專利名稱：硫酸小諾霉素的膜分離提取方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種膜分離提取方法，具體涉及硫酸小諾霉素的膜分離提取方法。
背景技術(shù)：
硫酸小諾霉素，為白色或類白色的疏松固體或粉末；無臭，有引濕性。其在水中易溶，在甲醇、こ醇、丙酮、こ酸こ酯或三氯甲烷中幾乎不溶。為氨基糖苷類抗生素，它阻礙蛋白質(zhì)合成，對革蘭陰性菌和革蘭陽性菌的敏感菌顯示抗菌活性。用于革蘭陰性桿菌所致的各種感染，如菌血癥、呼吸系統(tǒng)、膽管、尿路感染等。局部滴眼治療敏感菌引起的眼瞼炎、淚囊炎、結(jié)膜炎、角膜炎等。現(xiàn)有エ藝硫酸小諾霉素由絳紅小單孢菌201-9-8-53-84-37#(Micromonospora purpura 201-9-8-53-84_37#)生成。絳紅小單抱菌 201-9-8-53-84_37#(Micromonospora purpura 201-9-8-53-84_37#),為放線菌屬，小單抱菌科，已于中國典型 培養(yǎng)物保藏中心保藏，保藏號為=CCTCC NO M 2012471 ;保藏單位地址中國武漢武漢大學(xué)，保藏日期2012年11月21日?，F(xiàn)有的硫酸小諾霉素提取技術(shù)，是將硫酸小諾霉素解析液，經(jīng)711型強(qiáng)堿性陰離子交換樹脂床，動態(tài)吸附色素后再經(jīng)真空薄膜濃縮塔，用蒸汽加熱蒸發(fā)溶劑，得原體積1/40的濃縮液，該濃縮液最后用粉末狀活性炭吸附殘留色素，從而達(dá)到エ藝要求。該エ藝流程復(fù)雜、周期長、能耗高，有效成分流失較嚴(yán)重，產(chǎn)品得率低，且所使用的有機(jī)溶剤，不僅增加了提取成本，而且易對環(huán)境造成嚴(yán)重的污染。如《年產(chǎn)15噸硫酸小諾霉素エ廠設(shè)計》中選用傳統(tǒng)的培養(yǎng)基配方和傳統(tǒng)エ藝，硫酸小諾霉素解析液經(jīng)預(yù)處理、離子交換樹脂吸附、蒸汽濃縮、轉(zhuǎn)鹽、脫色等エ藝制得產(chǎn)品，毎年約損耗20噸樹脂，造成大量的浪費。為優(yōu)化工藝流程，提高產(chǎn)品質(zhì)量和穩(wěn)定性，節(jié)約成本，尋求新的生產(chǎn)エ藝方法迫在眉睫。本發(fā)明的背景技術(shù)如下
某傳統(tǒng)エ藝甲如下
A、小諾霉素種子的制備
al、母瓶斜面培養(yǎng)母瓶傳統(tǒng)培養(yǎng)基配方；于35°C培養(yǎng)6-7天；
a2、子瓶斜面培養(yǎng)子瓶傳統(tǒng)培養(yǎng)基；于37で培養(yǎng)10-15天，制成孢子，真空干燥保存?zhèn)?br> 用；
a3、孢子懸浮液將子瓶斜面培養(yǎng)的孢子制成懸浮液；
B、硫酸小諾霉素發(fā)酵液的制備
bl、一級種子罐培養(yǎng)一級種子傳統(tǒng)培養(yǎng)基；于35_37°C,通氣1:2V/V. m,攪拌速度320-350rpm, PH 自然，培養(yǎng)時間 40_45h ；
b2、ニ級種子罐培養(yǎng)ニ級種子傳統(tǒng)培養(yǎng)基；于33-35°C，通氣1:1-1. 5V/V. m，攪拌速度250-300rpm, PH 自然，培養(yǎng)時間 13_15h ；
b3、將培養(yǎng)的種子以10%的接種量接入發(fā)酵瓶，于32-34°C培養(yǎng)5-7天得發(fā)酵液，其中攪拌功率 2-4KW/m3，轉(zhuǎn)速 150_180r/min，空氣流量 50_70m3/m3. h,罐壓 0. 03-0. 05Mpa ；
C、硫酸小諾霉素解析液的制備Cl、酸化除雜加發(fā)酵液質(zhì)量I倍量的98%硫酸酸化過濾得酸化液，除去雜菌和其他雜
質(zhì)；
c2、中和加3mol/L的NaOH將酸化液中和至PH為7 ; c3、732樹脂吸附；
經(jīng)711型強(qiáng)堿性陰離子交換樹脂床，動態(tài)吸附色素后再經(jīng)真空薄膜濃縮塔，用蒸汽加熱蒸發(fā)溶劑，得原體積1/40的濃縮液，該濃縮液最后用粉末狀活性炭吸附殘留色素，從而達(dá)到エ藝要求。某傳統(tǒng)エ藝こ，如《年產(chǎn)15噸硫酸小諾霉素エ廠設(shè)計》，與某傳統(tǒng)エ藝甲有諸多相似之處。
