專利名稱：菌種誘變儀以及利用其復(fù)合誘變放射形根瘤菌的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于菌種誘變，特別是指一種菌種誘變儀以及利用其復(fù)合誘變放射形根瘤菌的方法。
背景技術(shù)：
微生物正常狀態(tài)下發(fā)生基因突變的機(jī)率為10_6，發(fā)生正向突變的機(jī)率更低。采用單一的物理誘變方法對(duì)微生物突變產(chǎn)生的效應(yīng)小，兩種或兩種以上的物理誘變方法復(fù)合使用對(duì)微生物突變產(chǎn)生的效應(yīng)大。專利號(hào)為03218655. x的實(shí)用新型專利中公開了一種誘變接種兩用箱，該實(shí)用新型通過外接的磁力攪拌器對(duì)其內(nèi)部的菌種實(shí)現(xiàn)單一物理方法的誘變， 其強(qiáng)度不易實(shí)現(xiàn)調(diào)整和控制，且誘變效果不明顯。放射形根瘤菌CGMCC NO. 5031為中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心保藏的菌種，申請(qǐng)?zhí)枮?01110219188. 5的發(fā)明專利申請(qǐng)中公開可以利用該菌種生產(chǎn)可得然膠，但利用該菌種生產(chǎn)可得然膠發(fā)酵液中可得然膠的固含量較低。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的之一在于提供一種菌種誘變儀，本發(fā)明的目的之二是提供利用菌種誘變儀復(fù)合誘變放射形根瘤菌CGMCC NO. 5031的方法，通過采用紫外燈光照、外加強(qiáng)度可調(diào)的磁場(chǎng)、使用紅外線燈提高菌種誘變環(huán)境溫度、以及利用藥物誘變對(duì)放射形根瘤菌CGMCC NO. 5031進(jìn)行誘變，達(dá)到提高突變效應(yīng)，提高突變后菌種的產(chǎn)膠率的目的。
保藏編號(hào)為CGMCCNo. 5031的放射形根瘤菌已于2011年7月12日由中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心保藏，該保藏單位位于北京市朝陽區(qū)北辰西路I號(hào)院3號(hào)， 該誘變株的分類命名為放射性根瘤菌(Rhizobium radiobacter)。本發(fā)明的目的之一是這樣實(shí)現(xiàn)的
菌種誘變儀，包括箱體、封裝于箱體前部的箱門、設(shè)置于箱體外部的箱蓋；電路部分包括電源、紫外燈管、紅外線燈、變壓器、電感線圈、滑動(dòng)變阻器以及顯示儀表，紫外燈管、紅外線燈和變壓器初級(jí)線圈并聯(lián)后分別接于電源兩端，變壓器次級(jí)線圈經(jīng)滑動(dòng)變阻器與電感線圈構(gòu)成回路，顯示儀表聯(lián)接于回路中；其中紫外燈管、紅外線燈設(shè)于箱體內(nèi)部上方；顯示儀表包括串聯(lián)設(shè)置于回路中的電流表，分別聯(lián)接于電感線圈首尾兩端的電壓表；電源選用220V交流電源，電感線圈用直徑O. 5毫米銅導(dǎo)線、纏繞匝數(shù)為1000，紫外燈管的波長為 260nm，紅外線燈的功率為35W。本發(fā)明的第二個(gè)目的是這樣實(shí)現(xiàn)的
利用菌種誘變儀復(fù)合誘變放射形根瘤菌CGMCC NO. 5031的方法，由如下工藝步驟組
成
A、化學(xué)誘變
將放射形根瘤菌CGMCC NO. 5031試管菌種斜面接種于裝有滅菌后的150-200ml培養(yǎng)基的三角瓶中，進(jìn)行搖床培養(yǎng)得到菌懸液，搖瓶培養(yǎng)的條件為轉(zhuǎn)速200-220轉(zhuǎn)/分鐘，溫度36-38°C，培養(yǎng)時(shí)間20-24小時(shí)；
