專利名稱：用于同時檢測小鼠腺病毒和脫腳病病毒的多重實時熒光pcr引物、探針及其試劑盒的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及生物檢測領(lǐng)域，特別是涉及一種同時檢測小鼠腺病毒和脫腳病病毒的多重實時熒光PCR引物、探針、試劑盒及其檢測方法。
背景技術(shù)：
自然感染實驗動物的病毒很多，根據(jù)對人類的危害性，可將其分為三類；一類為人獸共患病病毒，能夠感染人與靈長類動物；二類目前尚無跡象表明感染人，但能在體外培養(yǎng)的人、猿和猴源性細胞中進行復(fù)制，對人類有潛在危險性；三類病毒在自然條件下僅感染動物本身，目前尚無跡象表明能夠感染人，因此對人類威脅不大。現(xiàn)今，小鼠作為單克隆抗體、蛋白類藥物等生物制品的一個主要來源，具有潛在的病毒污染。在《中華人民共和國藥典O010年版)》三部中，規(guī)定了鼠源性生物制品需質(zhì)檢的8種鼠源病毒，其中小鼠腺病毒和脫腳病病毒均屬于二類，目前尚無跡象表明感染人，但能在體外培養(yǎng)的人、猿和猴源性細胞中進行復(fù)制，對人類有潛在危險性。鼠源性病毒檢測標(biāo)準(zhǔn)的制定對客觀評價生物制品質(zhì)量，確保人民健康必將起到積極的作用。小鼠腺病毒(Murine adenoviruses，簡稱MADV)在小鼠群中多呈隱性感染，但也可引起致死性疾病。這類病毒的帶毒期和排毒期均較長，嚴(yán)重影響小鼠健康。小鼠是小鼠腺病毒的自然宿主，實驗小鼠在籠內(nèi)主要經(jīng)糞便和尿液接觸傳播。不同毒株MADV，其毒力差異很大，MADV對不同年齡小鼠的易感性也不相同，臨床表現(xiàn)多種多樣。自然流行多由于感染 FL株引起，病鼠表現(xiàn)弓背、被毛粗糙、食欲下降等癥狀，新生乳鼠可死亡。K87株感染新生乳鼠和成年鼠均不發(fā)病，只是經(jīng)糞便不斷向外排毒并產(chǎn)生高滴度的抗體。裸鼠也可自然發(fā)生 MADV感染，但株型未定。用FL株接種乳裸鼠，可造成十二指腸出血和致死性消耗性疾病。小鼠脫腳病病毒也叫鼠痘病毒(poxvirus of mice，MPV)，能引起鼠痘。鼠痘多呈爆發(fā)性流行，致死率較高，常造成小鼠全群淘汰，危害極大。臨床表現(xiàn)以四肢、尾和頭部腫脹、潰爛、壞死甚至腳趾脫落為特征，故鼠痘病毒又稱脫腳病病毒(ectromelis virus，以下將此病毒簡稱為EV)。該病在世界各地的實驗室鼠群中廣泛流行，在我國鼠群中呈散發(fā)性流行。藥典規(guī)定的鼠源病毒檢測方法有細胞試驗、動物抗體產(chǎn)生實驗和雞胚感染實驗。 這些方法從生物效應(yīng)角度來檢測鼠源病毒的潛在污染，檢測手段復(fù)雜費時，周期長，且對操作的實驗室有一定要求，不宜作為一種常規(guī)的指導(dǎo)生產(chǎn)的質(zhì)控手段。而目前發(fā)展十分成熟的實時熒光PCR技術(shù)(Real-time FluorencePolymerase Chain Reaction簡稱Real Time PCR)檢測靈敏度高，簡單方便，且對實驗室要求也很低。 Real Time PCR于1996年由美國Appliedbiosystems公司推出，是在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團，利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程，使每一個循環(huán)變得“可見”，最后通過 Ct值和標(biāo)準(zhǔn)曲線對樣品中的DNA(or cDNA)的起始濃度進行定性定量分析的方法。該方法自產(chǎn)生以來，不斷發(fā)展完善，特別是隨著Taqman熒光探針的廣泛應(yīng)用，到目前為止該技術(shù)已經(jīng)非常成熟。Taqman熒光探針的PCR檢測是指進行PCR擴增時，在反應(yīng)體系中加入一對引物的同時還加入一個特異性的熒光探針，該探針為一寡核苷酸，兩端分別標(biāo)記一個報告熒光基團和一個淬滅熒光基團。