為彌補(bǔ)上述現(xiàn)有技術(shù)的缺陷，目前最需要解決的問題是優(yōu)化工藝流程，降低有效成分損耗，提高產(chǎn)品得率，穩(wěn)定產(chǎn)品質(zhì)量，降低能源及物料消耗，減少污染物排放，降低生產(chǎn)成本。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供ー種硫酸小諾霉素的膜分離提取方法。主要的步驟包括硫酸小諾霉素解析液的獲得，硫酸小諾霉素解析液的超濾膜脫色エ藝，硫酸小諾霉素解析液的納濾膜濃縮エ藝。本發(fā)明的目的ー是以超濾膜脫色エ藝替代傳統(tǒng)エ藝的711型強(qiáng)堿性陰離子交換樹脂床脫色エ藝，以納濾膜濃縮エ藝替代傳統(tǒng)エ藝的蒸汽濃縮エ藝，減少樹脂的浪費，以及能源的大量損耗。本發(fā)明的目的ニ是通過改進(jìn)培養(yǎng)基配方，并與恰當(dāng)?shù)某瑸V膜脫色エ藝、納濾膜濃縮エ藝結(jié)合，例如超濾膜的截留分子量、納濾膜的孔徑、操作壓力、透過流量等的優(yōu)化，不僅可以減少樹脂的浪費，以及能耗的大量損耗，還可以制備有效成分含量更高的硫酸小諾霉素，可提高產(chǎn)品的效價和純度。在獲得較高效價產(chǎn)品的前提下，合適的培養(yǎng)基配方，可有效減少雜質(zhì)的含量，進(jìn)而減少超濾膜脫色エ藝的環(huán)節(jié)，例如超濾膜單元件可由十個單元減為六個單元。本發(fā)明特別強(qiáng)調(diào)本發(fā)明的主要技術(shù)特征在于超濾膜脫色エ藝、納濾膜濃縮エ藝。硫酸小諾霉素解析液的獲得并非本發(fā)明的主要技術(shù)特征，硫酸小諾霉素解析液可以依據(jù)《年產(chǎn)15噸硫酸小諾霉素エ廠設(shè)計》的技術(shù)提示獲得，也可以依據(jù)其他培養(yǎng)基配方培養(yǎng)和分離獲得。硫酸小諾霉素屬于氨基酸苷類廣譜抗生素，它可以由一株絳紅小單孢菌201-9-8-53-84-37# (Micromonospora purpura 201-9-8-53-84_37#)產(chǎn)生。絳紅小單孢菌 201-9-8-53-84_37# (Micromonospora purpura 201-9-8-53-84_37#),為放線菌屬，小單孢菌科，已于中國典型培養(yǎng)物保藏中心保藏，保藏號為=CCTCC NO M 2012471 ;保藏單位地址中國武漢武漢大學(xué)，保藏日期2012年11月21日。膜分離技術(shù)的工作原理是，以選擇性透過膜為分離介質(zhì)，在膜兩側(cè)加以某種推動力。使原料側(cè)組分選擇性地透過膜，從而達(dá)到分離或提純的目的。根據(jù)膜的選擇透過性和膜孔徑的大小不同，可有選擇性地將不同粒徑的物質(zhì)濃縮分離，回收有用物質(zhì)。膜的孔徑一般為微米級，依據(jù)其孔徑的不同(或稱為截留分子量)，可將膜分為微濾膜(MF)、超濾膜(UF)、納濾膜(NF)和反滲透膜(RO)等。其中，超濾膜是ー種孔徑規(guī)格一致，額定孔徑范圍為0. 001-0. 02微米的微孔過濾膜。而納濾膜是允許溶劑分子或某些低分子量溶質(zhì)或低價離子透過的半透膜。膜分離過程中不發(fā)生相變，分離系數(shù)較大，節(jié)能、高效，無二次污染，可在常溫下連續(xù)操作，特別適用于熱敏性物質(zhì)。且該過程無需從外界加入其它物質(zhì)，這樣在避免有效成分被破壞的同時，還可節(jié)約成本，減少污染物排放。本發(fā)明的技術(shù)方案如下
A、小諾霉素種子的制備
取絳紅小單孢菌(Micromonospora purpura),植入母瓶進(jìn)行培養(yǎng)；al、母瓶斜面培養(yǎng)培養(yǎng)基由下述重量配比的原輔料制成，可溶性淀粉8-12份、氯化鈉0. 3-0. 8份、磷酸氫ニ鉀0. 2-0. 5份、硝酸鉀0. 8-1. 2份、天冬素0. 01-0. 03份、硫酸鎂0. 3-0. 7份、麩皮15-20份、甘油0. 3-0. 8份、瓊脂16-20份；于35°C培養(yǎng)6-7天；
a2、子瓶斜面培養(yǎng)培養(yǎng)基由下述重量配比的原輔料制成，可溶性淀粉10-15份、氯化鈉0. 3-0. 8份、磷酸氫ニ鉀0. 3-0. 6份、硝酸鉀1. 0-1. 5份、天冬素0. 02-0. 04份、硫酸鎂