搖瓶培養(yǎng)基由如下質(zhì)量百分?jǐn)?shù)的組分組成
葡萄糖O. 5%-1%、蛋白肽O. 1%-0. 3%、磷酸氫二鉀O. 15%-0. 25%、磷酸二氫鉀
O.05%-0. 1%、生物素 5ppm-10ppm、5-溴尿嘧啶 O. 005%-0. 01%、利福平 O. 0005%-0. 001%、余量為無菌水，pH=6-7 ；
B、磁光熱藥復(fù)合誘變 BI、培養(yǎng)平板的制備
將步驟A中制備的菌懸液稀釋后，取O. 1-0. 15ml均勻涂覆在盛有固體培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿表面，固體培養(yǎng)基由如下質(zhì)量百分?jǐn)?shù)的組分組成
葡萄糖O. 5%-1%、花生餅粉O. 1%-0. 3%、蛋白胨O. 1%-0. 3%、磷酸氫二鉀O. 08%-0. 1%、 磷酸二氫鉀O. 02%-0. 04%、生物素20ppm-30ppm、5-溴尿嘧啶O. 005%-0. 01%、利福平 lppm-1. 5ppm、瓊脂 I. 5%-2. 0%、余量為無菌水，pH=6_7 ；
B2、復(fù)合誘變
開啟菌種誘變儀預(yù)熱，打開紅外線燈D3使箱體內(nèi)溫度保持至36-38°C ;打開紫外燈管 D2，然后調(diào)節(jié)滑動(dòng)變阻器R旋鈕使電流表A指針指向O. 6A，紫外照射30秒后關(guān)閉紫外燈管 D2 ；72小時(shí)時(shí)，調(diào)節(jié)滑動(dòng)變阻器R旋鈕使電流表A指針指向O刻度，關(guān)閉紅外線燈D3 ;將培養(yǎng)皿包扎嚴(yán)密后取出，倒置放置于培養(yǎng)箱中36-38°C培養(yǎng)86-96小時(shí)得到該菌種的誘變株。申請(qǐng)人:已于2012年3月6日將該誘變株提交中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心保藏，該保藏單位位于北京市朝陽區(qū)北辰西路I號(hào)院3號(hào)，該誘變株的分類命名為放射性根瘤菌rat/ioAacier),保藏編號(hào)為CGMCCNo. 5848。本發(fā)明的具體技術(shù)構(gòu)思還有
為便于進(jìn)行箱體內(nèi)的菌種誘變操作，觀察操作過程中培養(yǎng)容器中的菌落形態(tài)，優(yōu)選的技術(shù)方案是在箱體內(nèi)部上方還設(shè)一照明燈，該照明燈與紫外燈管、紅外線燈、變壓器初級(jí)線圈并聯(lián)后接于電源兩端。為便于對(duì)電感線圈所在的回路中的電流和電壓情況進(jìn)行觀察和控制，優(yōu)選的技術(shù)方案是電壓表和電流表設(shè)于箱蓋表面，變壓器、滑動(dòng)變阻器、電感線圈、電源設(shè)于箱體一側(cè)外部的箱蓋內(nèi)。電感線圈可以根據(jù)實(shí)際情況選用包括鐵氧體線圈、鐵芯線圈等多種現(xiàn)有的形式， 并不脫離本發(fā)明的實(shí)質(zhì)。其中優(yōu)選的技術(shù)方案是采用鐵芯線圈。為便于對(duì)滑動(dòng)變阻器進(jìn)行控制，以有效改變電感線圈所產(chǎn)生的磁場(chǎng)強(qiáng)度，優(yōu)選的設(shè)計(jì)方案是滑動(dòng)變阻器的滑動(dòng)端與位于箱蓋表面的控制手柄聯(lián)連。所述的步驟BI中的菌懸液稀釋是將步驟A中制備的菌懸液稀釋為體積比為10, 的菌懸液。優(yōu)選的稀釋方法是，稀釋是按照體積比為1:10的比例依次將步驟A中制備的菌懸液稀釋為體積比為10_10的菌懸液，即依次稀釋為10' 10_2、10' 10_4、10_5、10' 10' 10_8、 10'I (Tici?？梢燥@而易見的是，步驟B2中對(duì)培養(yǎng)皿的包扎可以選用多種現(xiàn)有不透氣的遮光材料(如牛皮紙、遮光膜等等)，以避免外界環(huán)境對(duì)培養(yǎng)皿內(nèi)菌種的影響。其中較為優(yōu)選且常見的是，步驟B2中采用牛皮紙將培養(yǎng)皿包扎嚴(yán)密。誘變后菌種發(fā)酵制備可得然膠固形物的檢測(cè)(一)發(fā)酵液制備
