專利名稱：使用簡并引物檢測(cè)海水中細(xì)菌過氧化氫酶多樣性的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于海洋微生物生態(tài)學(xué)領(lǐng)域，特別是涉及使用簡并引物檢測(cè)海水中細(xì)菌過氧化氫酶多樣性的方法。
背景技術(shù)：
生命活動(dòng)中，特別是有氧代謝過程中會(huì)產(chǎn)生過氧化氫。過氧化氫是ー種活性氧，氧化性強(qiáng)，危害性大。過氧化氫酶能迅速分解過氧化氫，保護(hù)生物分子免受氧化損傷；過氧化氫酶是嗜氧微生物生命活動(dòng)中一直保持活性的重要持家蛋白。海洋中廣泛存在低溫環(huán)境，低溫條件下氧氣溶解度増大，氧濃度提高使低溫微生物更容易受到活性氧的影響。過氧化氫酶是嗜氧低溫生物代謝必需的抗氧化酶。完成基因組測(cè)序的海洋低溫細(xì)菌都有過氧化氫酶基因，如Desulfotalea psychrophila, Colwellia psychrerythraea和Pseudoalteromonas haloplanktis等。過氧化氫酶研究對(duì)于認(rèn)識(shí)海洋微生物在低溫下有氧代謝活動(dòng)規(guī)律有重要意義。海水表層過氧化氫含量受到太陽紫外線輻射和降水的影響，某些地區(qū)表層海水中過氧化氫濃度可達(dá)I. 45 μ mol/L。生活在含高過氧化氫的表層海水中的細(xì)菌面臨氧化脅迫，推測(cè)這些細(xì)菌只有具備較高活性的過氧化氫酶才能維持代謝活動(dòng)正常進(jìn)行。表層海水中的微生物過氧化氫酶分解紫外輻射產(chǎn)生的過氧化氫，這ー過程放熱促進(jìn)海冰融化，具有重要的生態(tài)影響。為了深入認(rèn)識(shí)海洋微生物過氧化氫酶的生態(tài)作用，有必要建立研究微生物過氧化氫酶多樣性的方法。目前可以直接檢測(cè)海水中過氧化氫酶活性，但直接測(cè)活的方法無法研究過氧化氫酶的種類和含量，因此無法獲得多祥性的信息；構(gòu)建宏基因組文庫并測(cè)序，可以獲得環(huán)境中過氧化氫酶基因的信息，但價(jià)格昂貴耗時(shí)太長，因此無相關(guān)報(bào)道；使用特異的保守引物擴(kuò)增環(huán)境樣品DNA中的目的基因，是研究環(huán)境基因多祥性的理想方法。目前尚無用于擴(kuò)增環(huán)境中過氧化氫酶基因的保守引物，因此也沒有發(fā)展出相應(yīng)的過氧化氫酶多樣性檢測(cè)方法。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的在于克服上述現(xiàn)有技術(shù)中存在不足，經(jīng)發(fā)明人長期從事海洋微生物領(lǐng)域的開發(fā)研究和生產(chǎn)實(shí)踐，從而開發(fā)提供一種精確、可靠、快速的使用簡并引物檢測(cè)海水中細(xì)菌過氧化氫酶多樣性的方法，本發(fā)明提供的使用簡并引物檢測(cè)海水中細(xì)菌過氧化氫酶多樣性的方法，包括下述步驟I)、從GenBank搜集各類已知的細(xì)菌過氧化氫酶蛋白序列，進(jìn)行多序列比對(duì)后，找出保守的氨基酸序列，由此獲得合適的四種簡并引物，四種簡并引物均根據(jù)過氧化氫酶蛋白序列的保守區(qū)設(shè)計(jì)，四種簡并引物序列包括兩種正向簡并引物序列(5’至3’)為C3+:TTTYAAYCGAGARMGRGTNCCNGARMGNG ；
CA:GTACCTGAAMGRGTRGTSCAYGCNMRRGG ；和兩種反向簡并引物序列(5’至3’)為CB:GAATATGCAAAAAGGCGNCCYTGNARNAKYTTRTC ；C3-:AATCTTTATGAGGCCAAACTTTTGTNANRTCR;2)使用步驟I)中四種簡并引物任ー組合，以聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(以下簡稱PCR)擴(kuò)增過氧化氫酶基因片段，PCR擴(kuò)增使用12. 5微升反應(yīng)體系所述反應(yīng)體系為2. 5mM脫氧核糖核苷三磷酸(以下簡稱dNTP) I微升，IOX水生棲熱菌(Taq) DNA聚合酶(以下簡稱Taq酶)PCR緩沖液I. 