專利名稱：Cetp表達的調(diào)節(jié)的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本文提供的是減少CETP mRNA和蛋白在動物中的表達的方法、化合物和組合物。同時，本文提供的是具有用于減少動物中的CETP相關(guān)疾病或疾患的CETP 抑制劑的方法、化合物和組合物。此類方法、化合物和組合物例如用于治療、預(yù)防、延緩或減輕動物的一種或多種心血管疾病或炎性綜合征或其癥狀。
背景技術(shù)：
控制與高膽固醇血癥和心血管疾病有關(guān)的風險因子已經(jīng)是學(xué)術(shù)界和工業(yè)的許多研究的焦點。因為升高的循環(huán)血漿低密度脂蛋白(LDL)膽固醇水平在高膽固醇血癥和心血管疾病的發(fā)展中被鑒定為獨立的風險因子，所以很多策略已指向降低在致動脈粥樣硬化脂蛋白中攜帶的膽固醇的水平。相反，高密度脂蛋白(HDL)通過在稱為反向膽固醇轉(zhuǎn)運的過程中將過量膽固醇從外周組織遞送至肝以分泌到膽汁中來防止血管動脈粥樣硬化起關(guān)鍵性作用(Yamashita 等人，Biochim. Biophys. Acta, 2000，1529，257-275)。來自外周細胞的膽固醇被HDL吸收后，其轉(zhuǎn)化成膽固醇酯。該HDL膽固醇酯可被運輸回肝且被肝吸收，或被轉(zhuǎn)移至極低密度脂蛋白(VLDL)、中等密度脂蛋白(IDL)和低密度脂蛋白(LDL) (Yamashita等人，Biochim. Biophys. Acta, 2000,1529, 257-275).HDL膽固醇酯的重新分配通過膽固醇酯轉(zhuǎn)移蛋白(也稱為CETP和脂質(zhì)轉(zhuǎn)移蛋白II)介導(dǎo)。在該過程中，CETP促進來自HDL的膽固醇酯的中性脂質(zhì)轉(zhuǎn)移成來自VLDL、IDL和LDL 的甘油三酯(Yamashita 等人，Biochim. Biophys. Acta, 2000,1529，257-275)。膽固醇酯轉(zhuǎn)移蛋白存在于人和兔中，但不存在于哨齒類動物中(Hirano等人，Curr. Opin. Lipidol.,2000，11,589-596)。膽固醇酯轉(zhuǎn)移蛋白于1987年克隆(Drayna等人，Nature，1987，327，632-634)，隨后定位到染色體16q21 (Lusis等人，Genomics，1987，I，232-235)。其在肝、脾、小腸、脂肪組織、腎上腺、腎、心和骨骼肌中表達且由多種細胞類型(包括單核細胞源性巨噬細胞、B-淋巴細胞、脂肪細胞和肝細胞)分泌(Yamashita等人，Biochim. Biophys. Acta, 2000,1529,257-275)。膽固醇酯轉(zhuǎn)移蛋白mRNA的兩個同種型是已知的全長形式和其中外顯子9缺失的可選剪接形式(Inazu等人，Biochemistry, 1992, 31, 2352-2358)?？蛇x剪接形式已被證明表達在脂質(zhì)轉(zhuǎn)移中失活的蛋白并且其表達已被建議用作調(diào)節(jié)特定組織內(nèi)脂質(zhì)轉(zhuǎn)移活性的開關(guān)(Inazu 等人，Biochemistry, 1992，31，2352-2358)。多種轉(zhuǎn)基因動物(包括嚙齒類動物，包含人膽固醇酯轉(zhuǎn)移蛋白基因)已被工程化且綜述(Barter等人，ATVB，2003，23，160-167)。膽固醇酯轉(zhuǎn)移蛋白過表達與動脈粥樣硬化之間的關(guān)系已證實在其中脂蛋白代謝與人的完全不同的小鼠模型中非常復(fù)雜(de Grooth等人，Journal of Lipid Res，2004，45，1967-1974)。在其中肝介導(dǎo)的致動脈粥樣硬化脂蛋白攝取受損的小鼠模型中，CETP活性是促致動脈粥樣硬化的但在高甘油三酯血癥和功能障礙的 HDL 中，CETP 活性可以是有益的(de Grooth 等人,Journal of Lipid Res, 2004,45,1967-1974)。膽固醇酯轉(zhuǎn)移蛋白缺乏(剪接缺陷或錯義突變)引起膽固醇酯轉(zhuǎn)移蛋白的濃度、組成和功能的各種異常情況并且已被鑒定為亞洲人群中高α脂蛋白癥(HALP)的最常見原因(Yamashita 等人，動脈粥樣硬化，2000,152，271-285)。已在糖尿病中的反向膽固醇轉(zhuǎn)運的綜述中檢查膽固醇酯轉(zhuǎn)移蛋白活性對反向膽固醇轉(zhuǎn)運的效應(yīng)(Quintao 等人，Diabetes Metab. Res. Rev.，2000,16, 237-250)。膽固醇酯從HDL至LDL和VLDL的轉(zhuǎn)移的過程可能是有害的，因為LDL和VLDL已 知是致動脈粥樣硬化的(Chong和Bachenheimer, Drugs, 2000,60, 55-93)。這種假設(shè)的支持可從以下方面得出顯示極低的動脈粥樣硬化發(fā)病率的大鼠中膽固醇酯轉(zhuǎn)移蛋白的缺乏(Chong和Bachenheimer, Drugs, 2000,60, 55-93)和具有膽固醇酷轉(zhuǎn)移蛋白缺陷的日本受試者具有高HDL水平和增加的壽命的觀察(Inazu等人，N. Engl. J. Med.，1990，323，1234-1238)。相反，具有減少的膽固醇酯轉(zhuǎn)移蛋白水平的日本男人的另一項研究發(fā)現(xiàn)增加的冠心病危險(Ishigami 等人，J. Biochem. (Tokyo)，1994,116,257-262)。膽固醇酯轉(zhuǎn)移蛋白的小分子抑制劑在本領(lǐng)域中充分呈示并且包括多種結(jié)構(gòu)種類(包括留醇、多環(huán)天然產(chǎn)物和雜環(huán))(Sikorski 和 Glenn, Annu. Rep. Med. Chem.，2000, 35,251-260)。針對膽固醇酯轉(zhuǎn)移蛋白的抗體(Saito 等人，J. Lipid Res.，1999，40，2013-2021 ；Sugano 等人，J. Lipid Res. , 2000,41,126-133)和來自豬血衆(zhòng)的妝(Cho 等人,Biochim.Biophys. Acta, 1998,1391,133-144)也已被證明用作人膽固醇酯轉(zhuǎn)移蛋白的抑制劑。CETP的小分子抑制劑(SMI)已廣泛地在臨床中試驗并且來自這些試驗的結(jié)果已產(chǎn)生多種對藥理學(xué)、功效和耐受性的效應(yīng)(Vergeer和Stroes, Am J Cardiol. , 2009,104，32E-8E)。最初開發(fā)的CETP SMI之一是托徹普(Torcetrapib)。在早期臨床試驗中，發(fā)現(xiàn)托徹普是CETP的有效抑制劑并且提供了有益的LDL/HDL比轉(zhuǎn)移(van der Steeg WA等人，Curr Opin Lipidol. , 2004,15 (6), 631-6)。然而，托徹普的開發(fā)由于處理組的不良事件增加而止步于臨床III。托徹普的否定效應(yīng)歸因于血壓的增加和循環(huán)醛固醇水平(Joy 和 Hegele，Curr Opin Cardiol.，2009，24 (4)，364-71)。而且，用托徹普治療的患者也呈現(xiàn)出擴大的富含apoAII的HDL,其可能具有延緩的分解代謝(Brousseau ME等人，J Lipid Res.，2009，50(7)，1456-62)。臨床開發(fā)中的兩個其它 CETP SMI (Anacetrapib 和Dalcetrapib (以前稱為JTT-705))并未顯示對血壓和醛固酮的負面效應(yīng)并且提供了有益的 HDL 和 LDL 的轉(zhuǎn)移(Masson D，Curr Opin Investig Drugs，2009，10 (9)，980-7 以及Rennings 和 Stalenhoef, Expert Opin Investig Drugs, 2008,17 (10), 1589-97)。然而，此時并未詳細描述這些化合物對HDL代謝和清除的效應(yīng)。Anacetrapib和Dalcetrapib的III期試驗的即將來臨的結(jié)果將顯示CETP的小分子抑制劑是否是心血管疾病的可行治療策略。