專利名稱：具有細(xì)胞壁結(jié)合神經(jīng)酰胺類糖脂的細(xì)菌疫苗及其應(yīng)用的制作方法
具有細(xì)胞壁結(jié)合神經(jīng)酰胺類糖脂的細(xì)菌疫苗及其應(yīng)用發(fā)明背景發(fā)明領(lǐng)域本發(fā)明一般涉及免疫學(xué)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
已知分枝桿菌在哺乳動(dòng)物中引起嚴(yán)重疾病，如結(jié)核病、漢森氏病、麻風(fēng)、肺病類結(jié)核、淋巴腺炎、皮膚病或彌散性疾病。全球人口的三分之一感染結(jié)核分枝桿菌 (Mycobacterium tuberculosis)，盡管卡介苗(BCG)已使用超過(guò)75年，每年仍有200萬(wàn)人死于結(jié)核病。Hoft DF5Lancet 372:164-175^008)。結(jié)核病是目前全球傳染病中導(dǎo)致死亡的第二大因素，僅次于 HIV/AIDS。Young DB 等，Journal of Clinical Investigation 118 1255-1265(2008)。一些研究表明有效控制結(jié)核分枝桿菌感染需要MHC I類和II類限制性T細(xì)胞。 Mogues T等，J Exp Med 193 :271_28(K2001)和Flynn JL等，Proc Natl Acad Sci USA 89 12013-12017(1992)。然而，脂質(zhì)抗原呈遞分子⑶Id缺陷型小鼠并不比野生型小鼠更易感染結(jié)核分枝桿菌，表明CDld限制性NKT細(xì)胞對(duì)于保護(hù)性免疫不是絕對(duì)必需。Behar SM等， J Exp Med 189 :1973-1980 (1999)。天然殺傷細(xì)胞(NKT)代表了表達(dá)T-細(xì)胞受體和NK-細(xì)胞受體的T淋巴細(xì)胞亞群，在連接先天性免疫和適應(yīng)性免疫中發(fā)揮作用。Kronenberg M和 Gapin L，Nat Rev Immunol 2:557-568^002)。激活后，NKT細(xì)胞在針對(duì)不同病原體包括單增李斯特菌(L. monocytogenes)、結(jié)核分枝桿菌、碩大利什曼原蟲(chóng)(Leishmania major)的早期和遲發(fā)性免疫有顯著作用。Kronenberg(2002) ；Behar SM 和 Porcelli SA，Curr Top Microbiol Immunol 314 :215-250(2007) ；Emoto M等，Eur J Immunol 29:650-659(1999)； Ishikawa H 等，Int Immunol 12 :1267-1274(2000)禾Π Ranson T 等，J Immunol 175 1137-1144(2005)。有報(bào)導(dǎo)NKT細(xì)胞的激活可引起⑶4和⑶8 T細(xì)胞應(yīng)答增強(qiáng)，并誘導(dǎo)樹(shù)突細(xì)胞成熟。Nishimura T 等，Int Immunol 12 :987-994 Q000)和 Silk JD 等，J Clin Invest 114 :1800-1811(2004)。與識(shí)別MHC-結(jié)合肽的常規(guī)T細(xì)胞不同，NKT細(xì)胞特異性針對(duì)MHC I類樣蛋白 ⑶Id呈遞的脂質(zhì)抗原。目前已鑒定了一些可由⑶Id呈遞激活NKT細(xì)胞的糖脂抗原，包括從自源和細(xì)菌源性糖脂。Tsuji M Cell Mol Life Sci 63:1889-1898(2006)。