專利名稱：一種金錢魚腎細(xì)胞體外培養(yǎng)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種魚類細(xì)胞體外培養(yǎng)方法，具體地說，是一種金錢魚腎細(xì)胞體外培養(yǎng)方法。
背景技術(shù)：
海水和淡水的含鹽度相差極大，但棲息在這兩種不同水域的魚類，其體液的鹽分卻相差無幾，產(chǎn)生這一奇特現(xiàn)象的原因是魚體進(jìn)行了對其自身十分重要的滲透壓調(diào)節(jié)。魚類調(diào)節(jié)滲透能力的大小，決定了他們對水環(huán)境的鹽度的適應(yīng)。盡管，滲透壓調(diào)節(jié)是魚類生存十分重要的，但迄今為止，仍缺乏對其機(jī)理的深入研究。目前，關(guān)于滲透壓調(diào)節(jié)的主要研究集中在觀察鰓絲及氯細(xì)胞變化，Na/K-ATPase活性和激素變化等方面，實(shí)際上，這個(gè)過程是由生物體內(nèi)復(fù)雜的信號傳導(dǎo)網(wǎng)絡(luò)控。隨著分子生物學(xué)的發(fā)展，有關(guān)滲透壓調(diào)節(jié)的機(jī)制將深入分子水平的研究，更多的滲透壓相關(guān)基因?qū)⒈话l(fā)現(xiàn)。然而，如何選擇合適的模型來研究這一復(fù)雜的生理過程？眾所周知，細(xì)胞是研究基因功能學(xué)，遺傳學(xué)，RNAi的理想材料。魚類細(xì)胞成為一種重要的研究手段，廣泛應(yīng)用于病毒學(xué)、環(huán)境毒理學(xué)、基因組學(xué)等方面。與活體魚相比，魚類細(xì)胞作為實(shí)驗(yàn)對象有著無法比擬的優(yōu)點(diǎn)(1)成本低，細(xì)胞系的維護(hù)不需要大型的養(yǎng)殖設(shè)備，節(jié)省人力物力；(2)重復(fù)性好，實(shí)驗(yàn)條件可以精確控制。腎臟是魚類滲透壓調(diào)節(jié)的主要器官，建立廣鹽性魚類腎細(xì)胞系將有助于滲透壓調(diào)節(jié)的研究。金錢魚iScatophagus argu)又名金鼓魚,是一種暖水性中小型魚類，分布在印度洋，太平洋，我國東海至南海北部，肉質(zhì)鮮美，營養(yǎng)價(jià)值高，成為近年來南方備受關(guān)注的海水養(yǎng)殖新對象。金錢魚抗逆性和環(huán)境適應(yīng)性極強(qiáng)，可直接在海水、咸淡水和純淡水不同類型的養(yǎng)殖環(huán)境中正常生長。金錢魚可以生活鹽度差別極大的水體中，顯示了較強(qiáng)的鹽度適應(yīng)性，雖然近年來我國魚類細(xì)胞技術(shù)發(fā)展迅速，但相對還是比較滯后，尤其是海水魚細(xì)胞培養(yǎng)依然存在很多難點(diǎn)，已建立海水魚細(xì)胞系還很少。中國專利文獻(xiàn)CN101591638B公開了大菱鲆腎細(xì)胞系的構(gòu)建方法，包括配置細(xì)胞培養(yǎng)液、原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)，獲得的大菱鲆腎細(xì)胞系形態(tài)為成纖維樣，可以傳代40代，細(xì)胞系可以直接應(yīng)用于病原特性研究、疫苗研制及功能基因研究，也適用于其他魚類構(gòu)建腎 細(xì)胞系。中國專利文獻(xiàn)CN101372682B公開了褐點(diǎn)石斑魚鰭細(xì)胞系的構(gòu)建方法，是以褐點(diǎn)石斑魚鰭組織為材料，采用濃度為O. 5%的透明質(zhì)酸酶和O. 2% II型膠原酶聯(lián)合消化法啟動原代培養(yǎng)，采用胰蛋白酶消化法進(jìn)行傳代培養(yǎng)，構(gòu)建的褐點(diǎn)石斑魚細(xì)胞系目前已傳代至第61代。