專利名稱：一種金錢魚生殖調(diào)控與全人工繁殖方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種水產(chǎn)養(yǎng)殖方法，具體地說，是一種金錢魚生殖調(diào)控與全人工繁殖 方法。
背景技術(shù)：
金錢魚(5ba tophagus argus )又名金鼓魚，為廣溫廣鹽性的魚類，我國東海至南海 北部沿海水域近岸巖礁、紅樹林區(qū)、海藻叢生地帶和河口附近均有分布，為一種兼具觀賞性 的優(yōu)質(zhì)經(jīng)濟魚類，在深受我國南方喜歡的品種。近年來因海水養(yǎng)殖方式趨向健康環(huán)保，其獨 有的生物學特性引起了海水養(yǎng)殖的極大關(guān)注度。金錢魚不經(jīng)過馴化就可以直接在淡水中成 活，適應(yīng)性極強，可在海水、咸淡水和純淡水不同類型的養(yǎng)殖環(huán)境中正常生長和發(fā)育，目前 在南方的養(yǎng)殖已具備一定規(guī)模，擴繁后可在我國大面積推廣。金錢魚不僅經(jīng)濟價值高，而且 性情溫和，環(huán)境適應(yīng)性和抗病抗逆性極強，金錢魚是以食植性為主、兼有肉食性的雜食性魚 類，餌料食譜廣，這種即有食性雜，又有獨特的廣鹽適應(yīng)性的優(yōu)良魚種在我國海水魚類養(yǎng)殖 的物種中不多見，適合我國主要港灣河口水域及各類咸、淡水池塘以及網(wǎng)箱或工廠化養(yǎng)殖 環(huán)境養(yǎng)殖，其養(yǎng)殖的前景深具潛力。金錢魚生長較快，兩齡養(yǎng)殖的成魚體重在1-2市斤，強 化培養(yǎng)一年即可上市。金錢魚出肉率高，適合進一步深加工。目前的市場價格在100-150 元/公斤，市場需求巨大，但養(yǎng)殖的苗種主要來源于天然采獲，因此出現(xiàn)了“一苗難求”的局 面。迄今為止，有關(guān)金錢魚繁、養(yǎng)殖生物學基礎(chǔ)研究非常少。金錢魚生長快，且食性雜，不需要太多的動物蛋白源，符合當下倡導(dǎo)的“低碳養(yǎng)殖” 的要求。金錢魚既可單養(yǎng)，亦可混養(yǎng)來清除池中的藻類，同時，金錢魚適合高密度的網(wǎng)箱或 工廠化養(yǎng)殖，在魚粉價格持續(xù)高漲的趨勢下，其養(yǎng)殖的前景深具潛力。Terence P. Barry等分別于1991和1993年對金錢魚的繁殖生物學的基礎(chǔ)理論進 行了研究，證明激素能誘導(dǎo)金錢魚排精和產(chǎn)卵，但并未對金錢魚的人工繁殖進行系統(tǒng)的研 究。蘭國寶等于2005年以天然生長的和網(wǎng)箱養(yǎng)殖的懷卵魚作為親魚，用LRH和HCG等激素 進行人工催產(chǎn)嘗試，但受精率和孵化率卻很低，受精率大約為0. 5% _1%，而孵化率則低于 0. 1%，無實用價值。珠海市龍勝良種魚苗培育基地采用剖解雄魚獲得成熟精子，對幾十尾 雌魚實施人工授精獲得了一定數(shù)量的魚苗，但大批雄魚解剖后就會死亡，這對生產(chǎn)單位是 一種損失。嚴格意義講，這只是一種半人工繁殖技術(shù)，因為只是實現(xiàn)了雌魚的自然產(chǎn)卵，而 且受精率和孵化率都不高。中國專利文獻CN :1739345A公開了高位池馴化和養(yǎng)殖方法。該發(fā)明涉及魚類養(yǎng)殖 方法，特別涉及金錢魚和黃斑藍子魚的高位池馴化和養(yǎng)殖方法。一種高位池馴化和養(yǎng)殖方 法，其包括如下過程a.捕捉天然苗種或收購；b.水處理及育苗；c.