25微升，50 μ M的兩種簡并引物各O. I至O. 2微升，Taq DNA聚合酶O. 5至O. 7U，海水DNA I微升，加水至總體積12. 5微升；制備過氧化氫酶基因片段時(shí)每次使用4至8個(gè)12. 5微升PCR擴(kuò)增體系；PCR擴(kuò)增條件94°C I至2分；94°C 20至40 秒，600C- 51°C 50至80秒，72°C I分30秒，10至15個(gè)循環(huán)，每循環(huán)降低退火溫度1°C ；94 °C 20至40秒，50 0C 50至80秒，72°C I分，20循環(huán)；72°C 3分。反應(yīng)后合并各管PCR擴(kuò)增產(chǎn)物，純化分子量在500bp至IOOObP的單ー PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；；3)使用T載體試劑盒(寶生物公司產(chǎn)品)連接步驟2)的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物，轉(zhuǎn)化大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞構(gòu)建過氧化氫酶的基因片段的T載體文庫，藍(lán)白斑篩選；挑取所有菌落擴(kuò)增，使用相應(yīng)的過氧化氫酶簡并引物進(jìn)行菌落PCR擴(kuò)增尋找陽性克?。画傊悄z電泳確認(rèn)目標(biāo)PCR擴(kuò)增產(chǎn)物即過氧化氫酶基因片段；4)向步驟3)的所有目的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物中加入限制性核酸內(nèi)切酶MboI及其緩沖液，酶切后使用瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)所有酶切反應(yīng)液中的核酸片段，每ー種特異的不重復(fù)的電泳條帶類型對(duì)應(yīng)著一種過氧化氫酶基因。確定過氧化氫酶基因的種類數(shù)以及每種基因的數(shù)目；5)對(duì)于步驟4)確定的每種過氧化氫酶基因，選擇ー個(gè)對(duì)應(yīng)的步驟2)中的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行DNA測(cè)序，獲得所有種類的過氧化氫酶基因的序列；這些序列和過氧化氫酶基因種類及數(shù)目構(gòu)成了海水中細(xì)菌過氧化氫酶多樣性的信息。本發(fā)明提供的使用簡并引物檢測(cè)海水中細(xì)菌過氧化氫酶多樣性的方法中，所述簡并引物序列通過以下方式獲得從GenBank搜集各類已知的細(xì)菌過氧化氫酶的蛋白序列，進(jìn)行多序列比對(duì)后，找出保守的氨基酸序列，由此獲得合適的簡并引物。擴(kuò)增過氧化氫酶基因的簡并引物，共有四種，其中正向引物和反向引物各兩種，正向引物序列(5’至3’ )為C3+:TTTYAAYCGAGARMGRGTNCCNGARMGNG ；CA:GTACCTGAAMGRGTRGTSCAYGCNMRRGG ；反向引物序列(5’至3’)為CB:GAATATGCAAAAAGGCGNCCYTGNARNAKYTTRTC ；C3-: AATCTTTATGAGGCCAAACTTTTGTNANRTCRAA。本發(fā)明提供的使用簡并引物檢測(cè)海水中細(xì)菌過氧化氫酶多樣性的方法中，使用的海水DNA通過以下方式提取采樣獲得的海水4°C暫存，送回實(shí)驗(yàn)室后立即通過8微米濾膜，再通過O. 22微米濾膜，將細(xì)菌截留在膜上。將膜剪成小于Imm2的碎片，加入2mL裂解緩沖液(50mmol/L三羥甲基氨基甲烷-20mmol/Lこニ胺四こ酸_400mmol/L氯化鈉_750mmol/L鹿糖_2mg/mL溶菌酶),37°C 30min,加入十二烷基硫酸鈉(終濃度1%)和蛋白酶K (終濃度100 μ g/mL), 55°C靜置2小吋，離心棄去碎膜片，加入等體積苯酹/氯仿/異戍醇混合液(體積比25:24:1)震蕩混勻，IOOOOg離心15min,取上清加入等體積氯仿/異戍醇混合液(體積比24:1)震蕩混勻，IOOOOg離心15min,取上清加入十分之一體積3mol/Lこ酸鈉和等體積異丙醇，-20°C靜置I小時(shí)或過夜，IOOOOg離心15min棄上清,加入500 μ L 70%こ醇，IOOOOg離心5min棄上清,干燥后加水復(fù)溶。