含非變異 Va 14-Ja 18重排T細(xì)胞受體的NKT細(xì)胞(iNKT細(xì)胞)經(jīng)由⑶Id呈遞時(shí)，對(duì)鞘糖脂、a -半乳糖神經(jīng)酰胺(a GalCer)有反應(yīng)性。Kronenberg M 和 Gapin L, Nat Rev Immunol 2 557-568(2002) ；Kronenberg M，Annu Rev Immunol 23 :877_90(K2005)。最近的研究顯示通過(guò)共施用α GalCer作為佐劑激活iNKT細(xì)胞，可改善抗瘧原蟲(chóng)、杜氏利什曼原蟲(chóng)、單增李斯特菌和 HIV 的疫苗。Gonzalez-Aseguinolaza G等，J Exp Med 195 :617-624(2002) ；Dondji B European Journal of Immunology 38:706-719(2008) ；Huang YX Vaccine 26: 1807-1816(2008)和 Enomoto N 等，F(xiàn)EMS Immunol Med Microbiol 51 :350-362U007)。
作為一種治療劑，α feilCer可減少小鼠中的瘧原蟲(chóng)寄生并延長(zhǎng)結(jié)核分枝桿 ^ ^ Ife /Jn 的 # 夕舌。Gonz￡ilez_Aseguinol￡iz￡i G 等，Proc Natl Acad Sci USA 97 8461-8466(2000) ；Chackerian A 等，Infection and Immunity 70 :6302-6309(2002) 因此，盡管CDld限制性T細(xì)胞對(duì)于最佳免疫并不絕對(duì)必需，其特異性激活提高了宿主對(duì)傳染病的抵抗力。對(duì)小鼠單次注射afedCer引發(fā)血清中的細(xì)胞因子動(dòng)蕩，導(dǎo)致IFNY，、IL-12和 IL-4 分泌。Fujii S 等，Immunol Rev 220:183-198(2007)。通過(guò) a GalCer 刺激 CDld 限制性iNKT細(xì)胞也可迅速激活NK細(xì)胞、樹(shù)突細(xì)胞、B細(xì)胞和常規(guī)T細(xì)胞。Nishimura T等，Int Immunol 12 :987-994(2000) ；Kitamura H 等，J Exp Med 189:1121—1128(1999) ；Fujii S 等，J Exp Med 198:267-279 0003)。iNKT細(xì)胞生成大量IFN γ且其生成需要iNKT細(xì)胞與DC之間經(jīng)⑶40-⑶40配體相互作用實(shí)現(xiàn)直接接觸。Nishimura T等，Int Immunol 12: 987-994(2000).。顯示iNKT細(xì)胞生成的IFN γ對(duì)小鼠腫瘤模式中α feilCer的抗轉(zhuǎn)移效果具有關(guān)鍵作用。Hayakawa Y 等，Eur J Immunol 31 :1720-1727(2001) ；Smyth MJ 等，Blood 99 =1259-1266(2002)。因此，有認(rèn)為iNKT細(xì)胞激活能通過(guò)影響早期細(xì)胞因子環(huán)境調(diào)節(jié)適應(yīng)性免疫應(yīng)答。最近，稱為α -C-GalCer的α -GalCer C-糖苷類似物被確定為優(yōu)勢(shì)Thl扭曲化合物，其比f(wàn)elCer在小鼠中的抗腫瘤和抗瘧疾活性更高。該化合物也在小鼠中誘導(dǎo)更高的 Thl 細(xì)胞因子 IL-12 和 IFNy 水平。khmieg J 等，Journal of Experimental Medicine 198 :1631-1641(2003) 已確認(rèn)這2種細(xì)胞因子IL-12禾口 IFNy對(duì)于在小鼠和人中控制TB 是必須的。