專(zhuān)利名稱(chēng)：用于確定鈷60輻照滅活動(dòng)物源性生物材料病毒的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物醫(yī)學(xué)工程領(lǐng)域，具體涉及一種用于確定鈷60輻照滅活動(dòng)物源性生物材料病毒的方法。
背景技術(shù)：
醫(yī)療器械種類(lèi)廣泛，其中包括各種動(dòng)物組織材料。動(dòng)物組織和其衍生物在特性方面要優(yōu)于無(wú)生命體材料如金屬、塑料或者紡織品。動(dòng)物組織材料的數(shù)量和品種也是多樣的。動(dòng)物組織材料可以作為醫(yī)療器械的主要組成(如豬、牛的心臟，羊腸縫合線(xiàn)、止血材料等)，或者是醫(yī)療器械產(chǎn)品外結(jié)構(gòu)或者鞏固體 (如肝磷脂、凝膠、膠原等)，或者用于生產(chǎn)加工過(guò)程(如動(dòng)物脂)。所以，動(dòng)物源性醫(yī)療器械產(chǎn)品在所有醫(yī)療器械產(chǎn)品中占有重要比例。目前國(guó)內(nèi)市場(chǎng)上的動(dòng)物源性醫(yī)療器械根據(jù)國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局2002年發(fā)布的醫(yī)療器械產(chǎn)品分類(lèi)目錄分為三類(lèi)，三類(lèi)醫(yī)療器械是植入材料，如異種皮質(zhì)骨、人工骨， 骨修復(fù)材料、骨填充材料，心臟或組織修補(bǔ)材料，如牛或豬心包生物瓣膜、心臟補(bǔ)片；眼內(nèi)充填材料，如醫(yī)用透明質(zhì)酸鈉等；接觸式人工器官，如人工皮膚、異體脫細(xì)胞真皮；醫(yī)用衛(wèi)生材料及敷料中可吸收性止血、防粘性材料，如生物蛋白膠、醫(yī)用膠原膜、透明質(zhì)酸；醫(yī)用縫合材料中醫(yī)用可吸收膠原縫合線(xiàn)、羊腸線(xiàn)等，部分含異種動(dòng)物血清的體外診斷試劑， 如高密度脂蛋白膽固醇試劑盒等。對(duì)于動(dòng)物來(lái)源的要求，必須是非疫區(qū)國(guó)家。根據(jù)國(guó)藥監(jiān)械2002[112]號(hào)文件規(guī)定， 禁止來(lái)自疫區(qū)的牛羊組織細(xì)胞等醫(yī)療器械產(chǎn)品進(jìn)入中國(guó)。歐盟中只有瑞典是唯一未發(fā)生過(guò) BSE的國(guó)家。為了提高動(dòng)物源性生物材料使用的安全性，盡量消除人獸共患病以及相關(guān)的潛在風(fēng)險(xiǎn)(如瘋牛病，口蹄疫，禽流感等)，因此必須對(duì)動(dòng)物源性生物材料制備過(guò)程中的病毒滅活(去除)工藝進(jìn)行驗(yàn)證(評(píng)價(jià))。但到目前為止，國(guó)家尚未有相關(guān)的技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)出臺(tái)，因此為相關(guān)企業(yè)提供有效的病毒滅活/去除的技術(shù)指導(dǎo)方案尤為迫切。

發(fā)明內(nèi)容
針對(duì)目前缺乏動(dòng)物源性生物材料病毒滅活效果技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)的現(xiàn)狀，本發(fā)明的目的在于提供一種用于確定鈷60輻照滅活動(dòng)物源性生物材料病毒的方法。本發(fā)明的目的通過(guò)下述技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)一種用于確定鈷60輻照滅活動(dòng)物源性生物材料病毒的方法，包括以下步驟(1)用指示病毒感染動(dòng)物源性生物材料，然后測(cè)定動(dòng)物源性生物材料中的病毒滴度值；(2)將受指示病毒感染的動(dòng)物源性生物材料進(jìn)行一定劑量的鈷60輻照處理，測(cè)定處理后材料的病毒滴度值；(3)若輻照處理前后動(dòng)物源性生物材料中的病毒滴度差值大于4LgTCID50/0. 