0.3-0. 7份、麩皮16-22份、甘油0. 4-1. 0份、瓊脂18-22份；于37°C培養(yǎng)10-15天，制成孢子，真空干燥保存?zhèn)溆茫?br> a3、孢子懸浮液將子瓶斜面培養(yǎng)的孢子制成懸浮液；
B、硫酸小諾霉素發(fā)酵液的制備
bl、一級種子罐培養(yǎng)培養(yǎng)基由由下述重量配比的原輔料制成，黃豆餅粉12-18份、葡萄糖0. 8-1. 5份、玉米粉18-24份、魚粉1_3份、尿素0. 8-1. 2份、碳酸I丐0. 8-1. 2份、淀粉36-45 份；于 35-370C，通氣 1: 2V/V. m,攪拌速度 320-350rpm, PH 自然，培養(yǎng)時間 40_45h ；b2、ニ級種子罐培養(yǎng)培養(yǎng)基由由下述重量配比的原輔料制成，花生餅粉15-20份、葡萄糖1. 0-1. 8份、玉米粉20-26份、尿素0. 8-1. 2份、硝酸鉀0. 8-1. 2份、碳酸I丐0. 8-1. 2份、淀粉36-45份；于33-35°C，通氣1:1-1. 5V/V. m,攪拌速度250_300rpm，PH自然，培養(yǎng)時間13-15h ；
b3、將培養(yǎng)的種子以10%的接種量接入發(fā)酵瓶，于32-34°C培養(yǎng)5-7天得發(fā)酵液，其中攪拌功率 2-4KW/m3，轉(zhuǎn)速 150_180r/min，空氣流量 50_70m3/m3. h,罐壓 0. 03-0. 05Mpa ；
C、硫酸小諾霉素解析液的制備
Cl、酸化除雜加發(fā)酵液質(zhì)量I倍量的98%硫酸酸化過濾得酸化液，除去雜菌和其他雜
質(zhì)；
c2、中和加3mol/L的NaOH將酸化液中和至PH為7 ; c3、732樹脂吸附；
D、脫色エ序硫酸小諾霉素解析液經(jīng)超濾膜系統(tǒng)脫色；
其中的超濾膜系統(tǒng)，包括第一組超濾単元、第二組超濾単元；第一組超濾単元由第一組第一級超濾単元、第一組第二級超濾単元、第一組第三級超濾單元組成；第二組超濾単元由第二組第一級超濾単元、第二組第二級超濾単元、第二組第三級超濾單元組成；其中第一組第一級超濾単元、第一組第二級超濾単元和第一組第三級超濾単元依次連接，第二組第一級超濾単元、第二組第二級超濾単元和第二組第三級超濾単元依次連接；第一組超濾單元與第二組超濾単元并聯(lián)連接；脫色步驟硫酸小諾霉素解析液平行經(jīng)過第一組超濾単元和第二組超濾単元脫色，即硫酸小諾霉素解析液平行地依次經(jīng)過第一組第一級超濾単元、第一組第二級超濾単元、第ー組第三級超濾単元，和第二組第一級超濾単元、第二組第二級超濾単元、第二組第三級超濾單元，脫色后的硫酸小諾霉素解析液進(jìn)入濃縮エ序；
超濾膜系統(tǒng)工作參數(shù)如下超濾單元選用孔徑為截留1000-5000分子量的超濾膜，操作壓カ控制在0. 3-0. 8Mpa、透過流量為2-5T/h ；
E、濃縮エ序脫色后的硫酸小諾霉素解析液經(jīng)納濾膜系統(tǒng)濃縮；
其中的納濾膜系統(tǒng)，包括第一級納濾單元、第二級納濾單元、第三級納濾單元；其中第一級納濾単元、第二級納濾単元、第三級納濾単元依次連接；
濃縮步驟脫色后的硫酸小諾霉素解析液依次經(jīng)過第一級納濾単元、第二級納濾単元、 第三級納濾單元進(jìn)行濃縮；得到硫酸小諾霉素。納濾膜系統(tǒng)工作參數(shù)如下納濾單元選用孔徑為lnm-50nm的納濾膜；操作壓カ控制在1. 0-3. OMpa、透過流量為2-5T/h。本發(fā)明具有如下優(yōu)點
1、簡化傳統(tǒng)硫酸小諾霉素分離提取的エ藝流程，縮短生產(chǎn)周期；
2、避免產(chǎn)品在加工過程中有效成份的損耗或變質(zhì)，提高產(chǎn)品收率；
3、穩(wěn)定產(chǎn)品質(zhì)量；
4、膜分離不發(fā)生相變，在常溫下進(jìn)行，不添加其他物質(zhì)，降低能源及物料消耗，減少污染物排放，降低生產(chǎn)成本。


圖1為本發(fā)明超濾膜系統(tǒng)和納濾膜系統(tǒng)的結(jié)構(gòu)示意圖。附圖標(biāo)記第一組第一級超濾単元1、第一組第二級超濾単元2、第一組第三級超濾單元3，第二組第一級超濾単元4、第二組第二級超濾単元5、第二組第三級超濾単元6、第一級納濾単元7、第二級納濾単元8、第三級納濾単元9。