苗種中間培育，該過程 包括苗種馴化、分級飼養(yǎng)和苗種人工誘食、馴餌兩個階段；d.成魚高位池養(yǎng)殖，該過程中包 括生態(tài)養(yǎng)殖、食餌投喂、病蟲害防治和水處理過程。中國專利文獻CN公開了一種 人工誘導(dǎo)石斑魚性腺發(fā)育成熟及排卵和排精的緩釋催產(chǎn)劑及用途。該發(fā)明公開了一種人工 誘導(dǎo)石斑魚性腺發(fā)育成熟及排卵和排精的緩釋催產(chǎn)劑，其配方組分如下促黃體素釋放激素類似物0. 1-1 %，17 α -羥基孕酮3-10%，膽固醇75_95%，纖維素1_19% ；在所述配方組 分中加1-3%的植物油，均勻混合，用特制的模具制成圓柱狀藥丸。該發(fā)明用于埋植石斑魚 體內(nèi)，以誘導(dǎo)其性腺發(fā)育成熟達到排卵和排精，以適應(yīng)石斑魚人工育苗產(chǎn)業(yè)化及大規(guī)模養(yǎng) 殖對種苗的需求。中國專利文獻CN:1180842C公開了魚類催熟激素緩釋微球注射劑及其 制備方法，該發(fā)明公開了魚類催熟激素緩釋微球注射劑，其特征是微球中含有激素與緩釋 劑，激素與緩釋劑的質(zhì)量比等于、小于0.01%。優(yōu)化方案是將激素粉狀微球放入棉籽油中混 勻，制成懸浮液。但是關(guān)于穩(wěn)定的生殖調(diào)控技術(shù)和高效的金錢魚人工繁殖技術(shù)目前還未見 報道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是針對現(xiàn)有技術(shù)中的不足，提供一種金錢魚生殖調(diào)控與全人工繁殖 方法。本發(fā)明的再一的目的是，提供一種金錢魚生殖調(diào)控與全人工繁殖方法所用的催產(chǎn) 緩釋劑。為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案是一種金錢魚生殖調(diào)控與全人工繁殖 方法，所述的方法在催產(chǎn)劑中加入催產(chǎn)緩釋劑，所述的催產(chǎn)緩釋劑按質(zhì)量百分比由以下組 分組成
膽固醇40-50%
丙烯甘油醇酯20-30%
三油酸甘油酯20-30%。所述的方法在人工催產(chǎn)一個半月前按每千克魚體重10-25 μ g胸腔注射&1RH-A拮 抗劑戈舍瑞林Goserelin0所述的方法中采用水溫25-30°C，鹽度19-沈％0。所述的方法中每千克魚體重注射25-30 μ g的催產(chǎn)劑LHRH-A2、1. 0-1. 5mg的催 產(chǎn)佐劑多巴胺拮抗劑地歐酮DOM和0. 5ml的催產(chǎn)緩釋劑。所述的方法中催產(chǎn)劑、催產(chǎn)佐劑和催產(chǎn)緩蝕劑混合乳化后胸腔注射。所述的方法中采用胸鰭基部注射，分兩次進行，間隔時間36-48小時。為實現(xiàn)上述第二個目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案是一種金錢魚生殖調(diào)控與全人 工繁殖方法所用的催產(chǎn)緩釋劑，所述的催產(chǎn)緩釋劑按質(zhì)量百分比由以下組分組成
膽固醇40-50%
丙烯甘油醇酯20-30%
三油酸甘油酯20-30%。本發(fā)明優(yōu)點在于
1、通過對金錢魚野生親魚的馴化和親本培育過程進行營養(yǎng)強化和對水質(zhì)理化參數(shù)的 調(diào)控以及激素緩釋技術(shù)，達到親本同步性成熟和提高生殖配子質(zhì)量的目標；