將誘變后的放射形根菌CGMCC NO. 5031試管斜面I支，無菌操作接種于裝有滅菌好的 150-200ml培養(yǎng)基的三角瓶中進(jìn)行搖床培養(yǎng)制成搖瓶種子，培養(yǎng)條件為轉(zhuǎn)速200-220轉(zhuǎn)/ 分鐘，溫度36-38°C，培養(yǎng)時(shí)間20-24小時(shí)。搖瓶培養(yǎng)的培養(yǎng)基由如下質(zhì)量百分?jǐn)?shù)的組分組成
葡萄糖O. 5%-1%、蛋白肽O. 1%-0. 3%、磷酸氫二鉀O. 15%-0. 25%、磷酸二氫鉀 O. 05%-0. 1%、生物素 5ppm-10ppm、pH=6-7、余量為無菌水。將培養(yǎng)好搖瓶種子按照質(zhì)量百分比為5-10%的接種量接入滅菌后的發(fā)酵培養(yǎng)基中進(jìn)行搖床培養(yǎng)發(fā)酵，發(fā)酵條件為轉(zhuǎn)速200-220轉(zhuǎn)/分鐘，溫度36-38°C，培養(yǎng)時(shí)間90-96 小時(shí)，制得發(fā)酵液。發(fā)酵培養(yǎng)基由如下質(zhì)量百分?jǐn)?shù)的組分組成
葡萄糖10%-12%、硝酸鈉O. 3%-0. 45%、磷酸氫二鉀O. 1%-0. 2%、磷酸二氫鉀O. 15%-0. 3%、 FeSO4 10ppm-15ppm、生物素20ppm-30ppm、聚醚消泡劑O. 03%-0. 1%、余量為無菌水；
(二)檢測(cè)
對(duì)發(fā)酵液中可得然膠的含量采用如下檢測(cè)方法
將發(fā)酵液倒入一定體積的小燒杯中，用玻璃棒攪拌使其無氣泡，用玻璃棒把表面抹平， 把杯子外的發(fā)酵液清洗干凈。發(fā)酵液用質(zhì)量百分比為90-95%的乙醇提取、沉降、過濾布擠干，將其撕碎后全部徹底移入到培養(yǎng)皿中，在微波爐小火烘3分鐘，然后放入100±5°C烘箱中烘至恒重(約4小時(shí))，拿出稱重。(三)計(jì)算
固形物含量(g/L)=(稱樣克數(shù)/發(fā)酵液體積)X 100%
經(jīng)檢測(cè)計(jì)算，檢測(cè)固含量最高可達(dá)96克/升，而現(xiàn)有的菌種在培養(yǎng)溫度為30-33°C時(shí)發(fā)酵液中可得然膠的固含量為78克/升。本發(fā)明所取得的實(shí)質(zhì)性特點(diǎn)和顯著的技術(shù)進(jìn)步在于
I、本發(fā)明巧妙的將紫外燈光照、磁場(chǎng)和使用紅外線燈提高菌種誘變環(huán)境溫度三種物理誘變方法結(jié)合于菌種誘變儀上，其結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì)簡單有效，對(duì)菌種誘變機(jī)率大。2、由于電感線圈L所產(chǎn)生的磁場(chǎng)強(qiáng)度、紫外燈的照射強(qiáng)度以及提高菌種誘變環(huán)境溫度的調(diào)整，均可以實(shí)現(xiàn)較為準(zhǔn)確的控制，從而可以科學(xué)的對(duì)菌種誘變的成因進(jìn)行分析，為科學(xué)實(shí)驗(yàn)奠定了基礎(chǔ)，同時(shí)可以有效縮短實(shí)驗(yàn)的進(jìn)程，有助于菌種誘變的工業(yè)化生產(chǎn)。3、采用磁光熱藥對(duì)放射形根瘤菌CGMCC NO. 5031進(jìn)行復(fù)合誘變，有效提高了誘變后菌種的產(chǎn)膠率，為工業(yè)化生產(chǎn)中可得然膠固形物收率的提高提供了有效的技術(shù)支撐。


圖I是本發(fā)明的結(jié)構(gòu)示意圖。圖2是本發(fā)明的電路圖。圖3是圖I的后視圖。本發(fā)明中的附圖標(biāo)記如下