對(duì)于在小鼠模型中針對(duì)結(jié)核病與BCG疫苗一起的佐劑使用很少有研究。一項(xiàng)此類研究報(bào)導(dǎo)了當(dāng)將CpG ODN和BCG疫苗一起使用時(shí)，抗結(jié)核分枝桿菌的保護(hù)提高。Freidag BL等，hfect Immun 68 :2948-2953(2000) 大部分針對(duì)α GalCer與抗不同傳染病疫苗一起使用的佐劑效果的早期研究分別共施用afeilCer和各疫苗以利用其佐劑活性。 Gonzalez-Aseguinolaza G等(2002) ；Dondji B等(2008) ；Huang YX等(2008)和Enomoto N等0007)。因此，仍需要用于增強(qiáng)對(duì)細(xì)菌如分枝桿菌、抗原的免疫應(yīng)答的有效組合物和疫
田ο發(fā)明概述本發(fā)明涉及包括細(xì)菌細(xì)胞和神經(jīng)酰胺類糖脂的經(jīng)修飾細(xì)菌，其中所述神經(jīng)酰胺類糖脂與細(xì)胞壁物理結(jié)合。在進(jìn)一步實(shí)施方式中，神經(jīng)酰胺類糖脂包括糖基神經(jīng)酰胺或 α-糖基神經(jīng)酰胺或其類似物。在一種實(shí)施方式中，糖基神經(jīng)酰胺或其類似物包括式I
權(quán)利要求
1.一種經(jīng)修飾細(xì)菌，包括細(xì)菌細(xì)胞和神經(jīng)酰胺類糖脂，其特征在于，所述神經(jīng)酰胺類糖脂與所述細(xì)菌細(xì)胞物理結(jié)合。
2.如權(quán)利要求1所述的經(jīng)修飾細(xì)菌，其特征在于，所述神經(jīng)酰胺類糖脂包括糖基神經(jīng)酰胺或其類似物。
3.如權(quán)利要求2所述的經(jīng)修飾細(xì)菌，其特征在于，所述糖基神經(jīng)酰胺或其類似物包括式I:
4.如權(quán)利要求3所述的經(jīng)修飾細(xì)菌，其特征在于，所述Rl是-(CH2)22CH3或-(CH2) 24CH3。
5.如權(quán)利要求3所述的經(jīng)修飾細(xì)菌，其特征在于，所述R2是-CH(OH)-(CH2)13CH3。
6.如權(quán)利要求3所述的經(jīng)修飾細(xì)菌，其特征在于，所述R4是半乳糖基、甘露糖基、巖藻糖基或葡萄糖基。
7.如權(quán)利要求1所述的經(jīng)修飾細(xì)菌，其特征在于，所述神經(jīng)酰胺類糖脂包括α-半乳糖神經(jīng)酰胺或其類似物。
8.如權(quán)利要求7所述的經(jīng)修飾細(xì)菌，其特征在于，所述α-半乳糖神經(jīng)酰胺或其類似物包括式II
9.如權(quán)利要求8所述的經(jīng)修飾細(xì)菌，其特征在于，所述R2是-CH(OH)(CH2)xCH3，其中X 是4-13范圍內(nèi)的整數(shù)。
10.如權(quán)利要求8所述的經(jīng)修飾細(xì)菌，其特征在于，所述Rl選自下組=(CH2)9CH= CH-CH2-CH = CH (CH2) 4CH3、(CH2)8CH = CH-CH2-CH = CH(CH2)4CH3^ (CH2)7CH = CH-CH2-CH = CH (CH2) 4CH3、(CH2)3CH = CH-CH2-CH = CH-CH2-CH = CH-CH2-CH = CH-(CH2) 4CH3、(CH2)3CH = CH-CH2-CH = CH-CH2-CH = CH-CH2-CH = CH-CH2-CH = CH-Ql2CH3、(CH2)7CH = CH-CH2-CH = CH = (CH2) 4CH3、(CH2) 7CH = CH-CH = CH (CH2) 5CH3、(CH2) 8CH = CH-CH = CH (CH2) 4CH3、(CH2) 9CH =CH-CH = CH(CH2)5CH3, (CH2)6CH = CH-CH = CH-CH = CH(CH2)4CH3, (CH2)6CH = CH-CH = CH-CH = CH(CH2)4CH3 和(CH2)7CH = CH-CH = CH-CH = CH (CH2) 3CH3。
