪拌器602和磁力攪拌子601組成；組織、細(xì)胞、各種溶液(即消化液、洗液、培養(yǎng)基)、以及廢液在單元間和/或單元內(nèi)流轉(zhuǎn)均由蠕動(dòng)泵和/或微型氣泵提供動(dòng)力實(shí)現(xiàn)，消化容器內(nèi)容物混合由磁力攪拌組件提供動(dòng)力實(shí)現(xiàn)；所述組織消化單元1、細(xì)胞分散單元2、細(xì)胞過(guò)濾單元3、細(xì)胞盛裝單元4中所包含的各個(gè)容器為有蓋容器，容器蓋子與容器瓶體上部的瓶口呈螺紋密封相連；且容器蓋子上設(shè)有穿通蓋體的中空不銹鋼鋼管，由此與各單元內(nèi)和/或各單元間的連接管線連接，從而實(shí)現(xiàn)各單元內(nèi)和/或各單元間物質(zhì)的流轉(zhuǎn)。裝置內(nèi)部與外部的氣體流通要通過(guò)空氣過(guò)濾器5過(guò)濾，在氣體進(jìn)入的同時(shí)將裝置外部空氣中的灰塵、細(xì)菌攔截在裝置外，由此實(shí)現(xiàn)裝置內(nèi)部的原代細(xì)胞制備全程為無(wú)菌操作。在本實(shí)用新型的優(yōu)選技術(shù)方案中，所述培養(yǎng)基存放容器和細(xì)胞盛裝容器的體積根據(jù)需求設(shè)置，所述取樣瓶容積為100ml-250ml，其余各容器容積為5L-10L。所述洗液存放容器102、消化液存放容器103、廢液存放容器104、消化容器105、培養(yǎng)基存放容器201、細(xì)胞分散容器202、細(xì)胞盛裝容器401、取樣瓶402的瓶口設(shè)計(jì)同補(bǔ)料瓶的瓶口設(shè)計(jì)，容器蓋子內(nèi)徑5cm-10cm，容器蓋子外徑為在容器蓋子內(nèi)徑基礎(chǔ)上增加1cm，容器蓋子與容器瓶體上口以螺紋方式連接，容器蓋子的組成包括塑料外蓋、不銹鋼內(nèi)蓋、密封圈，其中在不銹鋼內(nèi)蓋上設(shè)有穿通蓋體的中空不銹鋼鋼管，用于組織、細(xì)胞、各種溶液(即消化液、洗液、培養(yǎng)基)、以及廢液在各單元內(nèi)和/或各單元間的流轉(zhuǎn)。所述洗液存放容器102、消化液存放容器103、廢液存放容器104、消化容器105、培養(yǎng)基存放容器201、細(xì)胞分散容器202、細(xì)胞盛裝容器401、取樣瓶402都設(shè)有進(jìn)氣口和/或排氣口，所述進(jìn)氣口和/或排氣口設(shè)計(jì)為，由各容器蓋子上的一根穿通容器蓋體的中空不銹鋼鋼管連接硅膠管后再連接空氣過(guò)濾器5，如此保證了裝置使用過(guò)程中內(nèi)部不會(huì)進(jìn)入有菌的空氣。在本實(shí)用新型的優(yōu)選技術(shù)方案中，所述洗液存放容器102、消化液存放容器103、培養(yǎng)基存放容器104分別設(shè)置有供洗液、消化液或培養(yǎng)基溶液進(jìn)入的連接頭，洗液存放容器102、消化液存放容器103、培養(yǎng)基存放容器104上的連接頭與過(guò)濾除菌設(shè)備上配置的連接頭是可以插拔相連的或螺紋相連的。在本實(shí)用新型的優(yōu)選技術(shù)方案中，所述細(xì)胞盛裝單元4所配有的連接頭是供分裝用的連接頭，其能夠與細(xì)胞盛裝單元4以外的后續(xù)細(xì)胞盛裝容器的連接頭呈插拔相連或螺紋相連。在本實(shí)用新型的優(yōu)選技術(shù)方案中，所述消化容器105和細(xì)胞分散容器202采用圓底設(shè)計(jì)，并且消化容器105內(nèi)放置一枚磁力攪拌子601，使用時(shí)消化容器105置于磁力攪拌器602上，便于混合消化容器105內(nèi)的混合液，使用磁力攪拌組件還便于對(duì)消化容器內(nèi)的混合液加熱控溫。在本實(shí)用新型的優(yōu)選技術(shù)方案中，在所述細(xì)胞分散容器202內(nèi)，設(shè)有的兩個(gè)不銹鋼鋼管通過(guò)動(dòng)力系統(tǒng)使消化好的組織先后通過(guò)粗細(xì)端口的不銹鋼管管2023、2024撞擊容器壁，機(jī)械力量使組織分散成單個(gè)細(xì)胞，其中，粗細(xì)端口的內(nèi)徑分別為4mm和2mm。[0077]組織、細(xì)胞能夠在細(xì)胞分散容器內(nèi)循環(huán)撞擊容器內(nèi)壁，此即為自體循環(huán)。洗液存放容器102、消化液存放容器103、廢液存放容器104、培養(yǎng)基存放容器201、細(xì)胞盛裝容器401、取樣瓶402的進(jìn)液管不會(huì)接觸到液面；洗液存放容器102、消化液存放容器103、培養(yǎng)基存放容器201、細(xì)胞盛裝容器401的出液管深達(dá)瓶底；消化容器105的進(jìn)液管同時(shí)也是出液管，管口距瓶底2-5cm;細(xì)胞分散容器202的進(jìn)液管同時(shí)也是出液管，管子深達(dá)瓶底；進(jìn)液管或出液管的長(zhǎng)短通過(guò)連接在容器蓋子的中空不銹鋼鋼管上的硅膠管來(lái)進(jìn)行控制。