專利名稱：高活性復合乳酸菌飲料及其制備方法
技術領域：
本發(fā)明屬于微生物發(fā)酵制品技術領域，具體涉及ー種高活性復合乳酸菌飲料及其制備方法。
背景技術：
乳酸菌廣泛存在于人體的腸道中，是人體內(nèi)必不可少的且具有重要生理功能的菌群，也是最具代表性的腸內(nèi)益生菌。乳酸菌可以改變腸道內(nèi)環(huán)境，抑制有害菌繁殖，調(diào)整胃腸道菌群平衡，改善腸道功能，在很大程度上緩解或治療腸道疾病，并能提高人體免疫力，還具有抗腫瘤、抗衰老、降血脂、降血糖、降血壓的功效，還能有效降低癌癥病發(fā)率。此外，乳酸菌還能夠刺激腸道蠕動，不僅能夠促進食物消化、營養(yǎng)物質(zhì)吸收，還能夠促進食物殘渣及腸毒素等的排出，起到美容養(yǎng)顏、延年益壽的作用。因此，腸道內(nèi)乳酸菌數(shù)量的多少，直接影響到人的健康與否，并影響到人的壽命長短。大量的臨床試驗及消費者多年的使用證明，絕大部分乳酸菌安全性高，無毒副作用。目前大部分乳酸菌發(fā)酵制品，尤其是酸奶、發(fā)酵乳等主要是利用保加利亞乳桿菌及嗜熱鏈球菌進行發(fā)酵，這兩種菌在發(fā)酵過程中能產(chǎn)生相對較多的風味物質(zhì)，使產(chǎn)品的氣味和滋味較好。但是這兩種菌對胃酸及膽汁的耐受カ較差，在通過胃腸道過程中，這兩種菌幾乎全部被胃酸及膽汁殺死，到達腸道的保加利亞乳桿菌及嗜熱鏈球菌幾乎為零。再者，保加利亞乳桿菌及嗜熱鏈球菌不能在腸道內(nèi)定植，進入腸道內(nèi)能存活下來的極少量保加利亞乳桿菌及嗜熱鏈球菌很快便被排出體外，起不到真正的益生菌的作用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明為解決現(xiàn)有技術的不足，通過乳酸菌的篩選和搭配，提供了高活性復合乳酸菌飲料及其制備方法。所述乳酸菌飲料活菌量高，耐胃酸、耐膽汁鹽能力強，能在腸道內(nèi)定植，因而能有效調(diào)整動物腸道環(huán)境，真正發(fā)揮益生菌的功能。本發(fā)明一方面涉及一種副干酪乳桿菌IMC-4 (Lactobacillus paracaseiIMC-4)，已于2012年5月21日保藏于“中國典型培養(yǎng)物保藏中心”，保藏號為CCTCC Ν0:Μ 2012174。該菌株具有很強的耐胃酸、耐膽汁鹽性能，且能在腸道內(nèi)定植。申請人:經(jīng)過大量的篩選，發(fā)現(xiàn)嗜酸乳桿菌(Lactobacillus acidophilus)CGMCCI. 1854、植物乳桿菌(Lactobacillus plantarum) CGMCC :1. 103 和干酪乳桿菌(Lactobacillus casei)CGMCC 1. 2435具有較強的耐胃酸、耐膽汁鹽能力，而且這三種乳酸菌與上述副干酪乳桿菌協(xié)同作用，調(diào)節(jié)動物腸道健康的效果更佳，從而促成本發(fā)明。本發(fā)明另ー個方面涉及ー種高活性復合乳酸菌飲料，是以上述副干酪乳桿菌與嗜酸乳桿菌、植物乳桿菌和干酪乳桿菌的混合菌液對原料發(fā)酵后加工制備的。上述的混合菌液中副干酪乳桿菌、嗜酸乳桿菌、植物乳桿菌和干酪乳桿菌的數(shù)量比為:1 3 :1 0. 5 I. 5 :0· 5 2，優(yōu)選為1 1 0. 5 :1。上述的原料為奶粉、白砂糖和葡萄糖的水溶液，其中各原料的質(zhì)量體積比濃度g/ml分別為奶粉1%_10%、白砂糖O. 5%-10%、葡萄糖O. 5%_5%。上述的高活性復合乳酸菌飲料還添加有水溶性膳食纖維、功能性寡糖、甜味劑和增稠劑等輔料。在乳酸菌飲料中的終濃度質(zhì)量體積比g/ml分別為O. 5%-10%、0. 1%-2%、O. 01%-0. 5%、0· 05%-0. 5%O本發(fā)明還涉及另ー種高活性復合乳酸菌飲料，是用副干酪乳桿菌與嗜酸乳桿菌、植物乳桿菌和干酪乳桿菌的混合菌液對乳酸菌飲料的原料和輔料的混合物發(fā)酵后加工制備的。 