11.如權(quán)利要求10所述的經(jīng)修飾細(xì)菌，其特征在于，所述雙鍵是順式或反式。
12.如權(quán)利要求7所述的經(jīng)修飾細(xì)菌，其特征在于，所述α-半乳糖神經(jīng)酰胺或其類似物包括式III
13.如權(quán)利要求12所述的經(jīng)修飾細(xì)菌，其特征在于，所述Rl由氧代；羥基；鹵素；苯基；-OC (0) R6 ； -0R6 ；-C (0) R6 或 N (R6) 2 取代，其中各R6獨(dú)立地是鹵素、C1-C6烷基、或芳香環(huán)，芳香環(huán)可選有鹵素；羥基；-OC(O) R7 ； -0R7 ； -C (0) R7 或 N (R7) 2 取代，其中各R7獨(dú)立地是鹵素或C1-C6烷基。
14.如權(quán)利要求12所述的經(jīng)修飾細(xì)菌，其特征在于，所述Rl選自
15.如權(quán)利要求7所述的經(jīng)修飾細(xì)菌，其特征在于，所述α-半乳糖神經(jīng)酰胺或其類似物包括(2S, 3S，4R)-1-0- ( α -D-半乳吡喃糖基)-N-廿六醇基_2_氨基_1，3，4-十八烷三醇(KRN7000)或(2S, 3S)-1-0- ( α -D-半乳吡喃糖基)-N-廿六醇基_2_氨基-1，3-十八烷二醇)。
16.如權(quán)利要求7所述的經(jīng)修飾細(xì)菌，其特征在于，所述α-半乳糖神經(jīng)酰胺或其類似物包括(2S, 3S，4R)-I-CH2- ( α -半乳吡喃糖基)-N-廿六醇基_2_氨基_1，3，4-十八烷三醇(α -C-GalCer)。
17.如權(quán)利要求1-16中任一項(xiàng)所述的經(jīng)修飾細(xì)菌，其特征在于，所述神經(jīng)酰胺類糖脂納入所述細(xì)菌細(xì)胞的細(xì)胞壁。
18.如權(quán)利要求1-17中任一項(xiàng)所述的經(jīng)修飾細(xì)菌，其特征在于，所述細(xì)菌細(xì)胞選自分枝桿菌細(xì)胞、李斯特菌細(xì)胞、沙門氏菌細(xì)胞、耶爾森氏菌細(xì)胞、弗朗西絲氏菌和軍團(tuán)菌細(xì)胞。
19.如權(quán)利要求18所述的經(jīng)修飾細(xì)菌，其特征在于，所述細(xì)菌細(xì)胞是分枝桿菌細(xì)胞。
20.如權(quán)利要求19所述的經(jīng)修飾細(xì)菌，其特征在于，所述分枝桿菌細(xì)胞選自結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群(MTBC)細(xì)胞和非結(jié)核分枝桿菌(NTM)細(xì)胞。
21.如權(quán)利要求20所述的經(jīng)修飾細(xì)菌，其特征在于，所述分枝桿菌細(xì)胞是MTBC細(xì)胞。
22.如權(quán)利要求21所述的經(jīng)修飾細(xì)菌，其特征在于，所述MTBC細(xì)胞選自結(jié)核分枝桿菌細(xì)胞、牛分枝桿菌細(xì)胞、牛分枝桿菌卡介苗(BCG)細(xì)胞、非洲分枝桿菌細(xì)胞、卡氏分枝桿菌細(xì)胞、山羊分枝桿菌細(xì)胞和鰭腳分枝桿菌細(xì)胞。
23.如權(quán)利要求22所述的經(jīng)修飾細(xì)菌，其特征在于，所述MTBC細(xì)胞是結(jié)核分枝桿菌細(xì)胞。
24.如權(quán)利要求22所述的經(jīng)修飾細(xì)菌，其特征在于，所述MTBC細(xì)胞是BCG細(xì)胞