中國專利文獻(xiàn)CN102140438A公開了一種大黃魚脂肪細(xì)胞體外培養(yǎng)方法，包括I)取大黃魚腹腔腹壁的脂肪組織，2)將上述脂肪組織經(jīng)過細(xì)胞分散處理，得大黃魚前體脂肪細(xì)胞，3)將大黃魚前體脂肪細(xì)胞接入完全培養(yǎng)基中，吹打均勻，制成細(xì)胞懸液，所述完全培養(yǎng)基為含20%胎牛血清培養(yǎng)液，4)原代培養(yǎng)將細(xì)胞懸液在24-26°C條件下，培養(yǎng)成貼壁生長的前體脂肪細(xì)胞，待步驟4)所述的原代培養(yǎng)的細(xì)胞達(dá)到70-80%匯合時(shí)，可進(jìn)行傳代接種培養(yǎng)。但是關(guān)于金錢魚腎細(xì)胞系的培養(yǎng)方法目前還未見報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是針對現(xiàn)有技術(shù)中的不足，提供一種金錢魚腎細(xì)胞體外培養(yǎng)方法。為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案是一種金錢魚腎細(xì)胞體外培養(yǎng)方法，所述的培養(yǎng)方法包括以下步驟(I)配置L-15基礎(chǔ)培養(yǎng)基、原代培養(yǎng)基、含bFGF的原代培養(yǎng)基和傳代培養(yǎng)基；(2)金錢魚腎細(xì)胞原代培養(yǎng)a、無菌取腎取I齡健康金錢魚，剪尾放血后取腎組織，使用含有青霉素鏈霉素的基礎(chǔ)培養(yǎng)基沖洗，并使用含洗必泰、青霉素鏈霉素混合液的基礎(chǔ)培養(yǎng)基浸泡除菌，剪碎山、消化分離腎細(xì)胞將剪碎的腎組織轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)，加入胰蛋白酶消化，然后加入含有FBS的完全培養(yǎng)基終止胰酶消化，用濾網(wǎng)過濾組織塊，最 后獲得的細(xì)胞懸液離心；c、接種得到的腎細(xì)胞沉淀用含有bFGF的原代培養(yǎng)基接種，靜置培養(yǎng)；(3)金錢魚腎細(xì)胞傳代培養(yǎng)原代腎細(xì)胞鋪滿瓶底80%開始傳代，首次傳代按I: I比例，此后按1:2比例進(jìn)行傳代。所述的原代培養(yǎng)基是L-15基礎(chǔ)培養(yǎng)基添加20%FBS、400U ml—1青霉素和400ug ml—1鏈霉素，所述的含bFGF的原代培養(yǎng)基是每50ml原代培養(yǎng)基中添加IOng ml—1的bFGF。所述的傳代培養(yǎng)基是L-15基礎(chǔ)培養(yǎng)基添加15%和10%FBS，100U ml—1青霉素和IOOug πιΓ1 鏈霉素。所述的步驟(2)中用于沖洗腎組織的培養(yǎng)基是含有400U πιΓ1青霉素和400ug πιΓ1
鏈霉素的基礎(chǔ)培養(yǎng)基。 所述的步驟(2)中的浸泡除菌是指將腎組織在含有5%洗必泰，4%青霉素鏈霉素混合液的L-15基礎(chǔ)培養(yǎng)基中浸泡5min。所述的傳代培養(yǎng)具體方法如下首先吸出培養(yǎng)基，加入Iml O. 25%胰酶潤洗瓶底后倒掉，再加入O. 5ml O. 25%-EDTA，放置在28°C培養(yǎng)箱內(nèi)l_2min，鏡下觀察細(xì)胞變圓時(shí)，立即加入5ml新鮮培養(yǎng)基，輕輕吹打瓶底，使貼壁細(xì)胞脫落，首次傳代按I: I比例，此后按1:2比例進(jìn)行傳代，1-10代細(xì)胞培養(yǎng)基FBS濃度為15%，11代后降為10%。本發(fā)明優(yōu)點(diǎn)在于
1、本發(fā)明采用的金錢魚腎細(xì)胞培養(yǎng)方法可重復(fù)強(qiáng)，效果佳；
