專利名稱：一種高蟲(chóng)草素含量北冬蟲(chóng)夏草膠囊的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及保健食品。具體涉及一種高蟲(chóng)草素含量北冬蟲(chóng)夏草膠囊的制備方法。
技術(shù)背景
冬蟲(chóng)夏草為珍貴中草藥，其主要成分為:蟲(chóng)草酸、蟲(chóng)草素、蟲(chóng)草多糖以及抗衰老、 抗惡性腫瘤的活性物質(zhì)等，具有滋肺補(bǔ)腎、益精定喘、擴(kuò)展血管、降低血壓、抗病毒等多種功效。因而，冬蟲(chóng)夏草的需求量不斷增加，但是，有限的天然資源，日趨枯竭，人工栽培也不易成功。因此，這是亟待解決的問(wèn)題。
蛹蟲(chóng)草，又稱北蟲(chóng)草、北冬蟲(chóng)夏草。經(jīng)檢測(cè)，蛹蟲(chóng)草的藥用成分及含量和藥用價(jià)值可與冬蟲(chóng)夏草媲美，其中蟲(chóng)草素含量為冬蟲(chóng)夏草的3-5倍，其它主要成分的含量多數(shù)高于或相當(dāng)于冬蟲(chóng)夏草。蛹蟲(chóng)草可以人工栽培，培養(yǎng)基的原料主要為大米。本發(fā)明通過(guò)對(duì)蛹蟲(chóng)草菌株的篩選，得到蛹蟲(chóng)草C0B201，其蟲(chóng)草素含量平均為1.4%，最高可達(dá)1.7%。目前，現(xiàn)在的北冬蟲(chóng)夏草菌株蟲(chóng)草素含量為0.5-0.7%，天然蟲(chóng)草中蟲(chóng)草素含量約為0.2%。而將北冬蟲(chóng)夏草經(jīng)低溫風(fēng)干后進(jìn)行粉碎，再將蟲(chóng)草粉充填膠囊，能最大限度保持北冬蟲(chóng)夏草中的活性成分，而膠囊產(chǎn)品有利于保存、服用和攜帶。發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題在于研究設(shè)計(jì)高蟲(chóng)草素含量北冬蟲(chóng)夏草膠囊的制備方法。
本發(fā)明提供了一種高蟲(chóng)草素含量北蟲(chóng)草膠囊的制備方法。
本發(fā)明方法包括下列步驟:
(I)菌種制備:從野生蟲(chóng)草中分離得到的北冬蟲(chóng)夏草母種，蛹蟲(chóng)草擬青霉 Cordyceps militaris,CGMCC N0.1823接入改良馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(改良PDA培養(yǎng)基)中，18°C -25°C，避光培養(yǎng)10-12天，再接入原種培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，18°C _25°C，搖床培養(yǎng)5天，培養(yǎng)好的北冬蟲(chóng)夏草菌液于溫度4-10°C儲(chǔ)存，備用；
所述改良馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基配方，每IOOOml:
土豆 190_210g蔗糖 19_21g瓊脂 19_21g
加水補(bǔ)足IOOOml ；
原種培養(yǎng)基配方，每IOOOml:
土豆190-210g鹿糖9-llg蛋白胨0.9-1.1g胡蘿卜9_llg洋蔥9_llg蘑燕 9-llg 雞蛋 4_6g 明帆 0.04_0.06g 碳酸氫鈉 0.9-1.1g
加水補(bǔ)足IOOOml ;
⑵配料裝瓶
培養(yǎng)瓶體積為255ml，每個(gè)培 養(yǎng)瓶中加入大米20_30g，水24_40ml，混勻后上蓋，準(zhǔn)備滅菌；
⑶滅菌
將培養(yǎng)瓶排列整齊放入滅菌鍋內(nèi)，在121°C下，高壓蒸汽滅菌20-30分鐘，冷卻后， 取出，準(zhǔn)備接種；
(4)接種
將步驟(I)培養(yǎng)的北冬蟲(chóng)夏草菌液原種液，按每個(gè)滅菌后的培養(yǎng)瓶中加入2.5ml 的原種液進(jìn)行接種；
