專利名稱：產(chǎn)生具有免疫調(diào)節(jié)作用的乳的食物的篩選方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及產(chǎn)生具有免疫調(diào)節(jié)作用的乳的食物的篩選方法，其適用于食品和動物飼料等領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
生物體免疫基本上是為了對抗外來攻擊的“防御”目的而起作用。例如，相當(dāng)于所述“防御”的癌細(xì)胞的防御和消除，和在此情況中有效作用的免疫的增強(qiáng)。另一方面，免疫的反應(yīng)過度，即“超免疫”，可不利地影響生物體。其實(shí)例包括過敏反應(yīng)、自身免疫病和慢性炎癥等。已知，在這種情況下，通過抑制炎性細(xì)胞因子 (inflammatory cytokines)如 IL_6、TNF_a 和 IL-1 的產(chǎn)生來改善癥狀。另外，逐漸變的明確的是，為了對抗外來攻擊的“防御”目的而起作用的免疫增強(qiáng)作用和為了抑制由超免疫反應(yīng)誘導(dǎo)的過敏反應(yīng)、自身免疫病、慢性炎癥等而起作用的免疫抑制作用受到微小RNA(microRNA)(下文還簡稱為“miRNA”)的調(diào)節(jié)。在miRNA從基因組轉(zhuǎn)錄后，其進(jìn)行兩次切割變?yōu)榧s22個(gè)堿基的非編碼小RNA。已知，作為其功能，miRNA以序列互補(bǔ)的方式結(jié)合至靶mRNA的3'非翻譯區(qū)來抑制靶mRNA的翻譯。一種miRNA抑制細(xì)胞中多種mRNA的翻譯從而調(diào)節(jié)細(xì)胞的各種功能。特別是對其與癌癥發(fā)生和進(jìn)展的關(guān)系已進(jìn)行許多報(bào)道，并且miRNA和疾病間的關(guān)系引起了關(guān)注。例如，就miR-181而言，已報(bào)道其涉及B細(xì)胞的發(fā)育、T細(xì)胞的活化以及免疫的發(fā)育(非專利文獻(xiàn)1至3)。就miR-155而言，已知其通過活化先天免疫(非專利文獻(xiàn)1和4)和調(diào)節(jié)T細(xì)胞和 B細(xì)胞的分化和功能(非專利文獻(xiàn)1和5)涉及免疫發(fā)育，通過，其通過調(diào)節(jié)Thl/Th2平衡 (非專利文獻(xiàn)1和6)以及維持調(diào)節(jié)T細(xì)胞(其抑制超免疫反應(yīng))的功能(非專利文獻(xiàn)7) 涉及抗過敏和抗炎作用。miR-17和miR_92協(xié)同調(diào)節(jié)B細(xì)胞和T細(xì)胞的分化和發(fā)育，從而參與免疫發(fā)育(非專利文獻(xiàn)1、8和9)。已知miR-223通過控制嗜中性粒細(xì)胞的增殖和活化參與防御(非專利文獻(xiàn)1和 10)，miR-150通過抑制B細(xì)胞的分化參與防御(非專利文獻(xiàn)1和11)，以及l(fā)et_7i通過控制膽管細(xì)胞中TLR4的表達(dá)參與防御(非專利文獻(xiàn)12)。已知miR-125通過抑制TNF- α的產(chǎn)生參與抗炎作用(非專利文獻(xiàn)1和13)。
已知miR-146通過負(fù)調(diào)控先天免疫參與防御(非專利文獻(xiàn)1和14)，并且通過控制 Th 1/Th2平衡參與抗過敏(非專利文獻(xiàn)15)。 最近已報(bào)道在細(xì)胞內(nèi)作為翻譯調(diào)節(jié)分子而起作用的miRNA存在于稱為外泌體 (exo some)的脂雙層內(nèi)，并分泌出細(xì)胞(非專利文獻(xiàn)16)。由于還證實(shí)分泌的miRNA被其他細(xì)胞所吸收，提示存在依靠miRNA的細(xì)胞間相互作用。另外，已知外泌體存在于各種人體體液中。特別地，已報(bào)道在人血漿和血清中存在miRNA，已提出其作為前列腺癌或子宮癌的生物標(biāo)記的可能用途(非專利文獻(xiàn)17)。
除血漿和血清外，包含外泌體的體液包括唾液、尿、羊水和母乳(非專利文獻(xiàn)17)。 在這些中，母乳是由哺乳動物在特定時(shí)期產(chǎn)生的體液，并負(fù)責(zé)個(gè)體間即母嬰間物質(zhì)的轉(zhuǎn)移。 此外，母乳不僅是孩子的營養(yǎng)補(bǔ)給，而且還將母體獲得的免疫物質(zhì)給予孩子。母乳包含分泌型IgA、乳鐵蛋白、溶菌酶和細(xì)胞因子等，母乳被認(rèn)為保護(hù)嬰兒免受感染，并促進(jìn)嬰兒的免疫發(fā)育(非專利文獻(xiàn)19)。實(shí)際上，已知依靠母乳成長的孩子，與不以此方式成長的孩子，涉及較低的支氣管或腸道感染的風(fēng)險(xiǎn)。母乳包含顯示抗菌活性的IgA、 乳鐵蛋白、糖蛋白、糖脂等，以及調(diào)節(jié)免疫細(xì)胞的細(xì)胞因子。然而，迄今研究中分析的對象主要為包含于母乳中的蛋白質(zhì)，盡管有關(guān)于包含于母乳中的核酸的報(bào)道，但對包含于母乳并具有特定序列的核酸的研究還未報(bào)道。此外，還已知受環(huán)氧酶2表達(dá)控制的乳腺細(xì)胞(mammaryglandular cell)的發(fā)育是由miR-lOla調(diào)節(jié)的(非專利文獻(xiàn)20)。然而，這并不表明miRNA存在于乳中。另外，在本申請的優(yōu)先權(quán)日后，有報(bào)道稱微小RNA存在于來源于牛乳的微泡 (microve side)中(非專利文獻(xiàn)21)，并且在不同哺乳期的新鮮牛乳、商購液體乳和奶粉中鑒定出微小RNA(非專利文獻(xiàn)22)。現(xiàn)有技術(shù)文獻(xiàn)[非專利文獻(xiàn)]非專利文獻(xiàn) 1 =Lindsay, Μ. A.，Trends Immunol, 29 :343_351，2008非專利文獻(xiàn)2 :Li, Qi-Jing 等人，Cell, 129 :147_161，2007非專利文獻(xiàn)3 :Chen, Chang-Zheng 等人，Science, 303 :83_86，2004非專利文獻(xiàn)4:0' Connel，R.M·等人，PNAS，104(5) 1604-1609，2007非專利文獻(xiàn)5 =Vigorito, E.等人，Immunity, 27 :847_859，2007非專利文獻(xiàn)6 :Rodriguez，A.等人，S cience，316 :608_611，2007非專利文獻(xiàn)7 =Kohlhaas, S.