專利名稱：一種在腫瘤細胞中高效高特異表達靶基因的載體t-visa的制作方法
技術領域：
本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥領域，具體涉及一種在腫瘤細胞中高效高特異表達靶基因的載體 T-VISA。
背景技術：
在腫瘤細胞中，高效高特異表達靶基因是研究腫瘤生物學、腫瘤信號傳導、腫瘤基因調(diào)控和基因治療的重要方法。目前采用的腫瘤特異性啟動子表達靶基因，其活性低，效率差，難以對腫瘤生物學、信號傳導和基因調(diào)控進行深入研究，特別是造成腫瘤的基因治療無法在臨床中應用。基因治療已有20余年的發(fā)展歷史，人們寄望它能成為手術切除放化療等之外的有效的替代療法。目前腫瘤基因治療大多采用的巨細胞病毒啟動子(CMV)是目前活性最高的啟動子，但該啟動子沒有特異性，在正常細胞中也高表達目的基因，所開發(fā)的臨床試驗產(chǎn)品雖然有一定的療效，但毒副作用大，無法得到SFDA (中國食品與藥品管理局)和美國FDA(食品與藥品管理局)的批準而用于臨床。有人使用腫瘤特異啟動子，大大減少了毒副作用，但由于活性低，其療效也變得非常有限。因此，開發(fā)一種在腫瘤細胞中高特異性高效表達靶基因或治療基因的載體是非常必要的。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種在腫瘤細胞中高效高特異表達靶基因的載體T-VISA。本發(fā)明的在腫瘤細胞中高效高特異表達靶基因的載體T-VISA是一個環(huán)狀載體， 其堿基序列如SEQ ID NO. 1所示。本發(fā)明將報告基因熒光素酶Luciferase基因插入T-VISA載體中構成T-VlSA-Luc 質粒，對載體T-VISA的活性及特異性進行評價。將T-VlSA-Luc質粒轉染卵巢癌細胞系和正常細胞系，結果顯示Luciferase基因在卵巢癌細胞系中表達，但在正常卵巢細胞系中表達非常低。結果表明T-VISA載體能在卵巢癌細胞中高效高特異性表達靶基因。將T-VISA-Luc質粒轉染乳腺癌細胞、三陰乳腺癌細胞、乳腺癌干細胞系和正常細胞系，結果顯示在十個乳腺癌細胞系和三個乳腺癌干細胞系具有很高活性，但在正常細胞系中表達非常低。在乳腺癌細胞系、乳腺癌干細胞系和正常細胞系中，T-VISA的活性分別是CMV的1. 8 (1. 7-4. 3)，2. 6 (2. 0-3. 2)和0. 006倍。結果表明T-VISA載體在乳腺癌細胞， 三陰乳腺癌細胞和乳腺癌干細胞系中能高效高特異性表達靶基因。進一步的檢測T-VISA載體在小鼠體內(nèi)腫瘤細胞中的活性和特異性。Balb/c裸鼠中原位接種卵巢細胞系Hey8，2周后，通過尾靜脈注射50 μ g包含T-VISA-Luc質粒的脂質體，運用活體成像儀動態(tài)觀察靶基因Luciferase。結果顯示CMV-Luc導致Luciferase在小鼠肺組織、腫瘤組織和全身正常組織中表達，但T-VISA-Luc在小鼠腫瘤組織中高表達，在全身正常組織中表達很低。結果表明T-VISA-Luc在小鼠體內(nèi)卵巢癌細胞中高效高特異性表達革巴基因Luciferase。
綜上所述，本發(fā)明的T-VISA載體能在腫瘤細胞中高效高特異表達靶基因，表達效果與CMV啟動子相當，但其還具有在正常組織細胞中極低表達的優(yōu)點。因此本發(fā)明的T-VISA載體具有廣泛的應用價值1、可以利用T-VISA載體驅動任意靶基因在腫瘤細胞中高效高特異性表達，包括報告基因如Luciferase (熒光素酶)， GFP (綠色熒光蛋白)和治療基因如p53 (細胞凋亡蛋白基因)，IL-2 (免疫調(diào)控蛋白基因) 等。2、T-VISA載體可以與相應靶基因結合后進行腫瘤生物學，腫瘤信號傳導、腫瘤基因調(diào)控和基因治療的研究和應用。