靶向人膽固醇酯轉(zhuǎn)移蛋白核苷酸329至349的硫代磷酸酯寡核苷酸用于抑制人膽固醇酯轉(zhuǎn)移蛋白在人膽固醇酯轉(zhuǎn)移蛋白轉(zhuǎn)染的中國倉鼠卵巢(CHO)細胞系中的表達(Liu等人，Arterioscler. Thromb. Vase. Biol. ,1999,19,2207-2213)。在該研究中，通過將寡核苷酸與N，N-二棕櫚酰基甘氨?；?載脂蛋白E(129-169)肽(用作LDL受體配體)綴合而開發(fā)了用于將反義硫代磷酸酯寡核苷酸祀向遞送至肝的系統(tǒng)(Liu等人，Arterioscler.Thromb. Vase. Biol.，1999,19,2207-2213)。于膽固醇酯轉(zhuǎn)移蛋白對血衆(zhòng)脂蛋白膽固醇水平(Sugano和Makino, J. Biol.Chem.，1996，271，19080-19083)和對動脈粥樣硬化在兔中的發(fā)展(Sugano等人，J. Biol.Chem.，1998，273，5033-5036)的效應(yīng)的體內(nèi)研究中，靶向偶聯(lián)至無唾液酸糖蛋白-聚-L-賴氨酸載體分子的兔膽固醇酯轉(zhuǎn)移蛋白序列的位置148至168的21-mer反義寡核苷酸用于減少膽固醇酯轉(zhuǎn)移蛋白的表達。這些研究得出結(jié)論，給兔施用反義寡核苷酸-無唾液酸糖蛋白綴合物可降低LDL和VLDL的血漿水平(Sugano和Makino, J. Biol. Chem.，1996，271，19080-19083)并且抑制動脈粥樣硬化在兔中的發(fā)病率(Sugano等人，J. Biol. Chem.，1998，273,5033-5036)。在德國專利DE 19731609中公開且要求保護的是針對人膽固醇酯轉(zhuǎn)移蛋白反義寡核苷酸(包括經(jīng)修飾的DNA/RNA雜種寡核苷酸)以便抑制膽固醇酯轉(zhuǎn)移蛋白的表達 (Budzinksi等人，1999)。在同一專利中另外公開且要求保護的是含有5’ -非翻譯區(qū)域和調(diào)節(jié)序列的人膽固醇酯轉(zhuǎn)移蛋白基因的轉(zhuǎn)錄構(gòu)建體(Budzinksi等人，1999)。在美國專利申請USSN09/925, 139、11/031，827 和國際申請PCT/US02/24919 中公開的是靶向CETP的反義寡核苷酸和調(diào)節(jié)CETP的方法。目前，膽固醇酯轉(zhuǎn)移蛋白抑制劑包括數(shù)類小分子、抗體、肽和先前引用的反義抑制劑的實例。所有這些抑制劑中，CETP的小分子抑制劑已在臨床和實驗室中得到最廣泛的試驗并且顯示提供對完全血衆(zhòng)脂蛋白分布的陽性效應(yīng)(Masson D, Curr Opin InvestigDrugs, 2009,10 (9), 980-7 以及 Rennings 和 Stalenhoef, Expert Opin Investig Drugs,2008，17(10)，1589-97)。然而，由于在用小分子抑制劑治療的患者中觀察到的對血壓和醛固酮的潛在負面效應(yīng)加之HDL亞類的潛在負面變化，仍需要通過可選方式抑制CETP活性的治療劑(Joy 和 Hegele, Curr Opin Cardiol. , 2009, 24 (4), 364-71 和 Brousseau ME 等人，J Lipid Res.，2009，50(7)，1456-62) oCETP反義抑制提供了相比于傳統(tǒng)小分子抑制劑的唯一優(yōu)勢，因為反義抑制劑不依賴于化合物與蛋白質(zhì)的競爭結(jié)合并且通過減少CETP表達來直接抑制活性。反義化合物容易地在表達CETP的組織例如肝和脂肪組織中積累(Antisense DrugTechnology,第 2 版，ST Crooke 編，CRC Press, Boca Raton, FL)制備反義技術(shù)獨特地適用于靶CETP表達和功能。反義技術(shù)作為用于減少某些基因產(chǎn)物的表達的有效方法出現(xiàn)并且由此可證明其可獨特地用于多種調(diào)節(jié)CETP的治療、診斷和研究應(yīng)用。目前缺乏用于治療心血管和代謝病癥的可接受選擇。因此本文的目的是提供用于治療此類疾病和病癥的化合物和方法。本申請引用的所有文件、或文件的一部分(包括但不限于專利、專利申請、文章、書籍和書籍)據(jù)此通過引用清楚(針對本文所述的文件以及其整體)并入。發(fā)明概述本文提供的是可用于經(jīng)由作用反義機理例如RNA酶H、RNAi和dsRNA酶，以及其它基于靶降解或靶占有的反義機理來調(diào)節(jié)基因表達和相關(guān)途徑的反義化合物。
本文提供的是用于抑制CETP表達并且治療、預(yù)防、延緩或減輕CETP相關(guān)疾病、疾患或其癥狀的方法、化合物和組合物。在某些實施方案中，CETP相關(guān)疾病或疾患是心血管疾病或炎性疾病。在某些實施方案中，本發(fā)明的化合物和組合物包含靶向于CETP的長度為10至30個連接核苷的經(jīng)修飾的寡核苷酸。CETP靶可具有選自SEQ ID NO :1_4中任一個的序列。靶向CETP的經(jīng)修飾的寡核苷酸可具有的核堿基序列包含與SEQ ID NO :1-4的等長部分互補的至少8個連續(xù)核堿基。經(jīng)修飾的寡核苷酸可具有包含至少8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30個連續(xù)核堿基的核堿基序列。經(jīng)修飾的寡核苷酸的連續(xù)核堿基部分可與選自SEQ ID NO :1-4中任一個的CETP區(qū)域的等長部分互補。在某些實施方案中，經(jīng)修飾的寡核苷酸包含a)由連接脫氧核苷組成的缺口區(qū)段；b)由連接核苷組成的5’翼區(qū)段；和c)由連接核苷組成的3’翼區(qū)段。缺口區(qū)段位于5’翼區(qū)段與3’翼區(qū)段之間并且每個翼區(qū)段中的每個核苷包含經(jīng)修飾的糖。在某些實施方案中，經(jīng)修飾的寡核苷酸由20個連接核苷組成，缺口區(qū)段由10個連接脫氧核苷組成，5’ 翼區(qū)段由5個連接核苷組成，3’翼區(qū)段由5個連接核苷組成，每個翼區(qū)段的每個核苷包含2’ -O-甲氧基乙基糖，每個核苷間鍵合是硫代磷酸酯鍵合且每個胞嘧啶是5-甲基胞嘧啶。某些實施方案提供了減少動物中CETP表達或活性的方法，其包括向所述動物施用包含靶向本文描述的CETP的經(jīng)修飾的寡核苷酸的化合物。某些實施方案提供了增加動物中的HDL水平和/或HDL活性的方法，其包括向所述動物施用包含靶向本文描述的CETP的經(jīng)修飾的寡核苷酸的化合物。某些實施方案提供了減少動物中的LDL、TG或葡萄糖水平的方法，其包括向所述動物施用包含靶向本文描述的CETP的經(jīng)修飾的寡核苷酸的化合物。某些實施方案提供了減少動物中的LDL/HDL比例的方法，其包括向所述動物施用包含靶向本文描述的CETP的經(jīng)修飾的寡核苷酸的化合物。某些實施方案提供了減輕動物中的心血管疾病或代謝疾病的方法，其包括向所述動物施用包含靶向本文描述的CETP的經(jīng)修飾的寡核苷酸的化合物。某些實施方案提供了用于治療患有心血管疾病或代謝疾病的動物的方法，其包括1)鑒定患有代謝疾病或心血管疾病的所述動物，和2)向所述動物施用治療有效量的包含經(jīng)修飾的寡核苷酸的化合物，所述經(jīng)修飾的寡核苷酸由20個連接核苷組成并且具有與SEQ ID NO :1-4中任一個至少90%互補(如對經(jīng)修飾的寡核苷酸的整體性所測量)的核堿基序列，由此治療患有心血管疾病或代謝疾病的動物。在某些實施方案中，向動物施用的治療有效量的化合物減少動物中的心血管疾病或代謝疾病。發(fā)明詳述應(yīng)理解，前述一般描述和以下詳細描述僅僅是示例性的且說明性的，并不限制如要求保護的本發(fā)明。在本文，使用的單數(shù)包括復(fù)數(shù)，除非另有明確指出。如本文所用的，使用的“或”意指“和/或”，除非另有指出。而且，使用的術(shù)語“包括”以及其它形式例如“包括”和“被包括”并不是限制性的。同時，術(shù)語例如“要素”或“組分”包含要素和組分兩者，包含一個單元和要素以及包含一個以上亞單元的組分，除非另有明確指出。本文所述的部分標題僅僅是為了組織的目的并不應(yīng)理解為限制所述的主題。