(5)培養(yǎng)
接種后的北冬蟲(chóng)夏草培養(yǎng)瓶，移至培養(yǎng)架中，控制培養(yǎng)溫度18°C _25°C，濕度控制在65% -95%，每天光照9小時(shí)，光照強(qiáng)度為15001x-35001x，每天通風(fēng)1_3小時(shí)，培養(yǎng)45-60 天；
(6)采收
將培養(yǎng)成熟的北冬蟲(chóng)夏草進(jìn)行采收，擺放在采收盤(pán)；
所述北冬蟲(chóng)夏草的成熟標(biāo)準(zhǔn):色澤:黃色或橙黃色；組織形態(tài):長(zhǎng)圓柱狀，表面粗糙，頭部呈棒狀，長(zhǎng)度為6-10cm，直徑為0.2-0.4cm ；
(7)風(fēng)干
將北冬蟲(chóng)夏草采收盤(pán)置于風(fēng)干架上，保持室內(nèi)溫度40-48°C，20_24小時(shí)，測(cè)北冬蟲(chóng)夏草子實(shí)體水分< 12% ；
(8)粉碎
風(fēng)干后的北冬蟲(chóng)夏草粉碎至80目；
(9)膠囊充填
粉碎后的北冬蟲(chóng)草粉充填入膠囊，包裝。
本發(fā)明的另一目的是提供了用于上述制備的一種北冬蟲(chóng)夏草菌株(本申請(qǐng)人的菌種編號(hào)C0B201),該菌株為蛹蟲(chóng)草擬青霉Cordyceps militaris,保藏號(hào)CGMCC N0.1823。
本發(fā)明人通過(guò)長(zhǎng)期研究和實(shí)驗(yàn)，篩選到該菌株，經(jīng)中國(guó)科學(xué)院微生物研究所進(jìn)行菌種鑒定和毒理試驗(yàn)，鑒定為蟲(chóng)草屬菌種，蛹蟲(chóng)草(蛹蟲(chóng)草擬青霉)Cordyceps militaris。 已在中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心保藏。(地址:中國(guó)北京海淀區(qū)中關(guān)村北一條13號(hào)中國(guó)科學(xué)院微生物研究所，郵編:100080)
(保藏日期 :2006年9月22日，附保藏中心受理通知書(shū)及存活性報(bào)告書(shū))能用于工業(yè)化生產(chǎn)制備
本發(fā)明所述北冬蟲(chóng)夏草菌株CGMCC N0.1823蛹蟲(chóng)草擬青霉Cordyceps militaris 通過(guò)下列方法制備:
(I)野生北冬蟲(chóng)夏草(采集自中國(guó)沈陽(yáng)棋盤(pán)山)先用野生北冬蟲(chóng)夏草8-10倍量 W/W 75%酒精清洗，再用1% HgCl2溶液(以完全浸沒(méi)樣品為準(zhǔn))浸泡2min，然后用野生北冬蟲(chóng)夏草8-10倍量W/W無(wú)菌水分4次洗，每次2-2.5倍量W/W ；
(2)菌種培養(yǎng):清洗干凈的野生北冬蟲(chóng)夏草進(jìn)行蛹蟲(chóng)草孢子分離:野生北冬蟲(chóng)夏草用改良PDA培養(yǎng)基(改良馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基)平板培養(yǎng)，形成分生孢子，再挑取分生孢子用10-20ml無(wú)菌水制成孢子菌懸液；將該孢子菌懸液，再接種至改良PDA培養(yǎng)基中進(jìn)行第二次培養(yǎng)，分離得到純的菌株北冬蟲(chóng)夏草菌株CGMCC N0.1823。
所述步驟⑵的菌種培養(yǎng)條件(每次):
改良PDA培養(yǎng)基配方，每IOOOml:
土豆 190_210g 蔗糖 19_21g 瓊脂 19_21g
加水補(bǔ)足IOOOml ；
避光，溫度18°C -25°C，培養(yǎng) 10-12 天。