25.如權(quán)利要求20所述的經(jīng)修飾細(xì)菌，其特征在于，所述分枝桿菌細(xì)胞是NTM細(xì)胞。
26.如權(quán)利要求25所述的經(jīng)修飾細(xì)菌，其特征在于，所述NTM細(xì)胞是恥垢分枝桿菌細(xì)胞。
27.如權(quán)利要求116中任一項(xiàng)所述的經(jīng)修飾細(xì)菌，其特征在于，所述細(xì)菌細(xì)胞是活的、 死的或減毒的。
28.如權(quán)利要求27所述的經(jīng)修飾細(xì)菌，其特征在于，所述細(xì)菌細(xì)胞是活的。
29.如權(quán)利要求27所述的經(jīng)修飾細(xì)菌，其特征在于，所述細(xì)菌細(xì)胞是死的。
30.如權(quán)利要求27或觀所述的經(jīng)修飾細(xì)菌，其特征在于，所述細(xì)菌細(xì)胞是減毒的
31.如權(quán)利要求1-30中任一項(xiàng)所述的經(jīng)修飾細(xì)菌，其特征在于，所述細(xì)菌提高抗原特異性CD8T細(xì)胞對(duì)抗原的反應(yīng)。
32.如權(quán)利要求31所述的經(jīng)修飾細(xì)菌，其特征在于，所述抗原是分枝桿菌抗原。
33.如權(quán)利要求1-31中任一項(xiàng)所述的經(jīng)修飾細(xì)菌，其特征在于，所述細(xì)菌表達(dá)異源抗原。
34.如權(quán)利要求33所述的經(jīng)修飾細(xì)菌，其特征在于，所述異源抗原是病毒抗原、細(xì)菌抗原、真菌抗原、寄生蟲(chóng)抗原或腫瘤特異性抗原。
35.如權(quán)利要求33所述的經(jīng)修飾細(xì)菌，其特征在于，所述異源抗原是免疫原性肽。
36.如權(quán)利要求1-35中任一項(xiàng)所述的經(jīng)修飾細(xì)菌，其特征在于，所述細(xì)菌細(xì)胞是重組細(xì)菌細(xì)胞。
37.一種組合物，包含權(quán)利要求1-36中任一項(xiàng)所述的經(jīng)修飾細(xì)菌和藥物載體。
38.如權(quán)利要求37所述的組合物，其特征在于，所述藥物載體選自鹽水、緩沖鹽水、右旋糖、水、甘油和其組合。
39.如權(quán)利要求37所述的組合物，其特征在于，所述組合物還包括佐劑。
40.如權(quán)利要求39所述的組合物，其特征在于，所述佐劑選自下組糖脂、細(xì)胞因子、趨化因子、誘導(dǎo)細(xì)胞因子和趨化因子生成的化合物、生長(zhǎng)因子、干擾素、細(xì)菌組分、鋁基鹽、鈣基鹽、氧化硅、多核苷酸、類毒素、血清蛋白、病毒、病毒來(lái)源物質(zhì)、毒物、毒液、咪唑并喹啉化合物、TLR9激動(dòng)劑(例如CPG 0DNS)、TLR7/8激動(dòng)劑(例如咪喹莫特)、泊洛沙姆、陽(yáng)離子類脂、惰性載體、普流羅尼嵌段聚合物、沉淀形成劑、表面活性物質(zhì)、巨噬細(xì)胞刺激劑、替代途徑補(bǔ)體激活劑、非離子表面活性劑、mLT、MF59 、SAF、Ribi 佐劑系統(tǒng)、LPS衍生物(例如單磷酰脂質(zhì)A (MPL))、海藻糖二霉菌酸酯(TDM)；細(xì)胞壁骨架(CWS)、Det0XTM、QS21、Stimul0nTM、 弗氏完全佐劑、弗氏不完全佐劑、巨噬細(xì)胞集落刺激因子(M-CSF)、腫瘤壞死因子(TNF)、 3-0-脫酰MPL、CpG寡核苷酸、皂苷、聚氧乙烯醚、聚氧乙烯酯、和一種以上第二佐劑的組合。
41.一種疫苗組合物，包含權(quán)利要求1-35中任一項(xiàng)所述的經(jīng)修飾細(xì)菌或權(quán)利要求 35-40中任一項(xiàng)所述的組合物。