當(dāng)探針完整時，報告基團所發(fā)射的熒光信號被淬滅基團吸收，擴增時隨著Taq酶在鏈延伸過程中遇到與模板結(jié)合的探針，其5’_3’外切核酸酶活性將探針酶切降解，報告熒光基團與淬滅熒光基團分離，從而熒光檢測系統(tǒng)可以監(jiān)測到熒光信號，模板每復(fù)制一次，就有一個探針被切斷伴隨一個熒光信號的釋放。由于被釋放的熒光基團數(shù)目和PCR產(chǎn)物數(shù)量是一對一關(guān)系，所以信號累積與PCR產(chǎn)物完全同步。整個反應(yīng)結(jié)束后，便可得到一條擴增曲線，由已知濃度標(biāo)準(zhǔn)樣品的擴增曲線可以得到一條標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)該標(biāo)準(zhǔn)曲線以及樣品中的擴增曲線可對樣品進行定性定量分析。實時熒光PCR技術(shù)不僅實現(xiàn)了對DNA/RNA模板的定性/定量，而且具有靈敏度和特異性高、自動化程度高、無污染、實時和準(zhǔn)確等特點，該已被廣泛用于免疫分析、細菌、病毒檢測等多個領(lǐng)域。但迄今為止，使用多重實時熒光PCR技術(shù)同時對小鼠腺病毒和脫腳病病毒進行檢測方面還未見有報道，同時一次性檢測小鼠腺病毒和脫腳病病毒更經(jīng)濟、省力、 快速。

發(fā)明內(nèi)容
為了解決現(xiàn)有小鼠病毒檢測方法的不足，本發(fā)明提供了一種同時檢測小鼠腺病毒和脫腳病病毒的多重實時熒光PCR引物、探針及其試劑盒，該方法簡單方便、靈敏度高且檢測時間短。本發(fā)明的一個目的是提供用于同時檢測小鼠腺病毒和脫腳病病毒的多重實時熒光PCR引物，其中，特異性地擴增小鼠腺病毒的專用引物是由具有序列表中的SEQ IDNO 1的上游引物與具有序列表中的SEQ ID NO 2的下游引物組成的一對寡核苷酸；特異性地擴增小鼠脫腳病病毒的專用引物是由具有序列表中的SEQID NO 3的上游引物與具有序列表中的SEQ ID NO :4的下游引物組成的一對寡核苷酸。本發(fā)明的另一個目的是提供一種與上述引物配合使用的探針，其中，特異性地擴增小鼠腺病毒的專用探針具有序列表中的SEQ ID NO :5的核苷酸序列；特異性地擴增小鼠脫腳病病毒的專用探針具有序列表中的SEQ IDNO 6的核苷酸序列。其中，特異性地擴增小鼠腺病毒的專用探針與特異性地擴增小鼠脫腳病病毒的專用探針均為檢測病毒的探針，后述提及處可簡稱為檢測探針。優(yōu)選地，所述探針5’端連接有熒光報告基團，3’端連接有熒光淬滅基團。優(yōu)選地，所述熒光報告基團選自FAM、JOE、HEX、VIC、ROX中的任意一種，所述熒光淬滅基團選自TAMRA、Eclipse或BHQl或BHQ2。優(yōu)選地，特異性地擴增小鼠腺病毒的專用探針與特異性地擴增小鼠脫腳病病毒的專用探針可具有相同或不同的熒光報告基團。優(yōu)選地，兩種病毒的探針5’端均為FAM標(biāo)記，3’端為TAMRA標(biāo)記。優(yōu)選地，特異性地擴增小鼠腺病毒的專用探針5’端為FAM標(biāo)記，3’端為TAMRA標(biāo)記；特異性地擴增小鼠脫腳病病毒的專用探針5’端為JOE標(biāo)記，3’端為TAMRA標(biāo)記。本發(fā)明人設(shè)計了多對PCR引物和探針，經(jīng)過長期大量的實驗從眾多引物對中篩選出了由上述上游引物和下游引物組成的引物、探針。小鼠腺病毒、脫腳病病毒的擴增目的片段大小分別為131bp、119bp。上述引物分別對小鼠腺病毒/脫腳病病毒具有高度的保守性，且與小鼠基因組不具有顯著的同源性，使用上述引物、探針進行PCR擴增，可實現(xiàn)準(zhǔn)確定性、定量檢測。本發(fā)明的再一個目的是提供一種同時檢測小鼠腺病毒和脫腳病病毒的多重實時熒光PCR檢測試劑盒，其中，所述試劑盒包括上述提及的弓I物或探針。優(yōu)選地，每個試劑盒中兩種病毒的引物探針混合液的體積比為1 1;每種病毒引物探針混合液中，優(yōu)選將濃度均為ΙΟμΜ的引物、探針按照上游引物下游引物探針體積比為111的比例混合成引物探針混合液。