具體實施例下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明作進(jìn)ー步描述。實施例1、
硫酸小諾霉素(Micronomicin Sulfate)的膜分離提取方法,具體通過如下步驟獲得
A、小諾霉素種子的制備
取絳紅小單孢菌(Micromonospora purpura),植入母瓶進(jìn)行培養(yǎng)；al、母瓶斜面培養(yǎng)培養(yǎng)基由下述重量配比的原輔料制成，可溶性淀粉10份、氯化鈉0. 5份、磷酸氫ニ鉀0. 3份、硝酸鉀1. 0份、天冬素0. 02份、硫酸鎂0. 5份、麩皮18份、甘油0. 6份、瓊脂18份；于35°C培養(yǎng)7天；
a2、子瓶斜面培養(yǎng)培養(yǎng)基由下述重量配比的原輔料制成，可溶性淀粉13份、氯化鈉
0.5份、磷酸氫ニ鉀0. 4份、硝酸鉀1. 3份、天冬素0. 03份、硫酸鎂0. 5份、麩皮18份、甘油
0.8份、瓊脂20份；于37°C培養(yǎng)12天，制成孢子，真空干燥保存?zhèn)溆茫? a3、孢子懸浮液將子瓶斜面培養(yǎng)的孢子制成懸浮液；B、硫酸小諾霉素發(fā)酵液的制備
bl、一級種子罐培養(yǎng)培養(yǎng)基由由下述重量配比的原輔料制成，黃豆餅粉15份、葡萄糖1.2份、玉米粉22份、魚粉2份、尿素1. O份、碳酸鈣1. O份、淀粉40份；于37°C，通氣1: 2V/V. m，攪拌速度350rpm, PH自然，培養(yǎng)時間42h ；
b2、ニ級種子罐培養(yǎng)培養(yǎng)基由由下述重量配比的原輔料制成，花生餅粉18份、葡萄糖1.5份、玉米粉24份、尿素1. 0份、硝酸鉀1. 0份、碳酸鈣0. 8份、淀粉42份；于35°C，通氣1:1. 2V/V.m，攪拌速度280rpm, PH自然，培養(yǎng)時間15h ；
b3、將培養(yǎng)的種子以10%的接種量接入發(fā)酵瓶，于34°C培養(yǎng)6天得發(fā)酵液，其中攪拌功率 3KW/m3，轉(zhuǎn)速 160r/min，空氣流量 60m3/m3. h,罐壓 0. 04Mpa ；
C、硫酸小諾霉素解析液的制備
Cl、酸化除雜加發(fā)酵液質(zhì)量I倍量的98%硫酸酸化過濾得酸化液，除去雜菌和其他雜
質(zhì)；
c2、中和加3mol/L的NaOH將酸化液中和至PH為7 ; c3、樹脂吸附除雜；
D、脫色エ序硫酸小諾霉素解析液經(jīng)超濾膜系統(tǒng)脫色；
其中的超濾膜系統(tǒng)，包括第一組超濾単元、第二組超濾単元；第一組超濾単元由第一組第一級超濾単元1、第一組第二級超濾単元2、第一組第三級超濾単元3組成；第二組超濾單元由第二組第一級超濾単元4、第二組第二級超濾単元5、第二組第三級超濾単元6組成；其中第一組第一級超濾単元1、第一組第二級超濾単元2和第一組第三級超濾単元3依次連接，第二組第一級超濾単元4、第二組第二級超濾単元5和第二組第三級超濾単元6依次連接；第一組超濾単元與第二組超濾単元并聯(lián)連接；
脫色步驟硫酸小諾霉素解析液平行經(jīng)過第一組超濾単元和第二組超濾単元脫色，即硫酸小諾霉素解析液平行地依次經(jīng)過第一組第一級超濾単元1、第一組第二級超濾単元2、第一組第三級超濾単元3，和第二組第一級超濾単元4、第二組第二級超濾単元5、第二組第三級超濾単元6，脫色后的硫酸小諾霉素解析液進(jìn)入濃縮エ序；
超濾膜系統(tǒng)工作參數(shù)如下第一組第一級超濾単元1、第二組第一級超濾単元4選用孔徑為截留5000分子量的超濾膜，第一組第二級超濾単元2、第二組第二級超濾単元5選用孔徑為截留4000分子量的超濾膜，第一組第三級超濾單元組成3、第二組第三級超濾単元6選用孔徑為截留3000分子量的超濾膜，操作壓カ均控制在0. 5Mpa、透過流量為3T/h ；
E、濃縮エ序脫色后的硫酸小諾霉素解析液經(jīng)納濾膜系統(tǒng)濃縮；
其中的納濾膜系統(tǒng)，包括第一級納濾単元7、第二級納濾単元8、第三級納濾単元9 ;其中第一級納濾単元7、第二級納濾単元8、第三級納濾単元9依次連接；