2、本發(fā)明對已有的海水魚細(xì)胞培養(yǎng)方法進(jìn)行借鑒，改良，摸索了適合金錢魚腎細(xì)胞的體外培養(yǎng)方法，建立了穩(wěn)定的腎細(xì)胞培養(yǎng)體系，首次建立了金錢魚腎細(xì)胞系，以期為金錢魚滲透壓調(diào)節(jié)提供細(xì)胞模型，同時(shí)有助于金錢魚功能基因組的深入研究。


附圖I是加入生長因子組第四天腎細(xì)胞向外遷出。附圖2是金錢魚腎細(xì)胞第三代。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合附圖對本發(fā)明提供的具體實(shí)施方式
作詳細(xì)說明。實(shí)施例I配制培養(yǎng)基I.基礎(chǔ)培養(yǎng)基
將一包L-15干粉培養(yǎng)基溶于800ml超純水中，加入5ml HEPES( 1M)緩沖液，充分?jǐn)噭?，定容?L，調(diào)節(jié)pH為7. 4，O. 22 μ m濾膜過濾除菌，4°C保存?zhèn)溆谩?.完全培養(yǎng)基
原代培養(yǎng)基取IOOml上述基礎(chǔ)培養(yǎng)基，添加20%FBS，400U ml—1青霉素和400ug ml—1鏈霉素O含bFGF的原代培養(yǎng)基取50ml上述原代培養(yǎng)基，添加IOng πιΓ1的bFGF，配成含bFGF的原代培養(yǎng)基。傳代培養(yǎng)基用上述配制的基礎(chǔ)培養(yǎng)基，添加15%和10%FBS，100U ml—1青霉素和IOOug ml 1鏈霉素，兩周內(nèi)用完。 實(shí)施例2金錢魚腎細(xì)胞原代培養(yǎng)I.無菌取腎
取I齡健康金錢魚，剪尾放血后取材。具體操作如下75%酒精浸泡魚體30s，在超凈工作臺內(nèi)，解剖取下腎組織，用添加有400U ml—1青霉素和400ug ml—1鏈霉素的基礎(chǔ)培養(yǎng)基清洗腎組織以去除表面細(xì)菌和血液，為了保證組織無菌，將腎組織浸泡在含有5%洗必泰，4%青霉素鏈霉素混合液的L-15基礎(chǔ)培養(yǎng)基中5min，用眼科剪剪碎組織至Imm2大小。2.消化分離腎細(xì)胞
將剪碎的腎組織轉(zhuǎn)移至15ml離心管內(nèi)，加入5-6 ml的O. 25%胰蛋白酶，在28°C水浴鍋內(nèi)消化20min，期間不斷搖勻以加速分離，然后加入含有20%FBS的完全培養(yǎng)基終止胰酶消化，用200目濾網(wǎng)過濾組織塊,最后獲得的細(xì)胞懸液，IOOOrpm離心lOmin。3.接種
得到的腎細(xì)胞沉淀分別用含有bFGF和不含bFGF的培養(yǎng)基各接種一瓶(25cm2)，28°C靜置培養(yǎng)。24h觀察細(xì)胞貼壁情況，每隔2-3天換l-2ml新鮮培養(yǎng)基。實(shí)施例3金錢魚腎細(xì)胞傳代培養(yǎng)
原代腎細(xì)胞鋪滿瓶底80%開始傳代。傳代培養(yǎng)具體方法如下首先吸出培養(yǎng)基，加入Iml O. 25%胰酶潤洗瓶底后倒掉，再加入O. 5ml O. 25%-EDTA，放置在28°C培養(yǎng)箱內(nèi)l_2min，鏡下觀察細(xì)胞變圓時(shí)，立即加入5ml新鮮培養(yǎng)基，輕輕吹打瓶底，使貼壁細(xì)胞脫落，首次傳代按I: I比例，此后按1:2比例進(jìn)行傳代。1-10代細(xì)胞培養(yǎng)基FBS濃度為15%，11代后降為10%。實(shí)施例4金錢魚腎細(xì)胞體外培養(yǎng)方法
在對已有的海水魚細(xì)胞進(jìn)行借鑒，改良的基礎(chǔ)上，本發(fā)明提供了一種適合金錢魚腎細(xì)胞體外培養(yǎng)的方法，建立了金錢魚腎細(xì)胞系。其步驟如下
一、材料I.試驗(yàn)魚I齡健康金錢魚。2.試劑
L-15 干粉培養(yǎng)基，HEPES (1M)，0. 25%胰蛋白酶，O. 25%胰酶-EDTA，F(xiàn)BS (均為 GBICO產(chǎn)品)，堿性成纖維細(xì)胞生長因子bFGF (上海普飛生物技術(shù)有限公司)，青霉素-鏈霉素(上海微科生化試劑有限公司)，洗必泰液(上海旭飛生物科技有限公司)。二、方法
