專利名稱：一種讓慢性粒細(xì)胞白血病細(xì)胞凋亡的系統(tǒng)及其方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)研究領(lǐng)域，具體的說(shuō)，涉及一種導(dǎo)致白血病細(xì)胞凋亡的系統(tǒng)及其方法。
背景技術(shù)：
慢性粒細(xì)胞白血病(CML)是ー種發(fā)生在早期多能造血干細(xì)胞上的惡性骨髓增生性疾病。主要涉及髓系，臨床表現(xiàn)為脾腫大、外周血中粒細(xì)胞顯著增多并出現(xiàn)幼稚粒細(xì)胞。在受累的細(xì)胞系中，可找到Ph染色體和(或)bcr-abl融合基因。bcr-abl融合基因編碼的Bcr-Abl融合蛋白具有組成性激活的酪氨酸激酶活性，通過(guò)激活PI3K、STAT5等抗凋亡信號(hào)顯著地抑制細(xì)胞凋亡，誘導(dǎo)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化，從而引起CML的發(fā)生發(fā)展。目前臨床應(yīng)用于CML治療的ー線藥物是imatinib，它通過(guò)競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合Bcr-Abl蛋白中的ATP結(jié)合位點(diǎn)，使Bcr-Abl 不能磷酸化底物從而阻斷CML進(jìn)展。但是，目前臨床上仍有1/3的患者對(duì)imatinib不耐受或者耐藥，對(duì)于這些患者需要尋求另外的替代療法。

發(fā)明內(nèi)容
為解決以上技術(shù)問題，本發(fā)明的目的在于提供ー種讓慢性粒細(xì)胞白血病細(xì)胞凋亡的系統(tǒng)及其方法。本發(fā)明目的是這樣實(shí)現(xiàn)的RATS靶向Bcr-Abl入核借酪氨酸激酶活性誘導(dǎo)CML細(xì)胞凋亡的立項(xiàng)依據(jù)如下I. Bcr-AbI與c_AbI之間顯示出明顯的細(xì)胞內(nèi)定位和效應(yīng)的差異，在CML發(fā)病中起
著重要作用Bcr-Abl和c_Abl都含有相同的與蛋白定位相關(guān)的核定位信號(hào)(nuclearlocalization signal, NLS)和核輸出信號(hào)(nuclear export signal, NES),但 c_Abl 在細(xì)胞漿和細(xì)胞核都可定位，而Bcr-Abl則只定位于細(xì)胞漿。位于核內(nèi)的c-Abl是ー個(gè)重要的凋亡誘導(dǎo)蛋白，它活化后通過(guò)磷酸化轉(zhuǎn)錄因子P73使其轉(zhuǎn)錄活性增強(qiáng)，激活caspase凋亡信號(hào)途徑，誘導(dǎo)細(xì)胞的凋亡；位于胞漿的Bcr-Abl則通過(guò)激活抗凋亡信號(hào)顯著地抑制細(xì)胞凋亡，誘導(dǎo)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化。2.將Bcr-Abl轉(zhuǎn)運(yùn)到核內(nèi)，并利用Bcr-Abl的激酶活性，磷酸化p73，激活凋亡信號(hào)，從而誘導(dǎo)CML細(xì)胞凋亡思路的依據(jù)在DNA損傷吋，c-Abl入核并被激活，是DNA損傷應(yīng)激誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡所必需的，當(dāng)缺失c-Abl或c-Abl的激酶活性時(shí)細(xì)胞就對(duì)凋亡誘導(dǎo)不敏感。因此，c-Abl入核和激酶活性被激活是DNA損傷時(shí)c-Abl激活凋亡信號(hào)的前提。