等人，J. Immunol.，182 :2578_2582，2009非專利文獻(xiàn)8 :Koralov，S. B.等人，Cell，132 :860_874，2008非專利文獻(xiàn)9 =Xiao, C.等人，Nat. Immunol.，9 405-414, 2008非專利文獻(xiàn)10 Jonathan, B.等人，Nature, 451 1125-1129，2008非專利文獻(xiàn)11 :Zhou，B.等人，PNAS，104 (17) :7080_7085，2007非專利文獻(xiàn)12 =Chen, Xian-Ming 等人，J. Biol. Chem.，282 (39) =28929-28938, 2007非專利文獻(xiàn)13 =Tili, Ε.等人，J. Immunol.，179 :5082_5089，2007非專利文獻(xiàn)14 :Taganov，K. D.等人，PNAS，103 (33) 12481-12486，2006非專利文獻(xiàn)15 =Monticelli, S.等人，Genome Biol.，6，R71,2005非專利文獻(xiàn)16 =Valadi, H.等人，Nat. Cell Biol.，9 :654_659，2007非專利文獻(xiàn)17 =Gilad, S.等人，PLoS One, 3 (9) :e3148，2008非專利文獻(xiàn)18 =Admyre, C.，J. Immunol.，179 1969-1978，2007非專利文獻(xiàn)19 =Goldman, A. S.，Breastfeed Med. ,2(4) 195-204，2007非專利文獻(xiàn)20 =Tanaka, T.等人，Differentiation, 77 181-187，2009非專利文獻(xiàn) 21 :Hata, Τ.等人，Biochem. Biophys. Res. Commun.，396 (2) :528_533， 2010
非專利文獻(xiàn)22 :Chen，X.等人，Cell Research, (2010) :1-10

發(fā)明內(nèi)容
發(fā)明要解決的問題本發(fā)明的目的為提供產(chǎn)生具有免疫調(diào)節(jié)作用的乳的食物的篩選方法、一種具有免疫調(diào)節(jié)作用的新型食品及其生產(chǎn)方法。用于解決問題的方案本發(fā)明的發(fā)明人根據(jù)注意到母乳影響嬰兒免疫系統(tǒng)成熟的事實(shí)進(jìn)行了研究。結(jié)果，他們發(fā)現(xiàn)與免疫相關(guān)的miRNA在母乳中高度表達(dá)，并且完成了本發(fā)明。因此本發(fā)明提供食物或物質(zhì)的篩選方法，所述食物或物質(zhì)產(chǎn)生具有免疫調(diào)節(jié)作用的母乳，所述方法包括通過利用乳中微小RNA譜(profile)與由哺乳動物攝取的食物或包含于所述食物中的物質(zhì)的相關(guān)性作為指標(biāo)來鑒定使存在于所述哺乳動物乳中的微小RNA 的量增加或減少的所述食物或物質(zhì)。在前述方法的實(shí)施方案中，所述免疫調(diào)節(jié)作用為免疫增強(qiáng)作用，并且當(dāng)微小RNA 的量增加時(shí)，判定為所述食物或物質(zhì)產(chǎn)生具有免疫增強(qiáng)作用的母乳。在前述方法的優(yōu)選實(shí)施方案中，比較食物攝取前后所觀察到的乳中的微小RNA 譜，并且當(dāng)攝取后所觀察到的至少一種微小RNA的量高于攝取前所觀察到的量時(shí)，判定所述食物使所述乳中的所述微小RNA的量增加。在前述方法的另一優(yōu)選實(shí)施方案中，比較所述乳中的微小RNA譜和血清或血漿中的微小RNA譜，當(dāng)包含于所述乳和所述血清或血漿二者中的微小RNA的存在量在攝取所述食物后使包含于所述乳中的微小RNA的存在量是所述血清或血漿中的微小RNA的存在量的 1. 2倍以上時(shí)，判定所述食物使所述乳中的所述微小RNA的量增加。在前述方法的另一實(shí)施方案中，所述免疫調(diào)節(jié)作用為免疫抑制作用，并且當(dāng)所述微小RNA的量減少時(shí)，判定所述食物或物質(zhì)產(chǎn)生具有免疫抑制作用的母乳。在前述方法的優(yōu)選實(shí)施方案中，比較所述食物攝取前后所觀察到的所述乳中的微小RNA譜，并且當(dāng)攝取后所觀察到的至少一種微小RNA的量低于攝取前所觀察到的量時(shí)，判定所述食物使所述乳中的所述微小RNA的量減少。在前述方法的優(yōu)選實(shí)施方案中，比較所述乳中的微小RNA譜和血清或血漿中的微小RNA譜，當(dāng)包含于所述乳和所述血清或血漿二者中的微小RNA的存在量在攝取所述食物后使所述乳中的微小RNA的存在量為在血清或血漿中的微小RNA的存在量的0. 8倍以下時(shí)，判定所述食物使所述乳中的所述微小RNA的量減少。在前述方法的優(yōu)選實(shí)施方案中，所述哺乳動物為人類。在前述方法的優(yōu)選實(shí)施方案中，所述微小RNA譜由微小RNA的量組成，所述微小 RNA 選自由以下組成的組miR-10、miR-15、miR-16、miR-17、miR-18、miR-19、miR-20、 miR-2UmiR-22>miR-23>miR-24>miR-25>miR-26>miR-27>miR-28>miR-29>miR-30>miR-3U miR-33> miR-34> miR-92> miR-93> miR-96> miR-98> miR-99> miR-100、miR-10U miR-103、 miR-106、miR-107、miR-125、miR-126、miR-128、miR-129、miR-130、miR-133、miR-134、 miR-139、miR-140、miR-141、miR-143、miR-146、miR-148、miR-151、miR-152、miR-155、 miR-181、miR-182、miR-183、miR-184、miR-185、miR-186、miR-188、miR-192、miR-193、miR-195、miR-196、miR-199、miR-200、miR-203、miR-204、miR-205、miR-206、miR-210、 miR-212、miR-214、miR-218、miR-219、miR-221、miR-222、miR-223、miR-290、miR-291、 