圖1是質粒圖譜，其中圖IA是插入報告基因Luciferase的T-VlSA-Luc質粒圖譜，圖IB是CMV-Luc質粒結構示意圖，其中CMV是指巨細胞病毒啟動子，是目前活性最強無特異性啟動子，圖IC是T-VISA-Luc質粒結構示意圖，是由hTERT(人端粒酶啟動子)與 VISA(整合放大系統(tǒng))構成的Iuciferase表達質粒；圖2是T-VlSA-Luc在卵巢癌細胞中高效高特異表達靶基因Luciferase的效果圖；圖3是T-VISA-Luc在乳腺癌細胞，三陰乳腺癌細胞和乳腺癌干細胞系中高效高特異表達靶基因Luciferase的效果圖；圖4是T-VISA-Luc在小鼠體內(nèi)卵巢癌細胞中高效高特性表達靶基因Luciferase 的圖。
具體實施例方式以下實施例是對本發(fā)明的進一步說明，而不是對本發(fā)明的限制。實施例1 一、T-VISA 載體克隆端粒酶啟動子hTERT，長度為418bp，其序列如SEQ ID NO. 2所示，具有腫瘤細胞特異性，但其活性在腫瘤細胞中不到CMV啟動子活性的1%，因此無法廣泛應用。將該啟動子插入TSTA基本質粒啟動子序列部分，形成T-TSTA，再將WPRE插入T-TSTA中靶基因的 3，-UTR,能增強 mRNA 的穩(wěn)定性作用，由此構建 hTERT-VP16-GAL4_WPRE (VP16-GAL4-WPRE Integrated Systemic Amplifier，VISA，整合性系統(tǒng)放大器)調(diào)控系統(tǒng)，簡稱為T-VISA (整合性系統(tǒng)放大器)載體，其序列如SEQ ID NO. 1所示。在T-VISA載體中，hTERT啟動子控制Gal4_VP2 (兩個拷貝的VP16，具有強烈的轉錄激活特性)融合蛋白基因；Gal4-VP2融合蛋白與Gal4效應元件G5E4T結合，啟動靶基因或目的基因的大量轉錄。該T-VISA載體主要包括hTERT啟動子(其序列如SEQ ID NO. 2所示)、WPRE (其序列如SEQ ID NO. 3所示)、G5E4T (其序列如SEQ ID NO. 4所示)和Gal4_VP2基因(其序列如SEQ ID N0. 5所示)。本實施例的T-VISA載體可以通過酶切下述T-VISA-Luc質粒，利用酶Nhel/Bglll 將熒光素酶Luciferase基因切除得到。二、T-VISA-Luc 質粒的構建
pGL3. T-VISA-Luc (即T-VISA-Luc質粒)質粒的克隆構建步驟(一)pCRII-TOPO-hTERT 質粒克隆

1、常規(guī)方法提取乳腺癌MCF-7細胞(從美國ATCC公司購買)的DNA。2、以該DNA作為模板，設計擴增hTERT的PCR引物，hTERT PCR上游(Forward)禾口下游(Reverse)弓丨物Forward :5' -ata tct aga ggc ccc tcc ctc ggg tta ccc cac agc_3' (XbaI)Reverse :5' -ata gat ctt atg egg ccg ccc acg tgc gca gca gga cgc age gc_3' ο3、以乳腺癌 MCF-7 細胞 DNA 為模板，hTERT PCR 引物(Forward -ata tct aga ggc ccc tcc ctc ggg tta ccc cac agc_3' ；Reverse :5' -ata gat ctt atg egg ccg ccc acg tgc gcagca gga cgc age gc_3' )、Pfu DNA polymerase、dNTP 禾口 PCR 反應液， 擴增獲得hTERT啟動子(_416to+l)產(chǎn)物，其序列如SEQ ID N0. 2所示。其PCR反應體系 10XPCR buffer5 μ 1，上游(Forward)和下游(Reverse)引物各 1μ 1，MCF_7 細胞 DNA 為模板 IOOng DNA, 25mM MgCl2 3 μ 1, IOmM dNTPs 1 μ 1, Pfu-Taq (IU/μ 1)，最后補水至 50 μ 1。 PCR反應條件94°C熱變性5min，94°C變性lmin，55°C退火lmin，72°C延伸2min，共進行30 次循環(huán)；最后72°C延伸lOmin。4、PCR產(chǎn)物用Qiangen公司(美國)PCR DNA回收試劑盒回收，回收約418bp大小片斷。