本發(fā)明提供的使用簡并引物的方法的特點(diǎn)該方法精確、可靠、快速，是ー種使用簡并引物檢測(cè)海水中細(xì)菌過氧化氫酶多樣性的新一代的檢測(cè)方法?？煞奖闶褂脵z測(cè)海水中細(xì)菌過氧化氫酶的多祥性。適用于各種海洋環(huán)境的海水過氧化氫酶檢測(cè)，所能檢測(cè)的最小海水體積為200mL。


圖I為四種簡并引物擴(kuò)增海水DNA得到的過氧化氫酶基因片段的瓊脂糖凝膠電泳圖·M :分子量標(biāo)準(zhǔn)品；1 :CAC3-引物對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物，2: CACB弓I物對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物，3: C3+CB弓I物對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物，4: C3+C3-弓I物對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物
具體實(shí)施例方式本發(fā)明用下列實(shí)施例來進(jìn)ー步說明本發(fā)明，但本發(fā)明保護(hù)范圍并非限于下列實(shí)施例。實(shí)施例II)、簡并引物的確定從GenBank搜集各類已知的細(xì)菌過氧化氫酶的蛋白序列，進(jìn)行多序列比對(duì)后，找出保守的氨基酸序列，由此獲得合適的PCR擴(kuò)增過氧化氫酶基因的簡并引物，共有四種，正向引物和反向引物各兩種，正向引物序列(5’至3’)為C3+:TTTYAAYCGAGARMGRGTNCCNGARMGNG ；CA:GTACCTGAAMGRGTRGTSCAYGCNMRRGG ；反向引物序列(5’至3’)為CB:GAATATGCAAAAAGGCGNCCYTGNARNAKYTTRTC ；C3-:AATCTTTATGAGGCCAAACTTTTGTNANRTCRAA。、2 )使用正向簡并引物CA: CCNGARMGNGTNGTNCAYGCN和反向簡并引物C3-:AATCTTTATGAGGCCAAACTTTTGTNANRTCRAA,PCR擴(kuò)增過氧化氫酶基因片段。PCR擴(kuò)增使用12. 5微升反應(yīng)體系2. 5mM dNTP I微升，IOXTaq PCR擴(kuò)增緩沖液I. 25微升，50 μ M的兩種簡并引物各O. 15微升，Taq DNA聚合酶O. 625U，海水DNA I微升，加水至總體積12. 5微升。制備每種過氧化氫酶基因片段時(shí)毎次使用6個(gè)12. 5微升PCR擴(kuò)增體系。PCR條件940C 2min;94°C 30s, 60°C— 51 °C lmin, 72°C Imin 30s, 10 循環(huán)，每循環(huán)降低退火溫度 1°C ；94°C 30s, 50°C lmin, 72°C lmin, 20 循環(huán)；72°C 3min。反應(yīng)后合并 6 管 PCR 產(chǎn)物，使用膠回收試劑盒純化分子量在500bp至IOOObp的單ー PCR擴(kuò)增產(chǎn)物。3)、使用T載體試劑盒連接步驟2)的PCR產(chǎn)物，轉(zhuǎn)化大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞構(gòu)建過氧化氫酶的基因片段的T載體文庫。藍(lán)白斑篩選，挑取所有白色菌落，使用CA和C3-引物進(jìn)行菌落PCR尋找陽性克隆。瓊脂糖凝膠電泳確認(rèn)目標(biāo)PCR產(chǎn)物即過氧化氫酶基因片段。