I.配制培養(yǎng)基1.I基礎(chǔ)培養(yǎng)基
將一包L-15干粉培養(yǎng)基溶于800ml超純水中，加入5ml HEPES( 1M)緩沖液，充分?jǐn)噭?，定容?L，調(diào)節(jié)pH為7. 4，O. 22 um濾膜過濾除菌，4°C保存?zhèn)溆谩. 2完全培養(yǎng)基
金錢魚腎細(xì)胞原代所用培養(yǎng)基取IOOml上述基礎(chǔ)培養(yǎng)基，添加20%FBS，400U ml—1青霉素和400ug πιΓ1鏈霉素。為了比較bFGF對腎細(xì) 胞增殖的影響，取50ml上述原代培養(yǎng)基，添加IOng πιΓ1的bFGF,配成含bFGF的原代培養(yǎng)基。金錢魚腎細(xì)胞傳代所用培養(yǎng)基用上述配制的基礎(chǔ)培養(yǎng)基，添加15%和10%FBS，100U ml 1青霉素和IOOug ml 1鏈霉素，兩周內(nèi)用完。2.金錢魚腎細(xì)胞原代培養(yǎng)
2.I無菌取腎
取I齡健康金錢魚，剪尾放血后取材。具體操作如下75%酒精浸泡魚體30s，在超凈工作臺內(nèi)，解剖取下腎組織，用添加有400U ml—1青霉素和400ug ml—1鏈霉素的基礎(chǔ)培養(yǎng)基清洗腎組織以去除表面細(xì)菌和血液，為了保證組織無菌，將腎組織浸泡在含有5%洗必泰，4%青霉素鏈霉素混合液的L-15基礎(chǔ)培養(yǎng)基中5min，用眼科剪剪碎組織至Imm2大小。2. 2消化分離腎細(xì)胞
將剪碎的腎組織轉(zhuǎn)移至15ml離心管內(nèi)，加入5-6 ml的O. 25%胰蛋白酶，在28°C水浴鍋內(nèi)消化20min，期間不斷搖勻以加速分離，然后加入含有20%FBS的完全培養(yǎng)基終止胰酶消化，用200目濾網(wǎng)過濾組織塊,最后獲得的細(xì)胞懸液，IOOOrpm離心lOmin。2. 3 接種
得到的腎細(xì)胞沉淀分別用含有bFGF和不含bFGF的培養(yǎng)基各接種一瓶(25cm2)，28°C靜置培養(yǎng)。24h觀察細(xì)胞貼壁情況，每隔2-3天換l-2ml新鮮培養(yǎng)基。3.金錢魚腎細(xì)胞傳代培養(yǎng)
原代腎細(xì)胞鋪滿瓶底80%開始傳代。傳代培養(yǎng)具體方法如下首先吸出培養(yǎng)基，加入Iml O. 25%胰酶潤洗瓶底后倒掉，再加入O. 5ml O. 25%-EDTA，放置在28°C培養(yǎng)箱內(nèi)l_2min，鏡下觀察細(xì)胞變圓時(shí)，立即加入5ml新鮮培養(yǎng)基，輕輕吹打瓶底，使貼壁細(xì)胞脫落，首次傳代按I: I比例，此后按1:2比例進(jìn)行傳代。1-10代細(xì)胞培養(yǎng)基FBS濃度為15%，11代后降為10%。三、結(jié)果
I.細(xì)胞貼壁情況
剛接種的細(xì)胞貼壁不牢，接種24h內(nèi)要保證細(xì)胞處于靜止?fàn)顟B(tài)。24h后倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞貼壁情況，兩瓶細(xì)胞貼壁較好，大部分細(xì)胞均已貼壁，腎細(xì)胞主要是細(xì)胞團(tuán)貼壁，而大部分單個(gè)細(xì)胞沒有貼壁。相比于單個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞團(tuán)更容易貼壁。2. bFGF對原代腎細(xì)胞增殖的影響
