專利名稱：一株來自植物窩兒七的內(nèi)生真菌白地霉及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一株來自植物窩兒七的內(nèi)生真菌白地霉及其應(yīng)用。
背景技術(shù)：
鬼臼毒素(podophyllotoxin)主要存在于小檗科鬼臼屬及其近緣植物中，是一類具有廣泛生物學(xué)活性的天然化合物，有擬雌激素樣、抗雌激素樣、抗癌、抗病毒、抗真菌、鎮(zhèn)靜、抑制植物生長和抗氧化等作用。鬼白毒素具有較強(qiáng)的抗癌活性，其作用機(jī)制是抑制微管蛋白的解聚作用以阻止細(xì)胞分裂以及抑制DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶的活性。鬼臼毒素的糖苷衍生物 etoposide和teniposide的毒性較低，對小細(xì)胞肺癌、淋巴癌等多種腫瘤疾病均具有很好的療效，從而成為臨床應(yīng)用的廣譜抗腫瘤藥物。目前，鬼白毒素主要是從野生鬼白類植物的根莖中提取得到，而這類植物在全世界僅有4屬15種，我國有3屬12種，主要生長在秦嶺、西藏等高海拔地區(qū)，其生長緩慢，且鬼臼毒素類物質(zhì)的含量較低。由于鬼白毒素類物質(zhì)在醫(yī)學(xué)和農(nóng)林防治等方面具有廣闊的應(yīng)用前景，因而其需求量日益增加。對野生鬼白類植物資源的大量采集，已使其資源遭到嚴(yán)重破壞，造成生物多樣性和生態(tài)環(huán)境的不可逆的損失。因此解決鬼白毒素類物質(zhì)的來源問題具有重要意義。由于植物生長環(huán)境復(fù)雜，難以模擬，且其生長周期長，很難進(jìn)行大規(guī)模的人工栽培，而組織培養(yǎng)技術(shù)對于鬼白類植物也不適用。加之，鬼白毒素類物質(zhì)化學(xué)結(jié)構(gòu)復(fù)雜，化學(xué)合成雖可進(jìn)行，但成本太高。而通過基因工程學(xué)手段構(gòu)建工程菌也由于參與形成該類物質(zhì)的酶數(shù)量過多而無法進(jìn)行。所以利用內(nèi)生菌具有產(chǎn)生和宿主相同或相似的生物活性物質(zhì)的性質(zhì)，來解決鬼白毒素的來源問題，可能是唯一也是最有效的方法。近年來，已有學(xué)者利用內(nèi)生菌具有產(chǎn)生和宿主相同或相似的生物活性物質(zhì)的性質(zhì)，對我國特有的一些鬼臼類植物的內(nèi)生菌進(jìn)行了研究，已有從川八角蓮、中華山荷葉中分離到青霉屬的內(nèi)生菌，其培養(yǎng)物經(jīng)層析分析具有與鬼臼毒素相同的Rf值的報道(中華山荷葉內(nèi)生真菌的分離及其發(fā)酵產(chǎn)生藥用成分的初步研究，劉仕平、曾松茸、郭仕平、楊春艷、張玲琪，中國藥物與臨床，2003. 3 C3) =227-228 ；川八角蓮內(nèi)生真菌產(chǎn)鬼白毒素類似物的初步研究，郭仕平、蔣斌、蘇瑩珍、劉仕平、張玲琪，生物技術(shù)，2004. 14(2) :55-56.)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一株來自植物窩兒七的內(nèi)生真菌白地霉及其應(yīng)用。本發(fā)明提供的白地霉(Geotrichum candidum)，命名為TOQC，分離自陜西省眉縣紅河谷(海拔1560m)采集的植物窩兒七(Diphyllria sinensis L.)的根及根狀莖，已于 2010年04月27日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(簡稱CGMCC， 地址為北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號)，菌種保藏號為CGMCC No.3783。白地霉 (Geotrichum candidum)WEQC CGMCC No. 3783 簡稱白地霉 WEQC。白地霉WEQC可用于制備鬼臼毒素葡萄糖苷和/或表鬼臼毒素雙葡萄糖苷。