miR-292> miR-294> miR-296> miR-301> miR-320> miR-322> miR-324> miR-327> miR-328> miR-331、miR-338、miR-340、miR-341、miR-342、miR-345、miR-347、miR-352、miR-361、 miR-362、miR-365、miR-370、miR-375、miR-378、miR-409、miR-425、miR-429、miR-452、 miR-455、miR-465、miR-466、miR-483、mi R-484、miR-486、miR-494、miR-497、miR-500、 miR-503、miR-532、miR-542、miR-584、miR-652、miR-664、miR-672、miR-685、miR-708、 miR-760、miR-872、miR-874、miR-877、miR-1224、miR-1300、miR-1307、let_7a、let_7b、 let_7c、let_7d、le_7e、let_7f 禾口 let_7i。在前述方法的優(yōu)選實(shí)施方案中，所述微小RNA譜由微小RNA的量組成，所述微小 RNA 選自由以下組成的組miR-15、miR-16、miR-17、miR-18、miR-19、miR-20、miR-21、 miR-23>miR-24>miR-26>miR-27>miR-29>miR-30>miR-33>miR-34>miR-92>miR-93>miR-99> miR-100、miR-101、miR-106、miR-107、miR-125、miR-130、miR-140、miR-141、miR-143、 miR-146、miR-155、miR-181、miR-185、miR-186、miR-192、miR-193、miR-195、miR-200、 miR-205、miR-210、miR-218、miR-219、miR-221、miR-222、miR-223、miR-301、miR-322、 miR-340、miR-361、miR-370、miR-429、miR-455、miR-466、miR-497、miR-500、miR-503、 miR-532、miR-542、let_7d 和 let_7i。在前述方法的優(yōu)選實(shí)施方案中，所述微小RNA譜由微小RNA的量組成，所述微小 RNA 選自由以下組成的組miR-15、miR-16、miR-19、miR-21、miR-23、miR-24、miR-26、 miR-27、miR-30、miR-34、miR-99、miR-106、miR-107、miR-125、miR-130、miR-140、miR-181、 miR-193、miR-210、miR-222、miR-223、miR-361、miR-370、miR-429、miR-500、miR-532、 let-7d 禾口 let-7i。本發(fā)明還提供一種生產(chǎn)具有免疫調(diào)節(jié)作用的乳或乳制品的方法，其包括給予哺乳動物(除人以外)食物或物質(zhì)的步驟，所述食物或物質(zhì)通過前述篩選方法被鑒定為使所述哺乳動物的乳中微小RNA的量增加或減少，以及收集所述哺乳動物的乳的步驟。在前述方法的實(shí)施方案中，所述免疫調(diào)節(jié)作用為免疫增強(qiáng)作用，并且將所述食物或物質(zhì)鑒定為使所述微小RNA的量增加。在前述方法的實(shí)施方案中，所述免疫調(diào)節(jié)作用為免疫抑制作用，并且將所述食物或物質(zhì)鑒定為使所述微小RNA的量減少。本發(fā)明還提供一種具有免疫增強(qiáng)作用的口服攝取用組合物，其包括口服攝取用組合物的基質(zhì)和添加至所述基質(zhì)的微小RNA。在所述口服攝取用組合物的優(yōu)選實(shí)施方案中，所述微小RNA選自由mi R-10、 miR-15>miR-16>miR-17>miR-18>miR-19>miR-20>miR-2UmiR-22>miR-23>miR-24>miR-25> miR-26、miR-27> miR-28> miR-29> miR-30、miR-31> miR-33> miR-34> miR-92> miR-93> miR-96、miR-98、miR-99、miR-100、miR-101、miR-103、miR-106、miR-107、miR-125、miR-126、 miR-128、miR-129、miR-130、miR-133、miR-134、miR-139、miR-140、miR-141、miR-143、 miR-146、miR-148、miR-151、miR-152、miR-155、miR-181、miR-182、miR-183、miR-184、 miR-185、miR-186、miR-188、miR-192、miR-193、miR-195、miR-196、miR-199、miR-200、 miR-203、miR-204、miR-205、miR-206、miR-210、miR-212、miR-214、miR-218、miR-219、miR-22U miR-222> miR-223> miR-290> miR-291> miR-292> miR-294> miR-296> miR-301> miR-320、miR-322、miR-324、miR-327、miR-328、miR-331、miR-338、miR-340、miR-341、 miR-342、miR-345、miR-347、miR-352、miR-361、miR-362、miR-365、miR-370、miR-375、 miR-378、miR-409、miR-425、miR-429、miR-452、miR-455、miR-465、miR-466、miR-483、 miR-484、miR-486、miR-494、miR-497、miR-500、miR-503、miR-532、miR-542、miR-584、 miR-652、miR-664、miR-672、miR-685、mi R-708、miR-760、miR-872、miR-874、miR-877、 miR-1224、miR-1300、miR-1307、let_7a、let_7b、let_7c、let_7d、le_7e、let-7f和 let_7i 組成的組。