濃縮步驟脫色后的硫酸小諾霉素解析液依次經(jīng)過第一級納濾単元7、第二級納濾單元8、第三級納濾単元9進(jìn)行濃縮；得到硫酸小諾霉素。納濾膜系統(tǒng)工作參數(shù)如下第一級納濾単元7選用孔徑為35nm的納濾膜，第二級納濾單元8選用孔徑為20nm的納濾膜，第三級納濾単元9選用孔徑為IOnm的納濾膜；操作壓カ均控制在1. 5Mpa、透過流量為3T/h。實施例2、
超濾膜系統(tǒng)工作參數(shù)如下第一組第一級超濾単元1、第二組第一級超濾単元4選用孔徑為截留3000分子量的超濾膜，第一組第二級超濾単元2、第二組第二級超濾単元5選用孔徑為截留2000分子量的超濾膜，第一組第三級超濾單元組成3、第二組第三級超濾単元6選用孔徑為截留1000分子量的超濾膜，操作壓カ均控制在0. 3Mpa、透過流量為2T/h ;其余同實施例1。實施例3、
超濾膜系統(tǒng)工作參數(shù)如下第一組第一級超濾単元1、第二組第一級超濾単元4選用孔徑為截留4000分子量的超濾膜，第一組第二級超濾単元2、第二組第二級超濾単元5選用孔徑為截留3000分子量的超濾膜，第一組第三級超濾單元組成3、第二組第三級超濾単元6選用孔徑為截留2000分子量的超濾膜，操作壓カ均控制在0. 8Mpa、透過流量為5T/h ;其余同實施例1。實施例4、 納濾膜系統(tǒng)工作參數(shù)如下第一級納濾單元7選用孔徑為20nm的納濾膜，第二級納濾単元8選用孔徑為IOnm的納濾膜，第三級納濾単元9選用孔徑為5nm的納濾膜；操作壓カ均控制在1. OMpa、透過流量為2T/h ;其余同實施例1。實施例5、
納濾膜系統(tǒng)工作參數(shù)如下第一級納濾單元7選用孔徑為50nm的納濾膜，第二級納濾単元8選用孔徑為30nm的納濾膜，第三級納濾単元9選用孔徑為20nm的納濾膜；操作壓カ均控制在3. OMpa、透過流量為5T/h ;其余同實施例1。對比例1、
硫酸小諾霉素的膜分離提取方法，具體通過如下步驟獲得
A、小諾霉素種子的制備
硫酸小諾霉素屬于氨基酸苷類廣譜抗生素，它是由一株絳紅小單孢菌(Micromonospora purpura;廣生。al、母瓶斜面培養(yǎng)培養(yǎng)基由下述重量配比的原輔料制成，可溶性淀粉8份、碳酸鈣I份、磷酸氫ニ鉀0. 5份、硫酸鉀1. 0份、天冬素0. 02份、硫酸鎂0. 5份、麩皮20份、瓊脂18份；于35で培養(yǎng)7天；
a2、子瓶斜面培養(yǎng)培養(yǎng)基由下述重量配比的原輔料制成，可溶性淀粉10份、碳酸鈣I份、磷酸氫ニ鉀0. 6份、硫酸鉀1. 2份、天冬素0. 02份、硫酸鎂0. 5份、麩皮22份、瓊脂16份；于37°C培養(yǎng)12天，制成孢子，真空干燥保存?zhèn)溆茫籥3、孢子懸浮液將子瓶斜面培養(yǎng)的孢子制成懸浮液；
B、硫酸小諾霉素發(fā)酵液的制備
bl、一級種子罐培養(yǎng)培養(yǎng)基由由下述重量配比的原輔料制成，黃豆餅粉0.5份、葡萄糖4份、碳酸鈣0. 5份、淀粉55份、硫酸銨0. 05份、硝酸鉀0. 05份、蛋白胨0. 3份；于37°C，通氣1: 2V/V. m，攪拌速度350rpm，PH自然，培養(yǎng)時間42h ；
b2、ニ級種子罐培養(yǎng)培養(yǎng)基由由下述重量配比的原輔料制成，可溶性淀粉粉15份、葡萄糖3份、玉米粉15份、黃豆粉20份、蛋白胨2份、碳酸鈣5份、酵母粉2份；于35°C，通氣1:1. 2V/V.m，攪拌速度280rpm, PH自然，培養(yǎng)時間15h ；
b3、將培養(yǎng)的種子以10%的接種量接入發(fā)酵瓶，于34°C培養(yǎng)6天得發(fā)酵液，其中攪拌功率 3KW/m3，轉(zhuǎn)速 160r/min，空氣流量 60m3/m3. h,罐壓 0. 04Mpa ；C、硫酸小諾霉素解析液的制備
Cl、酸化除雜加發(fā)酵液質(zhì)量I倍量的98%硫酸酸化過濾得酸化液，除去雜菌和其他雜
質(zhì)；
c2、中和加3mol/L的NaOH將酸化液中和至PH為7 ; c3、樹脂吸附除雜；