4)、向步驟3)的所有目的PCR產(chǎn)物中加入限制性核酸內(nèi)切酶MboI及其緩沖液，酶切后使用瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)所有酶切反應(yīng)液中的核酸片段，每ー種特異的不重復(fù)的電泳條帶類型對(duì)應(yīng)著一種過氧化氫酶基因。確定過氧化氫酶基因的種類數(shù)以及每種基因的數(shù)目。5)、對(duì)于步驟4)確定的每種過氧化氫酶基因，選擇ー個(gè)對(duì)應(yīng)的步驟3)中的PCR產(chǎn)物進(jìn)行DNA測(cè)序，獲得所有種類的過氧化氫酶基因的序列。這些序列和過氧化氫酶基因種類及數(shù)目構(gòu)成了海水中細(xì)菌過氧化氫酶多樣性的信息。實(shí)施例2I)使用正向簡并引物CA: CCNGARMGNGTNGTNCAYGCN和反向簡并引物CB:AAATGTTCGGCCYTGNARNADYTTRTC，PCR擴(kuò)增過氧化氫酶基因片段。PCR使用12. 5微升反應(yīng)體系2.5mM dNTP I微升，IOXTaq PCR緩沖液I. 25微升，50 μ M的兩種簡并引物各O. 15微升，Taq DNA聚合酶O. 625U，海水DNA I微升，加水至總體積12. 5微升。制備每種過氧化氫 酶基因片段時(shí)每次使用6個(gè)12. 5微升PCR體系。PCR條件94°C 2min; 94°C 30s，60°C —51°C Imin, 72°C lmin 30s, 10循環(huán)，每循環(huán)降低退火溫度 1°C ;94°C 30s, 50°C lmin, 72°C lmin, 20循環(huán)；72°C 3min。反應(yīng)后合并6管PCR產(chǎn)物，使用膠回收試劑盒純化分子量在500bp至IOOObp的單ー PCR產(chǎn)物。2)使用T載體試劑盒連接步驟I)的PCR產(chǎn)物，轉(zhuǎn)化大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞構(gòu)建過氧化氫酶的基因片段的T載體文庫。藍(lán)白斑篩選，挑取所有白色菌落，使用CA和CB引物進(jìn)行菌落PCR尋找陽性克隆。瓊脂糖凝膠電泳確認(rèn)目標(biāo)PCR產(chǎn)物即過氧化氫酶基因片段。3)向步驟2)的所有目的PCR產(chǎn)物中加入限制性核酸內(nèi)切酶MboI及其緩沖液，酶切后使用瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)所有酶切反應(yīng)液中的核酸片段，每ー種特異的不重復(fù)的電泳條帶類型對(duì)應(yīng)著一種過氧化氫酶基因。確定過氧化氫酶基因的種類數(shù)以及每種基因的數(shù)目。4)對(duì)于步驟3)確定的每種過氧化氫酶基因，選擇ー個(gè)對(duì)應(yīng)的步驟2)中的PCR產(chǎn)物進(jìn)行DNA測(cè)序，獲得所有種類的過氧化氫酶基因的序列。這些序列和過氧化氫酶基因種類及數(shù)目構(gòu)成了海水中細(xì)菌過氧化氫酶多樣性的信息。實(shí)施例3I)使用正向簡并引物C3+:TTTYAAYCGAGARMGRGTNCCNGA和反向簡并引物CB:AAATGTTCGGCCYTGNARNADYTTRTC，擴(kuò)增過氧化氫酶基因片段。PCR使用12. 5微升反應(yīng)體系2. 5mM dNTP I微升，IOXTaq PCR緩沖液I. 25微升，50 μ M的兩種簡并引物各O. 15微升，Taq DNA聚合酶O. 625U，海水DNA I微升，加水至總體積12. 5微升。制備每種過氧化氫酶基因片段時(shí)每次使用6個(gè)12. 5微升PCR體系。PCR條件94°C 2min; 94°C 30s，60°C —51°C Imin, 72°C lmin 30s, 10循環(huán)，每循環(huán)降低退火溫度 1°C ;94°C 30s, 50°C lmin, 72°C lmin, 20循環(huán)；72°C 3min。反應(yīng)后合并6管PCR產(chǎn)物，使用膠回收試劑盒純化分子量在500bp至IOOObp的單ー PCR產(chǎn)物。2)使用T載體試劑盒連接步驟I)的PCR產(chǎn)物，轉(zhuǎn)化大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞構(gòu)建過氧化氫酶的基因片段的T載體文庫。