在所述口服攝取用組合物的優(yōu)選實(shí)施方案中，所述微小RNA選自由miR-15、 miR-16>miR-17>miR-18>miR-19>miR-20>miR-2UmiR-23>miR-24>miR-26>miR-27>miR-29> miR-30、miR-33> miR-34> miR-92> miR-93> miR-99> miR-100、miR-10U miR-106、miR-107、 miR-125、miR-130、miR-140、miR-141、miR-143、miR-146、miR-155、miR-181、miR-185、 miR-186、miR-192、miR-193、miR-195、miR-200、miR-205、miR-210、miR-218、miR-219、 miR-221、miR-222、miR-223、miR-301、miR-322、miR-340、miR-361、miR-370、miR-429、 miR-455、miR-466、miR-497、miR-500、miR-503、miR-532、miR-542、let_7d 和 let_7i 組成的組。在所述口服攝取用組合物的優(yōu)選實(shí)施方案中，所述微小RNA選自由miR-15、 miR-16、miR-19、miR-21> miR-23> miR-24> miR-26> miR-27> miR-30、miR-34、miR-99> miR-106、miR-107、miR-125、miR-130、miR-140、miR-181、miR-193、miR-210、miR-222、 miR-223、miR-361、miR-370、miR-429、miR-500、miR-532、let_7d 和 let_7i 組成的組。在所述口服攝取用組合物的優(yōu)選實(shí)施方案中，所述組合物為嬰兒用食品或幼兒用食品。在所述口服攝取用組合物的優(yōu)選實(shí)施方案中，所述嬰兒用食品或幼兒用食品為嬰兒配方(formula)或較大嬰兒配方(follow-up formula)。


圖1示出通過微陣列分析(microarray analysis)獲得的人母乳中miRNA的檢測結(jié)果。圖2示出出生后前六個(gè)月和其后六個(gè)月的母乳中miR-181a水平的比較。hsa表示人類，eel表示線蟲(秀麗隱桿線蟲Caenorhabditis elegans)(下圖應(yīng)同樣應(yīng)用)。圖3示出出生后前六個(gè)月和其后六個(gè)月的母乳中miR-155、miR-17和miR_92水平的比較。圖4示出人母乳和血清中免疫相關(guān)miRNA水平的比較圖5示出凍融前后所觀察到的miRNA水平的比較。圖6示出低pH(pHl)下保存前后所觀察到的miRNA水平的比較。圖7示出RNase處理后和無RNase處理所觀察到的miRNA水平的比較。
具體實(shí)施例方式本發(fā)明的方法為食物或物質(zhì)的篩選方法，所述食物或物質(zhì)產(chǎn)生具有免疫調(diào)節(jié)作用的母乳，所述篩選方法包括基于乳中的微小RNA譜與哺乳動物攝取的食物或包含于所述食物中的物質(zhì)的相關(guān)性來鑒定使存在于哺乳動物乳中的微小RNA的量增加或減少的所述食物或物質(zhì)。在本發(fā)明的前述方法的實(shí)施方案中，所述免疫調(diào)節(jié)作用為免疫增強(qiáng)作用，并且當(dāng)微小RNA的量增加時(shí)，判定所述食物或物質(zhì)產(chǎn)生具有免疫增強(qiáng)作用的母乳。在本發(fā)明的前述方法的另一實(shí)施方案中，所述免疫調(diào)節(jié)作用為免疫抑制作用，并且當(dāng)所述微小RNA的量減少時(shí)，判定所述食物或物質(zhì)產(chǎn)生具有免疫抑制作用的母乳。本發(fā)明基于以下觀點(diǎn)期望通過miRNA的口服給藥來獲得免疫調(diào)節(jié)作用，這是由于新發(fā)現(xiàn)miRNA包含于乳中，和即使在胃中的酸性條件下miRNA也可穩(wěn)定地存在以及母乳促進(jìn)攝取母乳的嬰兒中免疫發(fā)育的事實(shí)(例如，Breastfeed Med. , 2 (4) =195-204, 2007) 0 并且，基于乳中miRNA譜受飲食影響的預(yù)測，構(gòu)想鑒定可使存在于乳中的miRNA的量增加或減少的食物或包含于食物的活性成分。為本發(fā)明的篩選方法、乳和乳制品等所定義的免疫調(diào)節(jié)作用包括，例如，兩種作用為對抗外來攻擊的“防御”目的而起作用的增加免疫增強(qiáng)作用的作用(免疫增強(qiáng)作用) 和為對抗免疫過度反應(yīng)即過敏反應(yīng)、自身免疫病、慢性炎癥等(其中“超免疫反應(yīng)”不利地影響生物體)而起抑制作用的免疫抑制作用。術(shù)語“免疫增強(qiáng)作用”和“免疫抑制作用”以相對含義使用。當(dāng)對于某一哺乳動物母乳通常觀察到的免疫增強(qiáng)作用在攝取食物或物質(zhì)后增強(qiáng)時(shí)，所述母乳具有免疫增強(qiáng)作用，而當(dāng)免疫增強(qiáng)作用降低時(shí)，所述母乳具有免疫抑制作用。當(dāng)食物或物質(zhì)被哺乳動物攝取后所觀察到的免疫增強(qiáng)作用與攝取前所觀察的作用相比增強(qiáng)時(shí)，所述哺乳動物的母乳具有免疫增強(qiáng)作用，而當(dāng)免疫增強(qiáng)作用與攝取前所觀察到的作用相比降低時(shí)，所述母乳具有免疫抑制作用?？梢岳缫匀缦滤鰜硌芯坎溉閯游锶橹械膍iRNA譜和被所述哺乳動物攝取的食物或包含于所述食物中的物質(zhì)的相關(guān)性。收集來自攝取食物的哺乳動物的乳，檢測乳中的miRNA譜。所述哺乳動物不特別限定，實(shí)例包括人、牛、山羊、綿羊、豬、猿、狗、貓、大鼠、小鼠、 倉鼠和豚鼠等。所述哺乳動物優(yōu)選人或牛。本發(fā)明中，所述miRNA譜由miRNA的種類和量組成。所述miRNA可由一種miRNA組成或由兩種以上miRNA組成。