本發(fā)明方法采用篩選的菌株北冬蟲(chóng)夏草菌株CGMCC N0.1823蛹蟲(chóng)草擬青霉 Cordyceps militaris進(jìn)行優(yōu)化培養(yǎng)，制得高蟲(chóng)草素含量的北冬蟲(chóng)夏草膠囊，經(jīng)檢測(cè)產(chǎn)品北冬蟲(chóng)夏草中的蟲(chóng)草素含量達(dá)到1.4% -1.7%,(現(xiàn)有的其他人工培養(yǎng)的北冬蟲(chóng)夏草蟲(chóng)中的草素含量小于1%，約為0.53% -0.9% )。本發(fā)明方法簡(jiǎn)單，適于規(guī)模型的工業(yè)化生產(chǎn)。
具體實(shí)施方式
實(shí)施例1北冬蟲(chóng)夏草CGMCC N0.1823菌液制備
(I)篩選:野生北冬蟲(chóng)夏草(采集自中國(guó)沈陽(yáng)棋盤(pán)山)(10克)先用100ml75%酒精清洗，再用11^HgCl2溶液(以完全浸沒(méi)樣品為準(zhǔn))浸泡2min，然后用無(wú)菌水洗4次，(每次用量25ml)。清洗干凈的野生北冬蟲(chóng)夏草(5克)進(jìn)行蛹蟲(chóng)草孢子分離，用改良PDA培養(yǎng)基平板培養(yǎng)10-12天，避光，溫度19°C，形成大量的分生孢子。挑取分生孢子，用無(wú)菌水(20ml) 制成孢子菌懸液。將孢子菌懸液(0.2ml)，接種至改良PDA培養(yǎng)基中(IOml)平板培養(yǎng)10-12 天，避光，溫度19°C，分離得到純的北冬蟲(chóng)夏草菌株。經(jīng)中國(guó)科學(xué)院微生物研究所進(jìn)行菌種鑒定和毒理試驗(yàn)，鑒定為蟲(chóng)草屬菌種，蛹蟲(chóng)草(蛹蟲(chóng)草擬青霉)Cordyceps militaris。已在中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心保藏，保藏號(hào)CGMCC N0.1823。
(2)北冬蟲(chóng)夏草CGMCC N0.1823菌液制備
上述從野生蟲(chóng)草中分離得到的北冬蟲(chóng)夏草,蛹蟲(chóng)草擬青霉Cordyceps militaris, CGMCC N0.1823接入改良馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(改良PDA培養(yǎng)基10-15ml)中，19°C，避光培養(yǎng)10天，再接入改良PDA培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，19°C，搖床培養(yǎng)5天，培養(yǎng)好的北冬蟲(chóng)夏草菌液CGMCC N0.1823菌液放入冰箱，溫度4_10°C儲(chǔ)存，備用。
改良PDA培養(yǎng)基配方，每IOOOml
土豆 190-210g 蔗糖 19-21g 3
加水補(bǔ)足IOOOml0
實(shí)施例2
(I)菌種制備
(改良PDA培養(yǎng)基):
土豆 190g
蔗糖21g
瓊脂20g
加水補(bǔ)足IOOOml ；
(原種培養(yǎng)基):
土豆 200g
蔗糖IOg
蛋白胨1.0g
胡蘿卜IOg
洋蔥IOg
蘑燕IOg
雞蛋5g
明礬0.05g
碳酸氫鈉1.0g
加水補(bǔ)足IOOOml
實(shí)施例1從野生蟲(chóng)草中分離得到的北冬蟲(chóng)夏草菌液CGMCC N0.1823菌液，(0.2ml) 接入改良PDA(馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基)培養(yǎng)基(IOml)中，201:，避光培養(yǎng)11天，再接入原種培養(yǎng)基中(200ml)進(jìn)行培養(yǎng)，20°C，搖床培養(yǎng)5天，即得到北冬蟲(chóng)夏草菌液CGMCC N0.1823原種液。培養(yǎng)好的北冬蟲(chóng)夏草菌液于溫度4-10°C儲(chǔ)存，備用；