2、通過高效人工催產(chǎn)劑和全人工催產(chǎn)技術(shù)，實現(xiàn)雌雄生殖配子同步釋放，建立穩(wěn)定的 生殖調(diào)控技術(shù)和高效的金錢魚人工繁殖技術(shù)。


附圖1是金錢魚發(fā)育中的胚胎照片。附圖2是剛出膜的金錢魚魚苗照片。附圖3是金錢魚前期仔魚魚苗照片。附圖4是金錢魚后期仔魚魚苗照片。
具體實施例方式下面結(jié)合附圖對本發(fā)明提供的具體實施方式
作詳細說明。實施例1親本培育和催熟技術(shù)
在每年的1-3月，對雌雄親魚進行強化培育，基于金錢魚親魚營養(yǎng)需求研究表明維生 素A和E、高度不飽和脂肪酸可顯著提高金錢魚的性腺發(fā)育，促使雌雄親魚進一步成熟。加 強對水質(zhì)理化參數(shù)的調(diào)控，金錢魚的雄魚性腺發(fā)育對環(huán)境條件苛刻，這是限制金錢魚人工 繁殖的關(guān)鍵之一。正交研究表明，適宜于金錢魚性腺發(fā)育的鹽度范圍在1916%。，溫度在 25-30 0C，微流水的環(huán)境可促進金錢魚性腺發(fā)育。實施例2親本同步性成熟技術(shù)
金錢魚親魚性腺發(fā)育不同步，雄魚往往提早雌魚成熟，所以受精率低。為了實現(xiàn)金錢魚 親魚性腺的同步發(fā)育，在人工催產(chǎn)一個半月前按每千克魚體重10-25μg胸腔注射( RH-A 拮抗劑戈舍瑞林Goserelin (購自英國阿斯利康制藥有限公司)，可以顯著延緩金錢魚精巢 的成熟，而且能保證金錢魚親魚性腺發(fā)育同步。實施例3高效人工催產(chǎn)劑和全人工催產(chǎn)技術(shù)
單純采用催產(chǎn)激素如促黃體素釋放激素類似物LHRH和人體絨毛膜促性腺激素HCG對 金錢魚催產(chǎn)效果并不十分明顯，由于金錢魚對催產(chǎn)激素的反應(yīng)時間較長，效益時間太長催 產(chǎn)激素就會在生物體內(nèi)降解，這也是其它報道金錢魚孵化率很低的原因。我們在催產(chǎn)劑中 加入了自我研制的催產(chǎn)緩釋劑(膽固醇丙烯甘油醇酯三油酸甘油酯(質(zhì)量比)=40-50% 20-30% :20-30%)，不同于其它催產(chǎn)緩釋方法，他們是將緩釋催產(chǎn)劑制成圓柱狀藥丸和顆粒， 埋植于魚體內(nèi)。而本研究是將研制的緩釋劑與催產(chǎn)激素LHRH乳化后胸腔注射。人工催產(chǎn) 中添加了催產(chǎn)佐劑多巴胺拮抗劑地歐酮DOM(Cbmperidon)，研究證明，每千克魚體重注射 25-30 μ g的LHRH-A2、1. 0-1. 5mg的DOM和0. 5ml的催產(chǎn)劑緩釋劑，混合激素胸鰭基部注 射，分兩次進行，間隔時間36-48小時。人工繁殖的實驗證明，金錢魚的受精率可達60%以 上，孵化率大于50%，顯著高于其他報道。請參照附圖1、附圖2和附圖3，附圖1是金錢魚發(fā)育中的胚胎照片，附圖2是剛出膜 的金錢魚魚苗照片，附圖3是金錢魚前期仔魚魚苗照片，附圖4是金錢魚后期仔魚魚苗照片。實施例4金錢魚生殖調(diào)控與全人工繁殖方法 (1)親本培育和催熟技術(shù)
在每年的1-3月，對雌雄親魚進行強化培育，基于金錢魚親魚營養(yǎng)需求研究表明維生 素A和E、高度不飽和脂肪酸可顯著提高金錢魚的性腺發(fā)育，促使雌雄親魚進一步成熟。加 強對水質(zhì)理化參數(shù)的調(diào)控，金錢魚的雄魚性腺發(fā)育對環(huán)境條件苛刻，這是限制金錢魚人工 繁殖的關(guān)鍵之一。適宜于金錢魚性腺發(fā)育的鹽度范圍在1946%。，溫度在25-30°C，微流水 的環(huán)境可促進金錢魚性腺發(fā)育。