本發(fā)明還保護(hù)一種制備鬼白毒素葡萄糖苷和/或表鬼白毒素雙葡萄糖苷的方法， 是發(fā)酵培養(yǎng)白地霉WEQC，得到鬼白毒素葡萄糖苷和/或表鬼白毒素雙葡萄糖苷。所述發(fā)酵培養(yǎng)的培養(yǎng)基可為馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)基。所述發(fā)酵培養(yǎng)的條件可為26-30°C、100-150rpm振蕩培養(yǎng)5-9天。所述發(fā)酵培養(yǎng)的條件具體可為J8°C、120rpm振蕩培養(yǎng)7天。所述方法還可包括將發(fā)酵液進(jìn)行萃取的步驟。所述萃取的萃取劑具體可為氯仿。表鬼臼毒素雙葡萄糖苷(Picropodophillotoxin7' -0-β -D-glucopyranosyl-(1 —6) - β -D-glucopyranoside)的結(jié)構(gòu)式如式 1 所示。鬼臼毒素葡萄糖苷(Podophyllotoxin 7' -0-β-D-glucopyranoside)的結(jié)構(gòu)式
如式2所示。
權(quán)利要求
1.白地霉(Geotrichumcandidum)TOQC，其保藏編號為 CGMCC No. 3783。
2.白地霉(Geotrichumcandidum)WEQC CGMCC No. 3783在制備鬼臼毒素葡萄糖苷和/ 或表鬼白毒素雙葡萄糖苷中的應(yīng)用。
3.一種制備鬼白毒素葡萄糖苷和/或表鬼白毒素雙葡萄糖苷的方法，是發(fā)酵培養(yǎng)白地霉(Geotrichum candidum)WEQC CGMCC No. 3783，得到鬼臼毒素葡萄糖苷和/或表鬼臼毒素雙葡萄糖苷。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于所述發(fā)酵培養(yǎng)的培養(yǎng)基為馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)基。
5.根據(jù)權(quán)利要求3或4所述的方法，其特征在于所述發(fā)酵培養(yǎng)的條件為26-30°C、 100-150rpm振蕩培養(yǎng)5-9天。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于所述發(fā)酵培養(yǎng)的條件為J8°C、120rpm振蕩培養(yǎng)7天。
7.根據(jù)權(quán)利要求3至6中任一所述的方法，其特征在于所述方法還包括將發(fā)酵液進(jìn)行萃取的步驟。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于所述萃取的萃取劑為氯仿。
全文摘要
本發(fā)明公開了一株來自植物窩兒七的內(nèi)生真菌白地霉及其應(yīng)用。本發(fā)明提供了白地霉(Geotrichum candidum)WEQC CGMCC No.3783。本發(fā)明的白地霉WEQC具有產(chǎn)生鬼臼毒素葡萄糖苷以及表鬼臼毒素雙葡萄糖苷的生理特性，可用于鬼臼毒素類物質(zhì)的制備。本發(fā)明提供的制備鬼臼毒素葡萄糖苷以及表鬼臼毒素雙葡萄糖苷的方法，發(fā)酵條件簡單、菌種易培養(yǎng)、生產(chǎn)周期短，具有工業(yè)化規(guī)模生產(chǎn)的應(yīng)用潛力。本發(fā)明為鬼臼毒素類物質(zhì)的資源開發(fā)提供了新途徑，對保護(hù)植物生態(tài)多樣性具有重要意義。
文檔編號C12P19/60GK102168021SQ20101060954
公開日2011年8月31日 申請日期2010年12月28日 優(yōu)先權(quán)日2010年12月28日
發(fā)明者張嘉, 張正旺, 朱妍妍, 趙長琦 申請人:北京師范大學(xué)