每個(gè)培養(yǎng)瓶(200ml)中加入大米20g，水34ml，混勻后上蓋，滅菌(將培養(yǎng)瓶排列整齊放入滅菌鍋內(nèi)，在121 °C下，高壓蒸汽滅菌20分鐘，冷卻后，取出，準(zhǔn)備接種)；按每個(gè)培養(yǎng)瓶中加入2.5ml的北冬蟲(chóng)夏草菌液CGMCC N0.1823原種液進(jìn)行接種。接好種的培養(yǎng)瓶， 移至培養(yǎng)架中，控制培養(yǎng)溫度18°C，濕度控制在65%，每天光照9小時(shí)，光照強(qiáng)度為15001x， 每天通風(fēng)I小時(shí)以上。培養(yǎng)45天，待北冬蟲(chóng)夏草成熟后(直徑3mm，長(zhǎng)8cm)，進(jìn)行采收，再移入風(fēng)干室保持室內(nèi)溫度40°C，24小時(shí)進(jìn)行風(fēng)干，風(fēng)干后的北蟲(chóng)草進(jìn)行粉碎過(guò)80目篩，然后充填進(jìn)無(wú)色透明膠囊后裝瓶，進(jìn)行檢驗(yàn)和包裝成品。經(jīng)檢測(cè)，蟲(chóng)草素含量為1.7%。
實(shí)施例3
(改良PDA培養(yǎng)基):
土豆 200g
鹿糖20g
瓊脂20g
加水補(bǔ)足IOOOml ；
(原種培養(yǎng)基):
土豆 204g
蔗糖9g
蛋白胨1.0g
胡蘿卜9g
洋蔥9g
蘑菇9g
雞蛋5g
明帆0.05g
碳酸氫鈉1.0g
加水補(bǔ)足IOOOml
實(shí)施例1從野生蟲(chóng)草中分離得到的北冬蟲(chóng)夏草菌液CGMCC N0.1823菌液(0.2ml)，接入改良PDA (馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基)培養(yǎng)基中(約10ml)，20°C，避光培養(yǎng)11天，再接入原種培養(yǎng)基中(200ml)進(jìn)行培養(yǎng)，21°C，搖床培養(yǎng)5天，即得到北冬蟲(chóng)夏草菌液CGMCC N0.1823菌液原種液，于溫度4-10°C儲(chǔ)存，備用。
每個(gè)培養(yǎng)瓶(200ml)中加入大米25g，水35ml，混勻后上蓋，滅菌(將培養(yǎng)瓶排列整齊放入滅菌鍋內(nèi)，在121 °C下，高壓蒸汽滅菌25分鐘，冷卻后，取出，準(zhǔn)備接種)；按每個(gè)培養(yǎng)瓶中加入2.5ml的北冬蟲(chóng)夏草菌液CGMCC N0.1823原種液進(jìn)行接種。接好種的培養(yǎng)瓶， 移至培養(yǎng)架中，控制培養(yǎng)溫度22°C，濕度控制在75%，每天光照9小時(shí)，光照強(qiáng)度為20001x， 每天通風(fēng)I小時(shí)以上。培養(yǎng)50天，待北冬蟲(chóng)夏草成熟后(直徑3mm，長(zhǎng)8cm)，進(jìn)行采收，再移入風(fēng)干室保持室內(nèi)溫度45°C，22小時(shí)進(jìn)行風(fēng)干，風(fēng)干后的北蟲(chóng)草進(jìn)行粉碎過(guò)80目篩，然后充填進(jìn)無(wú)色透明膠囊后裝瓶，進(jìn)行檢驗(yàn)和包裝成品。經(jīng)檢測(cè)，蟲(chóng)草素含量為1.5%。0089]實(shí)施例40090](改良PDA培養(yǎng)基):0091]土豆 190g0092]蔗糖21g0093]瓊脂20g0094]加水補(bǔ)足IOOOml ；0095](原種培養(yǎng)基):0096]土豆 196g0097]蔗糖Ilg0098]蛋白胨1.0g0099]胡蘿卜Ilg0100]洋蔥Ilg0101]蘑菇Ilg0102]雞蛋5g0103]明帆0.05g0104]碳酸氫鈉1.0g0105]加水補(bǔ)足IOOOml0106]實(shí)施例1從野生蟲(chóng)草中分離得到的北冬蟲(chóng)夏草菌液CGMCC N0.1823菌液(0.2ml)，接入改良PDA(馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基)培養(yǎng)基中(IOml)，25°C，避光培養(yǎng)12天，再接入原種培養(yǎng)基中(200ml)進(jìn)行培養(yǎng)，22°C，搖床培養(yǎng)5天，即得到北冬蟲(chóng)夏草菌液CGMCC N0.1823原種液，于溫度4-10°C儲(chǔ)存，備用。