在本實(shí)用新型的優(yōu)選技術(shù)方案中，其中細(xì)胞過(guò)濾單元3的細(xì)胞過(guò)濾器301由漏斗形外壁3011、帶有穿通蓋體的中空不銹鋼管道3015的密封蓋、圓臺(tái)形過(guò)濾層支架3013、過(guò)濾層3012以及過(guò)濾器支架3014共五個(gè)部分組成，其中:細(xì)胞過(guò)濾器的外壁3011形似漏斗，漏斗大口端有螺口，可與配套蓋子螺紋相連，漏斗出口外徑同不銹鋼鋼管外徑，便于與硅膠管連接；細(xì)胞過(guò)濾器的連有I根中空不銹鋼管道3015的蓋子的形狀與補(bǔ)料瓶的蓋子相似，內(nèi)徑為15cm_25cm,夕卜徑比內(nèi)徑增加Icm;細(xì)胞過(guò)濾器的圓臺(tái)形過(guò)濾層支架3013由大小兩個(gè)圓形鐵圈通過(guò)4個(gè)支架相連,大小以可以穩(wěn)定貼于漏斗形外壁3011為準(zhǔn)，上口圓形鐵圈有固定過(guò)濾層3012的作用；過(guò)濾層3012為紗布或銅網(wǎng)，其中心下凹，使未過(guò)濾的液體不會(huì)未經(jīng)過(guò)濾就流到下一環(huán)節(jié);細(xì)胞過(guò)濾器的過(guò)濾器支架3014支撐漏斗形外壁3011。在本實(shí)用新型的優(yōu)選技術(shù)方案中，裝置中用于管線連接的不銹鋼鋼管和多通管的內(nèi)徑為6mm,夕卜徑為7mm,娃膠管的內(nèi)徑為6.4mm,外徑為8mm。在本實(shí)用新型的優(yōu)選技術(shù)方案中，該裝置使用前要經(jīng)過(guò)12rC、30min濕熱滅菌；各連接頭在滅菌前用硫酸紙或牛皮紙包裹，使用前拆掉硫酸紙或牛皮紙包裹；滅菌時(shí)各容器蓋子與容器瓶體間是旋松的，細(xì)胞過(guò)濾器蓋子與圓錐體外壁是旋松的，滅菌結(jié)束后立即旋緊；控制夾在滅菌后使用前安裝；蠕動(dòng)泵和/或微型氣泵使用時(shí)安裝。實(shí)施例1:利用大規(guī)模封閉式原代細(xì)胞制備裝置制備原代雞胚成纖維細(xì)胞本實(shí)施例的動(dòng)力系統(tǒng)采用蠕動(dòng)泵和磁力攪拌組件。參考附圖1-5進(jìn)行裝置的組裝和準(zhǔn)備，參考附圖1進(jìn)行操作。1、將清洗干凈、40°C _60°C烘干的各個(gè)容器和組件按照?qǐng)D1-5進(jìn)行組裝和連接，用包裝無(wú)菌物品的包裝紙包裝組織進(jìn)入端口、分裝用的連接頭、洗液存放容器的連接頭、消化液存放容器的連接頭、培養(yǎng)基存放容器的連接頭。2、容器蓋子與瓶體間呈旋松狀態(tài)，細(xì)胞過(guò)濾器蓋子與圓錐體外壁呈旋松狀態(tài)，121°C、30min濕熱滅菌，滅菌結(jié)束后立即旋緊各個(gè)蓋子。3、按照?qǐng)D1安裝控制夾8 (操作步驟中未提及的控制夾都處于關(guān)閉狀態(tài))。4、無(wú)菌條件下，洗液存放容器102的連接頭去掉包裝紙與濾芯式過(guò)濾器的出液端
連接頭連接，打開(kāi)控制夾 ,濾芯式過(guò)濾器過(guò)濾得到的無(wú)菌洗液4L-6L直接進(jìn)入洗液存放容器102，關(guān)閉控制夾 。[0094]5、無(wú)菌條件下，消化液存放容器103的連接頭去掉包裝紙與濾芯式過(guò)濾器的出液端連接頭連接，打開(kāi)控制夾@ ,濾芯式過(guò)濾器過(guò)濾得到的無(wú)菌消化液2L-5L直接進(jìn)入消化
液存放容器103，關(guān)閉控制夾@。6、無(wú)菌條件下，培養(yǎng)基存放容器201的連接頭去掉包裝紙與濾芯式過(guò)濾器的出液端連接頭連接，打開(kāi)控制夾@ ,濾芯式過(guò)濾器過(guò)濾得到的無(wú)菌培養(yǎng)基10L-40L直接進(jìn)入培
養(yǎng)基存放容器，關(guān)閉控制夾0)。7、消化液(常用消化液:0.05%-0.25%的胰酶溶液)預(yù)熱至37°C，其余溶液預(yù)熱至室溫。8、取9-10日齡SPF雞胚，常規(guī)方法取出胚體，去頭、去內(nèi)臟，同法操作其余雞胚。放于組織絞碎機(jī)的盛裝桶內(nèi)，開(kāi)啟組織絞碎機(jī)，將雞胚組織剪切為小塊，使其橫徑小于6mm。加入洗液300ml (此處的洗液為另行配制和除菌的)至組織絞碎機(jī)的盛裝桶內(nèi)。共計(jì)用胚300枚。此時(shí)組織絞碎機(jī)的盛裝桶內(nèi)的混合物共計(jì)1.0L-1.5L。9、將細(xì)胞分散容器202的第二管道2022和第一四通管703之間的硅膠管，安裝到
螺動(dòng)栗上。10、打開(kāi)控制夾⑦、⑩，蠕動(dòng)泵針對(duì)細(xì)胞分散容器202呈進(jìn)液狀態(tài)，啟動(dòng)蠕動(dòng)泵，將培養(yǎng)基2L-4L流轉(zhuǎn)到細(xì)胞分散容器202，關(guān)閉蠕動(dòng)泵，關(guān)閉控制夾⑦、⑩。11、將細(xì)胞分散容器202的第二管道2022和第一四通管703之間的硅膠管，從蠕動(dòng)泵上卸下。12、將消化容器105的第二管道1052和六通管707之間的硅膠管，安裝到蠕動(dòng)泵上。13、打開(kāi)控制夾①，蠕動(dòng)泵針對(duì)消化容器105呈進(jìn)液狀態(tài)，去掉組織進(jìn)入端口 101的包裝紙，組織進(jìn)入端口 101的入口端置于組織絞碎機(jī)的盛裝桶內(nèi)，啟動(dòng)蠕動(dòng)泵，將雞胚組織流轉(zhuǎn)到消化容器105，關(guān)閉蠕動(dòng)泵，關(guān)閉控制夾①。14、打開(kāi)控制夾②，蠕動(dòng)泵針對(duì)消化容器105呈進(jìn)液狀態(tài)，啟動(dòng)蠕動(dòng)泵，將2L-3L洗液流轉(zhuǎn)到消化容器105，關(guān)閉蠕動(dòng)泵，關(guān)閉控制夾②。