本申請引用的所有文件、或文件的一部分(包括但不限于專利、專利申請、文章、書籍和書籍)據(jù)此通過引用清楚(針對本文所述的文件以及其整體)并入。定義除非提供了明確定義，否則結(jié)合本文所述的分析化學(xué)、合成有機化學(xué)、以及醫(yī)藥和制藥化學(xué)所用的命名法、以及它們的方法和技術(shù)是本領(lǐng)熟知且常用的。標準技術(shù)可用于化學(xué)合成以及化學(xué)分析。當允許時，所有專利、申請、公布的申請和其它公布、GENBANK登記號及可通過數(shù)據(jù)庫例如National Center for Biotechnology Information (NCBI)和其它在本整個公開中提及的數(shù)據(jù)獲得的相關(guān)序列信息通過引用(針對本文所論述的文件的部分以及其整體)并入本文。除非另有指出，下列術(shù)語具有以下含義“2’ -O-甲氧基乙基”(也稱為2’ -MOE和2’ -O(CH2)2-OCH3)是指呋喃糖基環(huán)的2’位的O-甲氧基-乙基修飾。2’ -O-甲氧基乙基修飾的糖是經(jīng)修飾的糖。 “2’ -O-甲氧基乙基核苷酸”意指包含2’ -O-甲氧基乙基修飾的糖部分的核苷酸?！?’靶位點”是指與特定反義化合物的3’最末端核苷酸互補的靶核酸的核苷酸?！?’靶位點”是指與特定反義化合物的5’最末端核苷酸互補的靶核酸的核苷酸?！?5-甲基胞嘧啶”意指用與5 ’位連接的甲基修飾的胞嘧啶。5-甲基胞嘧啶是經(jīng)修飾的核堿基?！凹s”意指在值的土 10%內(nèi)。例如，如果提及“該化合物實現(xiàn)對CETP的至少約70%抑制”，則暗示該CETP水平被抑制在63%至77%的范圍內(nèi)?！盎钚运幱脛?Active pharmaceutical agent) ”意指當施用于個體時提供了治療益處的藥物組合物中的物質(zhì)。例如，在某些實施方案中，靶向于CETP的反義寡核苷酸是活性藥用劑?！盎钚园袇^(qū)域”或“靶區(qū)域”意指靶向一個或多個活性反義化合物的區(qū)域?！盎钚苑戳x化合物”意指減少靶核酸水平或蛋白水平的反義化合物?！爸拘纬伞币庵钢炯毎郧爸炯毎陌l(fā)展?！爸拘纬伞币庵钢镜漠a(chǎn)生或形成，脂肪變性或脂肪浸潤?！胺逝职Y”或“肥胖癥”是指肥胖或與去脂肪體重有關(guān)的過度高量的體脂肪或脂肪組織的狀態(tài)。體脂肪的量包括關(guān)心脂肪遍及身體的分布和脂肪組織沉積物的大小與質(zhì)量。體脂肪分布可通過皮膚褶測量、腰臀圍比或技術(shù)例如超聲、計算機斷層攝影術(shù)或核磁共振成像來評價。根據(jù)疾病控制和預(yù)防中心，體重指數(shù)(BMI)為30或以上的個體被認為是肥胖的。本文所用的術(shù)語〃肥胖癥〃包括由于在體內(nèi)脂肪組織的過度積累而使體脂肪的增加超過身體需要的疾患。術(shù)語“肥胖癥”包括但不限于以下疾患成年型肥胖癥；營養(yǎng)性肥胖癥；內(nèi)源性或炎性肥胖癥；內(nèi)分泌性肥胖癥；家族性肥胖癥；胰島功能亢進性肥胖癥；增生性-肥大性肥胖癥；性腺機能衰退性肥胖癥；甲狀腺功能減退性肥胖癥；終身性肥胖癥；病態(tài)肥胖癥和外源性肥胖癥?！鞍殡S施用(Administered concomitantly) ”是指以兩種活性劑的藥理學(xué)作用在患者中同時出現(xiàn)的任何方式兩種活性劑的共施用。伴隨施用不需要兩種活性劑以單一藥物組合物、以相同劑量形式或通過相同施用途徑施用。兩種活性劑的效應(yīng)不需要同時顯示它們自身。效應(yīng)僅需要在一定時段內(nèi)重疊并且不需要共存。
“施用”意指給動物提供活性劑，并且包括但不限于通過醫(yī)學(xué)專業(yè)人員施用和自身施用?！盎钚詣?Agent) ”意指當施用于動物時可提供治療益處的活性物質(zhì)?！暗谝换钚札RU”意指本發(fā)明的治療化合物。例如，第一活性劑可以是靶向CETP的反義寡核苷酸.“第二活性劑”意指本發(fā)明的第二治療化合物(例如靶向CETP的第二反義寡核苷酸)和/或非-CETP治療化合物?！皽p輕”是指減輕相關(guān)疾病、病癥或疾患的至少一個指標、癥狀或癥候。指標的嚴重度可通過本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的主觀或客觀量度來確定。“動物”是指人或非-人動物，包括但不限于小鼠、大鼠、兔、狗、貓、豬和非-人靈長類，包括但不限于猴和猩猩?！胺戳x活性”意指歸因于反義化合物與其靶核酸的雜交的任何可檢測或可測量的
活性。在某些實施方案中，反義活性是由此類靶核酸編碼的把核酸或蛋白的量或表達的減少。“反義化合物”意指能夠通過氫鍵合經(jīng)受與靶核酸雜交的寡聚化合物。如本文所用的，術(shù)語“反義化合物”包括本文所述的化合物的藥學(xué)上可接受的衍生物?！胺戳x抑制”意指在與靶核酸互補的反義化合物的存在下靶核酸水平或靶蛋白水平相比于在反義化合物存在下的靶核酸水平或靶蛋白水平的減少?！胺戳x寡核苷酸”意指具有允許與相應(yīng)的靶核酸區(qū)域或區(qū)段雜交的核堿基序列的單鏈寡核苷酸。如本文所用的，術(shù)語“反義寡核苷酸”包括本文所述的化合物的藥學(xué)上可接受的衍生物。“含有ApoB的脂蛋白”意指具有載脂蛋白B作為其蛋白組分的任何脂蛋白，并且應(yīng)理解為包括LDL、VLDL、IDL和脂蛋白，且可通常由脂質(zhì)降低劑和療法靶向?！昂蠥poB-IOO的LDL”意指含有ApoB-IOO同種型的LDL?！皠用}粥樣硬化”意指影響大型和中型動脈的動脈的硬化并且其特征在于存在脂肪沉積物。脂肪沉積物被稱為"動脈粥樣化"或“斑塊”，其主要由膽固醇和其它脂肪、鈣和癜痕脂肪，以及動脈內(nèi)層的損傷組成?！半p環(huán)糖”意指通過兩個非孿位環(huán)原子的橋接修飾的呋喃糖基環(huán)。雙環(huán)糖是經(jīng)修飾的糖?！半p環(huán)核酸”或“BNA”是指核苷或核苷酸，其中該核苷或核苷酸的呋喃糖部分包括連接呋喃糖環(huán)上的兩個碳原子的橋，由此形成雙環(huán)系統(tǒng)。“帽結(jié)構(gòu)”或“端帽部分”意指已在反義化合物的任一末端并入的化學(xué)修飾?！靶难芗膊　被颉靶难懿“Y”是指一組涉及心、血管或循環(huán)的疾患。心血管疾病的實例包括但不限于，動脈瘤、心絞痛、心律不齊、動脈粥樣硬化、腦血管疾病(中風)、冠心病、高血壓、血脂障礙、高脂血癥和高膽固醇血癥。“膽固醇酯轉(zhuǎn)移蛋白”或“CETP” (也稱為脂質(zhì)轉(zhuǎn)移蛋白II)意指CETP的任何核酸或蛋白?！癈ETP表達”意指從編碼CETP的基因轉(zhuǎn)錄的mRNA的水平或從mRNA翻譯的蛋白的水平。CETP表達可通過本領(lǐng)域已知的方法例如Northern或Western印跡來測定。“CETP核酸”意指任何編碼CETP的核酸。例如，在某些實施方案中，CETP核酸包括編碼CETP的DNA序列、從編碼CETP的DNA轉(zhuǎn)錄的RNA序列(包括包含內(nèi)含子和外顯子的基因組DNA)和編碼CETP的mRNA序列?！癈ETP mRNA”意指編碼CETP蛋白的mRNA?！盎瘜W(xué)上不同的區(qū)域”是指以某種方式化學(xué)上不同于同一反義化合物的另一區(qū)域的反義化合物的區(qū)域。例如，具有2’ -O-甲氧基乙基核苷酸的區(qū)域化學(xué)上不同于具有無2’ -O-甲氧基乙基修飾的核苷酸的區(qū)域。“嵌合反義化合物”意指具有至少兩個化學(xué)上不同的區(qū)域的反義化合物?！肮彩┯谩币庵附o個體施用兩種或更多種活性劑。兩種或更多種活性劑可以在單一藥物組合物中，或可以在分開的藥物組合物中。兩種或更多種活性劑中的每一種可通過相同或不同的施用路徑施用。共施用包括平行或相繼施用。“受限的乙基”或“cEt “是指具有包含在4’與2’碳原子之間的甲基(亞甲基氧基)(4’ -CH(CH3)-0-2’ )橋的呋喃酰基糖的雙環(huán)核苷。 “膽固醇”是存在于所有動物組織的細胞膜中的甾醇分子。膽固醇必須經(jīng)由脂蛋白在動物的血漿中進行轉(zhuǎn)運，所述脂蛋白包括極低密度脂蛋白(VLDL)、中等密度脂蛋白(IDL)、低密度脂蛋白(LDL)和高密度脂蛋白(HDL)?！把獫{膽固醇”是指存在于血漿或血清中的所有脂蛋白(VDL、IDL、LDL、HDL)酯化的和/或非酯化的膽固醇的總和?！