專利名稱：一株產(chǎn)二甲苯單加氧酶的惡臭假單胞菌及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一株產(chǎn)二甲苯單加氧酶菌株一惡臭假單胞菌(I^eudomonas putida) ZJB-LLJ,及其在微生物發(fā)酵制備5-甲基吡嗪_2_羧酸中的應(yīng)用。背景技術(shù)：
5-甲基吡嗪-2-羧酸(5-Methylpyrazine-2-carboxylic acid)是一種米白色固體結(jié)晶，分子式為C6H6N2O2、分子量138. 12、熔點166 169°C、外觀淡黃色晶體、具有刺激性氣味，暴露在空氣中會緩慢氧化，由棕色油狀物變?yōu)樽睾谏吵頎罟腆w，需真空密封保存。 5-甲基吡嗪-2-羧酸在醫(yī)藥工業(yè)領(lǐng)域有著廣泛的用途，主要用于合成第二代磺崛類降血糖藥物格列吡嗪、新型抗高血壓藥物阿西莫司以及抗結(jié)核藥物5-甲基吡嗪-2-羧酸甲醋等， 因此對5-甲基吡嗪-2-羧酸的研究具有重要的實際應(yīng)用價值。
權(quán)利要求
1.一株產(chǎn)二甲苯單加氧酶菌株——惡臭假單胞菌(Pseudomonas putida)ZJB-LLJ，保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，地址中國，武漢，武漢大學(xué)430072，保藏編號CCTCC No =M 2011395，保藏日期2011年11月13日。
2.如權(quán)利要求1所述的惡臭假單胞菌ZJB-LLJ在微生物發(fā)酵制備5-甲基吡嗪-2-羧酸中的應(yīng)用。
3.如權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征在于所述應(yīng)用為以惡臭假單胞菌ZJB-LLJ經(jīng)產(chǎn)酶培養(yǎng)獲得的含酶菌體細胞為催化劑，以2，5- 二甲基吡嗪為底物，在觀 32°C、pH7. 0 8. 0下進行轉(zhuǎn)化反應(yīng)M 48小時，于反應(yīng)液中獲得所述5-甲基吡嗪-2-羧酸。
4.如權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于所述產(chǎn)酶培養(yǎng)在以對二甲苯為唯一的碳源和能源的產(chǎn)酶培養(yǎng)基中進行，于觀 32°C、pH7. 0 8. 0下培養(yǎng)12 M小時。
5.如權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其特征在于所述產(chǎn)酶培養(yǎng)基質(zhì)量組成如下 (NH4)2SO4 1. 0 3. Og/L ；Na2HPO4 · 2H20 1. 0 5. Og/L ；KH2P04 0. 5 2. Og/L ；NaCl1. 0 5. 0g/L ；MgCl2 ·6Η20 0. 1 0. 5g/L ；CaCl2 ·2Η20 1. 0 5. 0g/L ；FeCl3 ·6Η20 0. 1 0. 5g/L ；ZnSO4 · 7H20 0. 05 0. 2g/L ；MnCl2 · 4H20 0. 05 0. lg/L ；H3BO3 0. 1 0. 5g/L ； CaCl2 · 6Η20 0. 1 0. 3g/L ；CuCl2 · 2H20 0. 05 0. 02g/L ；NiCl2 · 6H20 0. 01 0. 03g/L ； Na2MoO4 · 2Η20 0. 01 0. 05g/L ；EDTA · Na2 · 2Η20 3. 0 8. 0g/L ；FeSO4 · 7H20 1. 0 3. Og/ L，對二甲苯0. 5 2mL/L，溶劑為水，ρΗ6· 8 7. 2。
6.如權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于所述底物的初始濃度為2 6g/L。
全文摘要
本發(fā)明提供了一株產(chǎn)二甲苯單加氧酶菌株——惡臭假單胞菌(Pseudomonas putida)ZJB-LLJ，及其在微生物發(fā)酵制備5-甲基吡嗪-2-羧酸中的應(yīng)用。該菌株保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，地址中國，武漢，武漢大學(xué)430072，保藏編號CCTCC NoM 2011395，保藏日期2011年11月13日。本發(fā)明的有益效果主要體現(xiàn)在提供了一種產(chǎn)二甲苯單加氧酶的新菌株，通過該菌株可以制備藥物中間體5-甲基吡嗪-2-羧酸。使用本發(fā)明生產(chǎn)5-甲基吡嗪-2-羧酸，反應(yīng)條件溫和，節(jié)能，環(huán)保，更重要的是過程簡單，產(chǎn)物提取容易，具有良好的工業(yè)應(yīng)用前景。
文檔編號C12R1/40GK102533599SQ20111045142
公開日2012年7月4日 申請日期2011年12月29日 優(yōu)先權(quán)日2011年12月29日
發(fā)明者劉麗娟, 沈寅初, 薛亞平, 鄭裕國 申請人:浙江工業(yè)大學(xué)