15、打開(kāi)磁力攪拌器602，使磁力攪拌子601在消化容器105內(nèi)轉(zhuǎn)動(dòng)，洗液與組織充分接觸，lmin-3min,關(guān)閉磁力攪拌器602，靜置使組織沉降。16、打開(kāi)控制夾④，蠕動(dòng)泵針對(duì)消化容器105呈排液狀態(tài)，啟動(dòng)蠕動(dòng)泵，將消化容器內(nèi)2L-3L洗液流轉(zhuǎn)到廢液存放容器104，關(guān)閉蠕動(dòng)泵，關(guān)閉控制夾④。17、重復(fù)步驟14-16的操作。18、打開(kāi)控制夾③，蠕動(dòng)泵針對(duì)消化容器105呈進(jìn)液狀態(tài)，啟動(dòng)蠕動(dòng)泵，將消化液IL流轉(zhuǎn)到消化容器105，關(guān)閉蠕動(dòng)泵，關(guān)閉控制夾③。19、打開(kāi)磁力攪拌器602，使磁力攪拌子601在消化容器105內(nèi)轉(zhuǎn)動(dòng)，消化液與組織充分接觸，0.5min-lmin,關(guān)閉磁力攪拌器602，靜置使組織沉降。20、打開(kāi)控制夾④，蠕動(dòng)泵針對(duì)消化容器105呈排液狀態(tài)，啟動(dòng)蠕動(dòng)泵，將消化容器105內(nèi)IL消化液流轉(zhuǎn)到廢液存放容器104，關(guān)閉蠕動(dòng)泵，關(guān)閉控制夾④。21、重復(fù)步驟18的操作。22、打開(kāi)磁力攪拌器602，使磁力攪拌子601在消化容器105內(nèi)轉(zhuǎn)動(dòng)，消化液與組織充分接觸，打開(kāi)磁力攪拌器602的加熱開(kāi)關(guān)，調(diào)控溫度使消化容器105內(nèi)容物溫度為37°C，10min-40min，關(guān)閉磁力攪拌器602，靜置使未分散的大塊組織沉降。23、打開(kāi)控制夾⑤、⑥，蠕動(dòng)泵針對(duì)消化容器105呈排液狀態(tài)，啟動(dòng)蠕動(dòng)泵，將分散了的小塊雞胚組織IL流轉(zhuǎn)到細(xì)胞分散容器202，關(guān)閉蠕動(dòng)泵，關(guān)閉⑤、⑥控制夾。24、重復(fù)步驟21-23的操作，根據(jù)剩余組織的多少確定重復(fù)次數(shù)，重復(fù)次數(shù)為O次到多次。25、將消化容器105的第二管道1052和六通管707之間的硅膠管，從蠕動(dòng)泵上卸下。26、將細(xì)胞分散容器202的第二管道2022和第一四通管703之間的硅膠管，安裝到螺動(dòng)泵上。27、打開(kāi)控制夾⑥、⑧，蠕動(dòng)泵針對(duì)細(xì)胞分散容器202呈排液狀態(tài)，啟動(dòng)蠕動(dòng)泵，將組織在細(xì)胞分散容器202內(nèi)循環(huán)，組織撞擊容器內(nèi)壁，使得已經(jīng)分散的組織在機(jī)械撞擊的情況下進(jìn)一步分散成小塊，達(dá)到3倍體積(I倍體積:細(xì)胞分散容器內(nèi)混合液的總體)循環(huán)時(shí)(蠕動(dòng)泵設(shè)置的速度和時(shí)間，可以控制液體循環(huán)量)，關(guān)閉蠕動(dòng)泵，關(guān)閉控制夾⑥、⑧。28、打開(kāi)控制夾⑦、⑨，蠕動(dòng)泵針對(duì)細(xì)胞分散容器202呈排液狀態(tài)，啟動(dòng)蠕動(dòng)泵，將小塊組織在分散容器內(nèi)循環(huán)，小塊組織撞擊容器壁，使得已經(jīng)分散的小塊組織在機(jī)械撞擊的情況下進(jìn)一步分散成單個(gè)細(xì)胞，達(dá)到3倍體積循環(huán)時(shí)，關(guān)閉蠕動(dòng)泵，關(guān)閉控制夾⑨(此時(shí)控制夾⑦打開(kāi))。29、打開(kāi)控制夾 、⑩、⑩(此時(shí)控制夾⑦、 、⑩、 打開(kāi))，蠕動(dòng)泵針對(duì)細(xì)
胞分散容器202呈排液狀態(tài)，啟動(dòng)蠕動(dòng)泵，將分散的細(xì)胞通過(guò)細(xì)胞過(guò)濾器301，流轉(zhuǎn)到細(xì)胞盛裝容器401。30、組織沉渣過(guò)多，過(guò)濾受阻時(shí)，關(guān)閉控制夾 ,打開(kāi)控制夾 (此時(shí)控制夾⑦、 、 、 打開(kāi))繼續(xù)過(guò)濾。31、組織沉渣過(guò)多，過(guò)濾受阻時(shí)，關(guān)閉控制夾 ,打開(kāi)控制夾<3 (此時(shí)控制夾⑦、 、 、 打開(kāi))繼續(xù)過(guò)濾。濾器數(shù)量的設(shè)置根據(jù)具體情況而定。過(guò)濾結(jié)束，關(guān)閉蠕動(dòng)栗，關(guān)閉控制夾⑦、⑩、 、⑩。32、將細(xì)胞分散容器202的第二管道2022和第一四通管703之間的硅膠管，從蠕動(dòng)泵上卸下。33、將細(xì)胞盛裝容器401的第三管道4013和第二三通管702之間的硅膠管，安裝到螺動(dòng)泵上。[0123]34、打開(kāi)控制夾 ,蠕動(dòng)泵針對(duì)細(xì)胞盛裝容器401呈排液狀態(tài)，啟動(dòng)蠕動(dòng)泵，將細(xì)