加入bFGF的腎細(xì)胞，第4天開始有細(xì)胞遷出，第7天細(xì)胞鋪滿瓶底80%，原代培養(yǎng)周期為7天。請參照附圖1，附圖I是加入生長因子(bFGF)組第四天腎細(xì)胞向外遷出。不加bFGF的腎細(xì)胞生長較緩慢，第11天有細(xì)胞遷出，18天鋪滿瓶底80%，原代培養(yǎng)時(shí)間長達(dá)18天。結(jié)果表明bFGF能明顯促進(jìn)金錢魚腎細(xì)胞的增殖，大大縮短原代細(xì)胞培養(yǎng)的時(shí)間。
3.傳代培養(yǎng)
金錢魚腎細(xì)胞鋪滿瓶底80%后開始傳代,初次傳代按1:1的比例傳,傳代細(xì)胞生長迅速，3-4天鋪滿單層。目前，金錢魚腎細(xì)胞可傳至22代。傳代的腎細(xì)胞主要為纖維樣，混雜少量上皮樣細(xì)胞。請參照附圖2，附圖2是金錢魚腎細(xì)胞第三代。四、討論
I.血細(xì)胞的去除
腎臟里有大量的血管分布，為了去除血細(xì)胞對細(xì)胞培養(yǎng)的影響，在金錢魚取材之前斷尾放血20min，血細(xì)胞數(shù)量明顯減少，取材后又多次清洗腎組織，進(jìn)一步減少了血細(xì)胞的數(shù)量。2.除菌方法
保證組織的無菌是原代培養(yǎng)的關(guān)鍵。常用的組織塊消毒方法是用70%酒精浸泡，但要嚴(yán)格控制時(shí)間，過長的時(shí)間會降低組織的活性。青島海洋大學(xué)學(xué)報(bào)，2000年，I期30卷，朗剛?cè)A等在對櫛孔扇貝外套膜組織的原代培養(yǎng)中采用青霉素、鏈霉素和復(fù)方洗必泰混合溶液除菌，對組織損傷小，除菌徹底。本發(fā)明采用含有5%洗必泰，4%青霉素鏈霉素混合液的L-15基礎(chǔ)培養(yǎng)基浸泡腎組織5min，并使用含有高濃度抗生素的基礎(chǔ)培養(yǎng)基多次沖洗組織，在除菌的同時(shí)最大限度的保持了細(xì)胞活力。3. bFGF對細(xì)胞增殖的影響
bFGF是魚類細(xì)胞培養(yǎng)中常用的生長因子之一，在培養(yǎng)基中加入這種生長因子會促進(jìn)細(xì)胞進(jìn)入DNA合成期和分裂期，生長因子通過與酪氨酸激酶性受體結(jié)合，激活了受體的酪氨酸激酶活性，使ras蛋白被激活，進(jìn)而激活了細(xì)胞內(nèi)MAP激酶的級聯(lián)反應(yīng)鏈，來刺激細(xì)胞增殖。本發(fā)明對比了 bFGF對原代腎細(xì)胞增殖的影響，結(jié)果是不加bFGF的腎細(xì)胞11天有細(xì)胞遷出，18天長滿單層80%，加入IOng ml^bFGF的細(xì)胞第4天有細(xì)胞遷出，第7天細(xì)胞長滿單層80%，結(jié)果表明bFGF能明顯促進(jìn)金錢魚腎細(xì)胞增殖，縮短原代細(xì)胞培養(yǎng)周期。綜上所述，本發(fā)明采用的金錢魚腎細(xì)胞培養(yǎng)方法可重復(fù)強(qiáng)，效果佳。以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，應(yīng)當(dāng)指出，對于本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人 員，在不脫離本發(fā)明方法的前提下，還可以做出若干改進(jìn)和補(bǔ)充，這些改進(jìn)和補(bǔ)充也應(yīng)視為本發(fā)明的保護(hù)范圍。
權(quán)利要求
1.一種金錢魚腎細(xì)胞體外培養(yǎng)方法，其特征在于，所述的培養(yǎng)方法包括以下步驟(1)配置L-15基礎(chǔ)培養(yǎng)基、原代培養(yǎng)基、含bFGF的原代培養(yǎng)基和傳代培養(yǎng)基；(2)金錢魚腎細(xì)胞原代培養(yǎng)a、無菌取腎取I齡健康金錢魚，剪尾放血后取腎組織，使用含有青霉素鏈霉素的基礎(chǔ)培養(yǎng)基沖洗，并使用含洗必泰、青霉素鏈霉素混合液的基礎(chǔ)培養(yǎng)基浸泡除菌，剪碎山、消化分離腎細(xì)胞將剪碎的腎組織轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)，加入胰蛋白酶消化，然后加入含有FBS的完全培養(yǎng)基終止胰酶消化，用濾網(wǎng)過濾組織塊，最后獲得的細(xì)胞懸液離心；c、接種得到的腎細(xì)胞沉淀用含有bFGF的原代培養(yǎng)基接種，靜置培養(yǎng)；(3)金錢魚腎細(xì)胞傳代培養(yǎng)原代腎細(xì)胞鋪滿瓶底80%開始傳代，首次傳代按I: I比例，此后按1:2比例進(jìn)行傳代。