專利名稱:魚類細胞光隆培養(yǎng)技術(shù)的制作方法
本發(fā)明屬于A01K，魚類、魚類細胞工程。
本發(fā)明在國內(nèi)外尚無先例，至今未有見到魚類細胞的克隆化培養(yǎng)·文件檢索可見江藤久美 1978·遺·32(7)64-71。
本發(fā)明的目的在于培養(yǎng)魚類細胞克隆，研究魚類的細胞形態(tài)、細胞的生化特性、細胞遺傳、細胞一病毒關(guān)系、突變體分離，促進魚類細胞工程和單克隆抗體技術(shù)的發(fā)展。
魚類細胞克隆培養(yǎng)技術(shù)包括三個步驟1.制備飼養(yǎng)細胞取羅非魚的腎組織，經(jīng)冷消化后，按100萬個細胞/毫升接種，培養(yǎng)原代單層細胞，作飼養(yǎng)細胞用。
2.分離克隆將待克隆的魚類細胞傳代，挑選形態(tài)整齊、色澤明亮、胞質(zhì)內(nèi)顆粒少的生長良好的細胞，用細胞顯微操作法將單個細胞移入預先加有0.1毫升飼養(yǎng)細胞(約含1.5-2.0萬個細胞)的96孔微量培養(yǎng)板中，加蓋，透明膠帶密封，27℃孵箱培養(yǎng)。
3.復制培養(yǎng)當細胞在接種的96孔微量培養(yǎng)板中長至大半孔時，即可消化成細胞懸液后，利用復制培養(yǎng)技術(shù)，進行轉(zhuǎn)移擴增，可獲得大量細胞克隆。
本技術(shù)對魚類細胞的克隆率為50%以上，最高能達92%，而用哺乳類細胞克隆方法分離魚類細胞克隆，其克隆率為30%。因此，本技術(shù)具有克隆率較高，培養(yǎng)時間較短，不需經(jīng)X射線處理飼養(yǎng)細胞，使用方便等優(yōu)點，能在短期內(nèi)獲得大量細胞克隆。
用細胞顯微操作法分離待克隆的單個細胞，以羅非魚腎培養(yǎng)單層細胞作飼養(yǎng)細胞，與復制培養(yǎng)相結(jié)合進行轉(zhuǎn)移擴增的技術(shù)，是實現(xiàn)本專利的最好方式。
權(quán)利要求
1.魚類細胞克隆培養(yǎng)技術(shù)，其特征在于待克隆的魚類細胞以羅非魚腎原代單層細胞作飼養(yǎng)細胞。
2.根據(jù)權(quán)利要求
1所述的魚類細胞克隆培養(yǎng)技術(shù)，其特征在于選取形態(tài)整齊、色澤明亮、胞質(zhì)內(nèi)顆粒少，生長良好的單個細胞進行克隆培養(yǎng)。
3.根據(jù)權(quán)利要求
2所述的細胞克隆，其特征在于分離克隆與復制培養(yǎng)技術(shù)相結(jié)合。
專利摘要
魚類細胞克隆培養(yǎng)技術(shù)，屬于A01K，魚類、魚類細胞工程。用單細胞顯微操作法分離單個細胞進行克隆培養(yǎng)，并以羅非魚腎原代細胞作克隆培養(yǎng)細胞的飼養(yǎng)細胞，經(jīng)復制、擴增，能在短期內(nèi)獲得大量細胞克隆，一般可使克隆率達50％以上，最高可達92％。該技術(shù)可廣泛用于研究魚類的細胞形態(tài)、細胞遺傳、細胞一病毒關(guān)系及分離突變體等，并將促進魚類生物工程和單克隆抗體技術(shù)的發(fā)展。
文檔編號A01K61/00GK85102491SQ85102491
公開日1986年9月24日 申請日期1985年4月1日
發(fā)明者鄧初夏, 楊興棋, 陳宏溪 申請人:中國科學院水生生物研究所導出引文BiBTeX, EndNote, RefMan