優(yōu)選地，所述試劑盒還包括內(nèi)標(biāo)DNA標(biāo)準(zhǔn)品、內(nèi)標(biāo)DNA標(biāo)準(zhǔn)品的擴增引物和探針。 后述，所述內(nèi)標(biāo)DNA標(biāo)準(zhǔn)品的擴增引物和探針分別簡稱為內(nèi)標(biāo)引物、內(nèi)標(biāo)探針。優(yōu)選地，所述內(nèi)標(biāo)DNA標(biāo)準(zhǔn)品為含序列表中SEQ ID NO 7所示的核苷酸序列的ρΤ easy-3質(zhì)粒；所述內(nèi)標(biāo)DNA標(biāo)準(zhǔn)品的擴增引物是由具有序列表中的SEQ ID NO :8的上游引物與具有序列表中的SEQ ID NO :9的下游引物組成的一對寡核苷酸，所述探針具有序列表中的SEQ ID NO 10的核苷酸序列。優(yōu)選地，所述內(nèi)標(biāo)DNA標(biāo)準(zhǔn)品的濃度為2X IO7Copies/μ 1。優(yōu)選地，所述內(nèi)標(biāo)探針與兩種病毒檢測探針共三種探針分別由相同的熒光基團標(biāo)記或不同的熒光基團標(biāo)記，但是至少內(nèi)標(biāo)探針的的熒光基團不同于檢測探針的熒光基團。 優(yōu)選地Taqman探針為Taqman-MGB探針BHQ1/BHQ2等。優(yōu)選地，所述內(nèi)標(biāo)探針5’端為VIC標(biāo)記，3’端為TAMRA標(biāo)記，兩種病毒的檢測探針 5，端均為FAM標(biāo)記，3，端為TAMRA標(biāo)記。優(yōu)選地，所述內(nèi)標(biāo)探針5’端為VIC標(biāo)記，3’端為TAMRA標(biāo)記，特異性地擴增小鼠腺病毒的專用探針5’端為FAM標(biāo)記，3’端為TAMRA標(biāo)記；特異性地擴增小鼠脫腳病病毒的專用探針5，端為JOE標(biāo)記，3，端為TAMRA標(biāo)記。 優(yōu)選地，所述試劑盒還包括陽性DNA標(biāo)準(zhǔn)品。優(yōu)選地，所述陽性DNA標(biāo)準(zhǔn)品的濃度為 2 X IO7Copies/μ 1。優(yōu)選地，所述陽性標(biāo)準(zhǔn)品為含小鼠腺病毒和脫腳病病毒擴增目的片段的序列的 PMD18-T重組質(zhì)粒。當(dāng)所述試劑盒含有內(nèi)標(biāo)DNA標(biāo)準(zhǔn)品、內(nèi)標(biāo)引物、內(nèi)標(biāo)探針時，本試劑盒可進行定性或相對定量檢測；當(dāng)所述試劑盒只含有陽性DNA標(biāo)準(zhǔn)品時，可進行絕對定量檢測；如所述試劑盒同時含有內(nèi)標(biāo)DNA標(biāo)準(zhǔn)品、、內(nèi)標(biāo)引物、內(nèi)標(biāo)探針和陽性DNA標(biāo)準(zhǔn)品，則本試劑盒不僅可進行絕對定量檢測，同時因使用內(nèi)標(biāo)DNA標(biāo)準(zhǔn)品從提取步驟(而不只是熒光定量PCR過程)開始衡量了整個方法的可行性，實現(xiàn)了對整個反應(yīng)體系進行質(zhì)控。優(yōu)選地，所述試劑盒還包括PCR擴增試劑、陰性質(zhì)控品、空白對照。其中，PCR擴增試劑為 2XTaqman PCR Mix。本發(fā)明的又一目的是提供一種使用上述提及的試劑盒同時檢測小鼠腺病毒和脫腳病病毒的多重實時熒光PCR檢測方法，其中，所述方法所述實時熒光PCR的退火溫度為60 "C。優(yōu)選地，本發(fā)明提供一種上述提及的試劑盒用于同時檢測鼠源生物制品中小鼠腺病毒和脫腳病病毒的多重實時熒光PCR檢測方法。優(yōu)選地，所述多重實時熒光PCR的反應(yīng)條件為50°C，2min ;95°C，IOmin ;95°C， 15s，60°C，lmin，共 40 個循環(huán)。