澳懝檀嘉找种苿币庵敢种朴娠嬍倡@得的外源性膽固醇的吸收的活性劑。“互補性”意指第一核酸與第二核酸的核堿基之間配對的能力。在某些實施方案中，第一核酸與第二核酸之間的互補性可在兩條DNA鏈之間、在兩條RNA鏈之間，或在DNA和RNA鏈之間。在某些實施方案中，一條鏈上的一些核堿基基于其它鏈與互補氫鍵合匹配。在某些實施方案中，一條鏈上的所有核堿基基于其它鏈與互補氫鍵匹配。在某些實施方案中，第一核酸是反義化合物且第二核酸是靶核酸。在某些此類實施方案中，反義寡核苷酸是第一核酸且靶核酸是第二核酸?！斑B續(xù)核堿基”意指彼此直接相鄰的核堿基?！敖徊娣磻?yīng)的”意指靶向一個核酸序列的寡聚化合物可與不同核酸序列雜交。例如，在一些情況下，靶向人CETP的反義寡核苷酸可與鼠CETP交叉反應(yīng)。寡聚化合物是否與核酸序列而不是其指定靶交叉反應(yīng)取決于該化合物與非-靶核酸序列所具有的互補性的程度。“治愈”意指恢復(fù)健康或規(guī)定的針對疾病的治療的方法?！肮谛牟?CHD) ”意指供應(yīng)血和氧至心臟的小血管的狹窄，其通常是動脈粥樣硬化的結(jié)果?！懊撗鹾颂呛塑账帷币庵冈诤塑账岬奶遣糠值?’位具有氫的核苷酸。脫氧核糖核苷酸可被多種取代基中的任一種修飾?！疤悄虿?Diabetes mellitus) 〃或〃糖尿病〃是特征在于紊亂的代謝和異常高的血糖(高血糖癥)的綜合征，這是由胰島素水平不足或胰島素敏感性降低引起的。特有癥狀是由于高血糖水平導(dǎo)致的過量尿生成(多尿癥)、過度口渴和試圖補償排尿增加的流體攝取的增加(煩渴)、由于高血糖對眼光學(xué)的效應(yīng)導(dǎo)致的視力模糊、不明體重減輕和嗜睡?！疤悄虿⌒匝系K”或“具有血脂障礙的2型糖尿病”意指特征在于2型糖尿病、減少的HDL-C、升高的甘油三酯和升高的小且致密LDL顆粒的疾患?！跋♂寗币庵附M合物中缺少藥理學(xué)活性但是藥學(xué)上必需或期望的成分。例如，注射型組合物中的稀釋劑可以是液體，例如鹽水溶液。“血脂障礙”是指脂質(zhì)和/或脂蛋白代謝的病癥，包括脂質(zhì)和/或脂蛋白過度生成或缺乏。血脂障礙可表現(xiàn)為脂質(zhì)例如膽固醇和甘油三酯以及脂蛋白例如低密度脂蛋白(LDL)膽固醇的升高。“劑量單位”意指提供藥用劑的形式，例如丸劑、片劑或其它本領(lǐng)域中已知的劑量單位。在某些實施方案中，劑量單位是含有凍干的反義寡核苷酸的小瓶。在某些實施方案中，劑量單位是含有復(fù)原的反義寡核苷酸的小瓶?！皠┝俊币庵冈趩蝹€施用中或在指定時間內(nèi)提供的指定量的藥用劑。在某些實施方案中，劑量可在一個、兩個或多個大丸劑(bolus)、片劑或注射劑中施用。例如,在某些實施方案中，當期望皮下施用時，所需劑量需要不易由單次注射調(diào)節(jié)的體積，因此，兩個或更多個注射可用于實現(xiàn)所需劑量。在某些實施方案中，藥用劑通過在延長的時段內(nèi)或連續(xù)地輸注來施用。劑量可被陳述為每小時、每天、每周或每月藥用劑的量。劑量可例如以mg/kg表
/Jn ο“有效量”或“治療有效量”意指足以在需要活性劑的個體中實現(xiàn)所需生理學(xué)結(jié)果的活性藥用劑的量。有效量可在個體間變化，取決于待治療個體的健康和身體條件、待治療個體的分類群、組合物的制劑、個體的醫(yī)療條件的評價、以及其它相關(guān)因素?！巴耆パa”或“ 100%互補”意指第一核酸的核堿基序列的每個核堿基在第二核酸的第二核堿基序列中具有互補核堿基。在某些實施方案中，第一核酸是反義化合物且第二核酸是靶核酸?！叭笨诨w(Gapmer) ”意指其中具有多個支持RNA酶H切割的核苷的內(nèi)部區(qū)域位于具有一個或多個核苷的外部區(qū)域的嵌合反義化合物，其中包含內(nèi)部區(qū)域的核苷化學(xué)上不同于包含外部區(qū)域的核苷。內(nèi)部區(qū)域可被稱為“缺口區(qū)段”且外部區(qū)域可被稱為“翼區(qū)段”?！叭笨诩訉挼摹币庵妇哂?2或更多個連續(xù)2’ -脫氧核糖核苷的缺口區(qū)段的嵌合反義化合物的位置在具有I至6個核苷的5’和3’翼區(qū)段之間和與所述5’和3’翼區(qū)段直接相鄰。“葡萄糖”是被細胞用作能量和炎性中間體的來源的單糖?！把獫{葡萄糖”是指存在于血漿中的葡萄糖?！案呙芏戎鞍?C(HDL-C) ”意指與高密度脂蛋白顆粒相關(guān)的膽固醇。HDL-C在血清(或血漿)中的濃度通常以mg/dL或nmol/L量化。“HDL-C”和“血漿HDL-C”是指分別在血清和血漿中的HDL-C。"HMG-CoA還原酶抑制劑”意指通過抑制酶HMG-CoA還原酶起作用的活性劑，例如阿托伐他汀、羅蘇伐他汀、氟伐他汀、洛伐他汀、普伐他汀和辛伐他汀?！半s交”意指互補核酸分子的退火。在某些實施方案中，互補核酸分子包括反義化合物和靶核酸。“高膽固醇血癥”意指這樣的疾患，其特征在于升高的膽固醇或循環(huán)(血漿)膽固醇、LDL-膽固醇和 VLDL-膽固醇，如根據(jù) Expert Panel Report of the NationalCholesterol Educational Program(NCEP) of Detection, Evaluation of Treatment ofhigh Cholesterol in adults 的指南(參見，Arch. Int. Med. (1988) 148,36-39)?！案咧Y”或“血脂過多(hyperlipemia) ”是特征在于升高的血清脂質(zhì)或循環(huán)(血漿)脂質(zhì)的疾患。這種疾患顯示異常高的脂肪濃度。循環(huán)血液中的脂質(zhì)部分是膽固醇、低密度脂蛋白、極低密度脂蛋白和甘油三酯?！案吒视腿パY”意指特征在于升高的甘油三酯水平的疾患?！拌b定”或“選擇患有代謝疾病或心血管疾病的動物”意指鑒定或選擇已診斷有代謝疾病、心血管疾病或代謝綜合征的受試者；或，鑒定或選擇患有代謝疾病、心血管疾病或代謝綜合征的受試者包括但不限于聞膽固醇血癥、聞血糖癥、聞脂血癥、聞甘油二酷血癥、高血壓、增加的胰島素抵抗、減少的胰島素敏感性、超過正常體重、和/或超過正常體脂肪含量或其任何組合。此類鑒定可通過任何方法實現(xiàn)，包括但不限于標準臨床試驗或評價，例如測量血清或循環(huán)(血漿)膽固醇、測量血清或循環(huán)(血漿)血液-葡萄糖、測量血清或循環(huán)(血漿)甘油三酯、測量血壓、測量體脂肪含量、測量體重等?！疤岣叩男难芙Y(jié)果”意指不良心血管事件或其風險發(fā)生的減少。不良心血管事件的實例包括但不限于死亡、再梗塞、中風、心源性休克、肺水腫、心跳停止和房性心律失常。
“直接相鄰”意指在直接相鄰的要素之間例如區(qū)域、區(qū)段、核苷酸和/或核苷之間沒有插入要素?！皞€體”或“受試者”或“動物”意指對于治療或療法所選定的人或非-人動物?！ㄕT導(dǎo)〃、〃抑制〃、〃加強〃、〃升高〃、〃增加〃、〃減少〃等例如指示兩個狀態(tài)之間的定量差異。例如，〃有效抑制CETP的活性或表達的量”意指CETP在經(jīng)處理的樣品中的活性或表達的水平不同于CETP活性或表達在未經(jīng)處理的樣品中的水平。此類術(shù)語用于例如表達水平和活性水平。“抑制表達或活性”是指RNA或蛋白的表達或活性的減少或阻斷并且不一定指示表達或活性的完全消除?！耙葝u素抵抗”被定義為其中正常量的胰島素不足以從脂肪細胞、肌細胞和肝細胞產(chǎn)生正常胰島素響應(yīng)的疾患。脂肪細胞中的胰島素抵抗導(dǎo)致所存貯甘油三酯的水解，其升高血漿中的游離脂肪酸。肌肉中的胰島素抵抗減少葡萄糖攝取而肝中的胰島素抵抗減少葡萄糖存貯，兩種效應(yīng)用于升高血糖。胰島素和葡萄糖的高血漿水平由于胰島素抵抗而常引起代謝綜合征和2型糖尿病。“胰島素敏感性”是個體如何有效地加工葡萄糖的量度。具有高胰島素敏感性的個體有效地加工葡萄糖，而具有低胰島素敏感性的個體不能有效地加工葡萄糖?！昂塑臻g鍵合”是指核苷之間的化學(xué)鍵。“靜脈內(nèi)施用”意指進入靜脈的施用。“連接核苷”意指鍵合在一起的相鄰核苷?！爸|(zhì)降低”意指受試者中的一種或多種脂質(zhì)的減少。脂質(zhì)降低可用一個或多個劑量隨時間流逝而發(fā)生?！敖抵|(zhì)治療”或“脂質(zhì)降低劑”意指提供給受試者以減少受試者中的一種或多種脂質(zhì)的治療方案。