方法參考其說明書。5、將回收的 PCR 產(chǎn)物 2 μ 1，pCRII-T0P0(Invitrogen, Carlsbad, CA) 1 μ 1, DNA ligase bufferl μ 1，最后補水至 10μ 1，4°C連接反應 IOmin06、將2 μ 1連接產(chǎn)物與50 μ 1 Ecoli DH5感受態(tài)細胞混合后，冰浴30min。42°C水浴熱激動反應45sec，然后冰上放置3min。加入預熱的LB培養(yǎng)基500 μ 1，在37°C下250rpm 震搖30min。7、取200μ1 LB培養(yǎng)基細菌液，涂布ampicillinLB培養(yǎng)板上，在37°C下培養(yǎng)16小時。挑取陽性單克隆，提取質粒。8、酶切質粒鑒定，進行測序分析，證實hTERT啟動子(其序列如SEQ ID N0. 2所示)已經(jīng)插入克隆載體pCRII-TOPO中，命名為pCRII-TOPO-hTERT。( 二 ) pGL3-hTERT_Luc 質?？寺?、用 KpnI/Xhol 酶切 pCRII-TOPO-hTERT 質粒，用 KpnI/Xhol 酶切 pGL-3-basic 質粒(Promega公司，麥迪遜，WI)，該質粒中含有熒光素酶Luciferase基因。酶切體系 10XBufferA2y 1，KpnI/Xholl μ 1，質粒51^，補水至 20 μ 1，37°C水浴 1 小時。2、酶切產(chǎn)物在IXTAE Agarose凝膠中電泳，120v電泳30分鐘，回收hTERT (418bp 大小)片斷和pGL-3-Basis(4792bp大小)片斷。3、酶切產(chǎn)物用Qiangen公司(美國)PCRDNA回收試劑盒回收，方法參考其說明書。4、回收的 hTERT 產(chǎn)物 6μ 1，回收的 pGL-3-basic 產(chǎn)物 2μ 1，DNA ligase 1 μ 1, buffer 1 μ 1，最后補水至10 μ 1，4°C連接反應4小時。5、將2 μ 1連接產(chǎn)物與50 μ IE. ColiDH5感受態(tài)細胞混合后，冰浴30min。42°C水浴熱激動反應45sec，然后冰上放置3min。加入預熱的LB培養(yǎng)基500μ 1，在37°C下250rpm 震搖30min。
6、取200 μ ILB培養(yǎng)基細菌液，涂布AmpicillinLB培養(yǎng)板上，在37°C下培養(yǎng)16小時。挑取陽性單克隆，提取質粒。7、酶切質粒鑒定，進行測序分析，證實hTERT啟動子已經(jīng)插入載體pGL-3-basic 中，命名為pGL3-hTERT-Luc質粒。(三)pGL3-Luc_WPRE 質?？寺?、用 Asp 718/Sall 酶切 pGEM_3Z_WPRE 質粒(Promega 公司，麥迪遜，WI)，然后用 DNA polymerase 平端；用 Small 酶切 pGL_3_basic 質粒(Promega 公司，麥迪遜，WI)。酶切體系=IOX Buffer A2 μ l,Asp7181y 1/SalI 1μ 1，質粒 5 μ g，補水至 20 μ 1，37°C水浴 1 小時。2、酶切產(chǎn)物在IXTAE Agarose凝膠中電泳，120v電泳30分鐘，回收WPRE (590bp大小)片斷和pG-L3-Basis (約4800bp大小)片斷。3、酶切產(chǎn)物用Qiangen公司(美國PCRDNA回收試劑盒回收，方法參考其說明書。4、回收的 WPRE 產(chǎn)物 6μ 1，回收的 pGL-3-basic 產(chǎn)物 2μ 1，DNA Iigase 1 μ 1, buffer 1 μ 1，最后補水至10 μ 1，4°C連接反應4小時。5、2 μ 1連接產(chǎn)物與50 μ IE. coliDH5感受態(tài)細胞混合后，冰浴30min。42°C水浴熱激動反應45sec，然后冰上放置3min。加入預熱的LB培養(yǎng)基500μ 1，在37°C下250rpm震搖 30min。