miRNA的種類不特別限定，只要選擇存在于乳中的那些即可， 并且實(shí)例包括 miR-10、miR-15、miR-16、miR-17、miR-18、miR-19、miR-20、miR-21、miR-22、 miR-23>miR-24>miR-25>miR-26>miR-27>miR-28>miR-29>miR-30>miR-3UmiR-33>miR-34> miR-92> miR-93> miR-96> miR-98> miR-99、miR-100、miR-101、miR-103、miR-106、miR-107> miR-125、miR-126、miR-128、miR-129、miR-130、miR-133、miR-134、miR-139、miR-140、 miR-141、miR-143、miR-146、miR-148、miR-151、miR-152、miR-155、miR-181、miR-182、 miR-183、miR-184、miR-185、miR-186、miR-188、miR-192、miR-193、miR-195、miR-196、 miR-199、miR-200、miR-203、miR-204、miR-205、miR-206、miR-210、miR-212、miR-214、 miR-218、miR-219、miR-221、miR-222、miR-223、miR-290、miR-291、miR-292、miR-294、 miR-296> miR-30U miR-320> miR-322> miR-324> miR-327> miR-328> miR-331> miR-338> miR-340、miR-341、miR-342、miR-345、miR-347、miR-352、miR-361、miR-362、miR-365、miR-370、miR-375、miR-378、miR-409、miR-425、miR-429、miR-452、miR-455、miR-465、 miR-466、miR-483、miR-484、miR-486、miR-494、miR-497、miR-500、miR-503、miR-532、 miR-542、miR-584、miR-652、miR-664、miR-672、miR-685、miR-708、miR-760、miR-872、 miR-874、miR-877、miR-1224、miR-1300、miR-1307、let-7a、let_7b、let_7c、let_7d、le_7e、 let-7f 和 let-7i 等。這些miRNA為證實(shí)存在于或者人母乳、大鼠初乳或者牛初乳之一中的那些。如上所述，已知母乳促進(jìn)攝取母乳的嬰兒中的免疫發(fā)育(例如，Breastfeed Med. ,2(4) 195-205,2007)。此外，已報(bào)道被認(rèn)為對嬰兒(包括動物幼仔)的免疫系統(tǒng)重要的許多組分通常包含于初乳中(J. Anim. Sci. , 2009,87 (Suppl. 1) :3_9)。因此，提示已證實(shí)存在于乳中的前述miRNA參與免疫作用。在以上提及的那些中，優(yōu)選的是miR-15、miR-16、miR-17、miR-18、miR-19、miR-20、 miR-2UmiR-23>miR-24>miR-26>miR-27>miR-29>miR-30>miR-33>miR-34>miR-92>miR-93> miR-99、miR-100、miR-101、miR-106、miR-107、miR-125、miR-130、miR-140、miR-141、 miR-143、miR-146、miR-155、miR-181、miR-185、miR-186、miR-192、miR-193、miR-195、 miR-200、miR-205、miR-210、miR-218、miR-219、miR-221、miR-222、miR-223、miR-301、 miR-322、miR-340、miR-361、miR-370、miR-429、miR-455、miR-466、miR-497、miR-500、 miR-503、miR-532、miR-M2、let-7d和let_7i。這些是已報(bào)道其免疫調(diào)節(jié)作用的miRNA、已證實(shí)存在于大鼠和牛二者的初乳中的miRNA或在服用雙歧桿菌屬(Bifidobacterium)細(xì)菌的大鼠的初乳中量增加的miRNA。此外，在以上提及的miRNA中，特別優(yōu)選的是miR_15、miR_16、miR_19、miR-21、 miR-23> miR-24> miR-26> miR-27> miR-30、miR-34、miR-99> miR-106、miR-107、miR-125、 miR-130、miR-140、miR-181、miR-193、miR-210、miR-222、miR-223、miR-361、miR-370、 miR-429、miR-500、miR-532、let-7d和let_7i。這些是已證實(shí)存在于大鼠和牛二者的初乳中的miRNA。某些miRNA具有亞型，例如對于miR-181、miR_92、miR-125和miR-146等各自已知 2 至 4 種亞型，如分別為 miR-181a、miR_181b、miR_181c、miR_181d、miR_92a、miR_92b、 miR-125a、miR-125a_3P、miR-125a_5P、miR_125b、miR_146a、miR_146b、miR-146b_3P 和 miR-146b-5P。某些其他miRNA也具有亞型，并且在本發(fā)明中，miRNA可為這樣的任何亞型。 所述亞型的實(shí)例包括下文描述的實(shí)施例中(指實(shí)施例1、3、4和5)證實(shí)存在于乳中的那些。人miR-155 前體 has-mir-155 (MI0000681)，及其活性位點(diǎn) has-miR-155 (MIMAT 0009241)的核苷酸序列分別示于SEQ ID NOS :1和2。示于括號內(nèi)的為miRNA數(shù)據(jù)庫的登錄號(miRBase:!Sequences, http//microrna. Sanger, ac. uk/sequences/index, shtml)(以下描述應(yīng)同樣適用)。41 miR-155 ItT # bta-miR-155 (MI0009752) , R % ^ fi ι ^ bta-miR-155 (MIMAT0000646)的核苷酸序列分別示于 SEQ ID NOS :3 和 4。人miR-lSl前體hsa-mir_l8la-l(MI0000289)和 hsa-mir-lSla-2 (MIOOOO269)，及其活性位點(diǎn)hsa-miR-181a(MIMAT0000256)的核苷酸序列分別示于SEQ ID NO S:5、6和7。人miR-l8lb 前體 hsa-mir-lSlb-l (MI0000270)和 hsa-mir-lSlb-2 (MI0000683)， 及其活性位點(diǎn)hsa-miR-181b(MIMAT0000257)的核苷酸序列分別示于SEQ ID NO S :8、9和10。牛miR-181a 前體 bta-mir_181a (MI0004757)和 bta-mir-181a_l (MI0010484)，及其活性位點(diǎn)bta-miR-181a(MIMAT000;3543)的核苷酸序列分別示于SEQ ID NO S:ll、12和 13。