在某些實施方案中，提供降脂質(zhì)治療以減少受試者中的CETP、ApoB、總膽固醇、LDL-C, VLDL-C, IDL-C、非-HDL-C、甘油三酯、小且致密的LDL顆粒和Lp (a)中的一者或多者。降脂質(zhì)治療的實例包括他汀類藥物、貝特類藥物、MTP抑制劑?！爸鞍住崩鏥LDL、LDL和HDL是指一組存在于血清、血漿和淋巴且對于脂質(zhì)轉(zhuǎn)運重要的蛋白質(zhì)。每種脂蛋白的化學(xué)組成不同，因為HDL具有較高的蛋白與脂質(zhì)的比例，而VLDL具有較低的蛋白與脂質(zhì)的比例?！暗兔芏戎鞍?膽固醇(LDL-C) ”意指低密度脂蛋白顆粒中攜帶的膽固醇。LDL-C在血清(或血漿)中的濃度通常以mg/dL或nmol/L量化?！把錖DL-C”和“血漿LDL-C”是指分別在血清和血漿中的LDL-C?！爸饕L險因子”是指歸因于特定疾病或疾患 的高風險的因子。在某些實施方案中，冠心病的主要風險因子包括但不限于吸煙、高血壓、低HDL-C、冠心病的家族史、年齡和其它本文公開的因子?！按x病癥”或“代謝疾病”是指特征在于代謝功能改變或紊亂的疾患?！按x”和“新陳代謝”是本領(lǐng)域熟知的術(shù)語并且一般包括在活器官內(nèi)發(fā)生的一系列生物過程。代謝病癥包括但不限于，高血糖癥、糖尿病前期、糖尿病(I型和2型)、肥胖癥、胰島素抵抗、代謝綜合征和由于2型糖尿病引起的血脂障礙?！按x綜合征”意指特征在于代謝來源的脂質(zhì)和非-脂質(zhì)心血管風險因子的聚類的疾病。在某些實施方案中，代謝綜合征通過存在以下因素的任何3個來鑒定腰圍男性大于102cm或女性大于88cm ;血清甘油三酯為至少150mg/dL ；HDL-C男性低于40mg/dL或女性低于50mg/dL ;血壓為至少130/85mmHg ;和空腹葡萄糖為至少110mg/dL。這些決定子可在臨床實踐中容易測量(JAMA，2001，285 :2486-2497)。“錯配”或“非-互補核堿基”是指當?shù)谝缓怂岬暮藟A基不能與第二靶核酸相應(yīng)核堿基配對的情況。“混合型血脂障礙”意指特征在于升高的膽固醇和升高的甘油三酯的疾患?！敖?jīng)修飾的核苷間鍵合”是指來自天然存在核苷間鍵(即磷酸二酯核苷間鍵)的取代或任何變化?！敖?jīng)修飾的核堿基”是指不是腺嘌呤、胞嘧啶、鳥嘌呤、胸苷或尿嘧啶的任何核堿基?！拔唇?jīng)修飾的核堿基”意指嘌呤堿基腺嘌呤(A)和鳥嘌呤(G)以及嘧啶堿基胸腺嘧啶(T)、胞嘧啶(C)和尿嘧啶(U)?！敖?jīng)修飾的核苷”意指獨立地具有經(jīng)修飾的糖部分或經(jīng)修飾的核堿基的核苷?！敖?jīng)修飾的核苷酸”意指不獨立地具有經(jīng)修飾的糖部分、經(jīng)修飾的核苷間鍵合或經(jīng)修飾的核堿基的核苷酸?！敖?jīng)修飾的核苷”意指獨立地具有經(jīng)修飾的糖部分或經(jīng)修飾的核堿基的核苷?！敖?jīng)修飾的寡核苷酸”意指包含至少一個經(jīng)修飾的核苷酸的寡核苷酸?！敖?jīng)修飾的糖”是指天然糖的取代或變化?！盎颉币庵阜戳x化合物中化學(xué)上不同區(qū)域的模型?！癕TP抑制劑”意指抑制酶、微粒體甘油三酯轉(zhuǎn)移蛋白的活性劑。“天然存在核苷間鍵合”意指3’至5’磷酸二酯鍵合?！疤烊惶遣糠帧币庵赴l(fā)現(xiàn)于DNA (2’ -H)或RNA (2’ -0H)中的糖?！胺蔷凭灾靖渭膊　被颉癗AFLD ”意指特征在于不是由于過度酒精(例如，超過20g/天的酒精消耗)使用引起的肝的脂肪炎癥的疾患。在某些實施方案中，NAFLD與胰島素抵抗和代謝綜合征相關(guān)。NAFLD包括范圍為肝細胞(肝脂肪變性)中的單一甘油三酯蓄積到具有炎癥的肝脂肪變性(脂肪肝炎)、纖維化和肝硬化的疾病譜。“非酒精性脂肪肝炎” (NASH)從NAFLD的進展發(fā)生，遲于甘油三酯的沉積。能夠誘導(dǎo)壞死、炎癥和纖維化的“第二次打擊(second hit)”對于NASH的發(fā)展是必需的。用于第二次打擊的候選可分為以下大類引起氧化性應(yīng)激增加的因素和促進促炎性細胞因子的表達的因素。“核酸”是指由單體核苷酸組成的分子。核酸包括核糖核酸(RNA)、脫氧核糖核酸(DNA)、單鏈核酸、雙鏈核酸、小干擾核糖核酸(siRNA)和微RNA(miRNA)。核酸還可以包含這些要素在單個分子中的組合?！昂藟A基”意指能夠與另一個核酸的堿基配對的雜環(huán)部分。“核堿基互補性”是指能夠與另一個核堿基配對的核堿基。例如，在DNA中，腺嘌呤(A)與胸腺嘧啶(T)互補。例如，在RNA中，腺嘌呤(A)與尿嘧啶(U)互補。在某些實施方案中，互補核堿基是指能夠與其靶核酸的核堿基堿基配對的反義化合物的核堿基。例如，如果在反義化合物的某個位置的核堿基能夠與在靶核酸的某個位置的核堿基氫鍵合，那么寡核苷酸和靶核酸被認為在該核堿基對具有互補性?！昂藟A基序列”意指不依賴于任何糖、鍵合或核堿基修飾的連續(xù)核堿基的次序。 “核苷”意指與糖連接的核堿基?！昂塑漳M物”包括用于替換糖或糖和堿基并且不一定在寡聚化合物的一個或多個位置連接的那些結(jié)構(gòu)；例如具有嗎啉代、環(huán)己烯基、環(huán)己基、四氫呋喃基、二環(huán)或三環(huán)糖模擬物例如非呋喃糖單元的核苷模擬物?！昂塑账帷币庵妇哂泄矁r連接于核苷的糖部分的磷酸基的核苷?！昂塑账崮M物”包括用于替代核苷且寡聚化合物的一個或多個位置連接的那些結(jié)構(gòu)，例如肽核酸或嗎啉代(通過-N (H)-C (=0)-0-或其它非-磷酸二酯鍵合連接的嗎啉代)?！肮丫刍衔?或“寡聚物”是指包含兩個或更多個子結(jié)構(gòu)并且能夠與核酸分子的區(qū)域雜交的聚合結(jié)構(gòu)。在某些實施方案中，寡聚化合物是寡核苷。在某些實施方案中，寡聚化合物是寡核苷酸。在某些實施方案中，寡聚化合物是反義化合物。在某些實施方案中，寡聚化合物是反義寡核苷酸。在某些實施方案中，寡聚化合物是嵌合寡核苷酸。“寡核苷酸”意指連接核苷的聚合物，每個連接核苷可經(jīng)修飾或未經(jīng)修飾，彼此無關(guān)?！拔改c外施用”意指經(jīng)由注射或輸注的施用。胃腸外施用包括皮下施用、靜脈內(nèi)施用、肌內(nèi)施用、動脈內(nèi)施用、腹膜內(nèi)施用或顱內(nèi)施用，例如鞘內(nèi)或腦室內(nèi)施用。施用可以是連續(xù)的、或慢性的、或短期或間歇的。“肽”意指通過連接至少兩個氨基酸經(jīng)由酰胺鍵形成的分子。肽是指多肽和蛋白質(zhì)。“藥用劑”意指當施用于個體時提供治療益處的物質(zhì)。例如，在某些實施方案中，靶向于CETP的反義寡核苷酸是藥用劑。“藥物組合物”或“組合物”意指適用于給個體施用的物質(zhì)的混合物。例如，藥物組合物可包含一種或多種活性劑和無菌水溶液。“藥學(xué)上可接受的載體”意指不干擾寡核苷酸的結(jié)構(gòu)的介質(zhì)或稀釋劑。某些此類載體能使藥物組合物配制成例如片劑、丸劑、糖丸、膠囊、液體、凝膠劑、糖衆(zhòng)劑、衆(zhòng)液、混懸液和錠劑以給受試者口服攝入。某些此類載體能使藥物組合物配制成注射、輸注或局部施用。例如，藥學(xué)上可接受的載體可以是無菌水溶液。“藥學(xué)上可接受的衍生物”包括本文所述的化合物的衍生物例如溶劑合物、水合物、酯、前藥、多晶型物、異構(gòu)體、同位素標記的變體、綴合物、藥學(xué)上可接受的鹽和其它本領(lǐng)域已知的衍生物?！八帉W(xué)上可接受的鹽”或“鹽”意指反義化合物的生理學(xué)和藥學(xué)上可接受的鹽，即保留母體寡核苷酸的所需生物活性并且不賦予其不想要的毒理學(xué)效應(yīng)的鹽。術(shù)語“藥學(xué)上可接受的鹽”或“鹽”包括由藥學(xué)上可接受的非-毒性酸或堿基制備的鹽，包括無機或有機酸和堿。本文所述的化合物的“藥學(xué)上可接受的鹽”可通過本領(lǐng)域熟知的方法來制備。對于藥學(xué)上可接受的鹽的綜述，參見 Stahl 和 Wermuth, Handbook of Pharmaceutical Salts Properties, Selection and Use (ffiley-VCH, ffeinheim, Germany, 2002) 反義寡核苷酸的鈉鹽是有用的并且公認用于給人治療施用。因此，在一個實施方案中，本文所述的化合物是鈉鹽形式。“硫代磷酸酯鍵合”意指核苷之間的鍵合，其中磷酸二酯鍵通過用硫原子替代非橋接氧原子之一來修飾。硫代磷酸酯鍵合是經(jīng)修飾的核苷間鍵合。 “部分”意指核酸的確定數(shù)量的連續(xù)(即連接)核堿基。在某些實施方案中，部分是靶核酸的確定數(shù)量的連續(xù)核堿基。在某些實施方案中，部分是反義化合物的確定數(shù)量的連續(xù)核堿基。“預(yù)防”是指延緩或阻止疾病、病癥或疾患的發(fā)作或發(fā)展達到從數(shù)分鐘至無限期的時段。預(yù)防還意指減少疾病、病癥或疾患發(fā)展的風險?！扒八帯币庵敢詿o活性形式制備的治療劑，其在體內(nèi)或其細胞內(nèi)通過內(nèi)源性酶或其它化學(xué)品或條件的作用被轉(zhuǎn)化為活性形式(即藥物)。“區(qū)域”或“靶區(qū)域”被定義為具有至少一個可識別的結(jié)構(gòu)、功能或特征的靶核酸的部分?！昂颂呛塑账帷币庵冈诤塑账岬奶遣糠值?’位具有羥基的核苷酸。核糖核苷酸可被多種取代基中的任一種修飾?！暗诙钚詣被颉暗诙委焺币庵缚捎糜谂c“第一活性劑”組合的活性劑。第二治療劑可以是減輕、抑制或預(yù)防代謝疾病和/或心血管疾病的任何活性劑。第二治療劑可包括但不限于siRNA或反義寡核苷酸包括靶向CETP或另一靶的反義寡核苷酸。第二活性劑還可以包括抗體(例如，抗-CETP抗體)、肽抑制劑(例如，CETP肽抑制劑)、膽固醇降低齊U、脂質(zhì)降低劑、葡萄糖降低劑和抗炎劑。“區(qū)段”被定義為核酸內(nèi)的區(qū)域的較小的亞部分。例如，“靶區(qū)段”意指一個或多個反義化合物所靶向的靶核酸的核苷酸的序列?！?’靶位點”是指靶區(qū)段的5’最末端核苷酸?！?’靶位點”是指靶區(qū)段的3’最末端核苷酸。本文教導(dǎo)的反義寡核苷酸或靶核酸的“縮短的”或“截短的”形式具有一個、兩個或更多個缺失的核苷?！案弊饔谩币庵缚蓺w因于治療而不是所需效應(yīng)的生理學(xué)反應(yīng)。在某些實施方案中，副作用包括注射部位反應(yīng)、肝功能試驗異常、腎功能異常、肝毒性、腎毒性、中樞神經(jīng)系統(tǒng)異常、肌病和不適。例如，增加的血清氨基轉(zhuǎn)移酶水平可指示肝毒性或肝功能異常。例如，增加的膽紅素可包括肝毒性或肝功能異常。
“單鏈寡核苷酸”意指不與互補鏈雜交的寡核苷酸。“特異性雜交”是指在反義寡核苷酸與靶核酸之間具有足夠的互補性程度以誘導(dǎo)所需效應(yīng)同時在體內(nèi)測定和治療性處理的情況下在需要特異性結(jié)合的條件即在生理學(xué)條件下對非-靶核酸表現(xiàn)出最低效應(yīng)或無效應(yīng)的反義化合物?！耙种扑?Statin) ”意指抑制HMG-CoA還原酶活性的活性劑?！笆茉囌摺币庵笇χ委熁虔煼ㄋx定的人或非-人動物?！捌は率┯谩币庵冈谄つw正下方的施用?！鞍邢颉被颉氨话邢颉币庵冈O(shè)計和選擇與靶核酸特異性雜交并且誘導(dǎo)所需效應(yīng)的反義化合物的方法。
“靶核酸”、“靶RNA”和“靶RNA轉(zhuǎn)錄物”均是指能夠通過反義化合物靶向的核酸?！鞍袇^(qū)段”意指反義化合物所靶向的靶核酸的核苷酸的序列?！?’靶位點”是指靶區(qū)段的5’最末端核苷酸?！?’靶位點”是指靶區(qū)段的3’最末端核苷酸?！爸委熜陨罘绞阶兓币庵钢荚诮档椭?脂肪組織質(zhì)量/或膽固醇的飲食和生活方式變化。此類變化可減少發(fā)展心臟病的危險，并且可包括每天總卡路里、總脂肪、飽和脂肪、多不飽和脂肪、單不飽和脂肪、碳水化合物、蛋白質(zhì)、膽固醇、不溶纖維的飲食攝取的推薦以及體力活動的推薦?！案视腿ァ被颉癟G”意指由與三個脂肪酸分子組合的甘油的脂質(zhì)或中性脂肪?！?型糖尿病”(也稱為“2型糖尿病”或“糖尿病，2型”，并且之前稱為“糖尿病2型”、“非-胰島素依賴性糖尿病(NIDDM) ”、“肥胖癥相關(guān)性糖尿病”或“成人型糖尿病”)是主要特征在于胰島素抵抗、相對胰島素缺乏和高血糖癥的代謝病癥?！爸委煛笔侵赶騽游锸┯盟幬锝M合物以實現(xiàn)疾病、病癥或疾患的改變或提高?！拔唇?jīng)修飾的核苷酸”意指由天然存在核堿基、糖部分和核苷間鍵合組成的核苷酸。在某些實施方案中，未經(jīng)修飾的核苷酸是RNA核苷酸(即β -D-核糖核苷)或DNA核苷酸(即β -D-脫氧核糖核苷)。某些實施方案在某些實施方案中，本發(fā)明的化合物和組合物包含靶向于CETP的長度為10至30個連接核苷的經(jīng)修飾的寡核苷酸。CETP靶可具有選自SEQ ID NO :1-4中任一個的序列。在某些實施方案中，本發(fā)明的化合物和組合物包含經(jīng)修飾的寡核苷酸，所述經(jīng)修飾的寡核苷酸由10至30個核苷組成并且具有包含與SEQ ID NO :1-4的等長部分互補的至少8個連續(xù)核堿基的核堿基序列。在某些實施方案中，本發(fā)明的化合物和組合物包含經(jīng)修飾的寡核苷酸，所述經(jīng)修飾的寡核苷酸由10至30個連接核苷并且具有包含與SEQ ID NO :1-4的等長部分互補的至少 8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29 或 30 個連續(xù)
核堿基的核堿基序列。在某些實施方案中，本發(fā)明的化合物和組合物可由10至30個連接核苷組成并且具有包含 SEQ ID NO =41-114 中任一個的至少 8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19 或 20
個連續(xù)核堿基的核堿基序列。在某些實施方案中，以下反義化合物或寡核苷酸靶向CETP核酸的區(qū)域并且實現(xiàn)對 CETP mRNA 的至少 60% 抑制SEQ ID NO :49、53、56、57、58、59、60、62、66、70、71、76、77、78、80、83、86、89、92、93、94、96、97、99、102、105、106、107、108、109、110、111、113、114。在某些實施方案中，以下反義化合物或寡核苷酸靶向CETP核酸的區(qū)域并且實現(xiàn)對 CETP mRNA 的至少 65% 抑制SEQ ID NO :49、53、56、57、58、59、60、62、66、70、71、76、77、78、80、83、86、89、92、93、94、96、97、99、102、105、106、108、109、110、111、113、114。在某些實施方案中，以下反義化合物或寡核苷酸靶向CETP核酸的區(qū)域并且實現(xiàn)對 CETP mRNA 的至少 70% 抑制SEQ ID NO :49、56、57、58、59、60、62、66、70、71、77、80、83、86、93、94、96、99、102、105、106、109、110、111、114。在某些實施方案中，以下反義化合物或寡核苷酸靶向CETP核酸的區(qū)域并且實現(xiàn)對 CETP mRNA 的至少 75% 抑制SEQ ID NO :49、56、57、58、59、60、62、71、80、86、93、94、99、102、109、110、114。在某些實施方案中，以下反義化合物或寡核苷酸靶向CETP核酸的區(qū)域并且實現(xiàn)對 CETP mRNA 的至少 80% 抑制SEQ ID NO :57、58、62、80、86、94、99、102、109、110、114。 在某些實施方案中，以下反義化合物或寡核苷酸靶向CETP核酸的區(qū)域并且實現(xiàn)對 CETP mRNA 的至少 85% 抑制SEQ ID NO :58、62、80、86、102、109、114。在某些實施方案中，以下反義化合物或寡核苷酸靶向CETP核酸的區(qū)域并且實現(xiàn)對 CETP mRNA 的至少 90% 抑制SEQ ID NO :58、102、109、114。在某些實施方案中，反義化合物或寡核苷酸靶向CETP核酸的區(qū)域。在某些實施方案中，靶向于CETP核酸的反義化合物或寡核苷酸可靶向SEQ ID N0:1的以下核苷酸區(qū)域:132-151、239-278、303-435、511-550、614-654、703-722、773-812、845-910、996-1047、1093-1112、1168-1187、1208-1297、1318-1384、1406-1425、1446-1493、1539-1727、1763-1782。在某些實施方案中，靶向于CETP核酸的區(qū)域的化合物或寡核苷酸可具有與該區(qū)域的等長核堿基部分互補的連續(xù)核堿基部分。