專利名稱：一種檢測乳與乳制品中嗜冷菌含量的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種檢測乳與乳制品中微生物的方法，尤其適用于檢測乳與乳制品中嗜冷菌的含量。
背景技術(shù)：
目前，乳與乳制品中嗜冷菌檢測方法主要為國家行業(yè)標準SN/T 2552.4-2010《乳及乳制品衛(wèi)生微生物學檢驗方法-第四部分:嗜冷微生物菌落計數(shù)》，其中的第一法:6.5°C菌落計數(shù)法的培養(yǎng)條件為6.5°C下培養(yǎng)10天，其檢測結(jié)果準確但耗時較長。為解決耗時較長的問題，上述標準又提供了第二法21°C菌落計數(shù)法，采用的培養(yǎng)條件為21°C下培養(yǎng)25±1小時，雖然解決了耗時較長的問題，但在短時間內(nèi)菌落生長較小，計數(shù)不便，影響檢測結(jié)果的準確性。且由于在21°C的培養(yǎng)條件下，除了嗜冷菌外還有其他菌能夠生長，其最終形成的菌落不全部為嗜冷菌菌落，所以第二法是一種近似的檢測方法，如果僅僅為了使菌落生長的更大而延長第二法中的培養(yǎng)時間，會使更多的非嗜冷菌形成新的菌落，進一步影響檢測結(jié)果的準確性。目前還缺乏一種能夠在第一法基礎(chǔ)上有效降低檢測時間、且不影響檢測準確性的檢測乳與乳制品中嗜冷菌含量的方法。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種檢測乳與乳制品中嗜冷菌含量的方法，能夠在第一法基礎(chǔ)上有效降低檢測時間、檢測準確性較高。本發(fā)明提供了一種檢測乳與乳制品中嗜冷菌含量的方法，其接種后培養(yǎng)的條件為:先于16°C至18°C下培養(yǎng)18小時至20小時，再于6°C至7°C下培養(yǎng)4天。在檢測乳與乳制品 中嗜冷菌含量的方法的一種示意性實施方式中，該方法包括如下步驟:對待測乳或乳制品進行梯度稀釋，制成多個梯度樣本；將每個梯度樣本分別接種制成多份菌落培養(yǎng)物；對菌落培養(yǎng)物進行培養(yǎng)，培養(yǎng)的條件為:先于16°C至18°C下培養(yǎng)18小時至20小時，再于6°C至7°C下培養(yǎng)4天；培養(yǎng)結(jié)束后，對培養(yǎng)后的菌落培養(yǎng)物進行菌落計數(shù)并計算出待測乳或乳制品中嗜冷菌含量，其中可以選用生理鹽水或蛋白胨鹽溶液作為稀釋液進行梯度稀釋。在檢測乳與乳制品中嗜冷菌含量的方法的一種示意性實施方式中，接種的方法為:取每個梯度樣本分別加入無菌平皿中，然后向平皿傾注平板牛奶計數(shù)瓊脂，轉(zhuǎn)動平皿使梯度樣本和平板牛奶計數(shù)瓊脂混合均勻，水平放置平皿至混合均勻的物質(zhì)凝固，且培養(yǎng)時菌落培養(yǎng)物疊放可以不超過6個。在檢測乳與乳制品中嗜冷菌含量的方法的一種示意性實施方式中，接種的方法為:取每個梯度樣本分別置于菌落總數(shù)測試片內(nèi)，并使梯度樣本在菌落總數(shù)測試片上形成均勻的計數(shù)區(qū)域，靜置菌落總數(shù)測試片直至菌落總數(shù)測試片內(nèi)的物質(zhì)固化，且培養(yǎng)時菌落培養(yǎng)物疊放可以不超過20個。在檢測乳與乳制品中嗜冷菌含量的方法的一種示意性實施方式中，接種時，制成每個菌落培養(yǎng)物所需的梯度樣本的用量為I毫升，且每個稀釋倍數(shù)的梯度樣本分別同時接種兩份平板牛奶計數(shù)瓊脂或菌落總數(shù)測試片，制成兩份菌落培養(yǎng)物。其中在培養(yǎng)結(jié)束后，對培養(yǎng)后的菌落培養(yǎng)物進行菌落計數(shù)，可以將菌落數(shù)為10-300CFU的培養(yǎng)后的菌落培養(yǎng)物作為目標培養(yǎng)物，并通過如下方法計算出待測乳或乳制品中嗜冷菌含量。