每個(gè)培養(yǎng)瓶(200ml)中加入大米24g，水32ml，混勻后上蓋，滅菌(將培養(yǎng)瓶排列整齊放入滅菌鍋內(nèi)，在121 °C下，高壓蒸汽滅菌30分鐘，冷卻后，取出，準(zhǔn)備接種)；按每個(gè)培養(yǎng)瓶中加入2.5ml的北冬蟲(chóng)夏草菌液CGMCC N0.1823原種液進(jìn)行接種。接好種的培養(yǎng)瓶， 移至培養(yǎng)架中，控制培養(yǎng)溫度25°C，濕度控制在85%，每天光照9小時(shí)，光照強(qiáng)度為35001x， 每天通風(fēng)I小時(shí)以上。培養(yǎng)60天，待北冬蟲(chóng)夏草成熟后(直徑3mm，長(zhǎng)8cm)，進(jìn)行采收，再移入風(fēng)干室保持室內(nèi)溫度48°C，20小時(shí)進(jìn)行風(fēng)干，風(fēng)干后的北蟲(chóng)草進(jìn)行粉碎過(guò)80目篩，然后充填進(jìn)無(wú)色透明膠囊后裝瓶，進(jìn)行檢驗(yàn)和包裝成品。經(jīng)檢測(cè)，蟲(chóng)草素含量為1.4%。
實(shí)施例5
本發(fā)明產(chǎn)品的檢測(cè)結(jié)果
北冬蟲(chóng)夏草中腺苷和蟲(chóng)草素的檢測(cè)方法
(該方法參考孫月等蛹蟲(chóng)草蟲(chóng)草酸蟲(chóng)草素含量測(cè)定與分析中國(guó)食用菌第18卷第6 期第19頁(yè)1999年)
1. 原理
蟲(chóng)草素和腺苷的酸堿性不同以及結(jié)構(gòu)差異，導(dǎo)致他們與柱內(nèi)載體吸附能力的不同，同時(shí)利用緩沖溶液加大蟲(chóng)草素和腺苷的洗脫時(shí)間差，從而達(dá)到分離的目的。腺苷在 256nm處有最大吸收，蟲(chóng)草素在此波長(zhǎng)接近最大吸收，且吸收值與濃度呈線形關(guān)系。
2.試劑
2.1磷酸二氫鉀(分析純)、乙醇(優(yōu)級(jí)純)、甲醇(優(yōu)級(jí)純)、腺苷標(biāo)準(zhǔn)品、蟲(chóng)草素標(biāo)準(zhǔn)品、雙蒸水
2.2溶液的配制
腺苷標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制:精確稱取腺苷標(biāo)準(zhǔn)品0.0lOOg，加水溶解并定容到50ml，放置冰箱，備用。
蟲(chóng)草素標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制:精密稱取蟲(chóng)草素標(biāo)準(zhǔn)4.2mg，加水溶解并定容到100ml， 放置冰箱，備用。
0.01mol/L磷酸二氫鉀溶液:稱取磷酸二氫鉀1.3609g，加雙蒸水溶解，定容至 IOOOml0
3.儀器
高效液相色譜儀、超聲波清洗器、離心機(jī)
4.分析步驟
4.1樣品溶液的制備
精密稱取100目蟲(chóng)草粉0.2g，于50ml三角燒瓶中，加20ml提取液，超聲提取15 分鐘，3000rpm離心5分鐘，殘?jiān)貜?fù)操作一次，合并濾液，定容至50ml，再吸取5ml定容到 IOOmlo
4.2色譜柱條件:
色譜柱:C18柱4.6X150mm，5ym柱溫:室溫
紫外檢測(cè)器:檢測(cè)波長(zhǎng)256nm流動(dòng)相:甲醇:0.01mol/L
磷酸二氫鉀溶液=10: 90
流速:1.0mL/min
4.3 測(cè)定
4.3 測(cè)定