Bcr-Abl在結(jié)構(gòu)上具有和c-Abl —樣的效應(yīng)結(jié)構(gòu)域,更重要的是Bcr-Abl的激酶活性在細(xì)胞內(nèi)是組成性激活的，因此，Bcr-Abl進(jìn)入核內(nèi)就可以通過(guò)其激酶活性磷酸化P73，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。3.將CML細(xì)胞的Bcr-Abl轉(zhuǎn)運(yùn)到核內(nèi)的策略①核定位信號(hào)(NLS)在蛋白由胞漿向胞核內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)中的作用真核細(xì)胞內(nèi)的蛋白由胞漿向胞核內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)需要通過(guò)細(xì)胞核和細(xì)胞漿間屏障核膜的核孔復(fù)合物，這個(gè)過(guò)程是由核定 位信號(hào)(NLS)的引導(dǎo)發(fā)生的。②雷帕霉素類似物轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)(rapamycinanalog transport system, RATS):雷帕 霉素(Rapamycin)是一種天然的小分子化合物,它在細(xì)胞內(nèi)和FKBP蛋白(FK506_binding protein, FKBP)結(jié)合形成雷帕霉素-FKBP 二元復(fù)合物后,對(duì)雷帕霉素祀(mammalian traget of rapamycin,mTOR)的FRB結(jié)構(gòu)域(FKBP-rapamycin binding domain,FRB)具有很高的親 和性和特異性，形成FRB-雷帕霉素-FKBP三元復(fù)合物，從而選擇性誘導(dǎo)了 FRB和FKBP的相 互作用。因此，如果將核定位信號(hào)與FRB融合，在雷帕霉素誘導(dǎo)的蛋白相互作用下，定位信 號(hào)被傳遞給FKBP，或是與FKBP融合的目標(biāo)蛋白，通過(guò)這種方式，就可以實(shí)現(xiàn)蛋白的轉(zhuǎn)運(yùn)。為 了避免雷帕霉素對(duì)正常細(xì)胞的影響，可用雷帕霉素類似物(rapamycin analog)即AP21967 來(lái)代替雷帕霉素，同時(shí)對(duì)FRB進(jìn)行突變修飾，這樣AP21967就只結(jié)合突變修飾的FRB，而不結(jié) 合細(xì)胞內(nèi)的雷帕霉素靶的FRB。綜上所述，雷帕霉素類似物AP21967和FKBP、FRB以及與之 融合的核定位信號(hào)也就組成了雷帕霉素類似物核轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)(rapamycin analog transport system, RATS),通過(guò)RATS實(shí)現(xiàn)的蛋白核轉(zhuǎn)運(yùn)也在越來(lái)越多的研究中得到了應(yīng)用。③RATS 如何實(shí)現(xiàn)對(duì) Bcr-Abl 的靶向轉(zhuǎn)運(yùn)Grb2 的 SH2 (Src homology 2，SH2)結(jié) 構(gòu)域和Bcr-Abl的Y177特異性結(jié)合，在AP21967誘導(dǎo)FRB和FKBP相互作用時(shí)，就可以將與 FRB融合的核定位信號(hào)傳遞給與FKBP融合的SH2，進(jìn)一步傳遞給Bcr-Abl，從而將Bcr-Abl 轉(zhuǎn)運(yùn)入核。