42.一種治療動(dòng)物疾病的方法，包括給需要所述治療的動(dòng)物施用權(quán)利要求1-35中任一項(xiàng)所述的經(jīng)修飾細(xì)菌、權(quán)利要求35-40中任一項(xiàng)所述的組合物或權(quán)利要求41所述的疫苗組合物；其中所述經(jīng)修飾細(xì)菌的施用量足以改變所述疾病的進(jìn)展。
43.一種預(yù)防動(dòng)物疾病的方法，包括給需要所述預(yù)防的動(dòng)物施用權(quán)利要求1-35中任一項(xiàng)所述的經(jīng)修飾細(xì)菌、權(quán)利要求35-40中任一項(xiàng)所述的組合物或權(quán)利要求41所述的疫苗組合物；其中所述經(jīng)修飾細(xì)菌的施用量足以在所述動(dòng)物中誘導(dǎo)抗所述疾病的免疫應(yīng)答。
44.如權(quán)利要求43所述的方法，其特征在于，所述免疫應(yīng)答比未結(jié)合所述神經(jīng)酰胺類糖脂的細(xì)菌細(xì)胞產(chǎn)生的免疫應(yīng)答有增強(qiáng)或改變。
45.如權(quán)利要求42-44中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述疾病選自病毒性疾病、 細(xì)菌性疾病、真菌性疾病、寄生蟲(chóng)病和增生性疾病。
46.如權(quán)利要求45所述的方法，其特征在于，所述疾病是細(xì)菌性疾病。
47.如權(quán)利要求46所述的方法，其特征在于，所述疾病是分枝桿菌病。
48.如權(quán)利要求42-46中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述疾病選自下組結(jié)核病、 肺病類結(jié)核、淋巴腺炎、皮膚病、彌散性疾病、黑死病、肺鼠疫、兔熱病、軍團(tuán)病、炭疽、傷寒癥發(fā)熱、副傷寒發(fā)熱、食源性疾病、李斯特菌病、瘧疾、111￥、31￥、朋￥、1 ￥、流感、肝炎(HAV、HBV 和HCV)和癌癥。
49.如權(quán)利要求47所述的方法，其特征在于，所述分枝桿菌病是結(jié)核病。
50.一種誘導(dǎo)動(dòng)物中針對(duì)抗原的免疫應(yīng)答的方法，包括給所述動(dòng)物施用權(quán)利要求1-35 中任一項(xiàng)所述的經(jīng)修飾細(xì)菌、權(quán)利要求35-40中任一項(xiàng)所述的組合物或權(quán)利要求41所述的疫苗組合物。
51.如權(quán)利要求50所述的方法，其特征在于，所述經(jīng)修飾細(xì)菌的施用量足以在所述動(dòng)物中增強(qiáng)抗原特異性CD8T細(xì)胞反應(yīng)或提高天然殺傷(NKT)細(xì)胞活性。
52.如權(quán)利要求50所述的方法，其特征在于，所述免疫應(yīng)答包括抗體反應(yīng)。
53.如權(quán)利要求50所述的方法，其特征在于，所述免疫應(yīng)答包括CD8T細(xì)胞反應(yīng)。
54.如權(quán)利要求50所述的方法，其特征在于，所述免疫應(yīng)答包括CD8T細(xì)胞反應(yīng)和抗體反應(yīng)。
55.一種調(diào)節(jié)動(dòng)物中對(duì)BCG的CD8T細(xì)胞反應(yīng)的方法，包括給所述動(dòng)物施用有效量的權(quán)利要求1-35中任一項(xiàng)所述的經(jīng)修飾細(xì)菌、權(quán)利要求35-40中任一項(xiàng)所述的組合物或權(quán)利要求41所述的疫苗組合物，其中所述細(xì)菌細(xì)胞是BCG細(xì)胞。
56.如權(quán)利要求42-55中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述施用的途徑選自下組 肌肉內(nèi)、靜脈內(nèi)、氣管內(nèi)、鼻內(nèi)、經(jīng)皮膚、皮內(nèi)、皮下、眼球內(nèi)、陰道、直腸、腹膜內(nèi)、腸內(nèi)、吸入或者2種或2種以上所述途徑的組合。