胞盛裝容器401內(nèi)的細(xì)胞流轉(zhuǎn)20ml-50ml到取樣瓶402。關(guān)閉控制夾 。35、取下取樣瓶402盛裝細(xì)胞的下部玻璃瓶，將細(xì)胞適當(dāng)倍數(shù)(5倍-50倍)稀釋，臺(tái)盼藍(lán)染色細(xì)胞，在細(xì)胞計(jì)數(shù)板上計(jì)數(shù)活細(xì)胞數(shù)和死細(xì)胞數(shù)，通過(guò)計(jì)算得到每毫升溶液內(nèi)細(xì)胞數(shù)目和活細(xì)胞的比例，即細(xì)胞濃度和細(xì)胞活率。36、將細(xì)胞盛裝容器401的第三管道4013和第二三通管702之間的硅膠管，從蠕動(dòng)泵上卸下。37、將細(xì)胞分散容器202的第二管道2022和第一四通管703之間的硅膠管，安裝到螺動(dòng)泵上。38、根據(jù)細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果和后續(xù)細(xì)胞液用量，補(bǔ)充培養(yǎng)基到細(xì)胞盛裝容器。打開(kāi)控制夾⑦、⑩，蠕動(dòng)泵針對(duì)細(xì)胞分散容器202呈進(jìn)液狀態(tài)，啟動(dòng)蠕動(dòng)泵，將培養(yǎng)基流轉(zhuǎn)到細(xì)胞分
散容器202，關(guān)閉蠕動(dòng)泵，關(guān)閉控制夾⑦、⑩。打開(kāi)控制夾 、_，蠕動(dòng)泵針對(duì)細(xì)胞分散容
器202呈排液狀態(tài)，啟動(dòng)蠕動(dòng)泵，將培養(yǎng)基由細(xì)胞分散容器202流轉(zhuǎn)到細(xì)胞盛裝容器401。
關(guān)閉控制夾 、 。39、根據(jù)需要補(bǔ)充培養(yǎng)基的量，重復(fù)步驟38，至細(xì)胞盛裝容器內(nèi)的培養(yǎng)基的量達(dá)到要求。如后續(xù)使用生物反應(yīng)器平臺(tái)操作，接步驟40 ;如后續(xù)使用轉(zhuǎn)瓶操作，接步驟41。40、制備的細(xì)胞后續(xù)使用生物反應(yīng)器平臺(tái)操作，將控制夾 所在的硅膠管的非細(xì)
胞盛裝容器端與不銹鋼五通管分離。使得細(xì)胞盛裝容器成為獨(dú)立單元，可轉(zhuǎn)移到生物反應(yīng)器平臺(tái)進(jìn)行后續(xù)操作，細(xì)胞盛裝容器也為后續(xù)操作預(yù)留有包裝紙包裝的無(wú)菌連接頭，可供連接時(shí)使用。41、 制備的細(xì)胞后續(xù)使用轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng)，將細(xì)胞分散容器202的第二管道2022和第一四通管703之間的硅膠管，從蠕動(dòng)泵上卸下。將細(xì)胞盛裝容器401的第三管道4013和第二三通管702之間的硅膠管，安裝到蠕動(dòng)泵上。將細(xì)胞盛裝單元4的連接頭去掉包裝紙與
轉(zhuǎn)瓶分裝端口的連接頭連接，打開(kāi)控制夾 ,打開(kāi)與轉(zhuǎn)瓶相連的各個(gè)硅膠管上的控制夾，
蠕動(dòng)泵針對(duì)細(xì)胞盛裝容器401呈排液狀態(tài)，啟動(dòng)蠕動(dòng)泵，將細(xì)胞流轉(zhuǎn)到各個(gè)轉(zhuǎn)瓶，各個(gè)轉(zhuǎn)瓶?jī)?nèi)的細(xì)胞達(dá)到一定體積，關(guān)閉各自對(duì)應(yīng)的控制夾。所有流轉(zhuǎn)分裝結(jié)束，關(guān)閉蠕動(dòng)泵。關(guān)控制
夾 。無(wú)菌條件下，拔掉轉(zhuǎn)瓶進(jìn)液不銹鋼管上的硅膠管，將無(wú)菌堵頭連接到轉(zhuǎn)瓶的進(jìn)液不
銹鋼管上。轉(zhuǎn)瓶送到溫室轉(zhuǎn)瓶機(jī)上培養(yǎng)。42、使用結(jié)束，將裝置拆卸、清洗、烤干,備用。計(jì)數(shù)制備的原代雞胚成纖維細(xì)胞，獲得細(xì)胞4.5X IO10個(gè)-6.0X 101°個(gè)，單胚細(xì)胞產(chǎn)量1.5X IO8個(gè)-2.0X IO8個(gè)，活率80%以上。如定容終體積36000ml，則細(xì)胞密度1.25X 106個(gè)/ml -1.67X IO6個(gè)/ml，作為種細(xì)胞可供IOL轉(zhuǎn)瓶36個(gè)；如定容終體積10000ml，則細(xì)胞密度 4.5X IO6 個(gè)/ml-6.0X IO6 個(gè)/ml，可為 2.5g /L cytodexl 微載體的IOL體積生物反應(yīng)器做種細(xì)胞。相比之下，采用傳統(tǒng)方法制備原代雞胚成纖維細(xì)胞，每次最多操作量為雞胚20-30枚。使用本實(shí)用新型的大規(guī)模封閉式原代細(xì)胞制備裝置制備的原代細(xì)胞與傳統(tǒng)方法比較，生產(chǎn)規(guī)模是傳統(tǒng)法的10倍甚至更高，可有效地解決原代細(xì)胞大量制備工作量大、易污染的問(wèn)題，滿足規(guī)?；a(chǎn)的需求。實(shí)施例2:利用大規(guī)模封閉式原代細(xì)胞制備裝置制備原代地鼠腎細(xì)胞本實(shí)施例的動(dòng)力系統(tǒng)采用蠕動(dòng)泵、微型氣泵和磁力攪拌組件。1、將清洗干凈、40°C _60°C烘干的各個(gè)容器和組件按照?qǐng)D1-5進(jìn)行組裝和連接，用包裝無(wú)菌物品的包裝紙包裝組織進(jìn)入端口、分裝用的連接頭、洗液存放容器的連接頭、消化液存放容器的連接頭、培養(yǎng)基存放容器的連接頭。2、容器蓋子與瓶體間呈旋松狀態(tài)，細(xì)胞過(guò)濾器蓋子與圓錐體外壁呈旋松狀態(tài)，121°C、30min濕熱滅菌，滅菌結(jié)束后立即旋緊各個(gè)蓋子。3、按照?qǐng)D1安裝控制夾8 (操作步驟中未提及的控制夾都處于關(guān)閉狀態(tài))。4、無(wú)菌條件下，洗液存放容器102的連接頭去掉包裝紙與濾芯式過(guò)濾器的出液端