D、脫色エ序硫酸小諾霉素解析液經(jīng)超濾膜系統(tǒng)脫色； 其中的超濾膜系統(tǒng)，包括第一組超濾単元、第二組超濾単元；第一組超濾単元由第一組第一級超濾単元1、第一組第二級超濾単元2、第一組第三級超濾単元3組成；第二組超濾單元由第二組第一級超濾単元4、第二組第二級超濾単元5、第二組第三級超濾単元6組成；其中第一組第一級超濾単元1、第一組第二級超濾単元2和第一組第三級超濾単元3依次連接，第二組第一級超濾単元4、第二組第二級超濾単元5和第二組第三級超濾単元6依次連接；第一組超濾単元與第二組超濾単元并聯(lián)連接；
脫色步驟硫酸小諾霉素解析液平行經(jīng)過第一組超濾単元和第二組超濾単元脫色，即硫酸小諾霉素解析液平行地依次經(jīng)過第一組第一級超濾単元1、第一組第二級超濾単元2、第一組第三級超濾単元3，和第二組第一級超濾単元4、第二組第二級超濾単元5、第二組第三級超濾単元6，脫色后的硫酸小諾霉素解析液進(jìn)入濃縮エ序；
超濾膜系統(tǒng)工作參數(shù)如下第一組第一級超濾単元1、第二組第一級超濾単元4選用孔徑為截留5000分子量的超濾膜，第一組第二級超濾単元2、第二組第二級超濾単元5選用孔徑為截留4000分子量的超濾膜，第一組第三級超濾單元組成3、第二組第三級超濾単元6選用孔徑為截留3000分子量的超濾膜，操作壓カ均控制在0. 5Mpa、透過流量為3T/h ；
E、濃縮エ序脫色后的硫酸小諾霉素解析液經(jīng)納濾膜系統(tǒng)濃縮；
其中的納濾膜系統(tǒng)，包括第一級納濾単元7、第二級納濾単元8、第三級納濾単元9 ;其中第一級納濾単元7、第二級納濾単元8、第三級納濾単元9依次連接；
濃縮步驟脫色后的硫酸小諾霉素解析液依次經(jīng)過第一級納濾単元7、第二級納濾單元8、第三級納濾単元9進(jìn)行濃縮；得到硫酸小諾霉素。納濾膜系統(tǒng)工作參數(shù)如下第一級納濾単元7選用孔徑為35nm的納濾膜，第二級納濾單元8選用孔徑為20nm的納濾膜，第三級納濾単元9選用孔徑為IOnm的納濾膜；操作壓カ均控制在1. 5Mpa、透過流量為3T/h。對比例2、
硫酸小諾霉素的膜分離提取方法，具體通過如下步驟獲得
A、小諾霉素種子的制備
硫酸小諾霉素屬于氨基酸苷類廣譜抗生素，它由ー株絳紅小單孢菌(Micromonosporapurpura)廣生。al、母瓶斜面培養(yǎng)培養(yǎng)基由下述重量配比的原輔料制成，可溶性淀粉8份、碳酸鈣I份、磷酸氫ニ鉀0. 5份、硫酸鉀1. 0份、天冬素0. 02份、硫酸鎂0. 5份、麩皮20份、瓊脂18份；于35で培養(yǎng)7天；
a2、子瓶斜面培養(yǎng)培養(yǎng)基由下述重量配比的原輔料制成，可溶性淀粉10份、碳酸鈣I份、磷酸氫ニ鉀0. 6份、硫酸鉀1. 2份、天冬素0. 02份、硫酸鎂0. 5份、麩皮22份、瓊脂16份；于37°C培養(yǎng)12天，制成孢子，真空干燥保存?zhèn)溆?；a3、孢子懸浮液將子瓶斜面培養(yǎng)的孢子制成懸浮液；
B、硫酸小諾霉素發(fā)酵液的制備
bl、一級種子罐培養(yǎng)培養(yǎng)基由由下述重量配比的原輔料制成，黃豆餅粉0.5份、葡萄糖4份、碳酸鈣0. 5份、淀粉55份、硫酸銨0. 05份、硝酸鉀0. 05份、蛋白胨0. 3份；于37°C，通氣1: 2V/V. m，攪拌速度350rpm，PH自然，培養(yǎng)時間42h ；
b2、ニ級種子罐培養(yǎng)培養(yǎng)基由由下述重量配比的原輔料制成，可溶性淀粉粉15份、葡萄糖3份、玉米粉15份、黃豆粉20份、蛋白胨2份、碳酸鈣5份、酵母粉2份；于35°C，通氣1:1. 2V/V.m，攪拌速度280rpm, PH自然，培養(yǎng)時間15h ；
b3、將培養(yǎng)的種子以10%的接種量接入發(fā)酵瓶，于34°C培養(yǎng)6天得發(fā)酵液，其中攪拌功率 3KW/m3，轉(zhuǎn)速 160r/min，空氣流量 60m3/m3. h,罐壓 0. 04Mpa ；
C、硫酸小諾霉素解析液的制備
Cl、酸化除雜加發(fā)酵液質(zhì)量I倍量的98%硫酸酸化過濾得酸化液，除去雜菌和其他雜
質(zhì)；
c2、中和加3mol/L的NaOH將酸化液中和至PH為7 ; c3、樹脂吸附除雜；
D、脫色エ序硫酸小諾霉素解析液經(jīng)超濾膜系統(tǒng)脫色；