I、箱蓋；2、箱體；3、箱門；4、控制手柄；A、電流表；D1、照明燈；D2、紫外燈管;D3、紅外線燈；L、電感線圈；L1、初級(jí)線圈；L2、次級(jí)線圈；R、滑動(dòng)變阻器；T、變壓器；V、電壓表。該放射形根瘤菌CGMCC NO. 5031的誘變株申請(qǐng)人已于2012年3月6日提交中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心(簡稱CGMCC)保藏，該誘變株的保藏編號(hào)為 CGMCCNo. 5848。
具體實(shí)施例方式以下結(jié)合附圖對(duì)本發(fā)明的實(shí)施例做進(jìn)一步描述，但不作為對(duì)本發(fā)明的限定，本發(fā)明的保護(hù)范圍以權(quán)利要求記載的內(nèi)容為準(zhǔn)，任何依據(jù)本說明書所做出的等效技術(shù)手段替換均不脫離本發(fā)明的保護(hù)范圍。實(shí)施例I
本實(shí)施例中菌種誘變儀整體技術(shù)構(gòu)造如圖所示，其中包括箱體2、封裝于箱體2前部的箱門3、設(shè)置于箱體2外部的箱蓋I ;電路部分包括電源、紫外燈管D2、紅外線燈D3、變壓器 T、電感線圈L、滑動(dòng)變阻器R以及顯示儀表，紫外燈管D2、紅外線燈D3和變壓器初級(jí)線圈LI 并聯(lián)后分別接于電源兩端，變壓器次級(jí)線圈L2經(jīng)滑動(dòng)變阻器R與電感線圈L構(gòu)成回路，顯示儀表聯(lián)接于回路中；其中紫外燈管D2、紅外線燈D3設(shè)于箱體2內(nèi)部上方，變壓器T、滑動(dòng)變阻器R、電感線圈L、電源設(shè)于箱體2 —側(cè)外部的箱蓋I內(nèi)；顯示儀表包括串聯(lián)設(shè)置于回路中的電流表A，分別聯(lián)接于電感線圈L首尾兩端的電壓表V ;電源選用220V交流電源，電感線圈L用直徑O. 5毫米銅導(dǎo)線、纏繞匝數(shù)為1000，紫外燈管D2的波長為260nm，紅外線燈D3 的功率為35W。在箱體2內(nèi)部上方還設(shè)一照明燈D1，該照明燈Dl與紫外燈管D2、紅外線燈D3、變壓器初級(jí)線圈LI并聯(lián)后接于電源兩端。電壓表V和電流表A設(shè)于箱蓋I表面。電感線圈L采用鐵芯線圈。滑動(dòng)變阻器R的滑動(dòng)端與位于箱蓋I表面的控制手柄4聯(lián)連。利用磁光熱復(fù)合菌種誘變儀復(fù)合誘變放射形根瘤菌CGMCC NO. 5031的方法，由如下工藝步驟組成
A、化學(xué)誘變
將放射形根瘤菌CGMCC NO. 5031試管菌種斜面接種于裝有滅菌后的150ml培養(yǎng)基的三角瓶中，進(jìn)行搖床培養(yǎng)得到菌懸液，搖瓶培養(yǎng)的條件為轉(zhuǎn)速200轉(zhuǎn)/分鐘，溫度36°C，培養(yǎng)時(shí)間20小時(shí)；
搖瓶培養(yǎng)基由如下質(zhì)量百分?jǐn)?shù)的組分組成
葡萄糖O. 5%、蛋白肽O. 1%、磷酸氫二鉀O. 15%、磷酸二氫鉀O. 05%、生物素5ppm、5-溴尿嘧啶O. 005%、利福平O. 0005%、余量為無菌水，pH=6-7 ；
B、磁光熱藥復(fù)合誘變 BI、培養(yǎng)平板的制備
將步驟A中制備的菌懸液稀釋后，取O. 1-0. 15ml均勻涂覆在盛有固體培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿表面，固體培養(yǎng)基由如下質(zhì)量百分?jǐn)?shù)的組分組成
葡萄糖O. 5%、花生餅粉O. 1%、蛋白胨O. 1%、磷酸氫二鉀O. 08%、磷酸二氫鉀O. 02%、生物素20ppm、5-溴尿嘧啶O. 005%、利福平I. 5%、余量為無菌水，pH=6_7 ；B2、復(fù)合誘變