例如，該部分可以是與SEQ ID N0:1區(qū)域:132-151、239-278、303-435、511-550、614-654、703-722、773-812、845-910、996-1047、1093-1112、1168-1187、1208-1297、1318-1384、1406-1425、1446-1493、1539-1727、1763-1782的等長部分互補的至少8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20個連續(xù)核堿基部分。在某些實施方案中，SEQ ID NO 1的以下核苷酸區(qū)域當通過反義化合物或寡核苷酸靶向時展示出對 CETP 的至少 60% 抑制:132-151、239-258、303-396、416-435、511-530、614-654、773-812、845-864、891-910、1028-1047、1093-1112、1168-1187、1238-1297、1343-1384、1406-1425、1474-1493、1539-1697、1708-1727、1763-1782。在某些實施方案中，SEQ ID NO 1的以下核苷酸區(qū)域當通過反義化合物或寡核苷酸靶向時展示出對 CETP 的至少 65% 抑制132-151、239-258、303-396、416-435、511-530、614-654、773-812、845-864、891-910、1028-1047、1093-1112、1168-1187、1238-1297、1343-1384、1406-1425、1474-1493、1539-1590、1613-1697、1708-1727、1763-1782。在某些實施方案中，SEQ ID NO 1的以下核苷酸區(qū)域當通過反義化合物或寡核苷酸靶向時展示出對 CETP 的至少 70% 抑制:132-151、303-396、416-435、511-530、614-654、793-812、891-910、1028-1047、1093-1112、1258-1297、1343-1362、1406-1425、1474-1493、1539-1590、1636-1697、1763-1782。
在某些實施方案中，SEQ ID NO 1的以下核苷酸區(qū)域當通過反義化合物或寡核苷酸靶向時展示出對 CETP 的至少 75% 抑制:132-151、303-396、416-435、635-654、891-910、1093-1112、1258-1297、1406-1425、1474-1493、1636-1675、1763-1782。在某些實施方案中，SEQ ID NO :1的以下核苷酸區(qū)域當通過反義化合物或寡核苷酸靶向時展示出對CETP的至少80%抑制:313-352、416-435、891-910、1093-1112、1278-1297、1406-1425、1474-1493、1636-1675、1763-1782。在某些實施方案中，SEQ ID NO :1的以下核苷酸區(qū)域當通過反義化合物或寡核苷酸靶向時展示出對CETP的至少85%抑制:333-352、416-435、891-910、1093-1112、1474-1493、1636-1655、1763-1782。在某些實施方案中，SEQ ID NO 1的以下核苷酸區(qū)域當通過反義化合物或寡核苷酸靶向時展示出對 CETP 的至少 90% 抑制333-352、1474-1493、1636-1655、1763-1782。在某些實施方案中，本發(fā)明的化合物和組合物包含經(jīng)修飾的寡核苷酸的鹽。在某些實施方案中，本發(fā)明的化合物和組合物還包含藥學(xué)上可接受的載體或稀釋劑。在某些實施方案中，以經(jīng)修飾的寡核苷酸的整體為基準，測得經(jīng)修飾的寡核苷酸的核堿基序列與SEQ ID NO :1-4中任一個至少70%、80%、90%、95%或100%互補。在某些實施方案中，本發(fā)明的化合物由單鏈的經(jīng)修飾的寡核苷酸組成。在某些實施方案中，經(jīng)修飾的寡核苷酸由8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30個連接核苷組成。在某些實施方案中，經(jīng)修飾的寡核苷酸由20個連接核苷組成。在某些實施方案中，所述經(jīng)修飾的寡核苷酸的至少一個核苷間鍵合是經(jīng)修飾的核苷間鍵合。在某些實施方案中，每個核苷間鍵合是硫代磷酸酯核苷間鍵合。在某些實施方案中，經(jīng)修飾的寡核苷酸的至少一個核苷包含經(jīng)修飾的糖。在某些實施方案中，經(jīng)修飾的寡核苷酸包含至少一個經(jīng)四氫吡喃修飾的核苷，其中四氫吡喃環(huán)代替呋喃糖環(huán)。在某些實施方案中，每一個經(jīng)四氫吡喃修飾的核苷具有以下結(jié)構(gòu)
權(quán)利要求
1.一種減少動物中的CETP表達的方法，其包括向所述動物施用包含靶向于CETP的長度為10至30個連接核苷的經(jīng)修飾的寡核苷酸的化合物，其中在所述動物中的CETP表達減少。
2.一種減少動物中的CETP活性的方法，其包括向所述動物施用包含靶向于CETP的長度為10至30個連接核苷的經(jīng)修飾的寡核苷酸的化合物，其中在所述動物中的CETP活性減少。
3.一種增加動物中的HDL水平或HDL活性的方法，其包括向所述動物施用包含靶向于CETP的長度為10至30個連接核苷的經(jīng)修飾的寡核苷酸的化合物，其中在所述動物中的HDL水平或HDL活性増加。
4.一種減少動物中的LDL、TG或葡萄糖水平的方法，其包括向所述動物施用包含靶向于CETP的長度為10至30個連接核苷的經(jīng)修飾的寡核苷酸的化合物，其中在所述動物中的LDL、TG或葡萄糖的水平減少。
5.一種減少動物中的LDL/HDL比例的方法，其包括向所述動物施用包含靶向于CETP的長度為10至30個連接核苷的經(jīng)修飾的寡核苷酸的化合物，其中在所述動物中的LDL/HDL比例減少。
6.一種減輕動物中的代謝疾病或心血管疾病的方法，其包括向所述動物施用包含靶向于CETP的長度為10至30個連接核苷的經(jīng)修飾的寡核苷酸的化合物，其中在所述動物中的所述代謝疾病或心血管疾病減輕。
7.權(quán)利要求6所述的方法，其中所述心血管疾病是動脈瘤、心絞痛、心律不齊、動脈粥樣硬化、腦血管疾病、冠心病、高血壓、血脂障礙、高脂血癥或高膽固醇血癥。
8.權(quán)利要求1-6中任一項所述的方法，其中所述化合物由單鏈修飾的寡核苷酸組成。
9.權(quán)利要求1-6中任一項所述的方法，其中所述動物是人。
10.權(quán)利要求1-6中任一項所述的方法，其中所述化合物是第一活性剤，并且還包括施用第二活性剤。
11.權(quán)利要求10所述的方法，其中共施用所述第一活性劑和第二活性剤。
12.權(quán)利要求10中任一項所述的方法，其中所述第二活性劑是葡萄糖降低劑。
13.權(quán)利要求10所述的方法，其中所述第二活性劑是降LDL、TG或膽固醇治療。
14.權(quán)利要求1-6中任一項所述的方法，其中施用包含胃腸外施用。
15.權(quán)利要求1-6中任一項所述的方法，其中以所述經(jīng)修飾的寡核苷酸的整體為基準，測得所述經(jīng)修飾的寡核苷酸的核堿基序列與SEQ ID NO :1-4中任一個至少90%互補。
16.權(quán)利要求1-6中任一項所述的方法，其中以所述經(jīng)修飾的寡核苷酸的整體為基準，測得所述經(jīng)修飾的寡核苷酸的核堿基序列與SEQ ID NO :1-4中任一個至少95%互補。
17.權(quán)利要求1-6中任一項所述的方法，其中以所述經(jīng)修飾的寡核苷酸的整體為基準，測得所述經(jīng)修飾的寡核苷酸的核堿基序列與SEQ ID NO :1-4中任一個至少100%互補。
18.權(quán)利要求1-6中任一項所述的方法，其中所述經(jīng)修飾的寡核苷酸的至少ー個核苷間鍵合是經(jīng)修飾的核苷間鍵合。
19.權(quán)利要求18所述的方法，其中每個核苷間鍵合是硫代磷酸酯核苷間鍵合。
20.權(quán)利要求1-6中任一項所述的方法，其中所述經(jīng)修飾的寡核苷酸的至少ー個核苷包含經(jīng)修飾的糖。
21.權(quán)利要求20所述的方法，其包含至少ー個經(jīng)四氫吡喃修飾的核苷，其中四氫吡喃環(huán)代替呋喃糖環(huán)。