其中的超濾膜系統(tǒng)，包括第一組超濾単元、第二組超濾単元；第一組超濾単元由第一組第一級超濾単元、第一組第二級超濾単元、第一組第三級超濾単元、第一組第四級超濾單元、第一組第五級超濾單元組成；第二組超濾単元由第二組第一級超濾単元、第二組第ニ級超濾單元、第二組第三級超濾単元、第二組第四級超濾単元、第二組第五級超濾單元組成；其中第一組第一級超濾単元、第一組第二級超濾単元、第一組第三級超濾単元、第一組第四級超濾単元、第一組第五級超濾単元依次連接，第二組第一級超濾単元、第二組第二級超濾單元、第二組第三級超濾単元、第二組第四級超濾単元、第二組第五級超濾単元依次連接；第一組超濾単元與第二組超濾単元并聯(lián)連接；
脫色步驟:硫酸小諾霉素解析液平行經(jīng)過第一組超濾単元和第二組超濾単元脫色，即硫酸小諾霉素解析液平行地依次經(jīng)過第一組第一級超濾単元、第一組第二級超濾単元、第ー組第三級超濾単元、第一組第四級超濾単元、第一組第五級超濾単元，和第二組第一級超濾單元、第二組第二級超濾単元、第二組第三級超濾単元、第二組第四級超濾単元、第二組第五級超濾単元，脫色后的硫酸小諾霉素解析液進(jìn)入濃縮エ序；
超濾膜系統(tǒng)工作參數(shù)如下第一組第一級超濾単元、第二組第一級超濾單元選用孔徑為截留5000分子量的超濾膜，第一組第二級超濾単元、第二組第二級超濾單元選用孔徑為截留4000分子量的超濾膜，第一組第三級超濾單元組成、第一組第四級超濾単元、第一組第五級超濾単元、第二組第三級超濾単元、第二組第四級超濾単元、第二組第五級超濾単元選用孔徑為截留3000分子量的超濾膜，操作壓カ均控制在0. 5Mpa、透過流量為3T/h ；
E、濃縮エ序脫色后的硫酸小諾霉素解析液經(jīng)納濾膜系統(tǒng)濃縮；
其中的納濾膜系統(tǒng)，包括第一級納濾單元、第二級納濾單元、第三級納濾單元；其中第一級納濾単元、第二級納濾単元、第三級納濾単元依次連接；
濃縮步驟脫色后的硫酸小諾霉素解析液依次經(jīng)過第一級納濾単元、第二級納濾単元、第三級納濾單元進(jìn)行濃縮；得到硫酸小諾霉素。
納濾膜系統(tǒng)工作參數(shù)如下第一級納濾單元選用孔徑為35nm的納濾膜，第二級納濾單元選用孔徑為20nm的納濾膜，第三級納濾單元選用孔徑為IOnm的納濾膜；操作壓カ均控制在1. 5Mpa、透過流量為3T/h。試驗例
試驗例1、濁度法測定硫酸小諾霉素的效價
分別取實施例1-5和對比例I和對比例2制備的硫酸小諾霉素，精密稱量，用滅菌水制成1000U/mg的溶液，分別精密吸取此液適量，用滅菌磷酸鹽緩沖液(PH=7. 0)稀釋制成10、20U/mg濃度的高低劑量溶液，高低計量劑間比為2:1，分別精密量取上述溶液各1. 0ml，置滅菌比色管中，各6管，分別加入3%大腸埃希菌液培養(yǎng)基9. 0ml，立即搖勻，在濁度測定儀中培養(yǎng)3.5h。使用微生物比濁儀，恒溫培養(yǎng)，定時振蕩，計算結(jié)果。陰性對照PH=7.0磷酸鹽緩沖液1. 0ml，加9. Oml未接種實驗菌的培養(yǎng)基。結(jié)果見表I。表I 濁度法測定硫酸小諾霉素的效價結(jié)果比較_
權(quán)利要求
1.硫酸小諾霉素的膜分離提取方法，其特征在于硫酸小諾霉素解析液經(jīng)超濾膜系統(tǒng)脫色，脫色后的硫酸小諾霉素解析液再經(jīng)納濾膜系統(tǒng)濃縮； 其中的超濾膜系統(tǒng)，包括第一組超濾單元、第二組超濾單元；第一組超濾單元由第一組第一級超濾單元(I)、第一組第二級超濾單元(2)、第一組第三級超濾單元(3)組成；第二組超濾單元由第二組第一級超濾單元(4)、第二組第二級超濾單元(5)、第二組第三級超濾單元(6)組成；其中第一組第一級超濾單元(I)、第一組第二級超濾單元(2)和第一組第三級超濾單元(3)依次連接，第二組第一級超濾單元(4)、第二組第二級超濾單元(5)和第二組第三級超濾單元(6)依次連接；第一組超濾單元與第二組超濾單元并聯(lián)連接； 脫色步驟硫酸小諾霉素解析液平行經(jīng)過第一組超濾單元和第二組超濾單元脫色，即硫酸小諾霉素解析液平行地依次經(jīng)過第一組第一級超濾單元(I)、第一組第二級超濾單元(2)、第一組第三級超濾單元(3)，和第二組第一級超濾單元(4)、第二組第二級超濾單元(5)、第二組第三級超濾單元￠)，脫色后的硫酸小諾霉素解析液進(jìn)入濃縮工序； 