④外源性FKBP-SH2和NLS-FRB融合肽如何進(jìn)入靶細(xì)胞轉(zhuǎn)運(yùn)Bcr-Abl入核從而 激活P73 :選用Ad5腺病毒載體作為表達(dá)載體，分別構(gòu)建表達(dá)FKBP-SH2和帶有核定位信號(hào) 的NLS-FRB融合肽，將腺病毒同時(shí)感染CML細(xì)胞，加入AP21967后，RATS靶向轉(zhuǎn)運(yùn)Bcr-Abl 入核，既可以減少胞漿中的Bcr-Abl蛋白水平及其介導(dǎo)的致白血病信號(hào)，又可以使入核的 Bcr-Abl發(fā)揮其激酶活性，磷酸化p73，激活凋亡信號(hào)，達(dá)到誘導(dǎo)CML細(xì)胞凋亡的目的。根據(jù)以上依據(jù)進(jìn)行了實(shí)際的操作，發(fā)現(xiàn)效果明顯。實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證發(fā)明效果中，為了檢測(cè)的方便，在N3R前端加上一段氨基酸序列FLAG標(biāo) 簽構(gòu)成FN3R，F(xiàn)LAG標(biāo)簽具體為DYKDDDDK ;在F2S前端加上一段氨基酸序列HA標(biāo)簽構(gòu)成 HF2S, HA 標(biāo)簽具體為YPYDVPDYAVD。I.重組腺病毒Ad5-FN3R、Ad5_HF2S的構(gòu)建與鑒定FN3R片段通過(guò)重疊PCR擴(kuò)增獲得，通過(guò)分子克隆方法將FN3R片段插入腺 病毒穿梭質(zhì)粒pAdTrack-CMV，經(jīng)菌落PCR篩選、雙酶切及測(cè)序鑒定，證實(shí)構(gòu)建的質(zhì)粒 pAdTrack-CMV-FN3R與預(yù)期的序列相符。采用分步克隆的方法，將HA，兩段FKBP及SH2依次 插入pAdTrack-CMV中，構(gòu)建含HF2S片段的質(zhì)粒。經(jīng)菌落PCR篩選、雙酶切及測(cè)序鑒定，證 實(shí)構(gòu)建的質(zhì)粒pAdTrack-CMV-HF2S與預(yù)期的序列相符。同樣的方法構(gòu)建含突變片段HF2Sm 的質(zhì)粒。將穿梭質(zhì)粒與腺病毒的骨架質(zhì)粒pAdEasy-1在BJ5183細(xì)菌中重組，經(jīng)瓊脂糖凝膠 電泳、Pac I酶切鑒定，篩選出正確重組的腺病毒載體Ad5-FN3R、Ad5-HF2S、Ad5-HF2Sm。將 腺病毒載體Ad5-FN3R、Ad5-HF2S、Ad5-HF2Sm線性化后轉(zhuǎn)染AD-293細(xì)胞，在AD-293細(xì)胞中 進(jìn)行腺病毒的包裝、擴(kuò)增，獲得高滴度的腺病毒Ad5-FN3R、Ad5-HF2S、Ad5_HF2Sm。2. PCR 及 western blot 鑒定 FN3R、HF2S 及 HF2Sm 在細(xì)胞中的表達(dá)腺病毒溶液經(jīng)蛋白酶K處理后，作為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增，各病毒均擴(kuò)增得目的條帶(圖I中A，B)。而以Ad5空載為模板的陰性對(duì)照沒有條帶。重組腺病毒感染AD-293細(xì)胞和K562細(xì)胞后，提取總蛋白，Western blot檢測(cè)到目的蛋白在兩種細(xì)胞中的表達(dá)，而Ad5空載對(duì)照組未檢測(cè)到表達(dá)(圖I中C，D)。圖I 中 A. PCR 鑒定 FN3R mRNA 的表達(dá).M DL2000 標(biāo)準(zhǔn)，1,2 FN3R 病毒液，3 陽(yáng)性對(duì)照，4 陰性對(duì)照.