連接頭連接，打開(kāi)控制夾 ,濾芯式過(guò)濾器過(guò)濾得到的無(wú)菌洗液4L-6L直接進(jìn)入洗液存放容器102，關(guān)閉控制夾 。5、無(wú)菌條件下，消化液存放容器103的連接頭去掉包裝紙與濾芯式過(guò)濾器的出液端連接頭連接，打開(kāi)控制夾@ ,濾芯式過(guò)濾器過(guò)濾得到的無(wú)菌消化液2L-5L直接進(jìn)入消化
液存放容器103，關(guān)閉控制夾@。6、無(wú)菌條件下，培養(yǎng)基存放容器201的連接頭去掉包裝紙與濾芯式過(guò)濾器的出液端連接頭連接，打開(kāi)控制夾@ ,濾芯式過(guò)濾器過(guò)濾得到的無(wú)菌培養(yǎng)基10L-40L直接進(jìn)入培
養(yǎng)基存放容器，關(guān)閉控制夾@。7、取12-14日齡的健康地鼠，經(jīng)無(wú)菌手續(xù)取腎，放于組織絞碎機(jī)的盛裝桶內(nèi)，開(kāi)啟組織絞碎機(jī)，將地鼠腎組織剪切為小塊，使其橫徑小于6mm。加入洗液300ml (此處的洗液為另行配制和除菌的)至組織絞碎機(jī)的盛裝桶內(nèi)。8、將細(xì)胞分散容器202的第二管道2022和第一四通管703之間的硅膠管，安裝到
螺動(dòng)栗上。9、打開(kāi)控制夾⑦、⑩，蠕動(dòng)泵針對(duì)細(xì)胞分散容器202呈進(jìn)液狀態(tài)，啟動(dòng)蠕動(dòng)泵，將培養(yǎng)基2L-4L流轉(zhuǎn)到細(xì)胞分散容器202，關(guān)閉蠕動(dòng)泵，關(guān)閉控制夾⑦、⑩。10、在消化容器105的空氣過(guò)濾器5上口連接微型氣泵。11、打開(kāi)控制夾①，微型氣泵針對(duì)消化容器105排氣狀態(tài)，去掉組織進(jìn)入端口 101的包裝紙，組織進(jìn)入端口 101的入口端置于組織絞碎機(jī)的盛裝桶內(nèi)，啟動(dòng)微型氣泵，將地鼠腎組織流轉(zhuǎn)到消化容器，關(guān)閉微型氣泵，關(guān)閉控制夾①。12、打開(kāi)控制夾②，微型氣泵針對(duì)消化容器105排氣狀態(tài)，啟動(dòng)微型氣泵，將2L-3L洗液流轉(zhuǎn)到消化容器105，關(guān)閉微型氣泵，關(guān)閉控制夾②。13、打開(kāi)磁力攪拌器602，使磁力攪拌子601在消化容器105內(nèi)轉(zhuǎn)動(dòng)，洗液與組織充分接觸，lmin-3min,關(guān)閉磁力攪拌器602，靜置使組織沉降。14、打開(kāi)控制夾④，微型氣泵針對(duì)消化容器105呈進(jìn)氣狀態(tài)，啟動(dòng)微型氣泵，將消化容器內(nèi)2L-3L洗液流轉(zhuǎn)到廢液存放容器104，關(guān)閉微型氣泵，關(guān)閉控制夾④。15、重復(fù)步驟12-14的操作。16、打開(kāi)控制夾③，微型氣泵針對(duì)消化容器105呈排氣狀態(tài)，啟動(dòng)微型氣泵，將消化液IL流轉(zhuǎn)到消化容器105，關(guān)閉微型氣泵，關(guān)閉控制夾③。17、打開(kāi)磁力攪拌器602，使磁力攪拌子601在消化容器內(nèi)轉(zhuǎn)動(dòng)，消化液與組織充分接觸，0.5min-lmin，關(guān)閉磁力攪拌器602，靜置使組織沉降。18、打開(kāi)控制夾④，微型氣泵針對(duì)消化容器105呈進(jìn)氣狀態(tài)，啟動(dòng)微型氣泵，將消化容器內(nèi)IL消化液流轉(zhuǎn)到廢液存放容器104，關(guān)閉微型氣泵，關(guān)閉控制夾④。19、重復(fù)步驟16的操作。20、打開(kāi)磁力攪拌器602，使磁力攪拌子601在消化容器內(nèi)轉(zhuǎn)動(dòng)，消化液與組織充分接觸，10min-40min，關(guān)閉磁力攪拌器，靜置使未分散的大塊組織沉降。21、從消化容器105的空氣過(guò)濾器5上口卸下微型氣泵。22、打開(kāi)控制夾⑤、⑥，蠕動(dòng)泵針對(duì)細(xì)胞分散容器202呈進(jìn)液狀態(tài)，啟動(dòng)蠕動(dòng)泵，將分散了的小塊地鼠腎組織IL流轉(zhuǎn)到分散容器，關(guān)閉蠕動(dòng)泵，關(guān)閉控制夾⑤、⑥。23、在消化容器105的空氣過(guò)濾器5上口連接微型氣泵。24、重復(fù)步驟19-23的操作，根據(jù)剩余組織的多少確定重復(fù)次數(shù)，重復(fù)次數(shù)為O次到多次。