藍(lán)白斑篩選，挑取所有白色菌落，使用C3+和CB引物進(jìn)行菌落PCR尋找陽性克隆。瓊脂糖凝膠電泳確認(rèn)目標(biāo)PCR產(chǎn)物即過氧化氫酶基因片段。3)向步驟2)的所有目的PCR產(chǎn)物中加入限制性核酸內(nèi)切酶MboI及其緩沖液，酶切后使用瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)所有酶切反應(yīng)液中的核酸片段，每ー種特異的不重復(fù)的電泳條帶類型對(duì)應(yīng)著一種過氧化氫酶基因。確定過氧化氫酶基因的種類數(shù)以及每種基因的數(shù)目。4)對(duì)于步驟3)確定的每種過氧化氫酶基因，選擇ー個(gè)對(duì)應(yīng)的步驟2)中的PCR產(chǎn)物進(jìn)行DNA測(cè)序，獲得所有種類的過氧化氫酶基因的序列。這些序列和過氧化氫酶基因種類及數(shù)目構(gòu)成了海水中細(xì)菌過氧化氫酶多樣性的信息。實(shí)施例4I)使用正向簡并引物C3+: TTTYAAYCGAGARMGRGTNCCNGA和反向簡并引物C3-: AATCTTTATGAGGCCAAACTTTTGTNANRTCRAA，擴(kuò)增過氧化氫酶基因片段。PCR使用12. 5微升反應(yīng)體系2. 5mM dNTP I微升，10 X TaqPCR緩沖液I. 25微升，50 μ M的兩種簡并引物各O. 15微升，Taq DNA聚合酶O. 625U，海水DNA I微升，加水至總體積12. 5微升。制備每種過氧化氫酶基因片段時(shí)每次使用6個(gè)12. 5微升PCR體系。PCR條件94°C 2min;94°C 30s, 60°C — 51°C Imin, 72°C lmin 30s, 10 循環(huán)，每循環(huán)降低退火溫度 1°C ；94°C 30s, 50°C lmin, 72°C lmin, 20· 循環(huán)；72°C 3min。反應(yīng)后合并6管PCR產(chǎn)物，使用膠回收試劑盒純化分子量在500bp至IOOObp的單ー PCR產(chǎn)物。2)、使用T載體試劑盒連接步驟I)的PCR產(chǎn)物，轉(zhuǎn)化大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞構(gòu)建過氧化氫酶的基因片段的T載體文庫。藍(lán)白斑篩選，挑取所有白色菌落，使用C3+和C3-引物進(jìn)行菌落PCR尋找陽性克隆。瓊脂糖凝膠電泳確認(rèn)目標(biāo)PCR產(chǎn)物即過氧化氫酶基因片段。3)、向步驟2)的所有目的PCR產(chǎn)物中加入限制性核酸內(nèi)切酶MboI及其緩沖液，酶切后使用瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)所有酶切反應(yīng)液中的核酸片段，每ー種特異的不重復(fù)的電泳條帶類型對(duì)應(yīng)著一種過氧化氫酶基因。確定過氧化氫酶基因的種類數(shù)以及每種基因的數(shù)目。4)、對(duì)于步驟3)確定的每種過氧化氫酶基因，選擇ー個(gè)對(duì)應(yīng)的步驟2)中的PCR產(chǎn)物進(jìn)行DNA測(cè)序，獲得所有種類的過氧化氫酶基因的序列。這些序列和過氧化氫酶基因種類及數(shù)目構(gòu)成了海水中細(xì)菌過氧化氫酶多樣性的信息。
權(quán)利要求
1.一種使用簡并引物檢測(cè)海水中細(xì)菌過氧化氫酶多樣性的方法，其特征在于包括下述步驟 1)、從GenBank搜集各類已知的細(xì)菌過氧化氫酶蛋白序列，進(jìn)行多序列比對(duì)后，找出保守的氨基酸序列，由此獲得合適的四種簡并引物，四種簡并引物均根據(jù)過氧化氫酶蛋白序列的保守區(qū)設(shè)計(jì)，四種簡并引物序列包括兩種正向簡并引物序列(5’至3’)為C3+:TTTYAAYCGAGARMGRGTNCCNGARMGNG ；CA:GTACCTGAAMGRGTRGTSCAYGCNMRRGG ； 和兩種反向簡并引物序列(5’至3’)為CB:GAATATGCAAAAAGGCGNCCYTGNARNAKYTTRTC ； C3-:AATCTTTATGAGGCCAAACTTTTGTNANRTCR; 2)使用步驟I)中四種簡并引物任一組合，聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)擴(kuò)增過氧化氫酶基因片段，PCR擴(kuò)增使用12. 