(2)親本同步性成熟技術(shù)
金錢魚親魚性腺發(fā)育不同步，雄魚往往提早雌魚成熟，所以受精率低。為了實現(xiàn)金錢魚 親魚性腺的同步發(fā)育，在人工催產(chǎn)一個半月前按每千克魚體重10-25μg胸腔注射( RH-A 拮抗劑戈舍瑞林Goserelin (購自英國阿斯利康制藥有限公司)，可以顯著延緩金錢魚精巢 的成熟，而且能保證金錢魚親魚性腺發(fā)育同步。(3)高效人工催產(chǎn)劑和全人工催產(chǎn)技術(shù)
在催產(chǎn)劑中加入了自我研制的催產(chǎn)緩釋劑(膽固醇丙烯甘油醇酯三油酸甘油酯 (質(zhì)量比)=40-50% :20-30% :20-30%)，將研制的緩釋劑與催產(chǎn)激素LHRH乳化后胸腔注射。 人工催產(chǎn)中添加了催產(chǎn)佐劑多巴胺拮抗劑地歐酮DOM(Cbmperidon)，研究證明，每千克魚體 重注射25-30 μ g的LHRH-A2、1. 0-1. 5mg的DOM和0. 5ml的催產(chǎn)劑緩釋劑，混合激素胸鰭 基部注射，分兩次進行，間隔時間36-48小時。人工繁殖的實驗證明，金錢魚的受精率可達 60%以上，孵化率大于50%，顯著高于其他報道。請參照附圖1、附圖2和附圖3，附圖1是金錢魚發(fā)育中的胚胎照片，附圖2是剛出 膜的金錢魚魚苗照片，附圖3是金錢魚前期仔魚魚苗照片，附圖4是金錢魚后期仔魚魚苗照 片。實施例5不同催產(chǎn)劑條件下的催產(chǎn)和受精實驗
關(guān)于金錢魚的人工繁殖，國外雖已有以激素誘導(dǎo)精卵成熟的研究，但還未見取得成功 的報道；國內(nèi)目前還沒有這方面的研究報告。金錢魚人工繁殖難以取得成功的主要原因有兩個方面，一是雌雄魚性腺成熟不同 步，一般情況下雄性個體較雌性個體提前15-30 d成熟。二是雌魚卵巢不能充分發(fā)育成熟。 在比重為1. 010 1. 015的半咸水中進行人工促熟飼養(yǎng)時，當卵子發(fā)育到約200 μ m時， 如不及時用激素催產(chǎn)，卵巢會很快退化消失。催產(chǎn)劑1 促黃體素釋放激素類似物LHRH-A2，注射劑量30 μ g/kg，分兩次進行，間 隔時間36-48小時；
催產(chǎn)劑2 人體絨毛膜促性腺激素HCG，注射劑量30μ g/kg，分兩次進行，間隔時間 36-48小時；
催產(chǎn)劑3 :促黃體素釋放激素LHRH-A2 0. 5% (質(zhì)量比)、17 α -羥基孕酮 (17 α -hydroxyprogesterone)5. 5%、膽固醇(Cholesterol )75%、纖維素(Cellulose) 18% 及 1%植物油混合均勻，制成圓柱狀藥丸，用推進器推入魚體背部肌肉內(nèi)，注射劑量30 μ g/kg, 分兩次進行，間隔時間36-48小時；
催產(chǎn)劑4 促黃體素釋放激素LHRH-A2與蒸餾水溶化的明膠按質(zhì)量比0. 01%混勻，制成 乳狀液并加入戊二醛固化制成微球，注射時用棉籽油混勻，注射劑量30 μ g/kg,分兩次進 行，間隔時間36-48小時；
催產(chǎn)劑5 每千克魚體重注射30 μ g的LHRH-A2 + 1. 5mg D0M，混合激素胸鰭基部注射， 分兩次進行，間隔時間36-48小時；
催產(chǎn)劑6 每千克魚體重注射30 μ g的LHRH-A2 + 1. 5mg DOM +0. 5ml的催產(chǎn)劑緩釋劑， 混合激素胸鰭基部注射，分兩次進行，間隔時間36-48小時。催產(chǎn)劑緩蝕劑配方為膽固醇 丙烯甘油醇酯三油酸甘油酯(質(zhì)量比)=40-50% :20-30% :20-30% ；