若目標培養(yǎng)物對應(yīng)的梯度樣本涉及I個稀釋倍數(shù)，則應(yīng)按目標培養(yǎng)物的平均菌落數(shù)乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)得到待測乳或乳制品中嗜冷菌含量。若目標培養(yǎng)物對應(yīng)的梯度樣本涉及2個稀釋倍數(shù)，則采用如下公式計算出待測乳或乳制品中嗜冷菌含量:Ν= Σ C / [ Cn1 + 0.1Xn2) X d]，式中，N為待測乳或乳制品中嗜冷菌含量，單位為CFU/mL，Σ C為所有目標培養(yǎng)物中菌落數(shù)的總和，單位為CFU^1為目標培養(yǎng)物中較低稀釋倍數(shù)的梯度樣本對應(yīng)的目標培養(yǎng)物的個數(shù)，n2為目標培養(yǎng)物中較高稀釋倍數(shù)的梯度樣本對應(yīng)的目標培養(yǎng)物的個數(shù)，d為較低稀釋倍數(shù)的稀釋因數(shù)。若所有的培養(yǎng)后的菌落培養(yǎng)物的菌落數(shù)均少于10CFU，則應(yīng)按稀釋倍數(shù)最低的梯度樣本對應(yīng)的兩個培養(yǎng)后的菌落培養(yǎng)物的平均菌落數(shù)乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)得到待測乳或乳制品中嗜冷囷含量。若所有的培養(yǎng)后的菌落培養(yǎng)物的菌落數(shù)均多于300CFU，則應(yīng)按稀釋倍數(shù)最高的梯度樣本對應(yīng)的兩個 培養(yǎng)后的菌落培養(yǎng)物的平均菌落數(shù)乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)得到待測乳或乳制品中嗜冷囷含量。本發(fā)明中梯度稀釋是指對樣品進行N倍的梯度稀釋，如N取10，即表示對樣本進行十倍梯度稀釋，可首先將樣本稀釋十倍，得到Tl，再將Tl稀釋十倍，得到T2 ;將T2稀釋十倍，得到T3 ;將T3稀釋十倍，得到T4，依次類推。T1、T2、T3、T4的稀釋倍數(shù)依次為10\102、103、IO4,稀釋倍數(shù)對應(yīng)的稀釋因數(shù)為該稀釋倍數(shù)的倒數(shù)，依次為10' 10_2、10' ο-40本發(fā)明的一種檢測乳與乳制品中嗜冷菌含量的方法，其培養(yǎng)用時不到5天；最后形成的菌落較大，計數(shù)時不易產(chǎn)生誤差；檢測用時較短，準確性較高。
具體實施例方式為了對發(fā)明的技術(shù)特征、目的和效果有更加清楚的理解，現(xiàn)結(jié)合以下各實施例說明本發(fā)明的具體實施方式
。第一實施例。1、試劑及樣品。選用生牛乳作為待測乳或乳制品。蛋白胨鹽溶液:市購。平板牛奶計數(shù)瓊脂:市購。為了檢測的方便，若生牛乳中菌含量較高，可先對其進行一定比例稀釋后再用本實施例所述方法進行檢測。2、操作步驟。a.快速翻轉(zhuǎn)盛有生牛乳的容器，使其混合均勻；用無菌吸管吸取IOmL生牛乳于含有90mL無菌蛋白胨鹽溶液的三角瓶中，經(jīng)充分振搖獲得梯度樣本Tl ;另用一支ImL無菌吸管吸取ImL梯度樣本Tl，加入到含有9mL無菌蛋白胨鹽溶液的試管中，振搖試管，混合均勻，獲得梯度樣本T2 ;另用一支ImL無菌吸管吸取ImL梯度樣本T2，加入到含有9mL無菌蛋白胨鹽溶液的試管中，振搖試管，混合均勻，獲得梯度樣本T3 ;另用一支ImL無菌吸管吸取ImL梯度樣本T3，加入到含有9mL無菌蛋白胨鹽溶液的試管中，振搖試管，混合均勻，獲得梯度樣本T4。b.取梯度樣本T1-T4各兩份，每份lmL，分別將其加入8個直徑為90_100mm的無菌平皿中，然后向每個平皿傾注12-15mL溫度不高于46°C的平板牛奶計數(shù)瓊脂，轉(zhuǎn)動平皿使梯度樣本和平板牛奶計數(shù)瓊脂混合均勻，水平放置平皿至混合均勻的物質(zhì)凝固，制成8份菌落培養(yǎng)物。c.