優(yōu)選地，所述方法還包括標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立，將所述內(nèi)標(biāo)DNA標(biāo)準(zhǔn)品十倍稀釋成不同濃度的內(nèi)標(biāo)定量標(biāo)準(zhǔn)品，以所述內(nèi)標(biāo)定量標(biāo)準(zhǔn)品作為模板進行實時熒光PCR檢測，得到內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)曲線。優(yōu)選地，所述方法還包括將所述陽性DNA標(biāo)準(zhǔn)品十倍稀釋成不同濃度的陽性定量標(biāo)準(zhǔn)品，以所述陽性定量標(biāo)準(zhǔn)品作為模板進行多重實時熒光PCR檢測，得到檢測病毒的標(biāo)準(zhǔn)曲線。使用本發(fā)明試劑盒檢測時，可以將進行兩種病毒的單管同時檢測，也可將異管同時檢測。單管同時檢測時優(yōu)選擴增兩種病毒和內(nèi)標(biāo)的探針均具有不同的熒光報告基團。優(yōu)選地，所述內(nèi)標(biāo)探針5’端為VIC標(biāo)記，3’端為TAMRA標(biāo)記，特異性地擴增小鼠腺病毒的專用探針5’端為FAM標(biāo)記，3’端為TAMRA標(biāo)記；特異性地擴增小鼠脫腳病病毒的專用探針5’ 端為JOE標(biāo)記，3，端為TAMRA標(biāo)記。 本發(fā)明的還一個目的是提供上述提及的弓I物或探針、試劑盒或檢測方法在檢測小鼠腺病毒和脫腳病病毒殘留時的應(yīng)用。優(yōu)選地，本發(fā)明的目的是提供上述提及的引物或探針、試劑盒或檢測方法在檢測鼠源生物制品中小鼠腺病毒和脫腳病病毒殘留時的應(yīng)用。與現(xiàn)有檢測方法相比，本發(fā)明提供的同時檢測小鼠腺病毒和脫腳病病毒的多重實時熒光PCR檢測試劑盒及方法具有以下優(yōu)點1、簡單快速現(xiàn)有的藥典小鼠腺病毒檢測方法為細胞試驗、動物抗體產(chǎn)生實驗和雞胚感染實驗，從生物學(xué)效應(yīng)角度檢測生物制品中小鼠腺病毒的潛在感染，需時長(1 4周時間)，而本發(fā)明從核酸角度對腺病毒和脫腳病病毒進行聯(lián)合檢測，操作更為簡便快速，只需要6小時左右即可出結(jié)果，且對操作實驗室環(huán)境要求不高，規(guī)避了以前抽檢產(chǎn)品可能產(chǎn)生的漏洞，可在企業(yè)實現(xiàn)批批檢測，進一步提高了生物制品質(zhì)控質(zhì)量；2、靈敏度高現(xiàn)有檢測方法是從生物學(xué)效應(yīng)角度檢測生物制品中小鼠腺病毒的潛在感染，其中因制劑在制備過程中經(jīng)過了多個工藝步驟的處理，殘留鼠源病毒的活病毒抗原及病毒抗體存在的可能性極小，而本發(fā)明從病毒核酸角度進行檢測，相對前述藥典規(guī)定方法而言，提高了檢測的靈敏度。利用本發(fā)明中的實時熒光PCR同時檢測鼠源生物制品中腺病毒和脫腳病病毒時，不僅可定性也可以準(zhǔn)確定量，目標(biāo)DNA在IO2 IO7濃度范圍內(nèi)，都有很好的線性關(guān)系，靈敏度高可達到20copies/y l(100copies/reaction)；3、重復(fù)性、準(zhǔn)確性和特異性本發(fā)明中的引物和探針分別根據(jù)小鼠腺病毒、脫腳病病毒的同源性序列設(shè)計，設(shè)計時充分考慮各引物間的退火溫度，是經(jīng)篩選后得到的特異性引物和探針，且與小鼠基因組無同源性，檢測特異性強，重復(fù)性好；4、回收率高本發(fā)明實時熒光PCR方法回收率均達到了 50%以上，是一種理想的可替代現(xiàn)有藥典規(guī)定的檢測方法；5、對整個反應(yīng)體系進行質(zhì)控使用內(nèi)標(biāo)DNA標(biāo)準(zhǔn)品從提取步驟(而不只是熒光定量PCR過程)開始衡量了整個方法的可行性，大大提高了本發(fā)明的準(zhǔn)確性。