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的培養(yǎng)方法，其特征在于，所述的原代培養(yǎng)基是L-15基礎(chǔ)培養(yǎng)基添加20%FBS、400U ml—1青霉素和400ug ml—1鏈霉素，所述的含bFGF的原代培養(yǎng)基是每50ml原代培養(yǎng)基中添加IOng ml—1的bFGF。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的培養(yǎng)方法，其特征在于，所述的傳代培養(yǎng)基是L-15基礎(chǔ)培養(yǎng)基添加15%和10%FBS, 100U mr1青霉素和IOOug mF1鏈霉素。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述的培養(yǎng)方法，其特征在于，所述的步驟(2)中用于沖洗腎組織的培養(yǎng)基是含有400U mr1青霉素和400ug ml—1鏈霉素的基礎(chǔ)培養(yǎng)基。
5.根據(jù)權(quán)利要求I所述的培養(yǎng)方法，其特征在于，所述的步驟(2)中的浸泡除菌是指將腎組織在含有5%洗必泰，4%青霉素鏈霉素混合液的L-15基礎(chǔ)培養(yǎng)基中浸泡5min。
6.根據(jù)權(quán)利要求I所述的培養(yǎng)方法，其特征在于，所述的傳代培養(yǎng)具體方法如下首先吸出培養(yǎng)基，加入Iml 0. 25%胰酶潤洗瓶底后倒掉，再加入0. 5ml 0. 25%-EDTA，放置在28°C培養(yǎng)箱內(nèi)l_2min，鏡下觀察細(xì)胞變圓時(shí)，立即加入5ml新鮮培養(yǎng)基，輕輕吹打瓶底，使貼壁細(xì)胞脫落，首次傳代按I: I比例，此后按1:2比例進(jìn)行傳代，1-10代細(xì)胞培養(yǎng)基FBS濃度為15%, 11代后降為10%。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種金錢魚腎細(xì)胞體外培養(yǎng)方法，所述的培養(yǎng)方法包括以下步驟(1)配置L-15基礎(chǔ)培養(yǎng)基、原代培養(yǎng)基、含bFGF的原代培養(yǎng)基和傳代培養(yǎng)基；(2)金錢魚腎細(xì)胞原代培養(yǎng)a、無菌取腎；b、消化分離腎細(xì)胞；c、接種；(3)金錢魚腎細(xì)胞傳代培養(yǎng)。本發(fā)明優(yōu)點(diǎn)在于本發(fā)明采用的金錢魚腎細(xì)胞培養(yǎng)方法可重復(fù)強(qiáng)，效果佳；本發(fā)明對已有的海水魚細(xì)胞培養(yǎng)方法進(jìn)行借鑒，改良，摸索了適合金錢魚腎細(xì)胞培養(yǎng)的培養(yǎng)方法，建立了穩(wěn)定的腎細(xì)胞培養(yǎng)體系，首次建立了金錢魚腎細(xì)胞系，以期為金錢魚滲透壓調(diào)節(jié)提供細(xì)胞模型，同時(shí)有助于金錢魚功能基因組的深入研究。
文檔編號C12N5/071GK102634481SQ20121012037
公開日2012年8月15日 申請日期2012年4月23日 優(yōu)先權(quán)日2012年4月23日
發(fā)明者張俊彬, 張瑩瑩 申請人:上海海洋大學(xué)