6、取200 μ ILB培養(yǎng)基細菌液，涂布AmpicillinLB培養(yǎng)板上，在37°C下培養(yǎng)16小時。挑取陽性單克隆，提取質粒。7、酶切質粒鑒定，進行測序分析，證實WPRE插入了 pGL-3-basic中，命名為 pGL3-Luc-WPRE 質粒。 (四)pGL3-hTERT-TSTA_Luc 質?？寺?、用 Hindlll/NotI 酶切 pCRII-TOPO-hTERT質粒(見上)，然后用 DNA polymerase 平端；用 MSCI/Nhel 酶切 pGL3_TSTA_Luc 質粒(Invitrogen，Carlsbad, CA)，然后用 DNA polymerase 平端。酶切體系:10X Buffer A2 μ 1，Hindlll/NotI or MSCI/Nhel 1 μ 1，質粒 5 μ g，補水至20μ 1，37°C水浴1小時。2、酶切產(chǎn)物在IXTAE Agarose凝膠中電泳，120v電泳30分鐘，回收hTERT (418bp 大小)片斷和GL3-TSTA-Luc(7300bp大小)片斷。3、酶切產(chǎn)物用Qiangen公司(美國)PCRDNA回收試劑盒回收，方法參考其說明書。4、回收的 hTERT 產(chǎn)物 6μ 1，回收的 pGL33-TSTA-Luc 產(chǎn)物 2μ 1，DNA ligase 1 μ 1, buffer 1 μ 1，最后補水至10 μ 1，4°C連接反應4小時。5、2 μ 1連接產(chǎn)物與50 μ 1 Ε. coli DH5感受態(tài)細胞混合后，冰浴30min。42°C水浴熱激動反應45sec，然后冰上放置3min。加入預熱的LB培養(yǎng)基500μ 1，在37°C下250rpm 震搖30min。6、取200μ ILB培養(yǎng)基細菌液，涂布Ampicillin LB培養(yǎng)板上，在37°C下培養(yǎng)16小時。挑取陽性單克隆，提取質粒。7、酶切質粒鑒定，進行測序分析，證實hTERT啟動子插入了載體pGL33-TSTA-Luc 中,命名為 pGL3-hTERT-TSTA-Luc 質粒。(五)T-VISA-Luc質?？寺?br> 1、用 Notl/Bglll 酶切 pGL3-Luc_WPRE 質粒(見上)；用 Notl/Bglll 酶切 pGL3-hTERT-TSTA-Luc 質粒(見上)。酶切體系10X Buffer A2 μ 1，NotI 1 μ 1，BglII 1μ 1，質粒5yg，補水至20μ 1，37°C水浴1小時。2、酶切產(chǎn)物在IXTAE Agarose凝膠中電泳，120v電泳30分鐘，回收WPRE (590bp大小)片斷和 GL3-hTERT-TSTA-Luc(7593bp 大小)片斷。3、酶切產(chǎn)物用Qiang en公司(美國)DNA回收試劑盒回收，方法參考其說明書。4、回收的 WPRE 產(chǎn)物 6 μ 1，回收的 pGL3-hTERT-TSTA_Luc 產(chǎn)物 2 μ 1，DNA Iigase 1μ l，bufferly 1，最后補水至10 μ 1，4°C連接反應4小時。5、2 μ 1連接產(chǎn)物與50 μ IE. coli DH5感受態(tài)細胞混合后，冰浴30min。42°C水浴熱激動反應45sec，然后冰上放置3min。加入預熱的LB培養(yǎng)基500 μ 1，在37°C下250rpm 震搖30min。41、取200 μ ILB培養(yǎng)基細菌液，涂布Ampicillin LB培養(yǎng)板上，在37°C下培養(yǎng)16 小時。挑取陽性單克隆，提取質粒。42、酶切質粒鑒定，進行測序證實，命名為pGL3-hTERT-TSTA-Luc-WPRE質粒，簡稱 pGL3-hTERT-VISA-Luc 質粒，即 T-VISA-Luc 質粒。經(jīng)測序發(fā)現(xiàn) T-VISA-Luc 質粒是在 T-VISA 載體的序列(其核苷酸序列如SEQ ID NO. 1所示)的3084位后插入了熒光素酶Luc if erase 基因，其結構示意圖如圖IA和C所示。