對8份菌落培養(yǎng)物進行倒置培養(yǎng),培養(yǎng)的條件為:先于18°C下培養(yǎng)20小時,再于7°C下培養(yǎng)4天；培養(yǎng)時菌落培養(yǎng)物疊放不超過6個。d.培養(yǎng)結(jié)束后，對培養(yǎng)后的菌落培養(yǎng)物進行菌落計數(shù)，將菌落數(shù)為10-300CFU的培養(yǎng)后的菌落培養(yǎng)物作為目標培養(yǎng)物，并通過如下方法計算出生牛乳中嗜冷菌含量。若目標培養(yǎng)物對應(yīng)的梯度樣本涉及I個稀釋倍數(shù)，則應(yīng)按目標培養(yǎng)物的平均菌落數(shù)乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)得到生牛乳中嗜冷菌含量。若目標培養(yǎng)物對應(yīng)的梯度樣本涉及2個稀釋倍數(shù)，則采用如下公式計算出生牛乳中嗜冷菌含量:
式中，N為生牛乳中嗜冷菌含量，單位為CFU/mL，Σ C為所有目標培養(yǎng)物中菌落數(shù)的總和，單位為CFU，Ii1為目標培養(yǎng)物中較低稀釋倍數(shù)的梯度樣本對應(yīng)的目標培養(yǎng)物的個數(shù)，n2為目標培養(yǎng)物中較高稀釋倍數(shù)的梯度樣本對應(yīng)的目標培養(yǎng)物的個數(shù)，d為較低稀釋倍數(shù)的稀釋因數(shù)。若所有的培養(yǎng)后的菌落培養(yǎng)物的菌落數(shù)均少于10CFU，則應(yīng)按稀釋倍數(shù)最低的梯度樣本對應(yīng)的兩個培養(yǎng)后的菌落培養(yǎng)物的平均菌落數(shù)乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)得到生牛乳中嗜冷菌含量。若所有的培養(yǎng)后的菌落培養(yǎng)物的菌落數(shù)均多于300CFU，則應(yīng)按稀釋倍數(shù)最高的梯度樣本對應(yīng)的兩個培養(yǎng)后的菌落培養(yǎng)物的平均菌落數(shù)乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)得到生牛乳中嗜冷菌含量。3、檢測結(jié)果。
權(quán)利要求
1.一種檢測乳與乳制品中嗜冷菌含量的方法，其特征在于，接種后培養(yǎng)條件為:先于16°C至18°C下培養(yǎng)18小時至20小時，再于6°C至7°C下培養(yǎng)4天。
2.一種檢測乳與乳制品中嗜冷菌含量的方法，包括如下步驟: 對待測乳或乳制品進行梯度稀釋，制成多個梯度樣本； 將每個所述梯度樣本分別接種制成多份菌落培養(yǎng)物； 在如權(quán)利要求1所述的培養(yǎng)條件下對所述菌落培養(yǎng)物進行培養(yǎng)；所述培養(yǎng)結(jié)束后，對培養(yǎng)后的所述菌落培養(yǎng)物進行菌落計數(shù)并計算出所述待測乳或乳制品中嗜冷菌含量。
3.如權(quán)利要求2所述的檢測乳與乳制品中嗜冷菌含量的方法，其中，所述梯度稀釋的稀釋液選用生理鹽水或蛋白胨鹽溶液。
4.如權(quán)利要求2所述的檢測乳與乳制品中嗜冷菌含量的方法，其中，所述接種的方法為:取每個所述梯度樣本分別加入無菌平皿中，然后向所述平皿傾注平板牛奶計數(shù)瓊脂，轉(zhuǎn)動所述平皿使所述梯度樣本和所述平板牛奶計數(shù)瓊脂混合均勻，水平放置所述平皿至混合均勻的物質(zhì)凝固。
5.如權(quán)利要求2所述的檢測乳與乳制品中嗜冷菌含量的方法，其中，所述接種的方法為:取每個所述梯度樣本分別置于菌落總數(shù)測試片內(nèi)，并使所述梯度樣本在所述菌落總數(shù)測試片上形成均勻的計數(shù)區(qū)域，靜置所述菌落總數(shù)測試片直至所述菌落總數(shù)測試片內(nèi)的物質(zhì)固化。