上述的混合菌液中副干酪乳桿菌、嗜酸乳桿菌、植物乳桿菌和干酪乳桿菌的數(shù)量比為:1 3 :1 0. 5 I. 5 :0· 5 2，優(yōu)選為 3 1 0. 5 :2。上述的原料包括有紅糖、糖蜜、白砂糖、葡萄糖和酵母粉，輔料包括有水溶性膳食纖維、功能性低聚寡糖、甜味劑和增稠劑。其中各組分的質(zhì)量體積比g/ml分別為紅糖O. 5% 10%、糖蜜O. 5% 5%、白砂糖O. 5% 10%、葡萄糖O. 5% 5%、酵母粉O. 05% 1%、水溶性膳食纖維O. 5% 10%、功能性寡糖O. 1% 2%、甜味劑O. 01% O. 5%、增稠劑O. 05% O. 5%。本發(fā)明通過對乳酸菌種的篩選與合理搭配，采用副干酪乳桿菌、嗜酸乳桿菌、植物乳桿菌和干酪乳桿菌混合發(fā)酵的方法制備得到高活性復合乳酸菌飲料，飲料出廠時活菌量高于5. OX 108CFU/ml。所述四種乳酸菌對胃酸、膽汁鹽均具有很強的耐受性，能夠在腸道中大量存活，再配以水溶性膳食纖維、低聚寡糖等營養(yǎng)成分，更能有效調(diào)節(jié)動物腸道健康，提高機體免疫力。
具體實施例方式除了本發(fā)明篩選出的菌株外，實施本發(fā)明所用的各種原料、生產(chǎn)設備均可選自市售的任意ー種，并沒有特殊的限定。一、試劑配制人工胃液借鑒中華人民共和國獸藥典的方法，取稀鹽酸16. 4ml加水搖勻稀釋至1000ml,用濃鹽酸或10%的NaOH調(diào)整pH為3.0，于121°C滅菌30min，在無菌室以lg/100ml比例加胃蛋白酶。人工腸液取KH2P04 6. 8g,加蒸懼水500ml溶解，用O. 4% (w/v)的NaOH溶液調(diào)節(jié)pH值至6. 8，加水至1000ml，每IOOml溶液中加O. 3g禽膽鹽，充分溶解后，于115°C滅菌15min。PBS 緩沖液稱取 NaCl 8g、KCl O. 2g,Na2HPO4 和 O. 24g KH2PO4,溶于 800ml 蒸餾水中，用HCl調(diào)節(jié)溶液的pH值至7. 4，最后加蒸餾水定容至IL即可。在121°C下蒸氣滅菌(至少20分鐘)，保存存于室溫或4°C冰箱中。ニ、副干酪乳桿菌(Lactobacillus paracasei)的篩選與鑒定I、篩選(I)取多名健康成年人新鮮糞便于內(nèi)置有玻璃珠的滅菌三角瓶中，加入10倍重量PBS緩沖液置于搖床中震蕩30min，然后收集到離心管中2000g離心5min收集上清；(2)將上述上清5000g離心IOmin收集沉淀，用PBS緩沖液反復洗滌兩次收集沉淀；
(3)向上述收集沉淀的離心管中加入原上清等體積的人工胃液充分懸浮沉淀，37°C 水浴 30min ；(4)將上述懸液5000g離心IOmin收集沉淀，用PBS緩沖液反復洗滌兩次收集沉淀；(5)向上述收集沉淀的離心管中加入原上清等體積的人工腸液充分懸浮沉淀，37°C 水浴 30min ；(6)將上述懸液5000g離心IOmin收集沉淀，用PBS緩沖液反復洗滌兩次收集沉淀，最后用少量PBS緩沖液充分懸浮沉淀； (7)將上述懸液后涂布于添加碳酸鈣的MRS培養(yǎng)基上，37°C培養(yǎng)24 48小時，挑取平板上帶有透明圈的菌落分別劃線接種到添加碳酸鈣的MRS培養(yǎng)基上，37°C培養(yǎng)24 48小吋，重復操作幾次得到的純菌種進行保存。2、鑒定對上述篩選的乳酸菌分別進行耐胃酸、耐膽汁鹽能力檢測，對胃酸、膽汁鹽耐性都相對較強的菌株進行分子生物學方法鑒定，測得其16S rDNA序列。其中耐性最強的菌株IMC-4的16S rDNA序列通過比對確認為副干酪乳桿菌(Lactobacillus paracasoi),命名為副干釀乳桿菌 IMC-4 (Lactobacillus paracasei IMC-4)。將本發(fā)明的副干酪乳桿菌IMC-4 (Lactobacillus paracasci IMC-4)進行保藏，保藏單位中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏日2012年5月21日，保藏號為CCTCC Ν0:Μ2012174。