57.如權(quán)利要求56所述的方法，其特征在于，所述施用是皮內(nèi)。
58.一種試劑盒，包括權(quán)利要求1-35中任一項(xiàng)所述的經(jīng)修飾細(xì)菌、權(quán)利要求35-40中任一項(xiàng)所述的組合物或權(quán)利要求41所述的疫苗組合物。
59.如權(quán)利要求60所述的試劑盒，其特征在于，所述經(jīng)修飾細(xì)菌是凍干的。
60.如權(quán)利要求58或59所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括施用所述經(jīng)修
61.一種制被神經(jīng)酰胺類糖脂/分枝桿菌復(fù)合物的方法，包括(a)在培養(yǎng)基中培養(yǎng)分枝桿菌細(xì)胞和(b)在所述神經(jīng)酰胺類糖脂納入所述分枝桿菌細(xì)胞的細(xì)胞壁的條件下，將神經(jīng)酰胺類糖脂加入培養(yǎng)基。
62.一種生成針對(duì)抗原的疫苗的方法，包括(a)分離權(quán)利要求61所述的神經(jīng)酰胺類糖脂/分枝桿菌復(fù)合物和(b)將藥物載體加入(a)分離的復(fù)合物。
63.如權(quán)利要求61或62所述的方法，其特征在于，所述分枝桿菌細(xì)胞選自結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群(MTBC)細(xì)胞和非結(jié)核分枝桿菌(NTM)細(xì)胞。
64.如權(quán)利要求63所述的方法，其特征在于，所述NTM細(xì)胞是恥垢分枝桿菌細(xì)胞。
65.如權(quán)利要求63所述的方法，其特征在于，所述MTBC細(xì)胞選自結(jié)核分枝桿菌細(xì)胞、牛分枝桿菌細(xì)胞、BCG細(xì)胞、非洲分枝桿菌細(xì)胞、卡氏分枝桿菌細(xì)胞、山羊分枝桿菌細(xì)胞和鰭腳分枝桿菌細(xì)胞。
66.如權(quán)利要求65所述的方法，其特征在于，所述MTBC細(xì)胞是結(jié)核分枝桿菌細(xì)胞。
67.如權(quán)利要求65所述的方法，其特征在于，所述MTBC細(xì)胞是牛分枝桿菌細(xì)胞。
68.如權(quán)利要求65所述的方法，其特征在于，所述MTBC細(xì)胞是BCG細(xì)胞。
69.如權(quán)利要求61-68中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述分枝桿菌細(xì)胞是活的、 死的或減毒的。
70.如權(quán)利要求61-69中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述神經(jīng)酰胺類糖脂包括糖基神經(jīng)酰胺或其類似物。
71.如權(quán)利要求70所述的方法，其特征在于，所述糖基神經(jīng)酰胺或其類似物包括式I
72.如權(quán)利要求71所述的方法，其特征在于，所述Rl是-(CH2)22CH3或-(CH2)24CH3。
73.如權(quán)利要求71所述的方法，其特征在于，所述R2是-CH(OH)-(CH2)13CH3。
74.如權(quán)利要求71所述的方法，其特征在于，所述R4是半乳糖基、甘露糖基、巖藻糖基或葡萄糖基。
75.如權(quán)利要求61-69中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述神經(jīng)酰胺類糖脂包括 α-半乳糖神經(jīng)酰胺或其類似物。