開啟菌種誘變儀預(yù)熱，打開紅外線燈D3使箱體內(nèi)溫度保持至36°C ;打開紫外燈管D2， 然后調(diào)節(jié)滑動(dòng)變阻器R旋鈕使電流表A指針指向O. 6A，紫外照射30秒后關(guān)閉紫外燈管D2 ； 72小時(shí)時(shí)，調(diào)節(jié)滑動(dòng)變阻器R旋鈕使電流表A指針指向O刻度，關(guān)閉紅外線燈D3 ;將培養(yǎng)皿包扎嚴(yán)密后取出，倒置放置于培養(yǎng)箱中36°C培養(yǎng)86小時(shí)。所述的步驟BI中的菌懸液稀釋是將步驟A中制備的菌懸液稀釋為體積比為10, 的菌懸液。優(yōu)選的稀釋方法是，稀釋是按照體積比為1:10的比例依次將步驟A中制備的菌懸液稀釋為體積比為10_10的菌懸液，即依次稀釋為10' 10_2、10' 10_4、10_5、10' 10' 10_8、 10'I (Tici。步驟B2中采用牛皮紙將培養(yǎng)皿包扎嚴(yán)密。實(shí)施例2
本實(shí)施例中菌種誘變儀的結(jié)構(gòu)同實(shí)施例I，利用菌種誘變儀復(fù)合誘變放射形根瘤菌 CGMCC NO. 5031的方法，由如下工藝步驟組成
A、化學(xué)誘變
將放射形根瘤菌CGMCC NO. 5031試管菌種斜面接種于裝有滅菌后的200ml培養(yǎng)基的三角瓶中，進(jìn)行搖床培養(yǎng)得到菌懸液，搖瓶培養(yǎng)的條件為轉(zhuǎn)速220轉(zhuǎn)/分鐘，溫度38°C，培養(yǎng)時(shí)間24小時(shí)；
搖瓶培養(yǎng)基由如下質(zhì)量百分?jǐn)?shù)的組分組成
葡萄糖1%、蛋白肽O. 3%、磷酸氫二鉀O. 25%、磷酸二氫鉀O. 1%、生物素10ppm、5-溴尿嘧啶O. 01%、利福平O. 001%、余量為無菌水，pH=6-7 ；
B、磁光熱藥復(fù)合誘變 BI、培養(yǎng)平板的制備
將步驟A中制備的菌懸液稀釋后，取O. 15ml均勻涂覆在盛有固體培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿表面，固體培養(yǎng)基由如下質(zhì)量百分?jǐn)?shù)的組分組成
葡萄糖1%、花生餅粉O. 3%、蛋白胨O. 3%、磷酸氫二鉀O. 1%、磷酸二氫鉀O. 04%、生物素 30ppm、5-溴尿嘧啶O. 01%、利福平L 5ppm、瓊脂2. 0%、余量為無菌水，pH=6_7 ；
B2、復(fù)合誘變
開啟菌種誘變儀預(yù)熱，打開紅外線燈D3使箱體內(nèi)溫度保持至38°C ;打開紫外燈管D2， 然后調(diào)節(jié)滑動(dòng)變阻器R旋鈕使電流表A指針指向O. 6A，紫外照射30秒后關(guān)閉紫外燈管D2 ； 72小時(shí)時(shí)，調(diào)節(jié)滑動(dòng)變阻器R旋鈕使電流表A指針指向O刻度，關(guān)閉紅外線燈D3 ;將培養(yǎng)皿包扎嚴(yán)密后取出，倒置放置于培養(yǎng)箱中38°C培養(yǎng)96小時(shí)。其余步驟同實(shí)施例I。實(shí)施例3
本實(shí)施例中菌種誘變儀的結(jié)構(gòu)同實(shí)施例1，利用菌種誘變儀復(fù)合誘變放射形根瘤菌 CGMCC NO. 5031的方法，由如下工藝步驟組成
A、化學(xué)誘變
將放射形根瘤菌CGMCC NO. 5031試管菌種斜面接種于裝有滅菌后的180ml培養(yǎng)基的三角瓶中，進(jìn)行搖床培養(yǎng)得到菌懸液，搖瓶培養(yǎng)的條件為轉(zhuǎn)速210轉(zhuǎn)/分鐘，溫度37°C，培養(yǎng)時(shí)間22小時(shí)；
8搖瓶培養(yǎng)基由如下質(zhì)量百分?jǐn)?shù)的組分組成
葡萄糖O. 8%、蛋白肽O. 2%、磷酸氫二鉀O. 2%、磷酸二氫鉀O. 08%、生物素8ppm、5-溴尿嘧啶O. 007%、利福平O. 0008%、余量為無菌水，pH=6-7 ；