3、耐胃酸、耐膽汁鹽性能檢測(I)耐胃酸性能檢測方法取活化后的菌懸液40ml加入50ml離心管中，離心(5000g、5min)收集菌體，用PBS洗滌兩次后向離心管中加入40ml人工胃液，37°C水浴培養(yǎng)2h，每隔30min搖勻一次，于Oh和2h分別取樣作活菌計數(shù)，以Oh樣品為對照，計算2h樣品菌體的存活率，存活率=(2h時的活菌數(shù)/Oh時的活菌數(shù))X 100%。(2)耐膽汁鹽性能檢測方法取活化后的菌懸液40ml加入50ml離心管中，離心(5000g、5min)收集菌體，用PBS洗滌兩次后向離心管中加入40ml人工腸液，37°C水浴培養(yǎng)2h，每隔30min搖勻一次，于0h、2h分別取樣作活菌計數(shù)，以Oh樣品為對照，計算2h樣品菌體的存活率，存活率=(2h時的活菌數(shù)/Oh時的活菌數(shù))X 100%。耐胃酸、耐膽汁鹽性能檢測結果如下表所示
權利要求
1.ー種副干酪乳桿菌(Lactobacillus paracasci)，保藏號為 CCTCC N0:M2012174。
2.權利要求I所述的副干酪乳桿菌在制備乳酸菌飲料中的應用。
3.ー種高活性復合乳酸菌飲料，其特征在干，是用權利要求I所述的副干酪乳桿菌與嗜酸乳桿菌、植物乳桿菌和干酪乳桿菌的混合菌液對原料發(fā)酵后加工制備的。
4.如權利要求3所述的乳酸菌飲料，其特征在于所述的混合菌液中副干酪乳桿菌、嗜酸乳桿菌、植物乳桿菌和干酪乳桿菌的數(shù)量比為1 3 :1 :0. 5 I. 5 :0. 5 2。
5.如權利要求3所述的乳酸菌飲料，其特征在于所述的原料為奶粉、白砂糖和葡萄糖的水溶液，其中各原料的質(zhì)量體積比濃度分別為奶粉1%-10%、白砂糖O. 5%-10%、葡萄糖O.5%-5%。
6.權利要求3所述的乳酸菌飲料，其特征在于，還添加有水溶性膳食纖維、功能性寡糖、甜味劑、增稠劑。
7.如權利要求6所述的乳酸菌飲料，其特征在于所述的水溶性膳食纖維、功能性寡糖、甜味劑和增稠劑在乳酸菌飲料中的終濃度質(zhì)量體積比分別為O. 5%-10%、0. 1%-2%、O.01%-0. 5%、0· 05%-0. 5%O
8.ー種高活性復合乳酸菌飲料，是用權利要求I所述的副干酪乳桿菌與嗜酸乳桿菌、植物乳桿菌和干酪乳桿菌的混合菌液對乳酸菌飲料的原料和輔料的混合物發(fā)酵后加工制備的。
9.如權利要求8所述的復合乳酸菌飲料，其特征在于所述的混合菌液中副干酪乳桿菌、嗜酸乳桿菌、植物乳桿菌和干酪乳桿菌的數(shù)量比為1 3 :1 :0. 5 I. 5 :0. 5 2。
10.如權利要求8所述的復合乳酸菌飲料，其特征在于所述原料包括有紅糖、糖蜜、白砂糖、葡萄糖和酵母粉，輔料包括有水溶性膳食纖維、功能性低聚寡糖、甜味劑和增稠劑；其中各組分的質(zhì)量體積比分別為紅糖O. 5% 10%、糖蜜O. 5% 5%、白砂糖O. 5% 10%、葡萄糖O. 5% 5%、酵母粉O. 05% 1%、水溶性膳食纖維O. 5% 10%、功能性寡糖O. 1% 2%、甜味劑O. 01% O. 5%、增稠劑O. 05% O. 5%ο
全文摘要
本發(fā)明提供了一種副干酪乳桿菌(Lactobacills paracasei)，是從健康成年人糞便中篩選分離出來的，保藏號CCTCC NO: M2012174。本發(fā)明還提供了利用上述副干酪乳桿菌與嗜酸乳桿菌、植物乳桿菌和干酪乳桿菌混合發(fā)酵的方法制備得到的高活性復合乳酸菌飲料。該乳酸菌飲料出廠時活菌量可高達5億/ml以上，可以在腸道中存活并達到較大數(shù)量，對于調(diào)理腸道健康和提高機體免疫力具有很好的效果。
文檔編號C12N1/20GK102690772SQ20121019700
公開日2012年9月26日 申請日期2012年6月15日 優(yōu)先權日2012年6月15日
發(fā)明者張霞, 彭虹旎, 王增元, 陳琳, 陳竹嫻 申請人:濰坊康地恩生物科技有限公司, 青島蔚藍生物集團有限公司