專利名稱：一種假紫色色桿菌生防菌株及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于微生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種防治水稻稻瘟病的生防菌株，更具體地說涉及一種高效防治水稻稻痕病的假紫色色桿菌(Chromobacterium pseudoviolaceumkwkjT4)及其應(yīng)用。
背景技術(shù)：
水稻是主要的糧食作物，而病害是其產(chǎn)量和品質(zhì)的重要限制因素。由稻瘟病菌(Magnaporthe grisea Barr.)引起的稻痕病是水稻毀滅性的病害,每年因稻痕病損失的水稻足以養(yǎng)活6000萬人。目前，水稻病害的防治主要依靠化學(xué)農(nóng)藥?；瘜W(xué)農(nóng)藥高殘留、對人畜有害、污染環(huán)境，具有環(huán)境風(fēng)險，且長期使用導(dǎo)致抗藥性的產(chǎn)生。為了提高綜防效益，很有必要探索新的防治策略和方法。利用拮抗微生物的生防法防治植物病害，因選擇性好、易降·解和對環(huán)境友好等特點(diǎn)，在可持續(xù)農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中越來越受到重視。其中，根際有益細(xì)菌為水稻稻瘟病的生物防治提供了新的途徑，顯示出良好的應(yīng)用前景，但目前菌種來源單一，相關(guān)技術(shù)仍然薄弱。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的之一在于提供一種假紫色色桿菌(Chromobacteriumpseudoviolaceum kwkjT4)生防菌株,該假紫色色桿菌保藏在中國典型培養(yǎng)物保藏中心,保藏單位簡稱為CCTCC，保藏編號為CCTCC M2011332。本發(fā)明的假紫色色桿菌生防菌株是從湖南湘潭本地的蔬菜根際土壤中分離篩選獲得，具體是經(jīng)平板對峙篩選獲得。本發(fā)明的目的之二在于提供上述假紫色色桿菌生防菌株的應(yīng)用。其應(yīng)用之一是，對于水稻稻瘟病菌的拮抗作用。其應(yīng)用之二是，在防治水稻稻瘟病方面的應(yīng)用。其應(yīng)用之三是，對于立枯絲核菌、小麥紋枯病菌、小麥全蝕病菌以及小麥赤霉病菌的拮抗作用。本發(fā)明的假紫色色桿菌kwkjT4能高效防治水稻稻瘟病，該生防細(xì)菌菌株對水稻稻瘟病菌具有拮抗作用，能夠有效抑制水稻稻瘟病菌的生長，對水稻稻瘟病的防治具有重要的應(yīng)用價值。本發(fā)明的有益效果具體體現(xiàn)在如下幾個方面(I)本發(fā)明的假紫色色桿菌kwkjT4為植物根際有益細(xì)菌，能在水稻根際根內(nèi)、植株體內(nèi)定殖，能抑制水稻稻瘟病菌的菌絲生長，抑制作用強(qiáng)，對水稻稻瘟病的防治效果顯著。(2)抑菌譜較廣，對立枯絲核菌、小麥紋枯病菌和小麥全蝕病菌等多種病原真菌都有拮抗作用。(3)對環(huán)境友好。
(4)菌種培養(yǎng)條件簡單，易保存，易于工業(yè)化生產(chǎn)，具有良好的開發(fā)應(yīng)用潛力。


本發(fā)明的假紫色色桿菌(Chromobacteriumpseudoviolaceum kwkjT4)保藏在中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏 單位簡稱為CCTCC，保藏單位地址是湖北省武漢市武昌珞珈山武漢大學(xué)，保藏編號為CCTCC M2011332，保藏日期為2011年9月28日。圖I是本發(fā)明實(shí)施例I的假紫色色桿菌kwkjT4對稻瘟病菌菌絲的抑制作用結(jié)果的照片。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合具體實(shí)驗(yàn)實(shí)例及附圖對本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的描述。實(shí)施例I :假紫色色桿菌kwkjT4的分離篩選。本發(fā)明的假紫色色桿菌，其屬名為Chromobacterium,種名為pseudoviolaceum,株名為kwkjT4，菌株是從湖南湘潭本地的蔬菜根際土壤中分離篩選獲得，具體通過平板對峙篩選獲得，所述篩選方法屬于本領(lǐng)域常規(guī)實(shí)驗(yàn)方法。具體方法及過程描述如下取蔬菜根際土壤(0-15cm) 0. 5g,以無菌水浸泡，于32°C振蕩24h,取懸池液,米用系列稀釋法分離細(xì)菌，挑選單菌落后，劃線純化，獲得細(xì)菌純培養(yǎng)。水稻稻瘟菌(06-249ZF-1，由浙江省農(nóng)科院植物保護(hù)與微生物研究所郝中娜博士提供)在馬鈴薯蔗糖培養(yǎng)基(PDA)平板上28°C培養(yǎng)2-4天，用0. 