25、打開(kāi)控制夾⑥、⑧，蠕動(dòng)泵針對(duì)細(xì)胞分散容器202呈排液狀態(tài)，啟動(dòng)蠕動(dòng)泵，將組織在細(xì)胞分散容器202內(nèi)循環(huán)，組織撞擊容器內(nèi)壁，使得已經(jīng)分散的組織在機(jī)械撞擊的情況下進(jìn)一步分散成小塊，達(dá)到3倍體積(I倍體積:細(xì)胞分散容器內(nèi)混合液的總體)循環(huán)時(shí)(蠕動(dòng)泵設(shè)置的速度和時(shí)間，可以控制液體循環(huán)量)，關(guān)閉蠕動(dòng)泵，關(guān)閉控制夾⑥、⑧。26、打開(kāi)控制夾⑦、⑨，蠕動(dòng)泵針對(duì)細(xì)胞分散容器202呈排液狀態(tài)，啟動(dòng)蠕動(dòng)泵，將小塊組織在分散容器內(nèi)循環(huán)，小塊組織撞擊容器壁，使得已經(jīng)分散的小塊組織在機(jī)械撞擊的情況下進(jìn)一步分散成單個(gè)細(xì)胞，達(dá)到3倍體積循環(huán)時(shí)，關(guān)閉蠕動(dòng)泵，關(guān)閉控制夾⑨，此時(shí)控制夾⑦打開(kāi)。27、打開(kāi)控制夾、 、 (此時(shí)控制夾打開(kāi)⑦、 、⑩、 )，蠕動(dòng)泵針對(duì)細(xì)
胞分散容器202呈排液狀態(tài)，啟動(dòng)蠕動(dòng)泵，將分散的細(xì)胞通過(guò)細(xì)胞過(guò)濾器301，流轉(zhuǎn)到細(xì)胞盛裝容器401。28、組織沉渣過(guò)多，過(guò)濾受阻時(shí)，關(guān)閉控制夾 ,打開(kāi)控制夾 (此時(shí)控制夾⑦、 、 、 打開(kāi))繼續(xù)過(guò)濾。29、組織沉渣過(guò)多，過(guò)濾受阻時(shí)，關(guān)閉控制夾 ,打開(kāi)控制夾(Q (此時(shí)控制夾⑦、 、 、 打開(kāi))繼續(xù)過(guò)濾。濾器數(shù)量的設(shè)置根據(jù)具體情況而定。過(guò)濾結(jié)束，關(guān)閉蠕動(dòng)泵，關(guān)閉控制夾⑦、⑩、 、⑩。30、從消化容器105的空氣過(guò)濾器5上口卸下微型氣泵。31、在細(xì)胞盛裝容器401的空氣過(guò)濾器5上口連接微型氣泵。32、打開(kāi)控制夾 ,微型氣泵針對(duì)細(xì)胞盛裝容器401呈進(jìn)氣狀態(tài)，啟動(dòng)微型氣泵，
將細(xì)胞盛裝容器內(nèi)的細(xì)胞流轉(zhuǎn)到取樣瓶20ml-50ml，關(guān)閉微型氣泵。關(guān)閉控制夾(Q,從細(xì)胞盛裝容器401的空氣過(guò)濾器5上口卸下微型氣泵。33、取下取樣瓶402盛裝細(xì)胞的下部玻璃瓶，將細(xì)胞適當(dāng)倍數(shù)(5倍-50倍)稀釋，臺(tái)盼藍(lán)染色細(xì)胞，在細(xì)胞計(jì)數(shù)板上計(jì)數(shù)活細(xì)胞數(shù)和死細(xì)胞數(shù)，通過(guò)計(jì)算得到每毫升溶液內(nèi)細(xì)胞數(shù)目和活細(xì)胞的比例，即細(xì)胞濃度和細(xì)胞活率。34、根據(jù)細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果和后續(xù)細(xì)胞液用量，補(bǔ)充培養(yǎng)基到細(xì)胞盛裝容器401。打開(kāi)控制夾⑦、⑩，蠕動(dòng)泵針對(duì)細(xì)胞分散容器202呈進(jìn)液狀態(tài)，啟動(dòng)蠕動(dòng)泵，將培養(yǎng)基流轉(zhuǎn)到分
散容器202，關(guān)閉蠕動(dòng)泵，關(guān)閉控制夾⑦、⑩。打開(kāi)控制夾 、_，蠕動(dòng)泵針對(duì)細(xì)胞分散容
器202呈排液狀態(tài)，啟動(dòng)蠕動(dòng)泵，將培養(yǎng)基由分散容器202流轉(zhuǎn)到細(xì)胞盛裝容器401。關(guān)閉
控制夾 、@。35、根據(jù)需要補(bǔ)充培養(yǎng)基的量，重復(fù)步驟34，至細(xì)胞盛裝容器內(nèi)的培養(yǎng)基的量達(dá)到要求。如后續(xù)使用生物反應(yīng)器平臺(tái)操作，接步驟36 ;如后續(xù)使用轉(zhuǎn)瓶操作，接步驟37。36、制備的細(xì)胞后續(xù)使用生物反應(yīng)器平臺(tái)操作，將控制夾 所在的硅膠管的非細(xì)
胞盛裝容器端與不銹鋼五通管分離。使得細(xì)胞盛裝容器成為獨(dú)立單元，可轉(zhuǎn)移到生物反應(yīng)器平臺(tái)進(jìn)行后續(xù)操作，細(xì)胞盛裝容器也為后續(xù)操作預(yù)留有包裝紙包裝的無(wú)菌連接頭，可供連接時(shí)使用。37、制備的細(xì)胞后續(xù)使用轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng)。將細(xì)胞盛裝單元的連接頭去掉包裝紙與轉(zhuǎn)瓶分裝端口的連接頭連接，在細(xì)胞盛裝容器401的空氣過(guò)濾器5上口連接微型氣泵，微型氣
泵針對(duì)細(xì)胞盛裝容器401進(jìn)氣狀態(tài)，開(kāi)控制夾 ,打開(kāi)與轉(zhuǎn)瓶相連的各個(gè)硅膠管上的控制