取20 μ L標(biāo)準(zhǔn)溶液和試樣溶液注入色譜柱，以保留時(shí)間定性，以峰面積比較定量。
4.4標(biāo)準(zhǔn)曲線的·制備
腺苷標(biāo)準(zhǔn)溶液:分別配制濃度為0.200、1.00,2.00,5.00、10.00 μ g/ml腺苷標(biāo)準(zhǔn)溶液，在給定的儀器條件下進(jìn)行液相色譜分析，以峰面積對(duì)濃度做標(biāo)準(zhǔn)曲線。
蟲(chóng)草素標(biāo)準(zhǔn)曲線:分別配制濃度為0.42、1.005,5.025、10.050、15.075 μ g/ml腺苷標(biāo)準(zhǔn)溶液，在給定的儀器條件下進(jìn)行液相色譜分析，以峰面積對(duì)濃度做標(biāo)準(zhǔn)曲線。
5.結(jié)果計(jì)算A =峰面積/100
蟲(chóng)草素％= (0.0017A+0.0142) *20*50/1000/(M*1000) *100
本發(fā)明實(shí)施例2、3、4得到高蟲(chóng)草素含量的北冬蟲(chóng)夏草，經(jīng)檢測(cè)產(chǎn)品中蟲(chóng)草素含量為 1. %Λ.5%Λ.4%。
實(shí)施例6
市售得到樣品:隆力奇北冬蟲(chóng)夏草(江蘇隆力奇生物科技股份有限公司)
經(jīng)用實(shí)施 例5方法檢測(cè)，產(chǎn)品中蟲(chóng)草素含量為1.1%。
權(quán)利要求
1.一種高蟲(chóng)草素含量北蟲(chóng)草膠囊的制備方法，其特征在于，該方法包括下列步驟(1)菌種制備從野生蟲(chóng)草中分離得到的北冬蟲(chóng)夏草母種，蛹蟲(chóng)草擬青霉Cordyceps militaris，CGMCC NO. 1823接入改良馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基中，18°C _25°C，避光培養(yǎng) 10-12天，再接入改良馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，180C -25°C，搖床培養(yǎng)5天，培養(yǎng)好的北冬蟲(chóng)夏草菌液原種液于溫度4-10°C儲(chǔ)存，備用；(2)配料裝瓶培養(yǎng)瓶體積為255ml，每個(gè)培養(yǎng)瓶中加入大米20-30g，水24_40ml，混勻后上蓋，準(zhǔn)備滅囷；(3)滅菌將培養(yǎng)瓶排列整齊放入滅菌鍋內(nèi)，在121°C下，高壓蒸汽滅菌20-30分鐘，冷卻后，取出，準(zhǔn)備接種；(4)接種將步驟(I)培養(yǎng)的北冬蟲(chóng)夏草菌液原種液，按每個(gè)滅菌后的培養(yǎng)瓶中加入2. 5ml的原種液進(jìn)行接種；(5)培養(yǎng)接種后的北冬蟲(chóng)夏草培養(yǎng)瓶，移至培養(yǎng)架中，控制培養(yǎng)溫度18°C -25°C，濕度控制在 65% -95%，每天光照9小時(shí)，光照強(qiáng)度為15001x-35001x，每天通風(fēng)1_3小時(shí)，培養(yǎng)45-60 天；(6)米收將培養(yǎng)成熟的北冬蟲(chóng)夏草，長(zhǎng)度為6-lOcm，直徑為O. 2-0. 4cm進(jìn)行采收，擺放在采收盤(pán)；(7)風(fēng)干將北冬蟲(chóng)夏草采收盤(pán)置于風(fēng)干架上，保持室內(nèi)溫度40-48°C，20-24小時(shí)，測(cè)北冬蟲(chóng)夏草子實(shí)體水分< 12% ；(8)粉碎風(fēng)干后的北冬蟲(chóng)夏草粉碎至80目；(9)膠囊充填粉碎后的北冬蟲(chóng)草粉充填入膠囊。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種高蟲(chóng)草素含量北蟲(chóng)草膠囊的制備方法，其特征在于，所述步驟(I)改良馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基配方，每IOOOml 土豆 190-210g 蔗糖 19-21g 瓊脂 19_21g 加水至IOOOml ；原種培養(yǎng)基配方，每IOOOml 土豆190-210g 鹿糖9-llg 蛋白胨O. 9-1. Ig 胡蘿卜9_llg洋蔥9_llg 蘑燕 9-llg 雞蛋 4_6g 明帆 0.04_0.06g 碳酸氫鈉 O. 9-1. Ig 加水至IOOOml0
