專利名稱：雞肉品質(zhì)性狀相關(guān)基因—Akirin2基因SNP分型試劑盒的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本 實(shí)用新型屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，利用PCR-RFLP技術(shù)檢測提供一種雞肉品質(zhì)性狀相關(guān)基因一Akirin2基因SNP分型的試劑盒。
背景技術(shù)：
Akirin2是重要的肌源性因子，受到MSTN基因的調(diào)控，其表達(dá)可促使細(xì)胞生長和成肌細(xì)胞融合，最終導(dǎo)致肌細(xì)胞肥大，Akirin2基因可促進(jìn)白細(xì)胞介素6 (IL-6)的分泌，而IL-6是骨骼肌再生過程中的分泌因子，不僅能調(diào)節(jié)骨骼肌再生，而且其表達(dá)量在不同類型的肌纖維中也存在差異。Akirin2參與機(jī)體生長代謝過程，尤其在肌原纖維更新和宰后嫩化中扮演重要角色。肌纖維是構(gòu)成肌肉組織的基本單位，不同類型的肌纖維在所含蛋白質(zhì)類型、收縮特性、代謝特性等方面差異較大，因此由不同類型的肌纖維構(gòu)成的肌肉之間也存在較大差異，并最終影響到肌肉品質(zhì)(Karlsson et al. 1999 ；Klont et al. 1998)。說明Akirin2基因?qū)﹄u的肌肉品質(zhì)起著重要的調(diào)控作用。單核苷酸多態(tài)性(single nucleotide polymorphism, SNP),作為第三代遺傳標(biāo)記已得到飛速發(fā)展，目前已經(jīng)有多種發(fā)展成熟的檢測技術(shù)，如單鏈構(gòu)象多態(tài)性(SSCP)、限制性酶切片段長度多態(tài)性(RFLP)、DNA芯片以及Taqman探針等技術(shù)手段。限制性片段長度多態(tài)性聚合酶鏈反應(yīng)(PCR-RFLP)技術(shù)就是利用PCR擴(kuò)增目的DNA，擴(kuò)增產(chǎn)物再用特異性內(nèi)切酶消化切割成不同大小片段，直接在凝膠電泳上分型。該技術(shù)具有特異性高、檢測快速、通用性強(qiáng)、適用范圍廣、成本低廉等特點(diǎn)，目前已成功應(yīng)用于人類疾病及禽病相關(guān)基因分子標(biāo)記的SNP檢測和基因診斷試劑盒的研發(fā)。經(jīng)過對現(xiàn)有國內(nèi)外文獻(xiàn)和專利的檢索，至今未見有Akirin2基因多態(tài)性位點(diǎn)與雞肉品質(zhì)性狀相關(guān)性的報(bào)道。

實(shí)用新型內(nèi)容本實(shí)用新型的目的是為了給雞肌肉品質(zhì)性狀相關(guān)基因一Akirin2基因C397T的檢測提供一種準(zhǔn)確性高、快速、價(jià)格低廉的基因分型試劑盒。本實(shí)用新型的目的是通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的雞肉品質(zhì)性狀相關(guān)基因一Akirin2基因SNP分型試劑盒,其特征在于,所述的試劑盒由盒體,盒體內(nèi)的襯墊,襯墊的各孔腔內(nèi)分別置入的用于Akirin2基因PCR擴(kuò)增的上下游引物混合物、DNA Tag酶、擴(kuò)增緩沖液、dNTP、Buffer和內(nèi)切酶組成。用于Akirin2基因PCR擴(kuò)增的上下游引物混合物，引物信息如下上游引物5、ATGCAA AA G CTA G CA GTC TAT G Τ-3Λ下游引物5Λ- G G A G A G CCT G A G AA G G A G TT G -3Λ。本試劑盒使用方法I、PCR擴(kuò)增SNP位點(diǎn)所在片段I) PCR擴(kuò)增反應(yīng)體系準(zhǔn)備[0013]PCR的反應(yīng)體系為20μ1，其中包括擴(kuò)增緩沖液(IOXbuffer)2. 5μ12. 5mM dNTP2. Ομ 引物(5uM) μ 模板DNA (約 50 ng ) μ 5U/ul Taq0. 5M-I加水補(bǔ)至20μ1在200 ul的PCR薄壁管中，按照以上反應(yīng)體系加入試劑，充分混勻后短暫離心。2) PCR擴(kuò)增反應(yīng)程序設(shè)置在^pendorf PCR儀上設(shè)置如表I所述，程序設(shè)置完畢后，將PCR反應(yīng)管放入PCR儀進(jìn)行反應(yīng)擴(kuò)增。表I PCR擴(kuò)增反應(yīng)程序
權(quán)利要求1.一種雞肉品質(zhì)性狀相關(guān)基因一Akirin2基因SNP分型試劑盒，其特征在于，所述的試劑盒由盒體，盒體內(nèi)的襯墊，襯墊的各孔腔內(nèi)分別置入的用于Akirin2基因PCR擴(kuò)增的上下游引物混合物、DNA Tag酶、擴(kuò)增緩沖液、dNTP、Buffer和內(nèi)切酶組成。
專利摘要雞肉品質(zhì)性狀相關(guān)基因—Akirin2基因SNP分型試劑盒，屬于生物技術(shù)領(lǐng)域。雞肉品質(zhì)性狀相關(guān)基因—Akirin2基因SNP分型試劑盒，其特征在于，所述的試劑盒由盒體，盒體內(nèi)的襯墊，襯墊的各孔腔內(nèi)分別置入的引物混合物P、DNATag酶、擴(kuò)增緩沖液、dNTP、Buffer和內(nèi)切酶組成。本實(shí)用新型通過設(shè)計(jì)特異性引物，PCR擴(kuò)增和RFLP方法，使得產(chǎn)物更具特異性，保證了SNP分型的準(zhǔn)確性。本實(shí)用新型設(shè)計(jì)合理，使用方便、結(jié)果可靠且成本低廉。
文檔編號C12M1/34GK202658155SQ2012202225
公開日2013年1月9日 申請日期2012年5月17日 優(yōu)先權(quán)日2012年5月17日
發(fā)明者趙振華, 黎壽豐, 黃華云, 李春苗 申請人:江蘇省家禽科學(xué)研究所