圖I中B. PCR鑒定HF2S mRNA的表達(dá).M DL2000標(biāo)準(zhǔn)，1,6 :陰性對(duì)照，2 :正確重組的Ad5-HF2S腺病毒，3 :陽(yáng)性對(duì)照，4 :正確重組的Ad5_HF2Sm腺病毒，5 :陽(yáng)性對(duì)照 圖I中C. Western blot鑒定FN3R、HF2S及HF2Sm在AD-293細(xì)胞中的表達(dá) 圖I中D. Western blot鑒定FN3R、HF2S及HF2Sm在K562細(xì)胞中的表達(dá) 3.免疫熒光檢測(cè)FN3R、HF2S及HF2Sm在K562細(xì)胞中的定位(參看圖2)用Ad5-FN3R、Ad5_HF2S 或 Ad5_HF2Sm 腺病毒感染 K562 細(xì)胞，MOI 為 105，48h 收集細(xì)胞進(jìn)行免疫熒光實(shí)驗(yàn)，檢測(cè)FN3R、HF2S及HF2Sm蛋白在K562細(xì)胞中的定位。結(jié)果如圖2·所示FN3R主要定位于細(xì)胞核，HF2S、HF2Sm主要定位于細(xì)胞漿，與預(yù)期相符。4.免疫熒光檢測(cè)RATS轉(zhuǎn)運(yùn)Bcr-Abl入核前后Bcr-Abl及目的蛋白在K562細(xì)胞中的定位接種合適密度的K562細(xì)胞于細(xì)胞培養(yǎng)板中，以腺病毒Ad5_FN3R和Ad5_HF2S或(Ad5-HF2Sm)共感染K562細(xì)胞，MOI為105。12h后加入AP21967，48h后，收集細(xì)胞涂片，進(jìn)行免疫熒光實(shí)驗(yàn)。腺病毒Ad5-FN3R和Ad5-HF2S共感染K562細(xì)胞后，在不加入AP21967時(shí)，F(xiàn)KBP不能結(jié)合FRB，與FRB融合的NLS不能傳遞給FKBP及與之融合的蛋白，用HA抗體檢測(cè)到的是位于細(xì)胞漿的HF2S，此時(shí)，Bcr-Abl仍定位于細(xì)胞漿(圖3中A)，在加入AP21967后，F(xiàn)KBP與FRB相互作用，與FRB融合的NLS傳遞給FKBP及與之融合的蛋白，最終傳遞給Bcr-Abl，用HA抗體檢測(cè)到的蛋白包括HF2S和FN3R，主要位于細(xì)胞核，Bcr-Abl部分轉(zhuǎn)運(yùn)至細(xì)胞核(圖3中B)。在Ad5-FN3R和Ad5_HF2Sm共感染對(duì)照組，NLS能夠傳遞給FKBP以及與之融合的Sm,但由于Sm不能結(jié)合Bcr-Abl,故用HA抗體檢測(cè)到的蛋白包括FN3R和HF2Sm,主要位于細(xì)胞核，Bcr-Abl仍位于細(xì)胞漿(圖3中C)。以上結(jié)果證實(shí)RATS能夠轉(zhuǎn)運(yùn)Bcr-Abl入核。由于RATS轉(zhuǎn)運(yùn)K562細(xì)胞中Bcr-Abl入核的效應(yīng)不夠強(qiáng)，而據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，來(lái)普霉素B (LMB)能夠抑制NLS出核，增強(qiáng)入核效應(yīng)。因此，我們通過(guò)加入LMB來(lái)增強(qiáng)RATS轉(zhuǎn)運(yùn)Bcr-Abl入核的效應(yīng)。免疫熒光證實(shí)單獨(dú)0. 2nM LMB不能誘導(dǎo)Bcr-Abl入核(圖3中E)，但是能夠顯著增強(qiáng)RATS轉(zhuǎn)運(yùn)Bcr-Abl入核(圖3中D)，以上結(jié)果證實(shí)LMB增強(qiáng)了 RATS轉(zhuǎn)運(yùn)K562細(xì)胞中Bcr-Abl入核。5. RATS抑制K562細(xì)胞增殖為了使我們所用濃度的LMB不對(duì)K562細(xì)胞的生長(zhǎng)產(chǎn)生明顯的影響，以確保LMB只對(duì)RATS起輔助作用，我們用不同濃度(0. 2nM，0. 