牛m i R- 1 8 1 b前體 bta-mir-181b-l (MI0010485)禾口 bta-mir-181b-2 (MI0005013)，及其活性位點(diǎn) bta_miR-181b (MIMAT0003793)的核苷酸序列分別示于 SEQ ID NOS 14,15 和 16。入miR-223 ItT # hsa-mir-223 (MI0000300) , R % ^ fi ι ^ hsa-miR-223 (MIMAT0000280)的核苷酸序列分別示于 SEQ ID N0S:17 禾Π 18。41 miR-223 |ιΓ # bta-mir-223 (ΜΙ0009782) , R % ^ fi ι ^ bta-miR-223 (ΜΙΜΑΤ0009270)的核苷酸序列分別示于 SEQ ID N0S:19iP20。人miR-17前體的核苷酸序列hsa-mir-17 (MI0000071)，及其活性位點(diǎn) hsa-miR-17 (MIMAT0000070)(又稱 hsa-miR-17_5p)，分別示于 SEQ ID NO S 21 和 22。41 miR-17 ff # bta-mir-17 (MI0005031) R % ^ fi ι ^ bta-miR-17-5p (ΜΙΜΑΤ0003815)和 bta-miR-17_3p (MIMAT0003816)的核苷酸序列分別示于 SEQ ID NO S :23、24和 25。人miR-92a 前體 hsa-mir-92a_l (MI0000093)和 hsa-mir-92a_2 (MI0000094)及其活性位點(diǎn)hsa-miR-92a(MIMAT0000092)的核苷酸序列分別示于SEQ ID NO 3:26、27和沘。人miR-92b ff # hsa-mir-92b (MI0003560) R % ^ fi ι ^ hsa-miR-92b (MIMAT0003218)的核苷酸序列分別示于 SEQ ID NOS 29 禾Π 30。41 miR-92 ff # bta-mir-92 (MI0005024) R % ^ fi ι ^ bta-miR-92 (MIMAT0003808)的核苷酸序列分別示于 SEQ ID NOS :31 和 32。41 miR-92a ff # bta-mir-92a (MI0009905) R % ^ 個(gè)生 itl ^ bta-miR-92a (ΜΙΜΑΤ0009383)的核苷酸序列分別示于 SEQ ID NOS :33 和；34。牛miR_92b 前體 bta-mir_92b (MI0009906)及其活性位點(diǎn) bta-miR_92b (MIMAT 0009384)的核苷酸序列分別示于SEQ ID NOS 35和36。人let-7i ItT # hsa-let-7i (MI0000434) R % ^ fi ι ^ hsa-let-7i (MIMAT0000415)的核苷酸序列分別示于 SEQ ID NOS 37 禾口 38。41 let"7i Itr # bta-let"7i (MI0005065) R % ^ fi ι ^ bta-let-7i (MIMAT0003851)的核苷酸序列分別示于 SEQ ID NOS 39 和 40。人miR-125a ff # hsa-mir-125a (MI0000469) R % ^ fi ι ^ hsa-miR-125a-5p (ΜΙΜΑΤ0000443)和 hsa-miR-125a_3p (MIMAT0004602)的核苷酸序列分別示于 SEQ ID NO S:41、42 和 43。人miR-125b 前體 hsa-mir-125b_l (MI0000446)和 hsa-mir-125b_2 (MI0000470) 及其活性位點(diǎn)hsa-miR-125b(MIMAT0000423)的核苷酸序列分別示于SEQ ID NO S :44、45 和46。41 miR-125a ff # bta-mir-125a (MI0004752) R % ^ fi ι ^ bta-miR-125a (ΜΙΜΑΤ0003538)的核苷酸序列分別示于 SEQ ID N0S:47iP48。牛miR-125b 前體 bta-mir-125b_l (MI0004753)和 bta-mir-125b_2 (MI0005457)及其活性位點(diǎn)bta-miR-125b(MIMAT0003539)的核苷酸序列分別示于SEQ ID NO S :49、50 和51。人miR-146a ff # hsa-mir-146a (MI0000477) R % ^ 個(gè)生 ^ hsa-miR-146a(MIMAT0000449)的核苷酸序列分別示于 SEQ ID N0S:52 和 53。人miR-146b前體的核苷酸序列hsa-mir_146b (MI0003129)及其活性位點(diǎn) hsa-miR-146b-5p(MIMAT0002809)(也稱為 hsa_miR-146b)和 hsa-miR-146b_3p(MIMAT 0004766)的核苷酸序列分別示于SEQ ID NOS :54、55和56。41 miR-146a ff # bta-mir-146a (MI0009746) R % ^ 個(gè)生 ^ bta-miR-146a (MIMAT0009236)的核苷酸序列分別示于 SEQ ID NOS 57 禾Π 58。41 miR-146b ff # bta-mir-146b (MI0009745) R % ^ 個(gè)生 ^ bta-miR-146b (ΜΙΜΑΤ0009235)的核苷酸序列分別示于 SEQ ID N0S:59iP60。人miR-150 前體 hsa-mir-150 (MI0000479)及其活性位點(diǎn) hsa-miR-150 (MIMAT 0000451)的核苷酸序列分別示于SEQ ID NOS :61和62。41 miR-150 ff # bta-mir-150 (MI0005058) R % ^ 個(gè)生 ^ bta-miR-150 (MIMAT0003845)的核苷酸序列分別示于 SEQ ID NOS :63 和 64。除前述miRNA外，將已證實(shí)存在于大鼠或牛的乳中的miRNA和與這些miRNA相應(yīng)的其他動物的miRNA示于表1至10。表權(quán)利要求