B、磁光熱藥復(fù)合誘變 BI、培養(yǎng)平板的制備
將步驟A中制備的菌懸液稀釋后，取O. 13ml均勻涂覆在盛有固體培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿表面，固體培養(yǎng)基由如下質(zhì)量百分?jǐn)?shù)的組分組成
葡萄糖O. 8%、花生餅粉O. 2%、蛋白胨O. 2%、磷酸氫二鉀O. 09%、磷酸二氫鉀O. 03%、生物素25ppm、5-溴尿嘧啶O. 008%、利福平I. 2ppm、瓊脂I. 8%、余量為無菌水，pH=6_7 ；
B2、復(fù)合誘變
開啟菌種誘變儀預(yù)熱，打開紅外線燈D3使箱體內(nèi)溫度保持至37°C ;打開紫外燈管D2， 然后調(diào)節(jié)滑動(dòng)變阻器R旋鈕使電流表A指針指向O. 6A，紫外照射30秒后關(guān)閉紫外燈管D2 ； 72小時(shí)時(shí)，調(diào)節(jié)滑動(dòng)變阻器R旋鈕使電流表A指針指向O刻度，關(guān)閉紅外線燈D3 ;將培養(yǎng)皿包扎嚴(yán)密后取出，倒置放置于培養(yǎng)箱中37°C培養(yǎng)90小時(shí)。其余步驟同實(shí)施例I。
權(quán)利要求
1.菌種誘變儀，包括箱體(2)、封裝于箱體(2)前部的箱門(3)、設(shè)置于箱體(2)外部的箱蓋(I);電路部分包括電源、紫外燈管(D2)、紅外線燈(D3)、變壓器(T)、電感線圈(L)、滑動(dòng)變阻器(R)以及顯示儀表；其特征在于紫外燈管(D2)、紅外線燈(D3)和變壓器初級(jí)線圈 (LI)并聯(lián)后分別接于電源兩端，變壓器次級(jí)線圈(L2)經(jīng)滑動(dòng)變阻器(R)與電感線圈(L)構(gòu)成回路，顯示儀表聯(lián)接于回路中；其中紫外燈管(D2)、紅外線燈(D3)設(shè)于箱體(2)內(nèi)部上方，顯示儀表包括串聯(lián)設(shè)置于回路中的電流表(A)，分別聯(lián)接于電感線圈(L)首尾兩端的電壓表(V);電源選用220V交流電源，電感線圈(L)用直徑O. 5毫米銅導(dǎo)線、纏繞匝數(shù)為1000， 紫外燈管(D2)的波長為260nm，紅外線燈(D3)的功率為35W。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的菌種誘變儀，其特征在于在箱體(2)內(nèi)部上方還設(shè)一照明燈 (D1)，該照明燈(Dl)與紫外燈管(D2)、紅外線燈(D3)、變壓器初級(jí)線圈(LI)并聯(lián)后接于電源兩端。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的菌種誘變儀，其特征在于變壓器(T)、滑動(dòng)變阻器(R)、電感線圈(L)、電源設(shè)于箱體(2) —側(cè)外部的箱蓋(I)內(nèi)，電壓表(V)和電流表(A)設(shè)于箱蓋(I)表面。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述的菌種誘變儀，其特征在于電感線圈(L)選用鐵芯線圈。
5.根據(jù)權(quán)利要求I所述的菌種誘變儀，其特征在于滑動(dòng)變阻器(R)的滑動(dòng)端與位于箱蓋(I)表面的控制手柄(4)聯(lián)連。