22.權(quán)利要求21所述的方法，其中所述至少一個經(jīng)四氫吡喃修飾的核苷中的每ー個具有以下結(jié)構(gòu)
23.權(quán)利要求20所述的方法，其中至少ー種經(jīng)修飾的糖是雙環(huán)糖。
24.權(quán)利要求20所述的方法，其中至少ー種經(jīng)修飾的糖包含2’-O-甲氧基こ基或4’ -(CH2)η_0_2’ 橋，其中 η 是 I 或 2。
25.權(quán)利要求1-6中任一項所述的方法,其中經(jīng)修飾的寡核苷酸的至少ー個核苷包含經(jīng)修飾的核堿基。
26.權(quán)利要求25所述的方法，其中所述經(jīng)修飾的核堿基是5-甲基胞嘧啶。
27.權(quán)利要求1-6中任一項所述的方法，其中所述經(jīng)修飾的寡核苷酸由20個連接核苷組成。
28.權(quán)利要求1-6中任一項所述的方法，其中所述經(jīng)修飾的寡核苷酸包含 由連接脫氧核苷組成的缺ロ區(qū)段； 由連接核苷組成的5’翼區(qū)段； 由連接核苷組成的3’翼區(qū)段； 其中所述缺ロ區(qū)段位于5’翼區(qū)段與3’翼區(qū)段之間并且每個翼區(qū)段中的每個核苷包含經(jīng)修飾的糖。
29.權(quán)利要求1-6中任一項所述的方法，其中所述經(jīng)修飾的寡核苷酸由20個連接核苷組成，具有的核堿基序列包含與SEQ ID NO :1-4中任ー個的等長部分互補的至少8個連續(xù)核堿基，并且包含 由10個連接脫氧核苷組成的缺ロ區(qū)段； 由5個連接核苷組成的5’翼區(qū)段； 由5個連接核苷組成的3’翼區(qū)段； 其中所述缺ロ區(qū)段位于5’翼區(qū)段與3’翼區(qū)段之間，其中每個翼區(qū)段的每個核苷包含2’ -O-甲氧基こ基糖，其中每個核苷間鍵合是硫代磷酸酯鍵合，并且其中每個胞嘧啶是5-甲基胞嘧啶。
30.一種用于治療患有代謝疾病或心血管疾病的動物的方法，其包括 a.鑒定患有代謝疾病或心血管疾病的所述動物， b.向所述動物施用治療有效量的包含經(jīng)修飾的寡核苷酸的化合物，所述經(jīng)修飾的寡核苷酸由20個連接核苷組成并且以經(jīng)修飾的寡核苷酸的整體為基準，測得其具有的核堿基序列與SEQ ID NO :1-4中任一個至少90%互補。
其中患有代謝疾病或心血管疾病的所述動物被治療。
31.權(quán)利要求1、2、3、4、5、6或40所述的方法，其中向所述動物施用所述化合物減少所述動物中的代謝疾病或心血管疾病。
32.權(quán)利要求31的方法，其中所述代謝疾病或心血管疾病是肥胖癥、糖尿病、動脈粥樣硬化、血脂障礙、冠心病、非酒精性脂肪肝疾病(NAFLD)、高脂肪酸血癥、代謝綜合征或其組ムロ ο
33.權(quán)利要求3所述的方法，其中所述HDL水平和/或HDL活性增加至少5%、10%、20%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95% 或 100%。
34.化合物用于減少動物中的CETP水平或活性的用途，其中所述化合物包含長度為10至30個連接核苷的經(jīng)修飾的寡核苷酸，其靶向于如SEQ ID NO :1-4中任一個所示的CETP。
35.化合物用于增加動物中的HDL水平和/或HDL活性的用途，其中所述化合物包含長度為10至30個連接核苷的經(jīng)修飾的寡核苷酸，其靶向于如SEQ ID NO :1_4中任一個所示的 CETP。
36.化合物用于減少動物中的LDL、TG或葡萄糖水平的用途，其中所述化合物包含長度為10至30個連接核苷的經(jīng)修飾的寡核苷酸，其靶向于如SEQ ID NO :1_4中任一個所示的CETP。
37.化合物治療動物中的代謝疾病或心血管疾病的用途，其中所述化合物包含長度為10至30個連接核苷的經(jīng)修飾的寡核苷酸，其靶向于如SEQ ID NO :1-4中任一個所示的CETP。
38.ー種包含經(jīng)修飾的寡核苷酸的化合物，其由10至30個連接核苷組成并且具有的核堿基序列包含SEQ ID NO :41-114中任ー個的至少8個連續(xù)核堿基。
39.權(quán)利要求38所述的化合物，其中所述經(jīng)修飾的寡核苷酸的核堿基序列與SEQIDNO 1-4中任一個至少95%互補。
40.權(quán)利要求38所述的化合物，其中所述經(jīng)修飾的寡核苷酸的核堿基序列與SEQIDNO :1-4中任一個至少100%互補。
41.權(quán)利要求38所述的化合物，其中所述經(jīng)修飾的寡核苷酸是單鏈。
42.權(quán)利要求38所述的化合物，其中至少ー個核苷間鍵合是經(jīng)修飾的核苷間鍵合。
43.權(quán)利要求42所述的化合物，其中每個核苷間鍵合是硫代磷酸酯核苷間鍵合。
44.權(quán)利要求38所述的化合物，其中至少ー個核苷包含經(jīng)修飾的糖。
45.權(quán)利要求44所述的化合物，其包含至少ー個經(jīng)四氫吡喃修飾的核苷，其中四氫吡喃環(huán)代替呋喃糖環(huán)。
46.權(quán)利要求45所述的化合物，其中所述至少一個經(jīng)四氫吡喃修飾的核苷中的每ー個具有以下結(jié)構(gòu)
47.權(quán)利要求44所述的化合物，其中至少ー種經(jīng)修飾的糖是雙環(huán)糖。
48.權(quán)利要求44所述的化合物，其中至少ー種經(jīng)修飾的糖包含2’-O-甲氧基こ基或4’ -(CH2)η_0_2’ 橋，其中 η 是 I 或 2。
49.權(quán)利要求38所述的化合物，其中至少ー個核苷包含經(jīng)修飾的核堿基。
50.權(quán)利要求49所述的化合物，其中所述經(jīng)修飾的核堿基是5-甲基胞嘧啶。
51.權(quán)利要求38所述的化合物，其中所述經(jīng)修飾的寡核苷酸包含 由連接脫氧核苷組成的缺ロ區(qū)段； 由連接核苷組成的5’翼區(qū)段； 由連接核苷組成的3’翼區(qū)段； 其中所述缺ロ區(qū)段位于5’翼區(qū)段與3’翼區(qū)段之間，并且其中每個翼區(qū)段的每個核苷包含經(jīng)修飾的糖。
52.權(quán)利要求38所述的化合物，其中所述經(jīng)修飾的寡核苷酸由20個連接核苷組成并且包含 由10個連接脫氧核苷組成的缺ロ區(qū)段； 由5個連接核苷組成的5’翼區(qū)段； 由5個連接核苷組成的3’翼區(qū)段； 其中所述缺ロ區(qū)段位于5’翼區(qū)段與3’翼區(qū)段之間，其中每個翼區(qū)段的每個核苷包含2’ -O-甲氧基こ基糖，其中每個核苷間鍵合是硫代磷酸酯鍵合且其中每個胞嘧啶殘基是5-甲基胞嘧啶。
53.權(quán)利要求38所述的化合物，其中所述經(jīng)修飾的寡核苷酸由20個連接核苷組成。
54.—種包含經(jīng)修飾的寡核苷酸的化合物，所述經(jīng)修飾的寡核苷酸由20個連接核苷組成并且具有的核堿基序列包含與SEQ ID NO :1-4中任ー個的等長部分互補的至少8個連續(xù)核堿基，其中所述經(jīng)修飾的寡核苷酸包含 由10個連接脫氧核苷組成的缺ロ區(qū)段； 由5個連接核苷組成的5’翼區(qū)段； 由5個連接核苷組成的3’翼區(qū)段； 其中所述缺ロ區(qū)段位于5’翼區(qū)段與3’翼區(qū)段之間，其中每個翼區(qū)段的每個核苷包含2’ -O-甲氧基こ基糖，其中每個核苷間鍵合是硫代磷酸酯鍵合且其中每個胞嘧啶殘基是5-甲基胞嘧啶。
55.權(quán)利要求38或54中任一項所述的化合物用于增加動物中的HDL水平和/或HDL活性的用途。
56.權(quán)利要求38或54中任一項所述的化合物用于治療動物中的代謝疾病或心血管疾病的用途。
全文摘要
本文提供的是用于減少動物中CETP mRNA和蛋白的表達的方法、化合物和組合物。本文還提供的是用于在動物中增加HDL水平和/或HDL活性并且減少血漿脂質(zhì)、血漿葡萄糖和動脈粥樣硬化斑塊的方法、化合物和組合物。此類方法、化合物和組合物可用于治療、預(yù)防、延緩或減輕任何一種或多種心血管疾病或代謝疾病或其癥狀。
文檔編號C12N15/11GK102844434SQ201180017997
公開日2012年12月26日 申請日期2011年4月7日 優(yōu)先權(quán)日2010年4月7日
發(fā)明者T·A·貝爾三世, R·M·克魯克, M·J·格雷厄姆 申請人:Isis制藥公司