1.一種篩選食物或物質(zhì)的方法，所述食物或物質(zhì)產(chǎn)生具有免疫調(diào)節(jié)作用的母乳，所述方法包括通過利用哺乳動物乳中的微小RNA譜與由哺乳動物攝取的食物或包含于所述食物中的物質(zhì)的相關(guān)性作為指標(biāo)來鑒定使得存在于所述哺乳動物乳中的微小RNA的量增加或減少的食物或物質(zhì)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述免疫調(diào)節(jié)作用為免疫增強(qiáng)作用，并且當(dāng)微小 RNA的量增加時(shí)，判定所述食物或物質(zhì)產(chǎn)生具有免疫增強(qiáng)作用的母乳。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其中比較所述食物攝取前后所觀察到的所述乳中的微小RNA譜，并且當(dāng)攝取后所觀察到的至少一種微小RNA的量高于攝取前所觀察到的量時(shí)，判定所述食物使所述乳中的所述微小RNA的量增加。
4.根據(jù)權(quán)利要求2或3所述的方法，其中比較所述乳中的微小RNA譜和血清或血漿中的微小RNA譜，當(dāng)包含于所述乳和所述血清或血漿二者中的微小RNA的存在量在攝取所述食物后使包含于所述乳中的微小RNA的存在量是所述血清或血漿中的微小RNA的存在量的 1. 2倍以上時(shí)，判定所述食物使所述乳中的所述微小RNA的量增加。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述免疫調(diào)節(jié)作用為免疫抑制作用，并且當(dāng)所述微小RNA的量減少時(shí)，判定所述食物或物質(zhì)產(chǎn)生具有免疫抑制作用的母乳。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其中比較所述食物攝取前后所觀察到的所述乳中的微小RNA譜，并且當(dāng)攝取后所觀察到的至少一種微小RNA的量低于攝取前所觀察到的量時(shí)，判定所述食物使所述乳中的所述微小RNA的量減少。
7.根據(jù)權(quán)利要求5或6所述的方法，其中比較所述乳中的微小RNA譜和血清或血漿中的微小RNA譜，當(dāng)包含于所述乳和所述血清或血漿二者中的微小RNA的存在量在攝取所述食物后使所述乳中的微小RNA的存在量為在血清或血漿中的微小RNA的存在量的0. 8倍以下時(shí)，判定所述食物使所述乳中的所述微小RNA的量減少。
8.根據(jù)權(quán)利要求1至7任一項(xiàng)所述的方法，其中所述哺乳動物為人、大鼠或牛。
9.根據(jù)權(quán)利要求1至8任一項(xiàng)所述的方法，其中所述微小RNA譜由所述微小RNA的量組成，所述微小 RNA 選自由 miR-10、miR-15、miR-16、miR-17、miR-18、miR-19、miR-20、 miR-2UmiR-22>miR-23>miR-24>miR-25>miR-26>miR-27>miR-28>miR-29>miR-30>miR-3U miR-33> miR-34> miR-92> miR-93> miR-96> miR-98> miR-99> miR-100、miR-10U miR-103、 miR-106、miR-107、miR-125、miR-126、miR-128、miR-129、miR-130、miR-133、miR-134、 miR-139、miR-140、miR-141、miR-143、miR-146、miR-148、miR-151、miR-152、miR-155、 miR-181、miR-182、miR-183、miR-184、miR-185、miR-186、miR-188、miR-192、miR-193、 miR-195、miR-196、miR-199、miR-200、miR-203、miR-204、miR-205、miR-206、miR-210、 miR-212、miR-214、miR-218、miR-219、miR-221、miR-222、miR-223、miR-290、miR-291、 miR-292> miR-294> miR-296> miR-30U miR-320> miR-322> miR-324> miR-327> miR-328> miR-331、miR-338、miR-340、miR-341、miR-342、miR-345、miR-347、miR-352、miR-361、 miR-362、miR-365、miR-370、miR-375、miR-378、miR-409、miR-425、miR-429、miR-452、 miR-455、miR-465、miR-466、miR-483、miR-484、miR-486、miR-494、miR-497、miR-500、 miR-503、miR-532、miR-542、miR-584、miR-652、miR-664、miR-672、miR-685、miR-708、 miR-760、 miR-872、 miR-874、 miR-877、 miR-1224、 miR-1300、 miR-1307、 let_7a、 let_7b、 let-7c、let-7d、le_7e、let_7f 和 let_7i 組成的組。
10.根據(jù)權(quán)利要求1至8任一項(xiàng)所述的方法，其中所述微小RNA譜由所述微小RNA的量組成，所述微小 RNA 選自由 miR-15、miR-16、miR-17、miR-18、miR-19、miR-20、miR-21、 miR-23>miR-24>miR-26>miR-27>miR-29>miR-30>miR-33>miR-34>miR-92>miR-93>miR-99> miR-100、miR-101、miR-106、miR-107、miR-125、miR-130、miR-140、miR-141、miR-143、 miR-146、miR-155、miR-181、miR-185、miR-186、miR-192、miR-193、miR-195、miR-200、 miR-205、miR-210、miR-218、miR-219、miR-221、miR-222、miR-223、miR-301、miR-322、 miR-340、miR-361、miR-370、miR-429、miR-455、miR-466、miR-497、miR-500、miR-503、 miR-532、miR-542、let_7d 和 let_7i 組成的組。
11.根據(jù)權(quán)利要求1至8任一項(xiàng)所述的方法，其中所述微小RNA譜由所述微小RNA的量組成，所述微小 RNA 選自由 miR-15、miR-16、miR-19、miR-21、miR-23、miR-24、miR-26, miR-27、miR-30、miR-34、miR-99、miR-106、miR-107、miR-125、miR-130、miR-140、miR-181、 miR-193、miR-210、miR-222、miR-223、miR-361、miR-370、miR-429、miR-500、miR-532、 let-7d和let-7i組成的組。