催產(chǎn)劑7 每千克魚體重注射25 μ g的LHRH-A2 + l.Omg DOM +0. 5ml的催產(chǎn)劑緩釋劑，混合激素胸鰭基部注射，分兩次進行，間隔時間36-48小時。催產(chǎn)劑緩蝕劑配方為膽固醇 丙烯甘油醇酯三油酸甘油酯(質(zhì)量比)=40-50% :20-30% :20-30%o請參見表1，表1是不同催產(chǎn)劑條件下的受精率和孵化率。由表1可以看出，人工 繁殖的實驗證明，采用在催產(chǎn)劑中加入催產(chǎn)緩釋劑的方法，金錢魚的受精率可達60%以上， 孵化率大于50%，顯著高于其他報道。表1不同催產(chǎn)劑條件下的受精率和孵化率
催產(chǎn)劑激素種類受精率孵化率1LHRH-A20. 7%0. 1%2HCG1. 0%0. 09%3LHRH-A2圓柱藥丸30%22%4LHRH-A2 微球35%25%5lhrh-a2+dom25%18%6LHRH-A2+D0M+ 催產(chǎn)劑緩釋劑，30 μ g/kg65%54%7LHRH-A2+D0M+ 催產(chǎn)劑緩釋劑，25 μ g/kg61%52%8空白對照組0. 2%0. 09%
實施例6催產(chǎn)緩釋劑的制備(一)
一種金錢魚生殖調(diào)控與全人工繁殖方法所用的催產(chǎn)緩釋劑，所述的催產(chǎn)緩釋劑按質(zhì)量 百分比由以下組分組成膽固醇40%，丙烯甘油醇酯30%，三油酸甘油酯30%。先用高速攪拌 機將膽固醇與三油酸甘油酯混勻，按后加入丙烯甘油醇酯攪拌得到均一體。將催產(chǎn)緩釋劑 與催產(chǎn)激素LHRH乳化后胸腔注射。實施例7催產(chǎn)緩釋劑的制備(二)
一種金錢魚生殖調(diào)控與全人工繁殖方法所用的催產(chǎn)緩釋劑，所述的催產(chǎn)緩釋劑按質(zhì)量 百分比由以下組分組成膽固醇50%，丙烯甘油醇酯30%，三油酸甘油酯20%。先用高速攪拌 機將膽固醇與三油酸甘油酯混勻，按后加入丙烯甘油醇酯攪拌得到均一體。將催產(chǎn)緩釋劑 與催產(chǎn)激素LHRH乳化后胸腔注射。實施例8催產(chǎn)緩釋劑的制備(三)
一種金錢魚生殖調(diào)控與全人工繁殖方法所用的催產(chǎn)緩釋劑，所述的催產(chǎn)緩釋劑按質(zhì)量 百分比由以下組分組成膽固醇45%，丙烯甘油醇酯25%，三油酸甘油酯30%。先用高速攪拌 機將膽固醇與三油酸甘油酯混勻，按后加入丙烯甘油醇酯攪拌得到均一體。將催產(chǎn)緩釋劑 與催產(chǎn)激素LHRH乳化后胸腔注射。

實施例9催產(chǎn)緩釋劑的制備(四)
一種金錢魚生殖調(diào)控與全人工繁殖方法所用的催產(chǎn)緩釋劑，所述的催產(chǎn)緩釋劑按質(zhì)量 百分比由以下組分組成膽固醇50%，丙烯甘油醇酯20%，三油酸甘油酯30%。先用高速攪拌 機將膽固醇與三油酸甘油酯混勻，按后加入丙烯甘油醇酯攪拌得到均一體。將催產(chǎn)緩釋劑 與催產(chǎn)激素LHRH乳化后胸腔注射。實施例9催產(chǎn)緩釋劑的制備(五)
一種金錢魚生殖調(diào)控與全人工繁殖方法所用的催產(chǎn)緩釋劑，所述的催產(chǎn)緩釋劑按質(zhì)量 百分比由以下組分組成膽固醇50%，丙烯甘油醇酯25%，三油酸甘油酯25%。先用高速攪拌 機將膽固醇與三油酸甘油酯混勻，按后加入丙烯甘油醇酯攪拌得到均一體。將催產(chǎn)緩釋劑 與催產(chǎn)激素LHRH乳化后胸腔注射。以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實施方式，應(yīng)當指出，對于本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人