5nM，InM，2nM和5nM)的LMB處理K562細(xì)胞，24和48h的MTS結(jié)果證實(shí)，LMB濃度為0. 2nM時(shí)對(duì)K562細(xì)胞的生長(zhǎng)幾乎無(wú)影響(圖4)。進(jìn)ー步用0. 2nM和0. 5nM兩個(gè)濃度的LMB處理K562細(xì)胞，第2，4，6天的MTS結(jié)果也證實(shí)0. 2nM的LMB對(duì)K562細(xì)胞的生長(zhǎng)無(wú)影響(圖5)。因此我們選定0. 2nM的LMB為后續(xù)試驗(yàn)濃度。如圖6所示，與正常對(duì)照組(曲線a)相比，RATS在一定程度上抑制了 K562細(xì)胞的生長(zhǎng)(曲線C)，而在LMB輔助下，K562細(xì)胞生長(zhǎng)明顯受到抑制(曲線d)，而突變對(duì)照組(曲線e)和空載對(duì)照組(曲線b)對(duì)K562細(xì)胞的生長(zhǎng)沒有顯著的影響。以上結(jié)果說(shuō)明，RATS能抑制K562細(xì)胞的生長(zhǎng)，0. 2nM LMB顯著增強(qiáng)了 RATS對(duì)K562細(xì)胞的增殖抑制效應(yīng)。
6. RATS誘導(dǎo)K562細(xì)胞凋亡以MOI 為 105，Ad5-FN3R和 Ad5-HF2S 腺病毒共感染 K562 細(xì)胞，12h 后加入 AP21967， 24h后加入0. 2nM LMB，72h后收集細(xì)胞，瑞氏染色檢測(cè)K562細(xì)胞的形態(tài)、DAPI染色檢測(cè)細(xì) 胞核的變化情況。同時(shí)實(shí)驗(yàn)設(shè)立正常對(duì)照組(control);未加AP21967組(RATS—) :Ad5_FN3R 和Ad5-HF2S共感染后，不加AP21967，其余處理同實(shí)驗(yàn)組；突變對(duì)照組(RATSm) :Ad5_FN3R 和Ad5-HF2Sm共感染K562細(xì)胞，其余處理與實(shí)驗(yàn)組相同。瑞氏染色(圖7)發(fā)現(xiàn)RATS處 理組細(xì)胞大小不一，胞漿紫紅色顆粒增多，部分細(xì)胞空泡化，部分細(xì)胞出現(xiàn)明顯的細(xì)胞核固 縮、碎裂，說(shuō)明凋亡細(xì)胞增多。而正常對(duì)照組、RATS-組和RATS 組，細(xì)胞完整，大小均一，凋 亡細(xì)胞少見。這說(shuō)明RATS誘導(dǎo)了 K562細(xì)胞凋亡。DAPI染色(圖8)發(fā)現(xiàn)RATS處理組細(xì)胞 核出現(xiàn)固縮、碎裂、溶解等凋亡改變，計(jì)數(shù)1000個(gè)細(xì)胞核，凋亡率為22%。而正常對(duì)照組、 RATS_組和RATSm組，細(xì)胞核均一，圓形或類圓形，偶見固縮或碎裂的細(xì)胞核。這進(jìn)一步證實(shí) RATS誘導(dǎo)了 K562細(xì)胞凋亡。我們進(jìn)一步用western blot檢測(cè)caspase 3的活化情況。RATS組caspase 3 被活化，切割出17kDa的活化片段；而正常對(duì)照組，未加Ap21967組和突變對(duì)照組，都未見 caspase活化(圖9)。結(jié)果說(shuō)明RATS通過(guò)caspase 3誘導(dǎo)了 K562細(xì)胞凋亡。有益效果通過(guò)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證本發(fā)明的系統(tǒng)和方法，可以達(dá)到和實(shí)現(xiàn)誘導(dǎo)CML細(xì)胞凋亡，并且效 果非常好，對(duì)于治療白血病的研究及藥物的開發(fā)具有很大的研究?jī)r(jià)值。