6.如權(quán)利要求4所述的檢測乳與乳制品中嗜冷菌含量的方法，其中，進行所述培養(yǎng)時，所述菌落培養(yǎng)物疊放不超過6個。
7.如權(quán)利要求5所述的檢測乳與乳制品中嗜冷菌含量的方法，其中，進行所述培養(yǎng)時，所述菌落培養(yǎng)物疊放不超過20個。
8.如權(quán)利要求2所述的檢測乳與乳制品中嗜冷菌含量的方法，其中，所述接種時，制成每個所述菌落培養(yǎng)物所需的所述梯度樣本的用量為I毫升，且每個稀釋倍數(shù)的所述梯度樣本分別同時接種于兩份平板牛奶計數(shù)瓊脂或菌落總數(shù)測試片，制成兩份所述菌落培養(yǎng)物。
9.如權(quán)利要求8所述的檢測乳與乳制品中嗜冷菌含量的方法，其中，所述培養(yǎng)結(jié)束后，對培養(yǎng)后的所述菌落培養(yǎng)物進行所述菌落計數(shù)，將菌落數(shù)為10-300CFU的培養(yǎng)后的所述菌落培養(yǎng)物作為目標培養(yǎng)物，并通過如下方法計算出所述待測乳或乳制品中嗜冷菌含量: 若所述目標培養(yǎng)物對應(yīng)的所述梯度樣本涉及I個稀釋倍數(shù)，則應(yīng)按所述目標培養(yǎng)物的平均菌落數(shù)乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)得到所述待測乳或乳制品中嗜冷菌含量； 若所述目標培養(yǎng)物對應(yīng)的所述梯度樣本涉及2個稀釋倍數(shù)，則采用如下公式計算出所述待測乳或乳制品中嗜冷菌含量:N= Σ C / [ Cn1 + 0.1 Xn2) X d], 式中， N為所述待測乳或乳制品中嗜冷菌含量，單位為CFU/mL， Σ C為所有所述目標培養(yǎng)物中菌落數(shù)的總和，單位為CFU， H1為所述目標培養(yǎng)物中較低稀釋倍數(shù)的所述梯度樣本對應(yīng)的所述目標培養(yǎng)物的個數(shù)， H2為所述目標培養(yǎng)物中較高稀釋倍數(shù)的所述梯度樣本對應(yīng)的所述目標培養(yǎng)物的個數(shù)， d為所述較低稀釋倍數(shù)的稀釋因數(shù)； 若所有的培養(yǎng)后的所述菌落培養(yǎng)物的菌落數(shù)均少于10CFU，則應(yīng)按稀釋倍數(shù)最低的所述梯度樣本對應(yīng)的兩個培養(yǎng)后的所述菌落培養(yǎng)物的平均菌落數(shù)乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)得到所述待測乳或乳制品中嗜冷菌含量； 若所有的培養(yǎng)后的所述菌落培養(yǎng)物的菌落數(shù)均多于300CFU，則應(yīng)按稀釋倍數(shù)最高的所述梯度樣本對應(yīng)的兩個培養(yǎng)后的所述菌落培養(yǎng)物的平均菌落數(shù)乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)得到所述待測乳或乳制品中嗜 冷菌含量。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種檢測乳與乳制品中嗜冷菌含量的方法，其接種后培養(yǎng)的條件為先于16-18℃下培養(yǎng)18-20小時，再于6-7℃下培養(yǎng)4天。本發(fā)明檢測方法的檢測用時較少；其最后形成的菌落較大，計數(shù)時不易產(chǎn)生誤差；本發(fā)明檢測方法與6.5℃菌落計數(shù)法的檢測結(jié)果有較好的相關(guān)性。
文檔編號C12Q1/06GK103160563SQ20111041688
公開日2013年6月19日 申請日期2011年12月14日 優(yōu)先權(quán)日2011年12月14日
發(fā)明者劉曉川, 喻東威, 杜麗, 薛志清, 劉志楠, 李梅, 劉衛(wèi)星 申請人:內(nèi)蒙古蒙牛乳業(yè)(集團)股份有限公司