1ml,則采用該輻照劑量是有效的；若滅活處理前后動(dòng)物源性生物材料中的病毒滴度差值小于或等于4LgTCID50/0. 1ml，則需要增大輻照劑量。所述的指示病毒可以是RNA病毒或DNA病毒，可以是有包膜病毒或無(wú)包膜病毒；所述的指示病毒優(yōu)選豬偽狂犬病毒、豬細(xì)小病毒、科薩奇病毒3型或合胞病毒；當(dāng)指示病毒為上述4種病毒時(shí)，本發(fā)明的評(píng)價(jià)方法更加準(zhǔn)確。所述的動(dòng)物源性生物材料為骨松骨。本發(fā)明相對(duì)于現(xiàn)有技術(shù)具有如下的優(yōu)點(diǎn)及效果1、本發(fā)明選用指示病毒對(duì)動(dòng)物源性生物材料制備過(guò)程中滅活(去除)病毒工藝進(jìn)行有效評(píng)價(jià)(驗(yàn)證)，從而為動(dòng)物源性生物材料的使用提供安全保證，消除潛在的病毒感染風(fēng)險(xiǎn)。2、本發(fā)明的評(píng)價(jià)方法具有操作方法簡(jiǎn)便，評(píng)價(jià)結(jié)果可靠性高等優(yōu)點(diǎn)。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的描述，但本發(fā)明的實(shí)施方式不限于此。實(shí)施例1骨松骨鈷60輻照滅活柯薩奇3型病毒效果驗(yàn)證，包括以下步驟(1)取0. 9g骨松骨(由廣東冠吳生物科技股份有限公司提供；下同)，放入9ml柯薩奇3型病毒CVB3 (購(gòu)自武漢病毒研究所)液(病毒滴度為5. 75LgTCID50/0. 1ml)中，于 4°C浸泡吸附16小時(shí)，取出；將0. 9g吸附了柯薩奇3型病毒CVB3的骨松骨分為3份，每份 0. 3g，取其中一份加入3ml無(wú)牛血清培養(yǎng)液研磨成10%懸液，于4000r/min離心15分鐘，吸取上清，除菌過(guò)濾，測(cè)定其中柯薩奇3型病毒CVB3的滴度值(滴度測(cè)定采用96孔細(xì)胞病變法，計(jì)算按Karber法；下同)，為對(duì)照樣本病毒滴度值；(2)取步驟(1)中另外2份受柯薩奇3型病毒CVB3感染的骨松骨進(jìn)行鈷60輻照處理，輻照劑量為20kGy ；然后用3ml無(wú)牛血清培養(yǎng)液研磨成10%懸液，于4000r/min離心 15分鐘，吸取上清，除菌過(guò)濾，測(cè)定其病毒滴度；以上試驗(yàn)重復(fù)3個(gè)批次。經(jīng)過(guò)鈷60輻照處理后，3個(gè)批次的骨松骨中殘余柯薩奇3型病毒低于最低檢測(cè)限 (0. 500LgTCID50/0. 1ml)，三個(gè)批次病毒經(jīng)輻照后滴度減低值分別為第一批彡4. 92TCID50/0. Iml第二批彡4. 65TCID50/0. Iml第三批彡4. 72TCID50/0. Iml ；鈷60輻照處理前后樣品病毒滴度值差異見(jiàn)表1 :表1骨松骨鈷60輻照滅活柯薩奇3型病毒結(jié)果
^樣品經(jīng)鈷60輻照殘余柯薩奇3型病毒滴度(UTCID50/0. Iml)
(劑量為20kGy)_第一批_第二批_第三批
~對(duì)照樣本5A25Λ5522~