76.如權(quán)利要求75所述的方法，其特征在于，所述α-半乳糖神經(jīng)酰胺或其類似物包括Rl是線性或分支的C1-C27烷烴或C2-C27烯烴；或Rl是-C(0H)-R3，其中R3是線性或分支的C1-C26烷烴或C2-C26烯烴；R2是下列(a)-(e)中的一種(a)-CH2(CH2)xCH3,(b)-CH(OH) (CH2)xCH3,(c)-CH(OH)(CH2)xCH(CH3)2,(d)-CH= CH(CH2)xCH3,(e)-CH(OH) (CH2)xCH(CH3) CH2CH3,其中，X是4-17范圍內(nèi)的整數(shù)。
77.如權(quán)利要求76所述的方法，其特征在于，所述R2是-CH(OH)(CH2)xCH3，其中X是 4-13范圍內(nèi)的整數(shù)。
78.如權(quán)利要求76所述的方法，其特征在于，所述Rl選自(CH2)9CH= CH-CH2-CH = CH (CH2) 4CH3、(CH2)8CH = CH-CH2-CH = CH(CH2)4CH3^ (CH2)7CH = CH-CH2-CH = CH (CH2) 4CH3、 (CH2)3CH = CH-CH2-CH = CH-CH2-CH = CH-CH2-CH = CH- (CH2)4CH3^ (CH2)3CH = CH-CH2-CH = CH-CH2-CH = CH-CH2-CH = CH-CH2-CH = CH-CH2CH3、(CH2) 7CH = CH-CH2-CH = CH= (CH2) 4CH3、 (CH2)7CH = CH-CH = CH(CH2)5CH3, (CH2)8CH = CH-CH = CH (CH2) 4CH3、(CH2)9CH = CH-CH =
79.如權(quán)利要求78所述的方法，其特征在于，所述雙鍵是順式或反式。
80.如權(quán)利要求79所述的方法，其特征在于，所述α-半乳糖神經(jīng)酰胺或其類似物包括式 III
81.如權(quán)利要求75所述的方法，其特征在于，所述Rl由氧代；羥基；鹵素；苯基；-OC(O) R6 ； -0R6 ； -C (0) R6 或 N (R6) 2 取代，其中各R6獨(dú)立地鹵素、C1-Qg基或芳香環(huán)，芳香環(huán)可選用鹵素；羥基；-OC(O) R7 ；-0R7 ；-C(0)R7 或 N(R7)2 取代，以及其中各R7獨(dú)立地是鹵素或C1-C6烷基。
82.如權(quán)利要求81所述的方法，其特征在于，所述Rl選自下組
83.如權(quán)利要求75所述的方法，其特征在于，所述α-半乳糖神經(jīng)酰胺或其類似物包括(2S，3S，4R)-l-0-(a -D-半乳吡喃糖基)_N_廿六醇基_2_氨基-1,3,4-十八烷三醇 (KRN7000)或(2S, 3S)-1-0- ( a -D-半乳吡喃糖基)-N-廿六醇基_2_氨基-1，3-十八烷二醇)。
84.如權(quán)利要求75所述的方法，其特征在于，所述a-半乳糖神經(jīng)酰胺或其類似物包括(25，35，4幻-1-012-((1-半乳吡喃糖基)4-廿六醇基-2-氨基-1，3，4-十八烷三醇 (a -C-GalCer)。
全文摘要
本發(fā)明涉及與物理結(jié)合了神經(jīng)酰胺類糖脂物理的細(xì)菌細(xì)胞相關(guān)的組合物和方法。本發(fā)明可直接遞送神經(jīng)酰胺類糖脂佐劑到感染細(xì)菌疫苗的相同細(xì)胞。本發(fā)明的組合物和方法用于預(yù)防和治療疾病。
文檔編號(hào)C12N1/12GK102325875SQ201080008971
公開(kāi)日2012年1月18日 申請(qǐng)日期2010年1月8日 優(yōu)先權(quán)日2009年1月8日
發(fā)明者M·M·文卡塔斯瓦米, S·A·泊賽利 申請(qǐng)人:阿爾伯愛(ài)因斯坦醫(yī)科葉希瓦大學(xué),葉希瓦大學(xué)分部