5cm的打孔器制成菌餅，取I塊置另一 PDA平板中心，在距菌餅3cm處接種分離純化的細(xì)菌，28°C下培養(yǎng)，直至對照中菌絲擴(kuò)展至平板邊緣，記錄實(shí)驗(yàn)結(jié)果(照相)。以不加kwkjT4菌株發(fā)酵液的平板作為對照，實(shí)驗(yàn)設(shè)3個重復(fù)。共獲得161株土壤細(xì)菌，用平板對峙法對這161株純化的細(xì)菌進(jìn)行篩選，獲得一株稻瘟菌拮抗細(xì)菌，結(jié)果參見圖I。菌株經(jīng)形態(tài)(培養(yǎng))、生理生化特征和16S rDNA序列分析,并參照文獻(xiàn)(KampferP, et al. Chromobacterium piscinae sp.nov. and Chromobacterium pseudoviolaceumsp.nov. , from environmental samples. Int J Syst Evol Microbiol,2009,59 2486-2490)，鑒定為假紫色色桿菌(Chromobacterium pseudoviolaceum),即本發(fā)明的假紫色色桿菌kwkjT4菌株。該菌種的培養(yǎng)條件、檢測存活性條件是營養(yǎng)瓊脂(NA)培養(yǎng)基，IOg胰蛋白胨，5g氯化鈉，5g牛肉膏，20g瓊脂粉，IOOOrnl水，pH7. O，28 V下培養(yǎng)。 實(shí)施例2 :假紫色色桿菌kwkjT4對水稻稻瘟菌的體外抑菌活性測定實(shí)驗(yàn)。將kwkjT4菌株于營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基中28°C下培養(yǎng)48小時，取I. 5mL該菌液于8000r/min離心lOmin，取ImL上清液與30mL PDA培養(yǎng)基(實(shí)施例I中的馬鈴薯蔗糖培養(yǎng)基)混合均勻，倒平板，冷卻后接種0. 5cm的稻瘟菌菌餅于平板中心，28°C下培養(yǎng)，以不加kwkjT4菌株培養(yǎng)上清液為對照，待對照長至培養(yǎng)皿邊緣時測量抑菌圈大小。相對抑菌率=(對照菌落擴(kuò)展直徑-處理菌落擴(kuò)展直徑)/對照菌落擴(kuò)展直徑X 100%。其中，菌落擴(kuò)展直徑(Cm)=菌落的平均直徑-0. 5 (菌餅直徑)。結(jié)果表明，kwkjT4菌株對稻瘟菌菌絲生長的抑制率分別為97. 2，如表一。表一假紫色色桿菌kwkjT4菌株對稻瘟菌的體外抑菌活性
權(quán)利要求
1.一種假紫色色桿菌(iXroffioAacteritt pseudoviolaceum kwkjT4)生防菌株,保藏在中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏單位簡稱為CCTCC，保藏編號為CCTCC M2011332。
2.一種如權(quán)利要求I所述的假紫色色桿菌生防菌株的應(yīng)用，其特征在于對于水稻稻瘟病菌的拮抗作用。
3.—種如權(quán)利要求I所述的假紫色色桿菌生防菌株的應(yīng)用，其特征在于在防治水稻稻瘟病方面的應(yīng)用。
4.一種如權(quán)利要求I所述的假紫色色桿菌生防菌株的應(yīng)用，其特征在于對于立枯絲核菌、小麥紋枯病菌、小麥全蝕病菌以及小麥赤霉病菌的拮抗作用。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種高效防治水稻稻瘟病的假紫色色桿菌(ChromobacteriumpseudoviolaceumkwkjT4)生防菌株及其應(yīng)用。本發(fā)明的假紫色色桿菌保藏在中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏單位簡稱為CCTCC，保藏編號為CCTCC M2011332，保藏日期為2011年9月28日。本發(fā)明的假紫色色桿菌kwkjT4經(jīng)平板對峙獲得，其體外抑菌活性測定和溫室盆栽實(shí)驗(yàn)表明，本發(fā)明的假紫色色桿菌kwkjT4對水稻稻瘟病菌的生長有較強(qiáng)的抑制作用，能有效防治稻瘟病，其抑菌譜較廣，對立枯絲核菌、小麥紋枯菌和小麥全蝕病菌等多種病原真菌均有拮抗作用。本發(fā)明的菌種培養(yǎng)條件簡單，易保存，對環(huán)境友好，具有良好的開發(fā)應(yīng)用潛力。
文檔編號C12N1/20GK102952766SQ20111038707
公開日2013年3月6日 申請日期2011年11月29日 優(yōu)先權(quán)日2011年11月29日
發(fā)明者王海華, 謝宗華, 彭喜旭, 高健, 唐新科 申請人:湖南科技大學(xué)