圖1為多重實時熒光PCR檢測小鼠腺病毒時的定量曲線；圖2為多重實時熒光PCR檢測小鼠脫腳病病毒時的定量曲線；圖3為多重實時熒光PCR檢測小鼠腺病毒時的標(biāo)準(zhǔn)曲線；圖4為多重實時熒光PCR檢測小鼠脫腳病病毒時的標(biāo)準(zhǔn)曲線。
具體實施例方式以下所舉實施例只用于解釋本發(fā)明，并非用于限定本發(fā)明的保護范圍。下述實施例中所述試劑原料除特別注明來源外，均為市售的常見原料，試劑的配制采用常規(guī)方法。實施例中未詳述的方法均為本領(lǐng)域常規(guī)操作，詳見《分子克隆》第三版。實施例1同時檢測小鼠腺病毒和脫腳病病毒的多重實時熒光PCR引物、探針從genbank中查到MADV-1、MADV_2、MADV_3的全長基因組序列，它們的genbank號分別為 NC_000942/AC_000012、NC_014899/H_049560 和 NC_012584/EU8;35513。進行序列比對，找出具有其保守序列區(qū)的同源序列SEQ ID NO=Il ；根據(jù)文獻(David J. Esteban et al.，2005)，對小鼠脫腳病病毒ECTV-Mos的基因組進行分析，并結(jié)合文獻(Gloria Ribas et al.，2003)，選擇ECTV-Mos的保守基因 EVM170(即crmD基因)進行ECTV同源性分析。將該基因序列與GenBank+EMBL+DDBJ+PDB 數(shù)據(jù)庫進行序列比對，及與小鼠基因組數(shù)據(jù)庫進行序列比對，確定同源序列SEQ ID N0:12。分別針對上述找出的保守的同源序列區(qū)域設(shè)計實時熒光PCR檢測專用引物和探針序列。因要同時檢測小鼠腺病毒和脫腳病病毒，故在篩選引物時還要考慮分別針對兩種病毒的專用引物要求退火溫度相近。其中優(yōu)選的引物、探針序列如下表1所示表 權(quán)利要求
1.用于同時檢測小鼠腺病毒和脫腳病病毒的多重實時熒光PCR引物，其特征在于，特異性地擴增小鼠腺病毒的專用引物是由具有序列表中的SEQ IDNO 1的上游引物與具有序列表中的SEQ ID NO 2的下游引物組成的一對寡核苷酸；特異性地擴增小鼠脫腳病病毒的專用引物是由具有序列表中的SEQID NO 3的上游引物與具有序列表中的SEQ ID NO :4的下游引物組成的一對寡核苷酸。
2.一種與權(quán)利要求1所述引物配合使用的探針，其特征在于，特異性地擴增小鼠腺病毒的專用探針具有序列表中的SEQ ID NO 5的核苷酸序列；特異性地擴增小鼠脫腳病病毒的專用探針具有序列表中的SEQ IDNO 6的核苷酸序列。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的探針，其特征在于，所述探針5’端連接有熒光報告基團，3’ 端連接有熒光淬滅基團。
4.根據(jù)權(quán)利要求2或3所述的探針，其特征在于，所述熒光報告基團選自FAM、JOE、 HEX、VIC、ROX中的任意一種，所述熒光淬滅基團選自TAMRA、Eclipse或BHQl或BHQ2。
5.根據(jù)權(quán)利要求2 4任一所述的探針，其特征在于，特異性地擴增小鼠腺病毒的專用探針與特異性地擴增小鼠脫腳病病毒的專用探針具有不同的熒光報告基團。
6.一種同時檢測小鼠腺病毒和脫腳病病毒的多重實時熒光PCR檢測試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括權(quán)利要求1中所述的引物及權(quán)利要求2 5任一所述的探針。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的檢測試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括內(nèi)標(biāo)DNA標(biāo)準(zhǔn)品、內(nèi)標(biāo)DNA標(biāo)準(zhǔn)品的擴增弓丨物和探針。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的檢測試劑盒，其特征在于，所述內(nèi)標(biāo)DNA標(biāo)準(zhǔn)品為含序列表中SEQ ID N0:7所示的核苷酸序列的pT easy-3質(zhì)粒；所述內(nèi)標(biāo)DNA標(biāo)準(zhǔn)品的擴增引物是由具有序列表中的SEQ ID NO :8的上游引物與具有序列表中的SEQ ID NO :9的下游引物組成的一對寡核苷酸，所述探針具有序列表中的SEQ ID NO :10的核苷酸序列。