夾，開(kāi)微型氣泵，靠壓力將細(xì)胞流轉(zhuǎn)到各個(gè)轉(zhuǎn)瓶，各個(gè)轉(zhuǎn)瓶?jī)?nèi)的細(xì)胞達(dá)到一定體積，關(guān)閉各自對(duì)應(yīng)的控制夾。所有流轉(zhuǎn)分裝結(jié)束，關(guān)閉微型氣泵。無(wú)菌條件下，拔掉轉(zhuǎn)瓶進(jìn)液不銹鋼管上的硅膠管，將無(wú)菌堵頭連接到轉(zhuǎn)瓶的進(jìn)液不銹鋼管上。轉(zhuǎn)瓶送到溫室轉(zhuǎn)瓶機(jī)上培養(yǎng)。38、使用結(jié)束，將裝置拆卸、清洗、烤干，備用。
權(quán)利要求1.一種大規(guī)模封閉式原代細(xì)胞制備裝置，包括組織消化單元(1)、細(xì)胞分散單元(2)、細(xì)胞過(guò)濾單元(3)、細(xì)胞盛裝單元(4)以及動(dòng)力系統(tǒng)，各單元之間、各單元內(nèi)部通過(guò)硅膠管、多通管相連通，其特征在于: 所述組織消化單元⑴，包括組織進(jìn)入端口(101)、洗液存放容器(102)、消化液存放容器(103)、廢液存放容器(104)、消化容器(105)、空氣過(guò)濾器(5)、硅膠管和連接頭；所述洗液存放容器(102)、消化液存放容器(103)、廢液存放容器(104)、消化容器(105)上設(shè)帶有穿通蓋體的中空不銹鋼管道的密封蓋； 所述洗液存放容器(102)的密封蓋設(shè)有3根管道，第一管道(1021)上口和硅膠管相連，繼而硅膠管和空氣過(guò)濾器(5)相連；第二管道(1022)上口和硅膠管相連，繼而硅膠管和連接頭相連；第二管道(1022)下口和硅膠管相連，第三管道(1023)下口和硅膠管相連； 所述消化液存放容器(103)的密封蓋設(shè)有3根管道，第一管道(1031)上口和硅膠管相連，繼而硅膠管和空氣過(guò)濾器(5)相連；第二管道(1032)上口和硅膠管相連，繼而硅膠管和連接頭相連；第二管道(1032)下口和硅膠管相連，第三管道(1033)下口和硅膠管相連；所述廢液存放容器(104)的密封蓋設(shè)有2根管道，第一管道(1041)上口和硅膠管相連，繼而硅膠管和空氣過(guò)濾器(5)相連；第二管道(1042)下口和硅膠管相連； 所述消化容器(105)的密封蓋設(shè)有2根管道，第一管道(1051)上口和硅膠管相連，繼而硅膠管和空氣過(guò)濾器(5)相連；第二管道(1052)下口和硅膠管(1053)相連； 所述細(xì)胞分散單元⑵，包括培養(yǎng)基存放容器(201)、細(xì)胞分散容器(202)、空氣過(guò)濾器(5)、硅膠管和連接頭；所述培養(yǎng)基存放容器(201)、細(xì)胞分散容器(202)上設(shè)帶有穿通蓋體的中空不銹鋼管道的密封蓋； 所述培養(yǎng)基存放容器(201)的密封蓋設(shè)有3根管道，第一管道(2011)上口和硅膠管相連，繼而硅膠管和空氣過(guò)濾器(5)相連；第二管道(2012)上口和硅膠管相連，繼而硅膠管和連接頭相連；第二管道(2012)下口和硅膠管相連，第三管道(2013)下口和硅膠管相連；所述細(xì)胞分散容器(202)的密封蓋設(shè)有4根管道，第一管道(2021)上口和硅膠管相連，繼而硅膠管和空氣過(guò)濾器(5)相連；第二管道(2022)下口和硅膠管相連；下口為粗端口的第三管道(2023)和下口為細(xì)端口的第四管道(2024)在容器內(nèi)的長(zhǎng)度為細(xì)胞分散容器高度的1/3-1/2，且粗、細(xì)兩端口的出口朝向細(xì)胞分散容器(202)的容器內(nèi)壁； 所述細(xì)胞過(guò)濾單元⑶，包括兩個(gè)以上細(xì)胞過(guò)濾器(301 )，所述細(xì)胞過(guò)濾器(301)包括漏斗形外壁(3011)、過(guò)濾層(3012)、圓臺(tái)形過(guò)濾層支架(3013)、過(guò)濾器支架(3014)以及帶有穿通蓋體的中空不銹鋼管道(3015)的密封蓋；所述圓臺(tái)形過(guò)濾層支架(3013)由兩個(gè)不同直徑的圓形鐵圈通過(guò)4個(gè)支桿相連而成； 所述細(xì)胞盛裝單元⑷，包括細(xì)胞盛裝容器(401)、取樣瓶(402)、空氣過(guò)濾器(5)、硅膠管和連接頭；所述細(xì)胞盛裝容器(401)、取樣瓶(402)上設(shè)帶有穿通蓋體的中空不銹鋼管道的密封蓋；所述細(xì)胞盛裝容器(401)的密封蓋設(shè)有3根管道，第一管道(4011)上口和硅膠管相連，繼而硅膠管和空氣過(guò)濾器(5)相連；第二管道(4012)下口和硅膠管相連，第三管道(4013)下口和硅膠管相連；所述取樣瓶(402)的密封蓋設(shè)有2根管道，第一管道(4021)上口和硅膠管相連，繼而硅膠管和空氣過(guò)濾器(5)相連；第二管道(4022)下口和硅膠管相連；所述動(dòng)力系統(tǒng)包括磁力攪拌組件，蠕動(dòng)泵和/或微型氣泵；所述磁力攪拌組件包括位于消化容器(105)內(nèi)的磁力攪拌子(601)和位于消化容器(105)下方的磁力攪拌器(602)；所述多通管包括第一三通管(701)、第二三通管(702)、第一四通管(703)、第二四通管(704)、第三四通管(705)、五通管(706)、六通管(707)，其連接方式如下: 所述六通管(707)通過(guò)硅膠管分別和組織進(jìn)入端口( 101)、洗液存放容器(102)的第三管道(1023)上口、消化液存放容器(103)的第三管道(1033)上口、消化容器(105)的第二管道(1052)上口、第一三通管(701)、廢液存放容器(104)的第二管道(1042)上口相連； 所述第一三通管(701)通過(guò)硅膠管分別和六通管(707 )、細(xì)胞分散容器(202 )的第三管道(2023)上口、第一四通管(703)相連； 所述第一四通管(703)通過(guò)硅膠管分別和第一三通管(701)、細(xì)胞分散容器(202)的第二管道(2022)上口、第二四通管(704)、五通管(706)相連； 所述第二四通管(704)通過(guò)硅膠管分別和第一四通管(703)、細(xì)胞分散容器(202)的第四管道(2024)上口、培養(yǎng)基存放容器(201)的第三管道(2013)上口、第三四通管(705)相連； 所述第三四通管(705)通過(guò)硅膠管分別和第二四通管(704)、各細(xì)胞過(guò)濾器(301)的中空不銹鋼管道(3015)上口相連； 所述五通管(706)通過(guò)硅膠管分別和第一四通管(703)、各細(xì)胞過(guò)濾器(301)的漏斗形外壁(3011)出液口、細(xì)胞盛裝容器(401)的第二管道(4012)上口相連； 所述第二三通管(702)通過(guò)硅膠管分別和細(xì)胞盛裝容器(401)的第三管道(4013)上口、取樣瓶(402 )的第二管道(4022 )上口、供分裝用的連接頭相連。
2.按權(quán)利要求1所述的一種大規(guī)模封閉式原代細(xì)胞制備裝置，其特征在于:所述密封蓋，包括塑料外蓋、帶有穿通蓋`體的中空不銹鋼管道的不銹鋼內(nèi)蓋和密封圈，密封蓋與所密封的容器為螺紋連接。
3.按權(quán)利要求1所述的一種大規(guī)模封閉式原代細(xì)胞制備裝置，其特征在于:所述細(xì)胞分散容器(202)的第三管道(2023)出口內(nèi)徑為3-5mm，第四管道(2024)出口內(nèi)徑為l_3mm。
4.按權(quán)利要求1所述的一種大規(guī)模封閉式原代細(xì)胞制備裝置，其特征在于:所述消化容器(105)和細(xì)胞分散容器(202)為圓底容器，下設(shè)支架。
5.按權(quán)利要求1所述的一種大規(guī)模封閉式原代細(xì)胞制備裝置，其特征在于:所述洗液存放容器(102)、消化液存放容器(103)、培養(yǎng)基存放容器(201)上的連接頭與過(guò)濾除菌設(shè)備上配置的連接頭為插拔相連或螺紋相連。
6.按權(quán)利要求1所述的一種大規(guī)模封閉式原代細(xì)胞制備裝置，其特征在于:所述細(xì)胞盛裝單元⑷所配有的連接頭為供分裝用的連接頭，所述連接頭與細(xì)胞盛裝單元以外的后續(xù)細(xì)胞盛裝容器的連接頭呈插拔相連或螺紋相連。
7.按權(quán)利要求1所述的一種大規(guī)模封閉式原代細(xì)胞制備裝置，其特征在于:所述洗液存放容器(102)的第三管道(1023)下口設(shè)置的硅膠管、消化液存放容器(103)的第三管道(1033)下口設(shè)置的硅膠管、培養(yǎng)基存放容器(201)的第三管道(2013)下口設(shè)置的硅膠管、細(xì)胞分散容器(202)的第二管道(2022)下口設(shè)置的硅膠管、細(xì)胞盛裝容器(401)的第三管道(4013)下口設(shè)置的硅膠管，其長(zhǎng)度深達(dá)容器底部。
8.按權(quán)利要求1所述的一種大規(guī)模封閉式原代細(xì)胞制備裝置，其特征在于:所述洗液存放容器(102)的第二管道(1022)下口設(shè)置的硅膠管、消化液存放容器(103)的第二管道(1032)下口設(shè)置的硅膠管、廢液存放容器(104)的第二管道(1042)下口設(shè)置的硅膠管、培養(yǎng)基存放容器(201)的第二管道(2012)下口設(shè)置的硅膠管、細(xì)胞盛裝容器(401)的第二管道(4012)下口設(shè)置的硅膠管、取樣瓶(402)的第二管道(4022)下口設(shè)置的硅膠管，其管口高于容器內(nèi)液面高度。
9.按權(quán)利要求1所述的一種大規(guī)模封閉式原代細(xì)胞制備裝置，其特征在于:所述消化容器(105)的第二管道(1052) 下口連接的硅膠管(1053)，其管口距容器底部2_5cm。
專利摘要一種大規(guī)模封閉式原代細(xì)胞制備裝置，包括組織消化單元⑴、細(xì)胞分散單元⑴、細(xì)胞過(guò)濾單元⑶、細(xì)胞盛裝單元⑷以及動(dòng)力系統(tǒng)，各單元之間、各單元內(nèi)部通過(guò)硅膠管、多通管相連通。其優(yōu)點(diǎn)在于本裝置使用管線連接各個(gè)功能單元，使用空氣過(guò)濾器保證進(jìn)入體系的氣體是無(wú)菌的，連為一體的裝置使得原代細(xì)胞的制備全程是相對(duì)密閉的，減少了內(nèi)容物與外環(huán)境接觸的次數(shù)，比傳統(tǒng)原代細(xì)胞制備的操作方法降低了污染幾率；降低了人工操作的勞動(dòng)強(qiáng)度，比傳統(tǒng)操作方法提高了工作效率，放大了生產(chǎn)規(guī)模；使用了自體循環(huán)，模擬吹打法制備原代細(xì)胞，對(duì)細(xì)胞的損傷小，所獲細(xì)胞的活力高。本裝置可用于生物制品行業(yè)大規(guī)模制備原代細(xì)胞。
文檔編號(hào)C12M3/00GK202925027SQ201220465748

公開(kāi)日2013年5月8日 申請(qǐng)日期2012年9月13日 優(yōu)先權(quán)日2012年9月13日
發(fā)明者李晶梅, 漆世華, 溫文生, 秦紅剛, 肖敏, 李偉, 張萍, 薛霜, 謝紅玲, 馮釗, 吳玉石 申請(qǐng)人:武漢中博生物股份有限公司