圖I為FN3R、HF2S及HF2Sm的表達(dá)鑒定圖；圖2為免疫熒光檢測(cè)FN3R、HF2S及HF2Sm蛋白在K562細(xì)胞中的定位圖；圖3為免疫熒光檢測(cè)RATS轉(zhuǎn)運(yùn)Bcr-Abl入核前后Bcr-Abl及目的蛋白在K562細(xì) 胞中的定位圖；圖4為不同濃度的LMB對(duì)K562細(xì)胞生長(zhǎng)影響的曲線圖；圖5為0. 2、0. 5nM LMB在不同時(shí)間對(duì)K562細(xì)胞生長(zhǎng)影響的曲線圖；圖6為RATS抑制K562細(xì)胞增殖；圖7為瑞氏染色證實(shí)RATS誘導(dǎo)K562細(xì)胞凋亡圖；圖8為DAPI染色證實(shí)RATS誘導(dǎo)K562細(xì)胞凋亡圖；圖9為RATS激活caspase 3的鑒定圖；圖10為讓慢性粒細(xì)胞白血病(CML)細(xì)胞凋亡的系統(tǒng)示意圖。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例如圖10所示，一種讓慢性粒細(xì)胞白血病(CML)細(xì)胞凋亡的系統(tǒng)，由載入腺病毒的 兩個(gè)融合肽N3R、兩個(gè)化合物AP21967和載入腺病毒的融合肽F2S連接在一起構(gòu)成；所述融合肽N3R為3段NLS和FRB連接組成，所述融合肽F2S為2段FKBP和SH2 連接組成，一段FKBP通過(guò)一個(gè)化合物AP21967與一段FRB結(jié)合；一個(gè)融合肽F2S通過(guò)化合物AP21967同時(shí)結(jié)合兩個(gè)融合肽N3R ；所述融合肽N3R的氨基酸序列為PKKKRKVPKKKRKVPKKKRKVELIRVAILWHEMWHEGLEEASRLYFGERNVKGMFEVLEPLHAMMERGPQTLKETSFNQAYGRDLMEAQEffCRKYMKSGNVKDLLQAffDLYYHVFRRISKQ ；所述融合肽N3R的核苷酸序列如SEQ ID No. I所示；所述融合肽F2S的氨基酸序列為MGVQVETISP ⑶ GRTFPKRGQTCWHYTGMLEDGKKFDSSRDRNKPFKFMLGKQEVIRGWEEGVAQMSVGQRAKLTISPDYAYGATGHPGIIPPHATLVFDVELLKLEAAAMGVQVETISPGDGRTFPKRGQTCVVHYTGMLEDGKKFDSSRDRNKPFKFMLGKQEVIRGWEEGVAQMSVGQRAKLTISPDYAYGATGHPGIIPPHATLVFDVELLKLEGTLEWFFGKIPRAKAEEMLSKQRHDGAFLIRESESAPGDFSLSVKFGNDVQHFKVLRDGAGKYFLWVVKFNSLNE LVDYHRSTSVSRNQQIFLRDIE ；所述融合肽F2S的核苷酸序列如SEQIDNo. 2所示。具體讓慢性粒細(xì)胞白血病細(xì)胞凋亡的方法將載入腺病毒的融合肽N3R、化合物AP21967和載入腺病毒的融合肽F2S導(dǎo)入慢性粒細(xì)胞白血病細(xì)胞中，F(xiàn)RB與化合物AP21967結(jié)合，該化合物AP21967又與FKBP結(jié)合，形成FRB-AP21967-FKBP三元復(fù)合物，將N3R和F2S連接在一起構(gòu)成了讓慢性粒細(xì)胞白血病細(xì)胞凋亡的系統(tǒng)，同時(shí)SH2會(huì)結(jié)合Bcr-Abl癌蛋白，F(xiàn)RB將定位信號(hào)傳遞給Bcr-Abl癌蛋白，將Bcr-Abl癌蛋白轉(zhuǎn)運(yùn)入核，通過(guò)Bcr-Abl癌蛋白的酪氨酸激酶活性磷酸化激活p73，誘導(dǎo)CML細(xì)胞凋亡。
權(quán)利要求