三、效果實驗(一)將T-VlSA-Luc質粒轉染卵巢癌細胞系和正常細胞系，48小時后，收集細胞、 裂解，分光計檢測Iuciferase活性，其結果如圖2所示，由圖2中可以看出Luciferase基因在卵巢癌細胞系中表達，但在正常卵巢細胞系中表達非常低，而CMV-Lus質粒在卵巢癌細胞系中表達，在正常卵巢細胞系中也表達。結果表明T-VISA載體能在卵巢癌細胞中高效高特異性表達靶基因，還具有在正常組織細胞中極低表達的優(yōu)點。具體方法如下a、將卵巢癌細胞系和正常細胞置于12孔細胞板中培養(yǎng)，等細胞密度達到70%左右時，用PBS洗滌。b、T-VISA-Luc 質粒(見上)或 CMV-Luc (構建方法見 Chen et al (2004) · Cancer Gene Ther. 740-747)質粒 2 μ g 加入到 0ΡΤΙ-ΜΕΜ 培養(yǎng)基(Invtrogen 公司)100 μ 1 中，室溫放置 5min，獲得溶液 I ；Lipofectame 2000 (Invtrogen 公司)2 μ 1 加入到 0ΡΤΙ-ΜΕΜ 培養(yǎng)基(Invtrogen公司)100 μ 1中，室溫放置5min，獲得溶液II ；將溶液I和溶液II混合，室溫放置20min，獲得溶液III。C、取溶液III加到上述的細胞中，5小時后加DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)43小時。d、移去培養(yǎng)基，PBS洗滌3次，Iuciferase活性檢測試劑盒(Promega公司)裂解液裂解lOmin，收細胞集裂解液。e、細胞裂解液100 μ 1，根據(jù)Iuciferase活性檢測試劑盒說明書，用分光廣度計檢測 Iuciferase 活性。2、將T-VISA-Luc質粒轉染乳腺癌細胞、三陰乳腺癌細胞、乳腺癌干細胞系和正常細胞系，48小時后，收集細胞、裂解，分光計檢測Iuciferase活性，結果如圖3所示，由圖3 中可以看出，Iuciferase基因在十個乳腺癌細胞系和三個乳腺癌干細胞系具有很高活性，但在正常細胞系中表達非常低。在乳腺癌細胞系、乳腺癌干細胞系和正常細胞系中，T-VISA 的活性分別是CMV的1. 8 (1. 7-4. 3)，2. 6 (2. 0-3. 2)和0. 006倍。結果表明T-VISA在乳腺癌細胞，三陰乳腺癌細胞和乳腺癌干細胞系中能高效高特異性表達靶基因，還具有在正常組織細胞中極低表達的優(yōu)點。具體實驗方法如下a、將乳腺癌細胞、三陰乳腺癌細胞、乳腺癌干細胞系和正常細胞置于12孔細胞板中培養(yǎng)，等細胞密度達到70%左右時，用PBS洗滌。b、T-VISA-Luc質粒(見上)或CMV-Luc質粒2 μ g力卩入到OPTI-MEM培養(yǎng)基 (Invtrogen 公司)100 μ 1 中，室溫放置 5min，獲得溶液 I ；Lipofectame 2000 (Invtrogen 公司)2 μ 1加入到OPTI-MEM培養(yǎng)基(Invtrogen公司)100 μ 1中，室溫放置5min,獲得溶液 II ；將溶液I和溶液II混合，室溫放置20min，獲得溶液III。C、取溶液III加到上述的細胞中，5小時后甲DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)43小時。d、移去培養(yǎng)基，PBS洗滌3次，Iuciferase活性檢測試劑盒(Promega公司)裂解液裂解lOmin，收細胞集裂解液。e、細胞裂解液100 μ 1，根據(jù)Iuciferase活性檢測試劑盒說明書，用分光廣度計檢測 Iuciferase 活性。3、在Balb/c裸鼠中原位接種卵巢細胞系Hey8，2周后，通過尾靜脈注射50 μ g包含T-VlSA-Luc質粒的脂質體，運用Xenogen IVIS活體成像儀動態(tài)觀察靶基因Luc if erase， 結果如圖4所示，由圖4中可以看出，CMV-Luc導致Luciferase在小鼠肺組織、腫瘤組織和全身正常組織中表達，但T-VISA-Luc在小鼠腫瘤組織中高表達，在全身正常組織中表達很低。