7員，在不脫離本發(fā)明方法的前提下，還可以做出若干改進和補充，這些改進和補充也應(yīng)視為 本發(fā)明的保護范圍。
權(quán)利要求
1.一種金錢魚生殖調(diào)控與全人工繁殖方法，其特征在于，所述的方法在催產(chǎn)劑中加入 催產(chǎn)緩釋劑，所述的催產(chǎn)緩釋劑按質(zhì)量百分比由以下組分組成膽固醇40-50%丙烯甘油醇酯20-30%三油酸甘油酯20-30%。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述的方法在人工催產(chǎn)一個半月前按每 千克魚體重10-25 μ g胸腔注射GnRH-A拮抗劑戈舍瑞林Goserelin。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述的方法中采用水溫25-30°C，鹽 度19H
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述的方法中每千克魚體重注射 25-30 μ g的催產(chǎn)劑LHRH-A2、1.0-1. 5mg的催產(chǎn)佐劑多巴胺拮抗劑地歐酮DOM和0. 5ml的催產(chǎn)緩釋劑。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于，所述的方法中催產(chǎn)劑、催產(chǎn)佐劑和催產(chǎn)緩 蝕劑混合乳化后胸腔注射。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，所述的方法中采用胸鰭基部注射，分兩次 進行，間隔時間36-48小時。
7.—種金錢魚生殖調(diào)控與全人工繁殖方法所用的催產(chǎn)緩釋劑，其特征在于，所述的催 產(chǎn)緩釋劑按質(zhì)量百分比由以下組分組成膽固醇40-50%丙烯甘油醇酯20-30%三油酸甘油酯20-30%。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種金錢魚生殖調(diào)控與全人工繁殖方法，其特征在于，所述的方法在催產(chǎn)劑中加入催產(chǎn)緩釋劑，所述的催產(chǎn)緩釋劑按質(zhì)量百分比由以下組分組成膽固醇40-50%、丙烯甘油醇酯20-30%、三油酸甘油酯20-30%。本發(fā)明還提供一種金錢魚生殖調(diào)控與全人工繁殖方法所用的催產(chǎn)緩釋劑。本發(fā)明優(yōu)點在于通過對金錢魚野生親魚的馴化和親本培育過程進行營養(yǎng)強化和對水質(zhì)理化參數(shù)的調(diào)控以及激素緩釋技術(shù)，達到親本同步性成熟和提高生殖配子質(zhì)量的目標；通過高效人工催產(chǎn)劑和全人工催產(chǎn)技術(shù)，實現(xiàn)雌雄生殖配子同步釋放，建立穩(wěn)定的生殖調(diào)控技術(shù)和高效的金錢魚人工繁殖技術(shù)。
文檔編號A23K1/18GK102124973SQ20111004308
公開日2011年7月20日 申請日期2011年2月23日 優(yōu)先權(quán)日2011年2月23日
發(fā)明者張俊彬, 蔡澤平 申請人:上海海洋大學