6.一種利用如權(quán)利要求1-5所述的利用菌種誘變儀復(fù)合誘變放射形根瘤菌的方法，其特征在于由如下工藝步驟組成A、化學(xué)誘變將放射形根瘤菌CGMCC NO. 5031試管菌種斜面接種于裝有滅菌后的150-200ml培養(yǎng)基的三角瓶中，進(jìn)行搖床培養(yǎng)得到菌懸液，搖瓶培養(yǎng)的條件為轉(zhuǎn)速200-220轉(zhuǎn)/分鐘，溫度 36-38°C，培養(yǎng)時(shí)間20-24小時(shí)；搖瓶培養(yǎng)基由如下質(zhì)量百分?jǐn)?shù)的組分組成葡萄糖O. 5%-1%、蛋白肽O. 1%-0. 3%、磷酸氫二鉀O. 15%-0. 25%、磷酸二氫鉀 O. 05%-0. 1%、生物素 5ppm-10ppm、5-溴尿嘧啶 O. 005%-0. 01%、利福平 O. 0005%-0. 001%、余量為無菌水，pH=6-7 ；B、磁光熱藥復(fù)合誘變BI、培養(yǎng)平板的制備將步驟A中制備的菌懸液稀釋后，取O. 1-0. 15ml均勻涂覆在盛有固體培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿表面，固體培養(yǎng)基由如下質(zhì)量百分?jǐn)?shù)的組分組成葡萄糖O. 5%-1%、花生餅粉O. 1%-0. 3%、蛋白胨O. 1%-0. 3%、磷酸氫二鉀O. 08%-0. 1%、 磷酸二氫鉀O. 02%-0. 04%、生物素20ppm-30ppm、5-溴尿嘧啶O. 005%-0. 01%、利福平 lppm-1. 5ppm、瓊脂 I. 5%-2. 0%、余量為無菌水，pH=6_7 ；B2、復(fù)合誘變開啟磁光熱復(fù)合菌種誘變儀預(yù)熱，打開紅外線燈(D3)使箱體內(nèi)溫度保持至36-38°C;打開紫外燈管(D2)，然后調(diào)節(jié)滑動(dòng)變阻器(R)旋鈕使電流表(A)指針指向O. 6A，紫外照射30 秒后關(guān)閉紫外燈管(D2 );72小時(shí)時(shí)，調(diào)節(jié)滑動(dòng)變阻器(R)旋鈕使電流表(A)指針指向O刻度， 關(guān)閉紅外線燈(D3);將培養(yǎng)皿包扎嚴(yán)密后取出，倒置放置于培養(yǎng)箱中36-38°C培養(yǎng)86-96小時(shí)。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的利用菌種誘變儀復(fù)合誘變放射形根瘤菌的方法，其特征在于所述的步驟BI中的菌懸液稀釋是將步驟A中制備的菌懸液稀釋為體積比為10,的菌懸液。
8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的利用菌種誘變儀復(fù)合誘變放射形根瘤菌的方法，其特征在于所述的稀釋是按照體積比為1:10的比例依次將步驟A中制備的菌懸液稀釋為體積比為I。-10 的菌懸液，即依次稀釋為 ιο'ιο'ιο'ιο'ιο'ιο'ιο'ιο'ιο'ιο,。
9.根據(jù)權(quán)利要求6所述的利用菌種誘變儀復(fù)合誘變放射形根瘤菌的方法，其特征在于所述的步驟B2中采用牛皮紙將培養(yǎng)皿包扎嚴(yán)密。
全文摘要
本發(fā)明屬于菌種誘變，特別是指一種菌種誘變儀以及利用其復(fù)合誘變放射形根瘤菌的方法。菌種誘變儀包括箱體、箱門、箱蓋；電路部分包括電源、紫外燈管、紅外線燈、變壓器、電感線圈、滑動(dòng)變阻器以及顯示儀表，紫外燈管、紅外線燈和變壓器初級(jí)線圈并聯(lián)后分別接于電源兩端，變壓器次級(jí)線圈經(jīng)滑動(dòng)變阻器與電感線圈構(gòu)成回路，顯示儀表聯(lián)接于回路中，采用上述誘變儀對(duì)放射形根瘤菌CGMCCNO.5031進(jìn)行復(fù)合誘變。本發(fā)明解決了現(xiàn)有技術(shù)存在解決了現(xiàn)有設(shè)備中誘變效果不明顯、菌種產(chǎn)膠率低的問題，具有復(fù)合誘變儀可有效提高菌種誘變機(jī)率、誘變后的菌種產(chǎn)膠率得到明顯提高等優(yōu)點(diǎn)。
文檔編號(hào)C12N13/00GK102586102SQ20121006054
公開日2012年7月18日 申請(qǐng)日期2012年3月9日 優(yōu)先權(quán)日2012年3月9日
發(fā)明者張星昊 申請(qǐng)人:張星昊