結果表明T-VISA-Luc可在小鼠體內(nèi)卵巢癌細胞中高效高特異性表達，在正常組織細胞中極低表達。具體實驗步驟如下a、培養(yǎng)收集對數(shù)生長期的卵巢細胞系HeyS癌細胞，PBS洗滌計數(shù)。IXlO6細胞原位接種Balb/c裸鼠(上海動物中心)，14天后成瘤。b,T-VISA-Luc質粒(見上)或CMV-Luc質粒50 μ g加入到5%葡萄糖溶液50 μ 1 中，室溫放置5min，獲得溶液I ；20mM HLDC脂質體(本實驗室研制)20 μ 1加入到5%葡萄糖溶液30 μ 1中，室溫放置5min，獲得溶液II ；將溶液I和溶液II混合，室溫放置20min， 獲得包含T-VISA-Luc質?；駽MV-Luc質粒的脂質體。c、100 μ 1包含T-VISA-Luc質?；駽MV-Luc質粒的脂質體，通過尾靜脈注射成瘤 Balb/c 裸鼠。d、2天后成，用Xenogen IVIS (Xenogen公司)活體成像儀動態(tài)觀察成瘤Balb/c裸鼠革巴基因Luciferase表達。e、處死成瘤Balb/c裸鼠，解剖，用Xenogen IVIS (Xenogen公司)活體成像進一步觀察證實。f、計算分析。以不做任何處理的小鼠作為空白對照(Ctrl)。所述的HLDC脂質體是通過以下方法構建的將脂質從冰箱中取出(D0TAP儲存于_20°C、膽固醇儲存于_4°C )，恢復至室溫。水浴加熱2個旋轉蒸發(fā)儀分別至30°C，5(TC。稱取68. 75mg膽固醇，放入IOOOml圓底燒瓶。 向圓底燒瓶中加入IOOmg DOTAP和25mg Choroform。轉動燒瓶，使其充分混合。在30°C的水浴箱中旋轉圓底燒瓶2min，使其混合均勻，在燒瓶壁上形成一層薄膜。打開真空抽吸器， 30°C下30min。加入8. 9ml預熱的5%葡萄糖溶液溶解已干燥的薄膜，50°C下以105轉/min 快速旋轉45min。然后降低溫度至35°C旋轉lOmin。用保鮮膜(或石蠟)封口燒瓶，室溫下過夜，避光。測量體積，加雙蒸水至8. 9ml。在50°C的超聲水浴箱中200W對燒瓶進行超聲處理1-3分鐘。在50°C下依次通過1. 0μ，0.45 μ，0.22 μ，0. 1 μ的濾膜(1.0 μ，0.45 μ必須為 Whatman 的 polysufone 濾膜，貨號分別為 #6780-1310 和 #6780-1304 ；0. 22 μ ,0. 1 μ 必須為Whatman的Anotop濾膜，貨號分別為#6808-1122和#6809-1112)，最后過濾得到的脂質體放入潔凈的玻璃瓶中。用氮氣填充試管10秒，將脂質體保存于試管中置于4°C避光保存?zhèn)溆?同時防止空氣進入)。 綜上所示，本發(fā)明的T-VISA載體在腫瘤細胞中能夠高效高特異性的表達靶基因， 而在正常組織細胞中極低表達。
權利要求
1. 一種在腫瘤細胞中高效高特異表達靶基因的載體T-VISA，其特征在于，所述的載體為環(huán)狀載體，其堿基序列如SEQ ID NO. 1所示。
全文摘要
本發(fā)明公開一種在腫瘤細胞中高效高特異表達靶基因的載體。該載體是一個環(huán)狀載體，其序列如SEQ ID NO.1所示。T-VISA載體能在腫瘤細胞中高效高特異表達靶基因，表達效果與CMV啟動子相當，但具有在正常組織細胞中極低表達的特點。因此本發(fā)明的T-VISA載體具有廣泛的應用價值1、利用T-VISA載體可以驅動任意靶基因在腫瘤細胞中高效高特異性表達，包括報告基因如Luciferase(熒光素酶)，GFP(綠色熒光蛋白)和治療基因如p53(細胞凋亡蛋白基因)和IL-2(免疫調(diào)控蛋白基因)等。2、T-VISA載體可以與相應靶基因結合后進行腫瘤生物學，腫瘤信號傳導、腫瘤基因調(diào)控和基因治療的研究和應用。
文檔編號C12N15/63GK102352369SQ20111030044
公開日2012年2月15日 申請日期2011年9月29日 優(yōu)先權日2011年7月6日
發(fā)明者孔亞楠, 李來勝, 謝小明, 謝新華, 郭姣麗 申請人:中山大學腫瘤防治中心