9.根據(jù)權(quán)利要求6 8任一所述的檢測試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括陽性 DNA標(biāo)準(zhǔn)品。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的試劑盒，其特征在于，所述陽性標(biāo)準(zhǔn)品為含小鼠腺病毒同源序歹Ij SEQ ID NO 11和脫腳病病毒同源序列SEQ IDNO 12的pMD18_T重組質(zhì)粒。
11.根據(jù)權(quán)利要求6 10任一所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括PCR擴增試劑、陰性質(zhì)控品、空白對照。
12.一種使用權(quán)利要求1中所述的引物或權(quán)利要求2 5任一所述的探針或權(quán)利要求 6 11任一所述的試劑盒同時檢測小鼠腺病毒和脫腳病病毒的多重實時熒光PCR檢測方法，其特征在于，所述多重實時熒光PCR檢測方法的退火溫度為60°C。
13.根據(jù)權(quán)利要求12所述的方法，其特征在于，所述多重實時熒光PCR的反應(yīng)條件為 50°C，2min ；95°C, IOmin ；95°C，15s，60°C，lmin，共 40 個循環(huán)。
14.根據(jù)權(quán)利要求12或13所述的方法，其特征在于，所述方法還包括標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立， 將內(nèi)標(biāo)DNA標(biāo)準(zhǔn)品十倍稀釋成不同濃度的內(nèi)標(biāo)定量標(biāo)準(zhǔn)品，以所述內(nèi)標(biāo)定量標(biāo)準(zhǔn)品作為模板進行實時熒光PCR檢測，得到內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)曲線。
15.根據(jù)權(quán)利要求12 14任一所述的方法，其特征在于，所述方法還包括將陽性DNA 標(biāo)準(zhǔn)品十倍稀釋成不同濃度的陽性定量標(biāo)準(zhǔn)品，以所述陽性定量標(biāo)準(zhǔn)品作為模板進行多重實時熒光PCR檢測，得到檢測病毒的標(biāo)準(zhǔn)曲線。
16.權(quán)利要求1中所述的引物或權(quán)利要求2 5任一所述的探針或權(quán)利要求6 11任一所述的試劑盒或權(quán)利要求12 15任一所述檢測方法在檢測鼠源生物制品中小鼠腺病毒和脫腳病病毒殘留時的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種用于同時檢測小鼠腺病毒和脫腳病病毒的多重實時熒光PCR引物、探針，分別如序列表中SEQ ID NO1～6所示的寡核苷酸。含有上述引物及探針的多重實時檢測試劑盒可一次性聯(lián)合檢測小鼠腺病毒和小鼠脫腳病病毒，具有快速簡單、靈敏度高、特異性強且回收率高的優(yōu)點，解決了現(xiàn)有檢測手段復(fù)雜費時，周期長，且對操作的實驗室有一定要求的不足，具有很好的應(yīng)用前景。
文檔編號C12Q1/68GK102399907SQ20111037949
公開日2012年4月4日 申請日期2011年11月25日 優(yōu)先權(quán)日2011年11月25日
發(fā)明者周志文, 李萃, 王剛, 蔣立新, 譚淑萍 申請人:舒泰神(北京)生物制藥股份有限公司