5微升反應(yīng)體系所述反應(yīng)體系為2. 5mM脫氧核糖核苷三磷酸I微升，IOX水生棲熱菌DNA聚合酶PCR緩沖液I. 25微升，50 u M的兩種簡并引物各0. I至0. 2微升，水生棲熱菌DNA聚合酶0. 5至0. 7U，海水DNA I微升，加水至總體積12. 5微升；制備過氧化氫酶基因片段時(shí)每次使用4至8個(gè)12. 5微升PCR擴(kuò)增體系；PCR擴(kuò)增條件94°C I至2分；940C 20至40秒，60°C— 51°C 50至80秒，72°C I分30秒，10至15個(gè)循環(huán)，每循環(huán)降低退火溫度1°C -MV 20至40秒，500C 50至80秒，72°C I分，20循環(huán)；72°C 3分。反應(yīng)后合并各管PCR擴(kuò)增產(chǎn)物，純化分子量在500bp至IOOObp的單一 PCR擴(kuò)增產(chǎn)物； 3)使用T載體試劑盒連接步驟2)的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物，轉(zhuǎn)化大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞構(gòu)建過氧化氫酶的基因片段的T載體文庫，藍(lán)白斑篩選；挑取所有菌落擴(kuò)增，使用相應(yīng)的過氧化氫酶簡并引物進(jìn)行菌落PCR擴(kuò)增尋找陽性克??；瓊脂糖凝膠電泳確認(rèn)目標(biāo)PCR擴(kuò)增產(chǎn)物即過氧化氫酶基因片段； 4)向步驟3)的所有目的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物中加入限制性核酸內(nèi)切酶MboI及其緩沖液，酶切后使用瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)所有酶切反應(yīng)液中的核酸片段，每一種特異的不重復(fù)的電泳條帶類型對(duì)應(yīng)著一種過氧化氫酶基因，確定過氧化氫酶基因的種類數(shù)以及每種基因的數(shù)目； 5)對(duì)于步驟4)確定的每種過氧化氫酶基因，選擇一個(gè)對(duì)應(yīng)的步驟3)中的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行DNA測(cè)序，獲得所有種類的過氧化氫酶基因的序列；這些序列和過氧化氫酶基因種類及數(shù)目構(gòu)成了海水中細(xì)菌過氧化氫酶多樣性的信息。
全文摘要
本發(fā)明涉及使用簡并引物檢測(cè)海水中細(xì)菌過氧化氫酶多樣性的方法，以細(xì)菌過氧化氫酶保守區(qū)設(shè)計(jì)四種簡并引物的組合，以聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)擴(kuò)增海水總DNA中的過氧化氫酶基因片段，再以大腸桿菌構(gòu)建酶基因片段的文庫，使用限制性內(nèi)切酶對(duì)文庫中的酶基因進(jìn)行酶切，電泳檢測(cè)片段的分子量分布，確定不同的電泳條帶類型，最后對(duì)不同類型的過氧化氫酶基因分別進(jìn)行測(cè)序，可獲得過氧化氫酶基因多樣性的信息。該方法是一種精確、可靠、快速、使用簡并引物檢測(cè)海水中細(xì)菌過氧化氫酶多樣性的新方法,可用于檢測(cè)海水中細(xì)菌過氧化氫酶多樣性。
文檔編號(hào)C12Q1/68GK102851380SQ20121035214
公開日2013年1月2日 申請(qǐng)日期2012年9月20日 優(yōu)先權(quán)日2012年9月20日
發(fā)明者王偉, 孫謐, 紀(jì)曉峰, 袁翠 申請(qǐng)人:中國水產(chǎn)科學(xué)研究院黃海水產(chǎn)研究所