鈷 60 輻照后樣本<0.500^0. 500^0. 500 從表1可以看出，三個(gè)批次樣本輻照處理前后動(dòng)物源性生物材料中的病毒滴度差值均大于4LgTCID50/0. 1ml。說(shuō)明利用鈷60輻照劑量為20kGy時(shí)，可以有效滅活骨松骨中科薩奇3型病毒。實(shí)施例2骨松骨鈷60輻照滅活豬偽狂犬病毒效果驗(yàn)證，包括以下步驟(1)取0. 9g骨松骨，放入9ml豬偽狂犬病毒PRV (購(gòu)自北京微生物菌種保存中心) 液(病毒滴度為6.5LgTCID50/0. 1ml)中，于4°C浸泡吸附16小時(shí)，取出；將0.9g吸附了豬偽狂犬病毒PRV的骨松骨分為3份，每份0. 3g，取其中一份加入3ml無(wú)牛血清培養(yǎng)液研磨成 10%懸液，于4000r/min離心15分鐘，吸取上清，除菌過(guò)濾，測(cè)定其中豬偽狂犬病毒PRV的滴度值(滴度測(cè)定采用96孔細(xì)胞病變法，計(jì)算按Karber法；下同)，為對(duì)照樣本病毒滴度值；(2)取步驟(1)中另外2份受豬偽狂犬病毒PRV感染的骨松骨進(jìn)行鈷60輻照處理，輻照劑量為20kGy ；然后用3ml無(wú)牛血清培養(yǎng)液研磨成10%懸液，于4000r/min離心15 分鐘，吸取上清，除菌過(guò)濾，測(cè)定其病毒滴度；以上試驗(yàn)重復(fù)3個(gè)批次。經(jīng)過(guò)鈷60輻照處理后，3個(gè)批次的骨松骨中殘余豬偽狂犬病毒PRV低于最低檢測(cè)限(0. 500LgTCID50/0. 1ml)，三個(gè)批次病毒經(jīng)輻照后滴度減低值分別為第一批彡5. 71TCID50/0. Iml第二批彡5. 87TCID50/0. Iml第三批彡5. 79TCID50/0. Iml ；鈷60輻照處理前后樣品病毒滴度值差異見(jiàn)表2 表2骨松骨鈷60輻照滅活豬偽狂犬病毒結(jié)果
權(quán)利要求
1.一種用于確定鈷60輻照滅活動(dòng)物源性生物材料病毒的方法，其特征在于包括以下步驟(1)用指示病毒感染動(dòng)物源性生物材料，然后測(cè)定動(dòng)物源性生物材料中的病毒滴度值；(2)將受指示病毒感染的動(dòng)物源性生物材料進(jìn)行一定劑量的鈷60輻照處理，測(cè)定處理后材料的病毒滴度值；(3)若輻照處理前后動(dòng)物源性生物材料中的病毒滴度差值大于4LgTCID50/0.1ml，則采用該輻照劑量是有效的；若滅活處理前后動(dòng)物源性生物材料中的病毒滴度差值小于或等于4LgTCID50/0. 1ml，則需要增大輻照劑量。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于確定鈷60輻照滅活動(dòng)物源性生物材料病毒的方法，其特征在于所述的指示病毒為豬偽狂犬病毒、豬細(xì)小病毒、科薩奇病毒3型或合胞病毒。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于確定鈷60輻照滅活動(dòng)物源性生物材料病毒的方法，其特征在于所述的動(dòng)物源性生物材料為骨松骨。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種用于確定鈷60輻照滅活動(dòng)物源性生物材料病毒的方法，該方法包括以下步驟1、用指示病毒感染動(dòng)物源性生物材料，然后測(cè)定材料中的病毒滴度值；2、將受病毒感染的材料進(jìn)行病毒滅活處理，測(cè)定處理后材料的病毒滴度值；3、若滅活處理前后材料中的病毒滴度差值大于4LgTCID50/0.1ml，則該病毒滅活處理方法是有效的；若滅活處理前后材料中的病毒滴度差值小于或等于4LgTCID50/0.1ml，則該病毒滅活處理方法不宜采用。本發(fā)明選用指示病毒對(duì)動(dòng)物源性生物材料制備過(guò)程中滅活病毒工藝進(jìn)行有效評(píng)價(jià)，從而為動(dòng)物源性生物材料的使用提供安全保證，消除潛在的病毒感染風(fēng)險(xiǎn)；本發(fā)明的評(píng)價(jià)方法具有操作方法簡(jiǎn)便，評(píng)價(jià)結(jié)果可靠性高等優(yōu)點(diǎn)。
文檔編號(hào)C12R1/93GK102399908SQ20111039357
公開(kāi)日2012年4月4日 申請(qǐng)日期2011年12月1日 優(yōu)先權(quán)日2011年12月1日
發(fā)明者王一飛, 錢(qián)垂文 申請(qǐng)人:暨南大學(xué)