12.—種生產(chǎn)具有免疫調(diào)節(jié)作用的乳或乳制品的方法，其包括給予哺乳動物(除人以外)食物或物質(zhì)的步驟和收集所述哺乳動物的乳的步驟，所述食物或物質(zhì)通過根據(jù)權(quán)利要求1至11任一項(xiàng)所述的篩選方法鑒定為使哺乳動物的乳中的微小RNA的量增加或減少。
13.根據(jù)權(quán)利要求12所述的方法，其中所述免疫調(diào)節(jié)作用為免疫增強(qiáng)作用，并且所述食物或物質(zhì)被鑒定為使所述微小RNA的量增加。
14.根據(jù)權(quán)利要求12所述的方法，其中所述免疫調(diào)節(jié)作用為免疫抑制作用，并且所述食物或物質(zhì)被鑒定為使所述微小RNA的量減少。
15.一種具有免疫增強(qiáng)作用的口服攝取用組合物，其包括口服攝取用組合物的基質(zhì)和添加至所述基質(zhì)的微小RNA。
16.根據(jù)權(quán)利要求15所述的口服攝取用組合物，其中所述微小RNA選自由miR-10、 miR-15>miR-16>miR-17>miR-18>miR-19>miR-20>miR-2UmiR-22>miR-23>miR-24>miR-25> miR-26> miR-27> miR-28> miR-29> miR-30、miR-31> miR-33> miR-34> miR-92> miR-93> miR-96、miR-98、miR-99、miR-100、miR-101、miR-103、miR-106、miR-107、miR-125、miR-126、 miR-128、miR-129、miR-130、miR-133、miR-134、miR-139、miR-140、miR-141、miR-143、 miR-146、miR-148、miR-151、miR-152、miR-155、miR-181、miR-182、miR-183、miR-184、 miR-185、miR-186、miR-188、miR-192、miR-193、miR-195、miR-196、miR-199、miR-200、 miR-203、miR-204、miR-205、miR-206、miR-210、miR-212、miR-214、miR-218、miR-219、 miR-221、miR-222、miR-223、miR-290> miR-29U miR-292> miR-294> miR-296> miR-301、 miR-320、miR-322、miR-324、miR-327、miR-328、miR-331、miR-338、miR-340、miR-341、 miR-342、miR-345、miR-347、miR-352、miR-361、miR-362、miR-365、miR-370、miR-375、 miR-378、miR-409、miR-425、miR-429、miR-452、miR-455、miR-465、miR-466、miR-483、 miR-484、miR-486、miR-494、miR-497、miR-500、miR-503、miR-532、miR-542、miR-584、 miR-652、miR-664、miR-672、miR-685、miR-708、miR-760、miR-872、miR-874、miR-877、 miR-1224、miR-1300、miR-1307、let_7a、let_7b、let_7c、let_7d、le_7e、let-7f 禾口 let_7i 組成的組。
17.根據(jù)權(quán)利要求15所述的口服攝取用組合物，其中所述微小RNA選自由miR-15、miR-16>miR-17>miR-18>miR-19>miR-20>miR-2UmiR-23>miR-24>miR-26>miR-27>miR-29> miR-30、miR-33> miR-34> miR-92> miR-93> miR-99> miR-100、miR-101、miR-106、miR-107、 miR-125、miR-130、miR-140、miR-141、miR-143、miR-146、miR-155、miR-181、miR-185、 miR-186、miR-192、miR-193、miR-195、miR-200、miR-205、miR-210、miR-218、miR-219、 miR-221、miR-222、miR-223、miR-301、miR-322、miR-340、miR-361、miR-370、miR-429、 miR-455、miR-466、miR-497、miR-500、miR-503、miR-532、miR-542、let_7d 和 let_7i 組成的組。
18.根據(jù)權(quán)利要求15所述的口服攝取用組合物，其中所述微小RNA選自由miR-15、 miR-16、miR-19、miR-21、miR-23> miR-24> miR-26> miR-27> miR-30、miR-34、miR-99> miR-106、miR-107、miR-125、miR-130、miR-140、miR-181、miR-193、miR-210、miR-222、 miR-223、miR-361、miR-370、miR-429、miR-500、miR-532、let_7d 和 let_7i 組成的組。
19.根據(jù)權(quán)利要求15至18任一項(xiàng)所述的口服攝取用組合物，其中所述口服攝取用組合物為嬰兒用食品或幼兒用食品。
20.根據(jù)權(quán)利要求19所述的口服攝取用組合物，其中所述嬰兒用食品或幼兒用食品為嬰兒配方或較大嬰兒配方。
全文摘要
公開了一種能夠產(chǎn)生具有免疫調(diào)節(jié)作用的乳的食品的篩選方法、一種具有免疫調(diào)節(jié)作用的新型食品及其生產(chǎn)方法。能夠產(chǎn)生具有免疫調(diào)節(jié)作用的母乳的食物或物質(zhì)是通過以下來篩選的通過使用乳的微小RNA譜與由哺乳動物攝取的所述食物或包含于所述食物中的物質(zhì)之間的相關(guān)性作為指標(biāo)，鑒定能夠使包含于所述哺乳動物乳中的微小RNA的量增加或減少的食物或物質(zhì)。
文檔編號C12Q1/68GK102471803SQ20108003174
公開日2012年5月23日 申請日期2010年7月14日 優(yōu)先權(quán)日2009年7月14日
發(fā)明者關(guān)根一則, 和泉裕久, 小坂展慶, 落谷孝廣 申請人:森永乳業(yè)株式會社