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種高蟲(chóng)草素含量北蟲(chóng)草膠囊的制備方法，其特征在于，所述制得的的北冬蟲(chóng)草膠囊中北冬蟲(chóng)夏草的蟲(chóng)草素含量為1.4% -1.7%。
4.一種用于權(quán)利要求I所述高蟲(chóng)草素含量北蟲(chóng)草膠囊制備方法的北冬蟲(chóng)夏草菌株，其特征在于，所述菌株為蛹蟲(chóng)草擬青霉Cordyceps militaris,保藏號(hào)CGMCC NO. 1823。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的北冬蟲(chóng)夏草菌株，其特征在于，所述菌株通過(guò)下列方法制備(1)野生北冬蟲(chóng)夏草先用野生北冬蟲(chóng)夏草8-10倍量W/W75%酒精清洗，再用I1^HgCl2 溶液以完全浸沒(méi)樣品為準(zhǔn)，浸泡2min，然后用野生北冬蟲(chóng)夏草8-10倍量W/W無(wú)菌水分4次洗，每次2-2. 5倍量W/W;(2)菌種培養(yǎng)清洗干凈的野生北冬蟲(chóng)夏草進(jìn)行蛹蟲(chóng)草孢子分離野生北冬蟲(chóng)夏草用改良馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基平板培養(yǎng)，形成分生孢子，再挑取分生孢子用10_20ml無(wú)菌水制成孢子菌懸液；將該孢子菌懸液，再接種至改良PDA培養(yǎng)基中進(jìn)行第二次培養(yǎng)，分離得到純的菌株北冬蟲(chóng)夏草菌株CGMCC NO. 1823。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的北冬蟲(chóng)夏草菌株，其特征在于，所述步驟(2)的每次菌種培養(yǎng)條件(1)改良PDA培養(yǎng)基配方每IOOOml土豆 190-210g 蔗糖 19-21g 瓊脂 19_21g加水補(bǔ)足IOOOml ；(2)避光，溫度18°C-25°C，培養(yǎng)10-12天。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種高蟲(chóng)草素含量北蟲(chóng)草膠囊的制備方法。本發(fā)明方法采用篩選的菌株北冬蟲(chóng)夏草菌株CGMCC NO.1823蛹蟲(chóng)草擬青霉Cordyceps militaris進(jìn)行優(yōu)化培養(yǎng)，經(jīng)菌種制備、培養(yǎng)、采收、風(fēng)干、粉碎、膠囊灌裝等步驟，制備高蟲(chóng)草素含量的北冬蟲(chóng)夏草膠囊，經(jīng)檢測(cè)產(chǎn)品北冬蟲(chóng)夏草中的蟲(chóng)草素含量達(dá)到1.4％-1.7％，本發(fā)明方法簡(jiǎn)單，適于規(guī)模型的工業(yè)化生產(chǎn)。
文檔編號(hào)A23L1/28GK103251034SQ20121003554
公開(kāi)日2013年8月21日 申請(qǐng)日期2012年2月16日 優(yōu)先權(quán)日2012年2月16日
發(fā)明者張剛, 范培萍, 費(fèi)翅鯤, 黃克文, 范連花, 沈珍芳, 許瑨 申請(qǐng)人:上海高博特生物保健品有限公司