1.一種讓慢性粒細(xì)胞白血病細(xì)胞凋亡的系統(tǒng)，其特征在于由載入腺病毒的兩個(gè)融合肽N3R、兩個(gè)化合物AP21967和載入腺病毒的融合肽F2S連接在一起構(gòu)成； 所述融合肽N3R為3段NLS和FRB連接組成，所述融合肽F2S為2段FKBP和SH2連接組成， 一段FKBP通過(guò)一個(gè)化合物AP21967與一段FRB結(jié)合；一個(gè)融合肽F2S通過(guò)化合物AP21967同時(shí)結(jié)合兩個(gè)融合肽N3R ； 所述融合肽N3R的氨基酸序列為PKKKRKVPKKKRKVPKKKRKVELIRVAILWHEMWHEGLEEASRLYFGERNVKGMFEVLEPLHAMMERGPQTLKETSFNQAYGRDLMEAQEffCRKYMKSGNVKDLLQAffDLYYHVFRRISKQ ； 所述融合肽N3R的核苷酸序列如SEQ ID No. I所示； 所述融合肽F2S的氨基酸序列為MGVQVETISP⑶GRTFPKRGQTCVVHYTGMLEDGKKFDSSRDRNKPFKFMLGKQEVIRGWEEGVAQMSVGQRAKLTISPDYAYGATGHPGIIPPHATLVFDVELLKLEAAAMGVQVETISPOTGRTFPKRGQTCVVHYTGMLEDGKKFDSSRDRNKPFKFMLGKQEVIRGWEEGVAQMSVGQRAKLTISPDYAYGATGHPGIIPPHATLVFDVELLKLEGTLEWFFGKIPRAKAEEMLSKQRHDGAFLIRESESAPGDFSLSVKFGNDVQHFKVLRDGAGKYFLWVVKFNSLNELVDYHRSTSVSRNQQIFLRDIE ； 所述融合肽F2S的核苷酸序列如SEQ ID No. 2所示。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述一種讓慢性粒細(xì)胞白血病細(xì)胞凋亡的系統(tǒng)，其特征在于所述融合肽N3R和F2S載入的腺病毒為Ad5腺病毒。
3.一種讓慢性粒細(xì)胞白血病細(xì)胞凋亡的方法，其特征在于將載入腺病毒的融合肽N3R、化合物AP21967和載入腺病毒的融合肽F2S導(dǎo)入慢性粒細(xì)胞白血病細(xì)胞中，F(xiàn)RB與化合物AP21967結(jié)合，該化合物AP21967又與FKBP結(jié)合，將N3R和F2S連接在一起，同時(shí)SH2會(huì)結(jié)合Bcr-Abl癌蛋白，F(xiàn)RB將核定位信號(hào)傳遞給Bcr-Abl癌蛋白，將Bcr-Abl癌蛋白轉(zhuǎn)運(yùn)入核，通過(guò)Bcr-Abl癌蛋白的酪氨酸激酶活性磷酸化激活p73，誘導(dǎo)CML細(xì)胞凋亡。
全文摘要
本發(fā)明為一種讓慢性粒細(xì)胞白血病細(xì)胞凋亡的系統(tǒng)，由載入腺病毒的兩個(gè)融合肽N3R、兩個(gè)化合物AP21967和載入腺病毒的融合肽F2S連接在一起構(gòu)成。本發(fā)明系統(tǒng)和方法通過(guò)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，可以達(dá)到和實(shí)現(xiàn)誘導(dǎo)CML細(xì)胞凋亡，并且效果非常好，對(duì)于治療白血病的研究及藥物的開發(fā)具有很大的研究?jī)r(jià)值。
文檔編號(hào)C12N15/861GK102952825SQ20121030903
公開日2013年3月6日 申請(qǐng)日期2012年8月28日 優(yōu)先權(quán)日2012年8月28日
發(fā)明者馮文莉, 黃崢蘭, 高淼, 羅紅偉 申請(qǐng)人:重慶醫(yī)科大學(xué)