超濾膜系統(tǒng)工作參數(shù)如下第一組第一級超濾單元(I)、第二組第一級超濾單元(4)選用孔徑為截留5000分子量的超濾膜，第一組第二級超濾單元(2)、第二組第二級超濾單元(5)選用孔徑為截留4000分子量的超濾膜，第一組第三級超濾單元組成3、第二組第三級超濾單元(6)選用孔徑為截留3000分子量的超濾膜； 納濾膜系統(tǒng)，包括第一級納濾單元(7)、第二級納濾單元(8)、第三級納濾單元(9);其中第一級納濾單元(7)、第二級納濾單元(8)、第三級納濾單元(9)依次連接； 濃縮步驟脫色后的硫酸小諾霉素解析液依次經(jīng)過第一級納濾單元(7)、第二級納濾單元(8)、第三級納濾單元(9)進(jìn)行濃縮；得到硫酸小諾霉素； 納濾膜系統(tǒng)工作參數(shù)如下第一級納濾單元(7)選用孔徑為35nm的納濾膜，第二級納濾單元⑶選用孔徑為20nm的納濾膜，第三級納濾單元(9)選用孔徑為IOnm的納濾膜。
2.如權(quán)利要求1所述的硫酸小諾霉素的膜分離提取方法，其特征在于超濾膜系統(tǒng)工作參數(shù)中的操作壓力均控制在O. 5Mpa、透過流量為3T/h ;納濾膜系統(tǒng)工作參數(shù)中的操作壓力均控制在1. 5Mpa、透過流量為3T/h。
3.如權(quán)利要求1或2所述的硫酸小諾霉素的膜分離提取方法，其特征在于硫酸小諾霉素解析液通過如下步驟獲得， A、小諾霉素種子的制備 取絳紅小單孢菌，植入母瓶進(jìn)行培養(yǎng)；al、母瓶斜面培養(yǎng)培養(yǎng)基由下述重量配比的原輔料制成，可溶性淀粉10份、氯化鈉.O.5份、磷酸氫二鉀O. 3份、硝酸鉀1. O份、天冬素O. 02份、硫酸鎂O. 5份、麩皮18份、甘油.O.6份、瓊脂18份；于35°C培養(yǎng)7天； a2、子瓶斜面培養(yǎng)培養(yǎng)基由下述重量配比的原輔料制成，可溶性淀粉13份、氯化鈉.O.5份、磷酸氫二鉀O. 4份、硝酸鉀1. 3份、天冬素O. 03份、硫酸鎂O. 5份、麩皮18份、甘油.0.8份、瓊脂20份；于37°C培養(yǎng)12天，制成孢子，真空干燥保存?zhèn)溆茫? a3、孢子懸浮液將子瓶斜面培養(yǎng)的孢子制成懸浮液； B、硫酸小諾霉素發(fā)酵液的制備 bl、一級種子罐培養(yǎng)培養(yǎng)基由由下述重量配比的原輔料制成，黃豆餅粉15份、葡萄糖.1.2份、玉米粉22份、魚粉2份、尿素1. O份、碳酸鈣1. O份、淀粉40份；于37°C，通氣1:2V/V. m，攪拌速度350rpm, PH自然，培養(yǎng)時間42h ； b2、二級種子罐培養(yǎng)培養(yǎng)基由由下述重量配比的原輔料制成，花生餅粉18份、葡萄糖1.5份、玉米粉24份、尿素1. O份、硝酸鉀1. O份、碳酸鈣O. 8份、淀粉42份；于35°C，通氣1:1. 2V/V.m，攪拌速度280rpm, PH自然，培養(yǎng)時間15h ； b3、將培養(yǎng)的種子以10%的接種量接入發(fā)酵瓶，于34°C培養(yǎng)6天得發(fā)酵液，其中攪拌功率 3KW/m3，轉(zhuǎn)速 160r/min，空氣流量 60m3/m3. h,罐壓 O. 04Mpa ； C、硫酸小諾霉素解析液的制備 Cl、酸化除雜加發(fā)酵液質(zhì)量I倍量的98%硫酸酸化過濾得酸化液，除去雜菌和其他雜 質(zhì)； c2、中和加3mol/L的NaOH將酸化液中和至PH為7 ; c3、樹脂吸附除雜。
全文摘要
本發(fā)明涉及硫酸小諾霉素的膜分離提取方法。本發(fā)明的技術(shù)方案為硫酸小諾霉素解析液經(jīng)超濾膜系統(tǒng)脫色，其中超濾膜系統(tǒng)，包括6根超濾膜，每三根串聯(lián)為一組，二組并聯(lián)而成；再經(jīng)納濾膜系統(tǒng)濃縮，其中納濾膜系統(tǒng)，由3根納濾膜串聯(lián)而成。其具有工藝簡捷易操作，有效成分損失少，產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定，降低能源及物料消耗等優(yōu)點。
文檔編號C12R1/31GK103012514SQ201210565158
公開日2013年4月3日 申請日期2012年12月24日 優(yōu)先權(quán)日2012年12月24日
發(fā)明者黃武軍, 張威, 朱平, 丁平, 黎俊, 張良棟 申請人:江西制藥有限責(zé)任公司